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Abono Apartir de Flores1
Abono Apartir de Flores1
TRABAJO DE GRADO
Presentado como requisito parcial
Para optar al titulo de
APROBADO
________________________ ___________________________________
DIRECTOR ASESOR:
Dr. JAIRO CUERVO Ph.D Dra.: MARIA XIMENA RODRIGUEZ Ph.D
APROBADO
________________________ ___________________________________
APROBADO
________________________ ___________________________________
Jurado 1 Jurado 2
Dr. Gerardo Moreno Dr. Hernando Valencia
ING agrónomo M.Sc Biólogo M.Sc
“La Universidad no se hace responsable por los conceptos emitidos por sus
alumnos en sus trabajos de tesis. Solo velará por que no se publique nada
contrario al dogma y a la moral católica y por que las tesis no contengan ataques
personales contra persona alguna, antes bien se vea en ellas el anhelo de
buscar la verdad y la Justicia”
A todas las personas que hacen parte del laboratorio de Biología de suelos e
invernaderos de la Facultad de Agronomía de Universidad Nacional de Colombia y
que en determinado momento nos colaboraron en el desarrollo de nuestro objetivo.
1 INTRODUCCIÓN ................................................................................................................. 8
4. OBJETIVOS ....................................................................................................................... 42
7. CONCLUSIONES .............................................................................................................. 77
8. RECOMENDACIONES..................................................................................................... 79
9. BIBLIOGRAFIA ................................................................................................................ 80
ANEXOS ................................................................................................................................ 88
INDICE DE FIGURAS
Figura 1 Valores promedios del diámetro del halo de inhibición (mm) en
algunas enterobacterias (E.coli = Escherichia coli; Salm= Salmonella
enteritidis; Shig= Shiguella sp y Pen= Penicilina) vs diferentes tratamientos
de extractos de pétalos y control con
penicilina…...………………………………………………………………..65
2
Figura 13 Peso seco promedio tratamiento Bokashi pétalos de rosa plástico
negro (BPPN) Bokashi pétalos de rosa plástico transparente (BPPB) Bokashi
pétalos de rosa sin plástico (BPSP), Bokashi tradicional plástico negro
(BTPN), Bokashi tradicional plástico transparente (BTPB) y Bokashi
tradicional sin plástico (BTSP)………………………………..…………….80
3
INDICE DE TABLA
4
RESUMEN
5
efectos inhibitorios de los extractos fueron diferentes, evidenciándose que
para E.coli las dosis aplicadas inhibieron su crecimiento.las comparaciones
estadísticas para cada tratamiento se realizaron con ANOVA, pruebas de
Duncan(α=0.05)
6
ABSTRACT
The effect of two types of fertilizers fermented bokashi, traditional and
bokashi petals rose, analyzing factors determining physicochemical
temperature. pH, cation exchange, microbiological characteristics, using the
technique of counting plate means using nutritional SMRS1, starch, Shigella
Salmonella, three coverage on the ground, black plastic, transparent plastic
and plastic without, in the production of basil (Ocimum basilicum L).
Greenhouses at the National University, Bogota headquarters. It was found
that the treatment that best dry biomass present and obtained a greater effect
on height for growing basil was treating bokashi-based coverage and petals
rose with black plastic. The bokashi type fertilizers are an alternative for the
production of basil drunk to ease of preparation and good microbiological
quality, which makes them suitable for the production of aromatic. Cover
with plastic black soil temperature allows a more stable and a good weed
control, favoring the production of aromatic. To observe the capacity
development worker extracts were prepared using two methodologies,
technical and maceration technique rotary shaker which were tested in trials
in seed germination basil (Ocimum basilicum L). The results for the six tests
for germination show no statistically significant difference between the value
of both treatments as the root of stem. The study to determine the ability of
antimicrobial rose petals sp techniques were applied agar diffusion method
based on Kyrby Bauer getting results as an inhibition of microorganisms in
the doses used in sensidisc concentration of 500g/L, in general compared to
the positive control, the dose that was less effective was for the concentration
of 200g / L, was observed that according to microorganisms evaluated the
inhibitory effects of the extracts were different, and conclude that the doses
for E.coli Applied inhibited its crecimiento.las statistical comparisons for
each treatment were conducted with Anova, testing Duncan (α = 0.05
7
1 INTRODUCCIÓN
Las plantas aromáticas y medicinales en los últimos años han tenido un gran
interés mundial debido a su uso como materia prima en farmacia, industria,
cosméticos y alimentos por sus efectos secundarios, que influyen
positivamente en la salud del hombre y su entorno. Estas plantas han
constituido para los países en vía de desarrollo una importante práctica que
refleja la diversidad vegetal de la región, aportes socioculturales y
económicos; por ello representan una interesante alternativa en el campo de
salud e industrial.
Desde la Edad de Piedra se hace referencia a estas plantas donde los primeros
usos se encuentran en países como China, Egipto, India, Roma y Grecia.
8
investigaciones con el fin de buscar y afianzar cada día más las alternativas de
diversificación para el sector agrícola siendo estas investigaciones la principal
fortaleza de competitividad ante países industrializados.
9
características físicas, químicas y microbiológicas del suelo y generar una
producción más amigable con el medio ambiente.
Las coberturas pueden estar constituidas por plantas o materiales inertes que
se utilizan para la protección del suelo de la desecación, del sol, viento y
todos aquellos agentes que afectan las propiedades físicas, químicas y
biológicas de los suelos.
10
2. MARCO TEÓRICO Y REVISION DE LITERATURA
2.1 SITUACIÓN ACTUAL DE LAS PLANTAS AROMÁTICAS EN
COLOMBIA
En Colombia se está observando que las plantas aromáticas son una fuente
nueva de ingresos, en cuanto a producción para el exterior. Esta producción
para exportar se localiza actualmente en los departamentos de Cundinamarca
(80%), Tolima (10%), Antioquia (9%) y Valle del Cauca (1%), en donde el
exportador va dirigido especialmente a los Estados Unidos (75%), Canadá
(10%) e Inglaterra (10%) (Enciso, 2004).
