Principios básicos de

sedimentación
Campo centrifugado aplicado
2
=

Velocidad angular promedio

= 2π rad x rpm
 Aplicaciones de la centrifugación

Separar componentes celulares y subcelulares en

una gradiente, usando la centrifugación diferencial y
de densidad.
Las técnicas de centrifugación son usado para separar
una célula de otra, ellos son usado para remover células o
suspender partículas de su entorno circundante, ya sea en
un lote o en una base de flujo continuo.
Utilizado en aislamiento de virus y macromoléculas
incluyendo DNA, RNA, proteínas, lípidos o estableciendo
parámetro físicos en su centrifugación
 Centrifugación Gradiente de densidad

Utilizada para separar Sistema donde se

sólidos suspendidos en
un líquido o líquido separará las partículas,
inmiscible, de diferente en función de su
densidades. densidad de flotación.
De acuerdo a sus Se usa un medio con
propiedades como: gradiente
tamaño, forma,
densidad y viscosidad
del medio circundante.
FUERZA CENTRÍFUGA
 Tipos de técnicas de
centrifugación
Centrifugación diferencial
Frontera móvil o pellets

Separación de 2
componentes de una mezcla
utilizando únicamente la
fuerza centrífuga

Masa y volumen =Densidad

Depende de la velocidad y de
las RPM o g.
Más común. Fraccionar células
 Desventajas
Propenso a contaminarse
No permite separaciones precisas y a varias gradientes

Ventajas
Se puede realizar varias centrifugaciones hasta limpiar el pellet
deseado
Útil en la separación de procesamiento de muestras
 Ventajas Desventajas

Evita la contaminación El volumen de la muestra es

cruzada entre pellet y muy pequeño. <10% del
sobrenadante. volumen de la gradiente de
densidad.
Cuando se requiere
sedimentar El volumen de cada capa del
componentes con gradiente debe ser igual o más
velocidades de amplias que el volumen de la
muestra.
sedimentación con
diferencia de un 20% o Tiempos exactos.
menos. Velocidades de El medio circundante a las
sedimentación similares. partículas analizadas es de
Proceso complementario más baja densidad que ellas.
al de la centrifugación El roto no puede ser de
diferencial aceleración rápida. No usar
freno.
 Centrifugación isopícnica Ácidos nucleicos y virus

Centrifugación por gradiente de equilibrio

Iso = igual
pícnico = densidad de las sustancias

Es el punto donde la densidad de la

entidad o partícula, se iguala a la
densidad del líquido circundante.

Muy utilizado en bioquímica, para

separar entidades basado en su punto
isopícnico.

Separa las partículas en un gradiente de

densidades en función de la densidad de
las mismas.

Difusión de la célula, la fuerza

centrífuga y empuje hidrostático
 Ventajas Desventajas
No se vuelven a mezclar No permite la separación
de componente que
Tiene mayor precisión y poseen densidades muy
productividad: difieren parecidas o con
ligeramente en su velocidades de
densidad sedimentación muy
Muy aplicado en la ing. cercanas
Genética para el diseño de No es recomendado en
medicamentos biológicos y proteínas
terapia celular.
Tiene alto costo inicial,
Permite separar varios mantenimiento de los
componente a la vez. equipos e insumos para
formar la gradiente.
La composición química del
gradiente, no altere ni
destruya las muestras.
Medio de gradiente Uso
Sucrosa y Ficoll Preserva la morfología y actividad de las
fracciones subcelulares
Cloruro de cesio Útil en la técnica de centrifugación
isopícnica por gradiente de densidad
Bromuro de potasio Útil en la técnica de centrifugación
isopícnica por gradiente de densidad
Percoll Debido a su baja osmolaridad, baja
viscosidad y gran tamaño de partículas,
es adecuado para la separación de
células
Metrizamide Por el aislamiento de fracciones de
membrana por flotación.
Nycodenz Por el aislamiento de fracciones de
membrana por flotación.
Renografin Para el fraccionamiento celular
 Diferentes utilizaciones de los medios de gradientes

Medio de Nucleoprot Macromolé

Células Virus Organelos
gradiente eínas culas
Azucar
+ +++ +++ + -
(Fuente)
Polisacárido
++ ++ ++ - -
(Ficoll)
Sílica
coloidal +++ + +++ - -
(Percoll)
Medio
iodinatado ++++ ++ ++++ +++ +
(Nycodenz)
Sales de
metales
- ++ - ++ ++++
alcalinos
(CsCl)
 Centrifugación analítica Centrifugación preparativa

Objetivo: medir las De uso más común.

propiedades físicas de las
partículas que sedimentan, Objetivo: aislar partículas,
tales como su coeficiente de células o moléculas para su
sedimentación o su masa análisis o utilización
molecular. posterior.
Ultracentrifugación. Se utiliza una mayor cantidad
Se observan mediante un de muestra que en la
sistema óptico durante la analítica.
centrifugación. Los tubos de
centrífuga deben ser e
cuarzo para dejar pasar la
luz visible y ultravioleta.
Rotor basculante,
observación en vertical
Ultracentrifugación analítica
Material de gradiente
Formación y forma de gradiente
Determinación de la masa molecular
Método de barrera
Método rápido
Se trata de un a centrifugación a través de un medio de densidad constante. La
densidad de este medio debe ser intermedia entre la de los tipos celulares que se
requieren separar.

Ficoll – Paque, Lymphoprep y otros muchos.

Ficoll (polisacárido sintético) y metrizamida (compuesto sintético yodado)
Se dispone de varios medios con densidades adecuadas para la separación de tipos
celulares concretos
Tipos, características y aspectos
de seguridad de las centrífugas
 Tipos de centrífuga
• Centrífuga de sobremesa: <3000 rpm. Solo sedimentan células
• Microcentrífuga: <14000 rpm. Ácido nuecleicos y proteínas.
• De alta velocidad: < 25000 rpm. Organelos y biomoléculas.
• Centrífuga de enfriamiento
• Geotécnica
• Industriales
• Ultracentrífuga: < 75000 rpm. Fracciona moléculas (DNA plasmídico,
DNA cromosómico y RNA) Muy caras y delicadas en su manejo.

Centrifugación a baja velocidad ( < 10000 rpm)

Centrifugación a alta velocidad (entre 10000 y 20000 rpm)
Ultracentrifugación ( > 20000 rpm
 Rotores de ángulo fijo y rotores basculantes

Las partículas sedimentarias tienen una Una mayor distancia de viaje puede permitir
distancia corta para viajar antes del una mejor separación, como en la
pelleteado. centrifugación en gradiente de densidad
Poca duración de Más fácil de retirar el sobrenadante
ejecución Más utilizado
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Tipos de rotor
 Tipo de Rotor Pellet Zonal Ispícnico
De ángulo Excelente Límitado Variable*
Basculante Ineficiente Bueno Bueno**
Vertical NS Bueno Excelente
Zona NS Excelente Bueno

NS = No adecuado
*Bueno para macromoléculas, pobre para células y
organelos
**Bueno para células y organelos, necesitas precaución si
lo usas con CsCl