Aglutinación en látex para determinación de PCR y FR e Inmuno

difusión Radial para determinación en suero de Inmunoglobulinas

F. Santana- J. Santana- E. Sepúlveda- C. Solís- I. Soto- S. Triviño- N. Trujillo- C. Uribe- E. Vera-

A. Vera- V. Villa- D. Villagrán- A. Zúñiga.

INTRODUCCIÓN

La Precipitación y la Aglutinación son reacciones inmunológicas que resultan en una

agregación visible al combinarse el anticuerpo y su correspondiente antígeno, recibiendo el
nombre de Precipitación cuando el antígeno está en solución y Aglutinación cuando el
determinante antigénico se encuentra en un elemento particulado, ya sea glóbulo rojo,
bacteria, partícula de látex, etc.

En el práctico que se describe a continuación experimentamos con Proteína C Reactiva

(PCR), la cual es una proteína de fase aguda, es decir, que aumenta sus niveles cuando se
produce inflamación, esta proteína es la encargada de activar el sistema del complemento;
también trabajaremos con el Factor Reumatoide o FR, el cual es un auto anticuerpo del tipo
Ig M producido contra la porción fc de la Ig G, se pueden encontrar elevados títulos en
ciertas enfermedades reumáticas y en algunas infecciones crónicas como la tuberculosis.
Se detectan valores elevados en el 80% de los pacientes con artritis reumatoide y en
menores concentraciones en los pacientes con infecciones crónicas, enfermedades
autoinmunes, entre otras.

OBJETIVOS

i. Realizar una prueba para determinar presencia de FR (factor reumatoide), a través

de un método de aglutinació n en Lá tex.
ii. Realizar una prueba para determinar la presencia de PCR (proteína C reactiva), a
través de un método de aglutinació n en lá tex.
iii.
MATERIAL Y MÉTODOS

Método: Prueba rá pida para determinació n de FR y PCR en aglutinació n en lá tex en suero no

diluido.

MATERIALES

Para pruebas de aglutinación para PCR

 El kit contiene:
 Reactivo de látex PCR (tapa blanca) suspensió n
 de color azul con partículas de lá tex poliestireno
recubiertas con anticuerpos monoespecificos anti-
humano PCR (cabra)
 Suero control positivo (tapa roja) tiene suficiente
concentració n de PCR para producir una reacció n
notoria.
 Suero control negativo (tapa verde) no reacciona con LR (reactivo de lá tex)
 1 lamina con 6 áreas
 Buffer Glicina-NaCl

Para pruebas de aglutinación para FR

 El kit contiene:
 Reactivo de látex RF(tapa blanca suspensió n
de color blanco con partículas de lá tex poliestireno
recubiertas con inmunoglobulina humana IgG.
 Suero control positivo (tapa roja)suero control
anti-IgG humano (oveja)
 Suero control negativo (tapa verde)no reacciona con LR (Reactivo de Lá tex)
 1 lamina con 6 áreas
 Buffer Glicina-NaCl

Además ocuparemos:

 Pipetas de precisión
 Muestras de pacientes a examinar.

PROCEDIMIENTO

 Procedimiento de aglutinación en látex, para la determinación cuantitativa de la Proteína

C Reactiva en suero no diluido.
 1. La placa de vidrio para la realización del procedimiento de aglutinación posee seis áreas
marcadas.
2. Antes de usar el reactivo de látex PCR (LR), se mezcla suavemente para lograr una completa
homogenización de las partículas.
3. Pipetear o dejar caer una gota en el área de la placa. Una gota de LR tanto en las muestras
como en los controles; Los controles se realizan en las áreas uno y dos.
4. Mezclar con diferentes palillos y extender el fluido sobro toda la superficie de cada una de
las áreas.
5. Inclinar la placa de atrás hacia adelante por 2 minutos de tal forma que la mezcla rote
lentamente dentro de las áreas de la lámina.
6. Al finalizar los 2 minutos observar el resultado bajo luz artificial.
7. En las posteriores áreas se deja caer una gota de LR con 40 ul de suero (4 muestras) y se
siguen los procedimientos antes mencionados.

 Procedimiento de aglutinación en látex para la determinación cuantitativa del factor

reumatoide en suero no diluido.

1. La placa de vidrio para la realización del procedimiento de aglutinación posee seis áreas
marcadas.
2. Antes de usar el reactivo FR de látex (LR), se mezcla cuidadosamente a fin de re suspender
completamente las partículas.
3. Pipetear o dejar caer una gota en el área de la placa. Una gota de LR tanto en las muestras
como en los controles; Los controles se realizan en las áreas uno y dos.
4. Mezclar con diferentes palillos diferentes y extender el fluido sobro toda la superficie de
cada una de las áreas.
5. Inclinar la placa de atrás hacia adelante por 2 minutos de tal forma que la mezcla rote
lentamente dentro de las áreas de la lámina.
6. Al finalizar los 2 minutos observar el resultado bajo luz artificial.
7. En las posteriores áreas se deja caer una gota de LR con 40 ul de suero (4 muestras) y se
siguen los procedimientos antes mencionados.

RESULTADOS para determinación de Factor Reumatoide

En los ó valos del experimento tenemos

1. Control negativo de la aglutinació n

2. Control positivo de la aglutinació n
3. Muestra positiva FR 4b
4. Muestra negativa FR 1b
5. Muestra negativa FR 2b
6. Muestra negativa FR 3b
Tanto en las muestras 4,5 y 6 tenemos un resultado negativo lo cual nos lleva a deducir que no
se encuentra dicha proteína en la muestra (factor reumatoide), mas en la muestra n° 3 tenemos un
resultado positivo lo cual nos lleva a deducir la presencia de esta proteína, ya que se produce
aglutinación. Cave recalcar también que en el caso de FR el Ag está unido a la partícula y en el caso
de PCR es el Ac el que está unido a la partícula.

CONCLUSIÓN

La técnica de aglutinación en látex resulto ser rápida y sencilla, ofreciendo respuestas rápidas a un
examen de determinación de proteínas, además hemos podido hacer varias pruebas con diferentes
muestras al mismo tiempo. La fuerza con que ocurre la reacción no es indicativo de
concentraciones, es decir, es un test cualitativo y no cuantitativo, por lo tanto elementos más
notorios y otros menos notorios dentro de distintas aglutinaciones pueden llevar a un falso positivo
o a errores de carácter visual ya que dependiendo de los estados de los reactivos pueden dar
resultados inesperados, es por esto que siempre se deben tener de manera óptima los reactivos a
ocupar para una de estas determinaciones u otras.