11
introducido sobretodo a Francia, Reino Unido y Estados Unidos (Kirie,
2005).
12
2.2 GENERALIDADES DE ALBAHACA (Ocimum basilicum L.)
13
La albahaca es originaria de Persia y Asia menor, se ha extendido su cultivo
por las regiones templadas, sobre todo por los países de la cuenca
mediterránea.
14
En plena floración de la planta, cuando se estima recolectar el aceite, se corta
a unos 15 cm del suelo para conservar las yemas basales de los tallos (Espitia,
2004). El transplante se realiza a los 20 días de la germinación, para hacer
esta labor, se realizan aplicaciones de materia orgánica y fórmulas completas,
cada tres cosechas.
15
manifiesta con manchas foliares color marrón, que al expandirse afectan toda
la hoja, presentándose un moho gris sobre el tejido afectado, por condiciones
tales como alta humedad y agua libre sobre el follaje.
Las pudriciones radicales son causadas por hogos de los géneros Pythium
spp., Rhizotocnia spp., Phytophthora spp y Fusarium sp, los que producen
necrosis y podredumbre del sistema radical y corona asociado a clorosis y
marchitez de las plantas perdiendo las raíces su color blanco tomando una
coloración marrón. La principal vía de contaminación es a través del sustrato
(Gómez, 2004).
16
La agricultura orgánica se inicio en Inglaterra en la década de los años 30 por
los agrónomos Lady Eve Balfour y Sir Albert Howard; se destaca por la
recomendación de los abonos orgánicos y sus métodos pioneros de
compostaje controlado. Es la denominación más difundida mundialmente, a
partir de 1972, año de fundación de la IFOAM (Federación Internacional de
Movimientos de Agricultura Orgánica). Es la agricultura orgánica el alimento
al suelo y no a las plantas, por lo tanto si este está equilibrado a nivel de
nutrientes, las plantas también (Rosas, 2003).
17
en Costa Rica para el mejoramiento del suelo, como la base para el desarrollo
de este sistema de producción (IFOAM, 1998). Para la implementación de
este tipo de producción orgánica tuvo gran impacto la tecnología japonesa
fomentada por el ingeniero Shogo Sazaki del Servicio de Voluntarios
Japoneses con el Extranjero (JOCV). Estos abonos orgánicos han sido
popularizados por los productores orgánicos permitiendo que los productores
convencionales muestren interés debido a las ventajas que ofrece este sistema
para manejo de desechos y aporte de nutrientes al suelo.
Los abonos orgánicos generalmente son de dos tipos: sólidos y líquidos. Los
sólidos son llamados compost y los líquidos son los caldos trofobíoticos,
actualmente en Colombia dado el interés y crecimiento del consumo de
productos ecológicos, el Ministerio de Agricultura y Desarrollo Rural,
expidió la resolución N° 0074 del cuatro de abril de 2002 por medio de la
cual establece el reglamento para la producción primaria, procesamiento,
empacado, etiquetado, almacenamiento, certificación, importación y
comercialización de productos agropecuarios ecológicos. En el articulo 5 del
capitulo III de dicha resolución indica que los sistemas de producción
agropecuario ecológico utilizan insumos que aumentan la actividad biológica
del suelo y balancean el equilibrio biológico natural.
18
que se han generado gracias a la fermentación aeróbica de los residuos
vegetales y animales incorporados al preparado.
19
¾ PURINES E HIDROLATOS: Son preparados orgánicos con base en
plantas medicinales y aromáticas (presencia de metabolitos secundarios) y
en algunos casos con residuos de animales y melaza.
20
microorganismos (presentes en el estiércol y el suelo), estos se convierten en
elementos que la planta asimila con facilidad en pequeñas cantidades, sin
dejar residuos tóxicos a los humanos, ni a la naturaleza.
Cal: Se utiliza cal agrícola, cal viva, que aporta calcio, regula la acidez que se
presenta durante el proceso de fermentación de los abonos.
Mantillo de bosque: Aporta nutrientes importantes y microorganismos que
ayudan a la transformación de los abonos.
21
Suelo: Estimula la actividad microbiana para el proceso de fermentación y
suministra una mayor uniformidad a la mezcla.
22
contienen varios microorganismos benéficos que aceleran la preparación de
abono orgánico (Sasaki, 1991).
23
estos poseen almidón y compuestos que se acumulan, en este tipo de material
como son esteres grasos (terpenil), que representan del 14 al 64% y alcoholes
como (etanol-b-fenilo y alcohol bencil) los cuales poseen una posible
actividad promotora de desarrollo vegetal así como propiedades
antimicrobianas (Dunphy, 2006).
24
Movements IFOAM, 1998). La tecnología japonesa de producción de
“Bokashi e implementación y uso de los abonos, ha tenido gran impacto,
fomentada por el Ing. Shogo Sazaki del Servicio de Voluntarios Japoneses
para la Cooperación con el Extranjero (JOCV).
25
y el 42% se encuentra amenazado por este proceso de degradación (EOT,
2002).
26
2.4.1.3 Factores que intervienen en la elaboración de Bokashi
27
temperaturas, lo que permite que la energía no sea liberada al exterior
durante la elaboración, de esta forma se puede aprovechar la máxima energía
del producto. El uso de inoculante microbiano asegura una buena
fermentación, evitando que las bacterias productoras de ácido butírico
comiencen a actuar sobre la materia orgánica provocando putrefacción y
malos olores. (Rodríguez 1994).
28
recomienda temperaturas relativamente altas, 60 –80 °C para asegurar que
reduzcan los microorganismos patógenos (Okumoto et al., 2002).
29
El compost es un producto concentrado el cual es mezclado con el suelo u
otros ingredientes antes de su uso. El porcentaje máximo de compost en la
mezcla está alrededor del 30% y varía en función de su uso posterior. El
compost mejora la estructura del suelo, incrementa la cantidad de materia
orgánica y proporciona nutrientes, micronutrientes como el Nitrógeno,
Potasio y Fósforo (Altieri M. 2002).
