explicar cómo se realiza un recuento de microorganismos aerobios

mesófilos
los objetivos de aprendizaje son los siguientes
 utilizar métodos de recuento en placa
 calcular la biota total presente en la muestra
 estudiar la calidad sanitaria de los productos analizados esta
técnica se utiliza para determinar el número de microorganismos por gramo
o mililitro de la muestra en estudio
importante que hay que partir de diluciones seriadas decimales
la preparación de las muestras
 Pesar asépticamente una porción representativa de la muestra 10g
 continuación añadiremos el diluyente 90 mL de agua de peptona
tamponada,
SI se quiere conseguir una dilución 1/10 habrá que multiplicar la cifra
de pesada por 9 para conocer la cantidad de diluyente a utilizar
 el siguiente paso sería el homogeneizado y triturado de la muestra
con un triturador de paletas, de esta forma se obtendría la suspensión
madre y primera dilución de la serie a partir de ella continuaremos
realizando diluciones seriadas decimales
 una vez preparadas las diluciones seríadas decimales procedemos al
recuento en placas
en cuanto al material necesario
destacar que necesitamos preparar matraces de play count cuya
composición base es peptona, una extracto de levadura y una destroza
necesitamos un baño termostático mechero bunsen agitador orbital pipeta
de un mililitro y puntas para pipeta placas estériles vacías que como veis
aquí en la imagen ya están rotuladas con los números de las diluciones y
una estufa de cultivo de 30 grados centígrados para realizar
el recuento en placa como os he dicho anteriormente hay que partir de
dilución es seriadas decimales de la muestra
en primer lugar como habéis visto en el vídeo
 encendemos el mechero porque hay que trabajar en condiciones de
asepsia
  cargamos la pipeta
 de esta manera sembraremos por duplicado un mililitro de cada
dilución que es lo que se llamará inoculó en las placas petri vacías
 la suspensión madre pero eso se haría también con todas las
diluciones
la dilución siguiente la me haríamos el tubo porque
siempre que flameará la boca del tubo cuando abro el tubo cuando cierro el
tubo y por duplicado a las dos placas petri estériles que ya tenía preparadas
y rotuladas con la dilución correspondiente
una vez tenemos todas las diluciones sembradas en placa habrá que añadir
a cada placa habrá que añadir a cada placa unos 15 mililitros del medio de
cultivo del play count daggar
como sabéis está esterilizado y atemperado a 50 grados esperando a que
vayamos a utilizarlo porque si lo dejáramos la bancada de trabajo a
temperatura ambiente acabaría solidificando se trata de un agar los
agares a temperatura ambiente solidifican
tenemos que adicionar como hemos dicho y veis en el vídeo unos 15
mililitros de medio de cultivo a todas las placas y una vez adicionado el
medio de cultivo habrá que homogeneizar el inóculo con el medio de
cultivo como se homogeneiza el inóculo con el medio de cultivo para
homogeneizar el inóculo con el
para homogenizar el inoculo con el medio de cultivo:
medio de cultivo tenemos que dar vueltas circulares hacia un lado y
hacia otro debéis de tener especial atención y cuidado para que el medio de
cultivo no salte a la tapa de la placa
si saltará la tapa de la placa habría microorganismos que no podríamos
contar porque estarían en la parte superior y no en la parte donde está el
medio de culto una vez sólidas las placas se
invierten se incuban boca abajo a 30 grados durante 72 horas pasado el
periodo de incubación vamos a proceder a la
lectura del recuento
debemos de contar las placas que tengan entre 30 y 300 colonias
empezando de la ilusión más concentrada a la más diluida
si os fijáis en estas figuras en estas fotos en la primera placa que es la
dilución 10 a la menos dos empezamos contando
por la parte trasera de la placa punteando con un rotulador y a la vista de
esta zona contada ya tenemos más de 100 colonias con lo cual no tendría
sentido continuar contando las colonias de la dilución 10 a la menos
2 pasaríamos a la siguiente que es la dilución 10 a la menos 3 que como
veis ya tiene un número de colonias comprendido entre 30 y 300 por tanto
la dilución 10 a la menos 3 sería la seleccionada la elegida porque
dilución es más concentradas tienen más de 300 colonias y dilución es
más diluidas tienen menos de 30 en este caso una vez seleccionada la
ilusión 10 a la menos 3 procederíamos a diluidas tienen menos de 30
en este caso una vez seleccionada la ilusión 10 a la menos 3
procederíamos a hacer la lectura del recuento
contaríamos las dos placas de la dilución 10 a la menos 3 acordaros que se
siembra por duplicado haríamos la media de las dos placas y
multiplicaríamos por la inversa del factor de dilución de las placas elegidas
de esta forma obtendríamos el resultado que se expresa en unidades
formadoras de colonia por gramo o mililitro de muestra
por ejemplo
en el caso anterior el número de colonias entre 30 y 300 se encontraba en la
dilución 1/1000 o lo que es lo mismo 10 a la menos 3 y nos ponemos a
contar las colonias de las dos placas en una de las placas tenemos 80
colonias por ejemplo estos no suponen un ejemplo en la otra placa tenemos
70 tendríamos que hallar la media la medida serían 75 colonias para
expresar el resultado multiplicaríamos la media por la inversa de la dilución
es decir 75 por 1000 unidades formadoras de colonia por gramo mililitro de
producto tenéis que tener en cuenta que el resultado siempre debe referirse
a la unidad es decir no 75 75 7.5 por en este caso en vez de 1000 ya serían
10.000 por 10 a la 4 unidades formadoras de colonia por gramo o mililitro
 en conclusión, este método estima la biota total, pero sin especificar el tipo
de microorganismo esta determinación refleja la calidad sanitaria de los
productos analizados las condiciones higiénicas de la materia prima y la
manipulación que ha sufrido durante la elaboración sin embargo tienen un
valor limitado como indicador de la presencia de patógenos o sus toxinas
en general nos permite conocer las condiciones de salubridad de algunos
alimentos espero que os sea de gran ayuda y utilidad