El proceso de compostaje tiene lugar cuando hay una relación (en seco)
carbono-nitrógeno de entre 25/1 y 30/1, es decir, que haya entre 25 y 30 veces
más carbono que nitrógeno. Por ello muchas veces se mezclan distintos
componentes de distintos tasas C/N. Es necesaria la presencia de celulosa
(fuente de carbono) que las bacterias transforman en azúcares y energía, así
como las proteínas (fuente de nitrógeno) que permiten el desarrollo de los
microorganismos.
30
En Colombia se han realizado varios estudios empleando bioabonos en
residuos de flores de diferentes especies, destacándose en los residuos de rosa
un descenso de aproximadamente del 70% del volumen en un periodo de 6
días, observándose la función que realizan diversos microorganismos como
bacterias, actinomicetos y hongos durante el proceso de degradación de la
materia orgánica (Uscategui y Valvuena 1999).
31
ambiente.
• EXTRACTO SECO: Son preparaciones sólidas las cuales se obtienen
por extracción con un solvente orgánico o agua y concentración del
extracto fluido hasta que se evapore (Piñeros, 1991).
Para que una extracción sea óptima, se requiere control de factores como:
estado de la materia prima, selección del disolvente, tamaño de la partícula,
temperatura, tiempo de extracción (Cáceres 1998)
32
viscosidad, baja presión, baja toxicidad entre otras (Dahlstrom et al., 1999).
33
Diversos productos derivados de las plantas han mostrado un efecto
antimicrobiano. Entre estos compuestos se destacan los flavonoides, fenoles,
terpenos, aceites esenciales, alcaloides, lectinas y polipéptidos (Cowan 1999).
En los extractos de las plantas se han evidenciado propiedades antifúngicas,
antibacterianas, estimuladores del desarrollo fisiológico de la planta o
activando mecanismos de defensa contra plagas y enfermedades (Kagale et
al., 2004).
34
La sustancia activa se encuentra a menudo concentrada en una parte
específica de la planta, aunque frecuentemente y por razones comerciales se
emplee toda la planta.
35
desarrollo del microorganismo. El agente antimicrobiano se prepara en
soluciones concentradas en un diluyente y luego se diluye en caldo para
obtener las concentraciones apropiadas. Un tubo de caldo se mantiene sin
inocular como control negativo de crecimiento, y un tubo inoculado pero sin
antimicrobiano. Luego de la incubación (24 horas) se observa la turbidez de
los tubos que indicaran el desarrollo bacteriano (Jawetz 1995).
36
organismo la CMI con dosis terapéuticas se podría afirmar que la cepa es
sensible al antibiótico. En caso contrario la cepa es resistente. Una cepa es
moderadamente sensible cuando la CMI de es antibiótico se alcanza en el
organismo con una dosis más elevada que la dosis terapéutica habitual sin
llegar a ser tóxica. A veces la CMI se suelen encontrar en los ítems entre
sensible y resistente lo que se llama puntos de corte o concentraciones críticas
en este caso se clasifica la cepa como intermedia y se aconseja repetir la
prueba (Carmona 1997).
37
2.6 COBERTURAS PLÁSTICAS
38
historia de cultivos y otros componentes de la ecología del suelo (Hasse, V.
2001).
39
3. FORMULACIÓN DEL PROBLEMA Y JUSTIFICACIÓN
40
la capacidad antimicrobiana generando un inmenso beneficio para la
producción agrícola.
41
4. OBJETIVOS
42
5 MATERIALES Y METODOS
Para la elaboración de los extractos a partir del material vegetal se aplicó dos
metodologías, técnica de maceración y técnica de agitador rotatorio.
43
de los principios activos y filtrar al vacío. El extracto se almacenó en frasco
ámbar (Zambrano, 2005).
En siete cajas de petri por triplicado estériles , se colocó una capa de gasa
recubierta con papel filtro estéril y se humedecieron con 9 ml de agua
destilada , en cada caja se colocaron 20 semillas de albahaca en estado
vegetativo, previamente desinfectadas con alcohol al 70%,por 1 minuto; se
inocularon las semillas a diferentes dosis de aplicación de los extractos sobre
cada semilla (0, 2 µL,5 µL,10 µL,30 µL,60 µL,90 µL) recolectados de
acuerdo a la técnicas de agitador rotatorio y macerado a partir de material
vegetal. Se dejaron los siete ensayos a temperatura ambiente,
simultáneamente se tomó un testigo al cual solo se le agregó agua estéril con
tres repeticiones de cada concentración para un total de sesenta semillas para
cada tratamiento, realizando observaciones diarias (Zamorano 2005).
44
Se recolectaron 300 kg de material vegetal (pétalos de rosa) de la Plaza
distrital de Paloquemao, los cuales se pesaron y luego fueron desinfectados
con solución de hipoclorito de sodio al 0.2% por dos minutos, luego se
realizaron cuatro lavados con agua destilada estéril. Se procesaron en una
picadora de cocina marca Oster. Para elaborar el extracto Se utilizó 150 g,
250 g, y 500 g de pétalos. Cada uno de las cantidades se le agregaron 1000 ml
de agua destilada y esterilizada, los cuales fueron licuados hasta obtener una
mezcla homogénea en licuadora industrial marca Oster por 5 minutos
(Bianchi et al., 1999).
45
en agar, basada en el método de Kirby Bauer. la cual es empleada para
pruebas de antibiograma. Para esta prueba se sembró uniformemente con el
microorganismo patógeno toda la superficie de una placa de petri, con agar
Mueller Hinton, para luego colocar sobre la superficie del agar un disco con
antibiótico (penicilina) el cual fue utilizado como control positivo, un disco
impregnado en agua destilada estéril que fue empleado como control negativo
y discos de papel filtro impregnados con las diferentes concentraciones del
extracto de pétalos de rosa.(150g, 200g y 500g) ,llevando a un periodo de
incubación de 37°C, por 24 horas. La prueba se realizó por triplicado para
cada cepa. Si el extracto contiene metabolitos con actividad antimicrobiana,
se observara un halo de inhibición el cual rodea al disco y se determina su n
diámetro (Tortora 1993).
46
(Laurel, romero ,cebollin) (30 kilos), bokashi tradicional (10 kilos) y 20 litros
de agua. El bokashi modificado fue elaborado con pétalos de rosa se , con
cascarilla de arroz (50 kilos) pétalos de rosas (30 kilos) ,gallinaza en galpón
de piso (25 kilos), carbón de madera (2 kilos), cal (4 kilos), melaza (2 kilos),
bokashi tradicional (10 kilos) y agua (20 litros) solamente al momento de
preparación.
47
Facultad de Agronomía de la Universidad Nacional de Colombia, sede
Bogotá.
48
5.5 EVALUACIÓN DE ABONOS ORGÁNICOS EN INVERNADERO
49
ANALISIS VALOR
Textura FA
pH 6.8
Conductividad eléctrica 5.7
Materia orgánica 2.2
Densidad aparente 1.4
Densidad real 2.6
5.5.3.1 Siembra
La siembra se realizó cuando las plántulas tenían una altura de 5 cm, con
densidad de 20 cm entre planta por 25 entre calle, siembra por cama de veinte
plántulas por metro cuadrado. Las plantas ya sembradas se marcaron al azar
para realizar sus respectivas mediciones (altura, determinación de peso seco).
50
5.6 MEDICIONES DE BIOMASA Y ALTURA
5.7. ESTADÍSTICA
51
Para las pruebas de germinación se realizó el extracto a base de pétalos de
rosa con dos tratamientos (agitador rotatorio y macerado), con tres
repeticiones por cada concentración aplicada.
52
6. RESULTADOS Y DISCUSION
53
1997, quien demostró que las capas superiores del suelo tienen una marcada
fluctuación diurna de la temperatura, enfriándose durante la noche y
calentándose a altas temperaturas durante las horas de sol. Esta fluctuación
diurna causa que la humedad en las capas superiores del suelo descienda
durante el día como resultado de la radiación solar, mientras que de noche
baja la temperatura de las capas superiores causando un movimiento
ascendente de la humedad. A medida que el efecto de la cobertura del suelo
se profundiza, el movimiento de la humedad es más pronunciado cambiando
la distribución de las sales y mejorando la estructura del suelo. Se ha
informado de una reducción de la salinidad del suelo como resultado del uso
de coberturas (Saghir, A.R. 1997). Hasse (2001) encontró que la eficiencia de
las coberturas también está influenciada por el tipo, el color, la estructura, la
humedad, el contenido de materia orgánica y el espesor del suelo y la
transmisión de la luz del material de cobertura (película de plástico), la
temperatura del aire, el largo del día, la intensidad de la luz solar, la extensión
del calentamiento, la sensibilidad de los patógenos y las plagas al calor, la
historia de cultivos y otros componentes de la ecología del suelo (Hasse, V.
2001).
54
Tabla 3. Registros de pH del proceso de Bokashi a base de pétalos y Bokashi
Tradicional en diferentes periodos de tiempo
Día
Bokashi 5 10 15
Pétalos 8.82 9.15 7.86
Tradicional 7.79 7.70 7.35
Como se puede observar (ver tabla 2), la relación de pH básico fue mejor en
bokashi pétalos que en bokashi tradicional. Según Parmar et al., (2001), este
tipo de pH es óptimo para la inhibición de microorganismos patógenos como
por ejemplo E.coli, siendo mas sensible a un pH 7 a 8.
55
El comportamiento de la temperatura (ver tabla 3) durante el proceso de
degradación de cada uno de los tratamientos la temperatura alcanzada para
bokashi a base de pétalos de rosa fue de 50°C en el día 10 y la mínima
temperatura alcanzada fue de 32°C. Para bokashi tradicional la temperatura
fue de 42°C en horas de la tarde del mismo día. Se observo que en bokashi
tradicional no se alcanzaron altas temperaturas, asimismo se observo una
notable disminución de quince a diecisiete grados centígrados para ambos
tratamientos en el día 15. Bollen, (1993). Sostiene que los patógenos pueden
eliminarse durante el compostaje, probablemente a causa del efecto de la
temperatura generada por las pilas. Según Elorrieta et al., (2002) encontró en
estudios in vitro que al exponer los patógenos a diferentes temperaturas entre
30°C y 50°C hubo inhibición de patógenos, con estos resultados
estandarizados en laboratorio. Los resultados corroboran las observaciones
formuladas con otros agentes patógenos y virus.
56
6.2 EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA
(METODO KIRBY BAUER)
Según estudios realizados por Dunphy (2006), los pétalos poseen alcoholes,
esteres grasos geraniol, nerol y citronellol siendo principios activos, que al
estar en contacto con los microorganismos, posiblemente inhibieron la
proliferación de estas poblaciones actuando como agentes antimicrobianos,
alterando el paso de nutrientes y la eliminación de los desechos por medio de
la membrana citoplasmática a la célula provocando la salida del contenido
celular al medio circundante e interfiriendo en el crecimiento de la célula
como lo hace un agente antimicrobiano (Tortora, 2006).
Para Shigella sp se observo una menor inhibición 6 y 25% del obtenido con
el testigo con penicilina en comparación a las otras cepas utilizadas siendo
más resistente a la composición de los pétalos, esto se debe probablemente a
la capacidad que tiene el microorganismo de resistencia a sustancias
antimicrobianas y su mecanismo para metabolizarlas ya que según Conté
(1995), en Shigella sp se ha observado mutaciones en lo genes cromosómicos
que le permiten tener resistencia a ese tipo de antibiótico. Según estudios
realizados por Boonkaew et al.,2003 la actividad biológica de extractos
vegetales los cuales poseen alta actividad antimicrobiana en especial contra
57
bacterias Gram. positivas, utilizando hojas y raíz para la obtención de los
principios activos, aplicando diferentes técnicas según el material vegetal
utilizado; por esta razón para el desarrollo de este trabajo, al utilizar los
pétalos de rosas como material vegetal, se encontró dicha actividad inhibitoria
con el fin de reducir considerablemente la flora patógena.
Figura 1 Valores promedios del diámetro del halo de inhibición (mm) en algunas
enterobacterias (E.coli = Escherichia coli; Salm= Salmonella enteritidis; Shig= Shigella sp y
Pen= Penicilina) vs diferentes tratamientos de extractos de pétalos y control con penicilina.
58
Para el tratamiento de extractos de pétalos de rosa por el método de agitador
rotatorio, se encontró diferencias significativas entre las concentraciones del
extracto aplicadas a los tratamientos en las pruebas de germinación con un
p<0.05. Se observo una mayor efectividad para la raíz aplicando el
tratamiento correspondiente a la dosis seis 90 uL con un 46% de efectividad
con respecto al testigo. (Ver figura 2 y 3).
5
Longitudderaíz(cm)
Macerado
3
Agitador
0
0 µL 2.5 µL 5.0 µL 10 µL 30 µL 60 µL 90 µL
Tratamientos
59
4
3,5
3
dtallo(cm)
2,5
Agitador
2
Macerado
ngitu
1,5
lo
0,5
0
0uL 10uL 2,5uL 5uL 30uL 60uL 90uL
tra ta mie ntos
Al analizar las muestras del suelo inicial en el estudio, (ver anexo 10) antes de
aplicar los diferentes tratamientos se observo una baja población
(193x106ufc/g) y baja poblaciones microbianas en comparación con los datos
obtenidos al aplicar los diferentes tratamientos a las camas, las cuales indican
que el suelo era deficiente en riqueza microbiana debido a la baja fertilización
y la poca interacción microbiana que presentaba este suelo, según Viterii
(2002). La falta de incorporación de materia orgánica y el uso excesivo de
agroquímicos, han conducido a la degradación de las propiedades física,
química y biológica que determina la capacidad productiva de los suelos.
60
en la elaboración de abono tipo bokashi (Kelley y Walker, 1999). También se
utilizan como indicadores de contaminación fecal en los ambientes
relacionados con el suelo y el agua (Hassen et al., 2001; Tallon et al.,2005).
Salmonella es considerado como el principal problema específico y de la
calidad higiénica de compost (Brinton y Droffner, 1994; Yanko, 1995; Hay,
1996), razón por la cual se evaluó la presencia de la población de
enterobacterias, en los dos abonos tipo Bokashi y se observo
microscópicamente bacterias Gram. negativas para el día cinco
evidenciándose una alta población para el tratamiento de bokashi tradicional
(anexo 11) notándose una disminución a medida que maduraba el material
orgánico, no hubo presencia de cepas de Salmonella en el día 15 las cuales se
evidencian en el agar S.S (Salmonella, Shigella) que presentan colonias con
color transparente con centro negro. Las colonias que se presentaron se
observaron macroscópicamente de color rosadas y fucsias, forma redonda,
borde definido y cremosas, lo que corresponde con la descripción del Manual
de Merck (2005) en donde se define a E.coli .como colonias rosadas hasta de
color cremoso, y a Enterobacter aerogenes como colonias blanquecinas,
opacas, mucosas.
No se observo viraje del medio S.S, y las colonias rosadas hasta roja son
lactosa positiva indicando presencia de E.coli. Entre los tratamientos de
bokashi a base de pétalos de rosa y bokashi tradicional no se observaron
diferencias significativas según la prueba del rango múltiple de Duncan con
un valor p>0.05) tal vez a condiciones como pH básico, temperatura
manteniéndose constantes.
Comparando ambos tratamientos, ver (figura 4), en cuanto a los datos del día
cinco, diez y quince se evidencia diferencias muy marcadas ya que en el día
cinco el recuento de bacterias fue alto (anexo 11) respecto al día diez y
quince que iba disminuyendo gradualmente, a medida que pasaba los días, la
61
población patógena disminuía considerablemente, lo cual se debe a que para
la elaboración de los abonos tipo bokashi se utilizó como materia prima
residuos de plantas aromáticas (Bokashi tradicional y bokashi modificado a
base de pétalos de rosa), que contienen sustancias antimicrobianas que
inhiben el crecimiento de microorganismos; los residuos utilizados fueron
tomillo perteneciente a la familia Labiatae que contienen sustancias como
carvacrol (2-hidroxi-p.cimeno),P-cimenol (Isopropil-Tolueno) a las cuales se
les ha encontrado propiedades antifúngicas, y albahaca perteneciente a la
familia Lamiaceae que se caracteriza por poseer monoterpenos como
carvacrol y timol (Espitia, 2004).
62
desecación y pH también pueden desempeñar un papel significativo en la
reducción de patógenos.
90
80
70
60
50
0-4
5
/g1
40 10
FC
15
U
30
20
10
0
Petalos Tradicional
-10
Tra ta mie ntos
Figura 4 Promedio recuentos UFC x 10-4 g-1 de enterobacterias en agar SS en tres tiempos
de elaboración de bokashi pétalos y tradicional.
63
heterótrofa de los suelos. Sin embargo la heterogeneidad de estos
microorganismos puede estar influida por la cantidad de los productos
aplicados, las condiciones físicas del suelo.
Promedio recuento agar SMRS1 hongos
16
14
12
10
(ufc/g)
8
6
4
2
0
5 10 15
Petalos Tradicional
Figura 5 Promedio recuentos UFC x 10-4 g-1 de hongos fosfato solubilizadores en agar
SMRS1 en tres tiempos de elaboración de bokashi pétalos y tradicional.
64
sustancias antimicrobianas, posiblemente no permitieron el crecimiento de
estas bacterias
Figura 6 Promedio recuentos UFC x 10-4 g-1 de bacterias fosfato solubilizadoras en agar
SMRS1 en tres tiempos de elaboración de bokashi pétalos y tradicional.
65
aumenta la temperatura lo cual proporciona un ambiente propicio para que los
microorganismos amilolíticos se desarrollen.
5,5
4,5
almidón (ufc/g)
3,5
2,5
2
5 10 15
Petalos Tradicional
Figura 7 Promedio recuento UFC x 10-4 g-1 material de bacterias amilolìticas en agar almidón
en tres tiempos de elaboración de bokashi pétalos y tradicional
66
6.5. ANALISIS DE RESULTADOS DE LAS CAMAS CON COBERTURAS
PLASTICAS Y TRATAMIENTOS DE ABONO TIPO BOKASHI
De acuerdo a los tratamientos (ver figura 8), el mas efectivo fue el de la cama
correspondiente a bokashi pétalos y plástico negro, estudios realizados por Gelsomino
et al.,(2006) muestran que la cobertura del suelo, estimula el crecimiento de la población
microbiana favoreciendo el crecimiento de Bacillus spp., Pseudomonas fluorescentes y
hongos, los cuales pueden suprimir patógenos por parte de microorganismos que son
más competitivos y a menudo antagonistas de los patógenos y plagas de las plantas.
Según Tamietti.G (2006) la mayor parte de los microorganismos tolerantes a las
coberturas, son conocidos como agentes de control biológico o estimulantes del
crecimiento de las plantas.
Estudios realizados por (Chellemi, 2006) han demostrado que al comparar la cobertura
plástica del polietileno claro, con polietileno negro, este último absorbe la radiación
solar, reduce el calentamiento del suelo en varios grados, es más estable y durable en
condiciones de campo.
Figura 8 Promedio recuentos UFC x 10-4 g-1 de poblaciones microbianas en agar nutritivo bajo coberturas
plásticas.
67
6.5.2. Recuento de bacterias y hongos fosfato solubilizadoras en agar SMRS1 de
bajo coberturas plásticas y abonos tipo bokashi.
Según estudios de Beltrán y Torrado (2002), esta clase de bacterias se puede desarrollar
gracias a los macronutrientes presentes en el suelo como el fosforo. Los
microorganismos de la rizosfera poseen la capacidad de liberar iones fosfato de sus
diversas combinaciones y participar en distintas fases del ciclo del fosforo en el suelo.
Con un adecuado suministro de fosfato, los microorganismos son benéficos
especialmente para las plantas jóvenes que en presencia de bacterias fosfato
solubilizadoras.
68
8
Promedio recuento hongos
6
SMRS1 (ufc/g)
0
1 2 3 4
-2
Cam a
Figura 9 Promedio recuentos UFC x 10-4 g-1 de hongos fosfato solubilizadores en agar SMRS1 bajo
coberturas plásticas (plástico negro, transparente y sin plástico) combinado con bokashi tradicional cama 1
y 3 y pétalos de rosa cama 2 y 4.
7
Promedio recuento bacterias
6
5
SMRS1 (ufc/g)
4
3
2
1
0
-1 1 2 3 4
Cam a
Figura 10 Promedio recuentos UFC x 10-4 g-1 de bacterias fosfato solubilizadoras en agar SMRS1 bajo
coberturas plásticas (plástico negro, transparente y sin plástico) combinado con bokashi tradicional cama
1,3 y pétalos de rosa cama 2,4.
69
6.5.3 Recuento de población microbiana en agar Almidón de acuerdo a las camas
12
Recuento agar Almidon
10
0
1 2 3 4
Cam a
Figura 11 Promedio recuentos UFC x 10-4 g-1 de bacterias amiloliticas en agar almidón bajo coberturas
plásticas (plástico negro, transparente y sin plástico) combinado con bokashi tradicional cama 1,3 y
pétalos de rosa cama 2,4.
70
6.5.4 Recuento de poblaciones de enterobacterias en agar .S.S en las camas con
plásticos y tratamientos
Para los plásticos se presentaron diferencias significativas (ver anexo 29). Se observo
diferencias en la cobertura que no tenia plástico en comparación a los que si estaban
cubiertos (ver figura 12). Tanto la variable de bokashi y plástico, influyen
considerablemente en la disminución de la concentración de microorganismos patógenos
evidenciando un mejor resultado con cobertura de plástico negro debido a que se
presenta una mayor absorción de los rayos solares estimulando la producción de
sustancias que inhiben flora patógena. Se hizo anteriormente en el proceso de
elaboración que al abono al final de su elaboración no presentó alta concentración de
microorganismos patógenos, y los patógenos que se encontraban al estar a 24°C se
inhibió su crecimiento ya que crecen solo a 37°C. En estudios realizados por. Stapleton
(2000), se observo que durante el proceso de empleo de las coberturas plásticas, se
produce un calentamiento de la materia orgánica liberándose compuestos volátiles al
suelo. Diferentes tipos de materia orgánica tales como el abono animal y los residuos de
los cultivos especialmente los residuos vegetales, podrían combinarse con la cobertura
del suelo para incrementar la temperatura por medio del calor generado por la
descomposición de esos materiales e incrementar la capacidad del suelo para mantener
el calor aumentando la actividad biocida para enterobacterias por medio de la
producción de compuestos volátiles, razón por la cual en los resultados obtenidos, la
población patógeno disminuyó considerablemente (ver anexo 28).
Según Misle (2001) la radiación solar puede fácilmente penetrar la cobertura de plástico
pero la radiación emitida por el suelo (normalmente a una longitud de onda más larga)
no puede pasar a través de esa cobertura. Consecuentemente, la mayor parte de esa
radiación será retenida debajo de la cobertura plástica. Durante este proceso la
temperatura del suelo podría elevarse a niveles letales para muchos de los organismos
del suelo, incluyendo enterobacterias lo cual fue observado para este estudio.
71
Figura 12 Promedio recuentos UFC x 10-4 g-1 de enterobacterias en agar SS bajo coberturas plásticas
(plástico negro, transparente y sin plástico) combinado con bokashi tradicional cama 1,3 y pétalos de rosa
cama 2,4.
Según los resultados obtenidos para la toma de peso seco de las plantas de albahaca en la
(anexo 34), se observó diferencias entre los tratamientos según la gráfica 15.los
resultados arrojados en cuanto a peso seco, el mejor tratamiento estadísticamente
significativo fue el correspondiente a bokashi con pétalos de rosa y plástico negro; de
acuerdo a estudios en campo realizados por Loughrin y Kaspebauer, (2001) con
cobertura en albahaca se ha demostrado que coberturas coloreadas optimizan el tamaño,
aroma sabor e incrementa la producción de compuestos volátiles. Según estudios
realizados por la USDA las, hojas de albahaca tratadas con coberturas coloreadas son
más grandes, más suculentas, y más pesadas. Las hojas de albahaca desarrollan
concentraciones de compuestos fenólicos y de olor significativamente más altas que
aquellas plantas cultivadas con cobertura blanca. (USDA,2005).
El plástico negro genero una buen efecto en la biomasa de la albahaca ya que esta
tonalidad de plástico permiten absorber los rayos solares y se de un incremento de
temperatura para el crecimiento de la albahaca. Mientras que con el plástico transparente
72
permite el paso de los rayos solares y generando una evaporación del agua del suelo más
marcada y propiciando valores de temperatura más altos, lo cual pude interferir con la
fisiología de la planta y con el cambio de las poblaciones microbianas del suelo. Al
aumentar la temperatura en las coberturas de plástico transparente, se estaría
promoviendo el crecimiento de malezas y por ende afectando el crecimiento de la
albahaca por competencia de nutrientes (Diaz-Perez et al., 2007)
Figura 13 Peso seco promedio tratamiento Bokashi pétalos de rosa plástico negro (BPPN) Bokashi
pétalos de rosa plástico transparente (BPPB) Bokashi pétalos de rosa sin plástico (BPSP), Bokashi
tradicional plástico negro (BTPN), Bokashi tradicional plástico transparente (BTPB) y Bokashi tradicional
sin plástico (BTSP).
73
limitar la evaporación de agua del suelo, para controlar malezas, para mejorar la
estructura del suelo y para combatir la erosión (Misle E. 2001)
30
Alturas (cm)
25
20
15
10
5
0
N
N
P
B
TP
TP
TS
PP
PP
PS
B
B
Tratamientos
Figura 14 Alturas promedio del tallo (cm) de Albahaca, tratamiento Bokashi pétalos de rosa plástico
negro (BPPN) Bokashi pétalos de rosa plástico transparente (BPPB) Bokashi pétalos de rosa sin plástico
(BPSP), Bokashi tradicional plástico negro (BTPN), Bokashi tradicional plástico transparente (BTPB) y
Bokashi tradicional sin plástico (BTSP).
74
Al ser muy elevada la relación C/N disminuye la actividad biológica. Mientras que al ser
muy baja no afecta el proceso de compostaje, perdiendo el exceso de nitrógeno en
amoniaco. Es importante realizar una mezcla adecuada de los distintos residuos con las
diferentes relaciones C/N para obtener un abono equilibrado. Los materiales orgánicos
ricos en carbono y pobres en nitrógeno son la paja, el heno seco, las hojas, las ramas, la
turba y el aserrín. Los pobres en carbono y ricos en nitrógeno son los vegetales jóvenes,
las deyecciones animales y los residuos de matadero (Vásquez 2003).
Según Pare et al.,(1998), el carbono orgánico puede servir como fuente de energía y de
carbón celular, por lo tanto los requerimientos de carbón(C) son mayores que los de
nitrógeno(N).La proporción de estos dos elementos, necesaria oscila entre 25:1 y 30:1
(C/N). Si hay demasiado nitrógeno en relación con el carbono, este se perderá en forma
de amoniaco. Las relaciones muy estrechas (<20:1) inducen a perdidas de nitrógeno en
forma de amoniaco, además, valores altos de pH (>8.5) pueden favorecer perdida de
nitrógeno, y relaciones muy amplias convierten al nitrógeno en un nutriente limitante.
Por otro lado un nivel elevado de C:N no permite que se forme una población
microbiana extensa sin nutrientes adicionales. El resultado es un nivel de
descomposición más lento.
75
7. CONCLUSIONES
76
• El bokashi es una alternativa en los sistemas de fertilización en los diferentes
cultivos, debido a su facilidad de manejo en un tiempo corto de elaboración lo
que le permite al agricultor realizar un mejor y práctico aprovechamiento de los
residuos generados de otros cultivos, solucionando también el problema de
contaminación ambiental.
77
8. RECOMENDACIONES
78
9. BIBLIOGRAFIA
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mar.2008]
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(1981).
86
ANEXOS
500 14mm 15 mm 14 mm 13 mm 0 mm
150 10 mm 9 mm 10 mm 11 mm 0 mm
Salmonella
enteritidis 200 0 mm 1 mm 3 mm 16 mm 0 mm
500 15 mm 16 mm 15 mm 14 mm 0 mm
150 10mm 8 mm 9 mm 40 mm 0 mm
Shigella sp
200 0 mm 2 mm 1 mm 25 mm 0 mm
500 10 mm 9 mm 8 mm 30 mm 0 mm
87
Anexo 2 Análisis estadístico técnica macerado longitud raíz (cm) (T0=testigo;T1=2.5
µL;T2=5µL;T3=10µL;T4=30µL;T5=60µL;T6=90µL)
Tratamiento Valores de medias Agrupamiento Duncan
5 (60µL) 3.9717 A
6 (90µL) 3.9074 A
4 (30µL) 3.7647 A
1 (2.5 µL) 3.7455 A
3 (10µL) 3.6268 BA
2 (5µL) 3.4345 BA
0 (testigo) 3.1404 B
Anexo 3 Análisis estadístico, Técnica macerado longitud tallo (cm) (T0=testigo; T1=2.5
µL;T2=5µL;T3=10µL;T4=30µL;T5=60µL;T6=90µL)
Tratamiento Valores de medias Agrupamiento Duncan
1 (2.5 µL) 1.53333 A
4 (30µL) 1.51034 A
6 (90µL) 1.30000 B
3 (10µL) 1.24915 CB
5 (60µL) 1.09677 CD
2 (5µL) 1.05357 D
0 (testigo) 0.98649 D
88
Anexo 4 Resultados técnica agitador rotatorio longitud raíz (cm (T0=testigo;T1=2.5
µL;T2=5µL;T3=10µL;T4=30µL;T5=60µL;T6=90µL)
Anexo 5 Tratamientos aplicados según la técnica por Agitador rotatorio longitud tallo
(cm) (T0=testigo;T1=2.5 µL;T2=5µL;T3=10µL;T4=30µL;T5=60µL;T6=90µL)
89
Anexo 6
Anexo 7
RESULTADOS OBTENIDOS POR TECNICA DE MACERACIÓN
CÓD DEL PROMEDIO LONGITUD DESVIACION
TRATAMIENTO TRATAMIENTO TALLO (cm) ESTANDAR
Testigo 0 1,24 0,34
2,5 µL extracto 1 0,98 0,08
5 µL extracto 2 1,51 0,45
10 µL extracto 3 1,51 0,48
30 µL extracto 4 1,096 0,29
60 µL extracto 5 1,23 0,42
90 µL extracto 6 1,05 0,22
Anexo 8
90
Anexo 9
Anexo 10
Anexo 11
91
Anexo 12 Análisis estadístico para el recuento de microorganismos en Agar SS en el
proceso de elaboración de los abonos tipo Bokashi tratamiento 1 Bokashi tradicional y
tratamiento 2 Bokashi pétalos de rosa.
Anexo 14
92
Anexo 15 Análisis estadístico para el recuento de hongos en agar SMRS1 para hongos
en el proceso de elaboración de los abonos tipo Bokashi
Tratamiento Valores de medias Agrupamiento Duncan
2 6,222 A
1 2,833 B
Anexo 16
93
Duncan Media Día
A 114,92 5
BA 67,58 15
B 13,08 10
Anexo 18
Desviación Desviación
Promedio estándar Promedio estándar
dia 5 30x104ufc/g 0,57 40x104ufc/g 0,57
dia 10 40x104ufc/g 2 30x104ufc/g 4,5
dia 15 50x104 ufc/g 1 20x104ufc/g 5
94
Anexo 20
95
Anexo 22
96
Anexo 24
97
Anexo 26
98
Anexo 28
99
Anexo 30 Análisis estadístico del peso seco de las albahacas bajo cobertura plástica sin
variable cama
Tratamiento Valores de medias Agrupamiento Duncan
1: Bokashi tradicional plástico negro 20.3000 A
2: Bokashi tradicional plástico transparente 15.5042 B
3: Bokashi tradicional sin plástico; 15.4625 B
4:Bokashi pétalos plástico negro 12.7479 C
5: Bokashi petalos plástico blanco 10.2917 D
6: Bokashi pétalos sin plástico 8.5383 D
Anexo 31 Análisis estadístico del peso seco de las albahacas bajo cobertura plástica
con variable cama
Tratamiento Valores de medias Agrupamiento Duncan
Cama 1:Bokashi tradicional 13.9250 A
Cama 2:Bokashi pétalos 13.1639 A
Cama 3:Bokashi tradicional 14.1111 A
Cama 4:Bokashi pétalos 14.0297 A
Anexo 32
Anexo 33
100
Anexo 34
Altura de las Albahacas
Valores de Agrupamiento
Tratamiento medias Duncan
Tratamiento1: BPPNC2 :bokashi pétalos plástico negro
cama dos 21.933 CB
Tratamiento 2 BPPNC4 :bokashi pétalos plástico negro
cama cuatro 26.333 A
Tratamiento3: BPPTC2 bokashi pétalos plástico
transparente cama dos 22.633 B
Tratamiento 4 BPSPC2 bokashi pétalos sin plástico cama
dos 19.667 CD
Tratamiento 5: BPSPC4 bokashi pétalos sin plástico cama
cuatro, Tratamiento 5 18.444 D
Tratamiento 6: BTPNC1 bokashi tradicional plástico negro
cama uno 18.444 E
Tratamiento 7 BTPNC3 bokashi tradicional plástico negro
cama tres 25.444 A
Tratamiento 8: BTPTC1 bokashi tradicional plástico
transparente cama uno), 15.933 E
Tratamiento 9:BTPTC3 bokashi tradicional plástico
transparente cama tres 25.000 A
Tratamiento 10: BTSPC1 (bokashi tradicional sin plástico
cama uno 14.688 E
Tratamiento 11: BTSPC3 (bokashi tradicional sin plástico cama tres)
21.647 CB
Anexo 35
101
Anexo 36
Altura del cultivo de albahaca (cm) en bokashi pétalos bajo coberturas plásticas
Tratamiento Altura (cm) Desv estándar
Bokashi pétalos plástico negro 24,0416667 3,38
Bokashi pétalos plástico trasparente 22,75 3,55
Bokashi pétalos sin plástico 19,625 2,20
Anexo 37
MEDIOS DE CULTIVO
Glucosa 10 g/l
Ca 3(PO4)2 5 g/l
Mg SO4.7H2O 0.3g/l
NaCl 20 g/l
Agar-agar 15 g/l
(NH4)2SO4 1 g/l
102
Extracto de levadura 1 g/l
Agar-agar 15 g/l
pH 7
Agar-agar 15 g/l
pH 7.0
Carboximetilcelulosa 10 g/l
103
Fosfato dibásico de potasio 0.1 g/l
Agar-agar 15g/l
Ajustar pH 7+/-2
AGAR PIKOVSKAYA
Glucosa 10g/l
REACTIVOS:
Lugol
104