MANUAL ECOLOGIA MICROBIANA

AISLAMIENTO DE BACTERIAS HALÓFILAS

I. INTRODUCCIÓN

Los océanos poseen la mayor riqueza filogenética sobre la tierra,

presentando el mayor número de animales, plantas y microorganismos. Ellos
han desarrollado una serie de estrategias metabólicas y fisiológicas, que les
permitan sobrevivir en este medio extremo. Los mares y océanos
constituyen un enorme reservorio natural que justifica el desarrollo de
investigaciones relacionadas con el incremento del conocimiento de su
diversidad biológica, en las que se incluyen la evaluación de sus
potencialidades de uso. En la actualidad la gran mayoría de los
microorganismos marinos, permanecen sin identificación, a pesar de que
constituyen una parte importante de los recursos biológicos del planeta
(Giovanonni, 2002).

Los estudios relacionados con la determinación de la concentración y el

aislamiento de bacterias heterótrofas a partir de muestras de origen marino
establecen una estrecha relación con las características tróficas de las áreas
de muestreo. Así mismo las cifras más elevadas de microorganismos suelen
encontrarse en la zona más superficial, disminuyendo, en mayor o menor
cantidad, al aumentar la profundidad, aunque en la interfase agua-
sedimento se observa un incremento por la se acumulación de una mayor
cantidad de materia orgánica. Además, también se han detectado en
regiones de afloramiento y en zonas de convergencia de aguas de diferentes
orígenes (Miravet, 2003). Los resultados demostraron que el mayor
porcentaje de bacterias aisladas corresponde a las Gram positivas (79%). En
la literatura especializada es contradictoria la información acerca de la
proporción de bacterias Gram positivas y Gram negativas en el mar.
Mientras algunos autores plantean una mayor abundancia de bacterias
Gram negativas en ecosistemas marinos, debido a que su pared celular está
mejor adaptada a sobrevivir en este medio (Lugioyo, 2003); otros refieren
que las Gram positivas se encuentran en mayor porcentaje respecto al total
de la microbiota marina, en particular los bacilos esporulados por su
capacidad de adaptarse a diferentes ambientes (Fenical y Jensen, 1996).

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II. OBJETIVO
 Aislar bacterias marinas a partir de una muestra de agua de mar.

III.MATERIALES

 Papel filtro
 Pipetas estériles
 Matraz de 250 mL
 Probeta
 Mecheros
 Agua destilada
 Pabilo
 Algodón
 Papel Craft
 Agua de mar

Para el medio Zobell

 Peptona de carne (0,5 g)

 Agar (1,5 g)

 Agua de mar filtrada (75 mL)

 Agua destilada (25 mL)
 FePO4 (0.01 g)
 Extracto de levadura (0.1 g)

IV. PROCEDIMIENTO

 El aislamiento de bacterias marinas se realizará en agar marino según

ZoBell preparado con agua de mar.

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 Preparación del medio

Para preparar el medio de cultivo, disolver el agar, peptona y extracto de

levadura junto con el agua destilada, luego agregar el agua de mar filtrada y
autoclavar. El medio de cultivo se esterilizará en autoclave a 121°C durante
15 minutos, posteriormente será enfriado a 50°C y vertido en cajas Petri
estériles.

 Aislamiento de bacterias viables.

Para el aislamiento de bacterias heterotróficas, se sembraron diluciones de

las muestras de agua en la superficie de placas con agar marino.

Para el aislamiento de bacterias se realizará mediante la técnica de

esparcido en superficie empleando el medio de cultivo Zobell y se incubarán
a 18-22ºC durante varios días (hasta 5 días)

Se realizará el conteo de cepas microbianas, este procedimiento se realiza

siempre que las cepas se encuentren de manera independiente unas de
otras y no formando una sola masa. Cuando se encuentre una disolución en
la que se diferencien las estructuras bacterianas, se contará las unidades
formadoras de colonia. Una vez contadas las colonias que existen, se
determinó el número real de colonias que existen por mililitro, lo cual se
realiza con la siguiente fórmula

 Caracterización morfológica

La morfología macroscópica será descrita de acuerdo a las siguientes

características: tamaño, color, forma, textura y presencia o ausencia de
micelio vegetativo

La morfología microscópica será determinada mediante coloración Gram

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V. RESULTADOS

BACTERIAS HALÓFILAS AISLADAS

Tabla N1 Numero de colonias presentes en las placas con agar

marino

Tabla N2 Numero de colonias presentes en cada dilución

Tabla N3 Descripción de características macroscópicas de colonias seleccionadas en medio agar

marino

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VI. DISCUSIÓN

 En este trabajo no pudimos identificar las bacterias presentes en el medio

marino de donde previenen estas bacterias aisladas pero en el trabajo de:
Rosa Camacho
 Encontró Del muestreo que se realizó en 2014 se lograron aislar trece
bacterias halófilas cultivables que fueron identificadas molecularmente y
pertenecen a los
géneros Halobacillus, Marinococcus, Alkalibacillus, Bacillus y Aquisalibacill
us. Se exploró la producción de proteasas, exopolisacaridos y
biosurfactantes a partir de estas bacterias. Se encontró una bacteria del
género Halobacillus que produce proteasas que son biocatalizadores que
pueden hidrolizar proteínas para obtener moléculas más pequeñas
llamadas péptidas, así como aminoácidos libres. La proteasa producida
por Halobacillusmostró actividad biocatalítica en elevadas concentraciones
de sal (180 g/L de NaCl) y sobre sustratos como leche, gluten, caseína,
soya y pescado. Con esta proteasa se generaron péptidos a partir de
proteínas de pescado; los péptidos fueron estudiados y mostraron
actividad antioxidante, además de inhibir (in-vitro) enzimas relacionadas
con diabetes (amilasa y glucosidasa).
 El recuento de microorganismos viables en matrices ambientales se
puede realizar mediante la técnica basada en contar las UFC
presentes en un gramo o mililitro de muestra. Se considera que cada
colonia que se desarrolla en el medio de cultivo proviene de un
microorganismo de la muestra bajo estudio, el cual es capaz de
reproducirse y formar una colonia con características macroscópicas,
siendo está clasificado con UFC.
 Las características macroscópicas permiten la identificación y
clasificación de los microorganismos, ya que cada uno forma colonias
con distintas propiedades como color, forma, tamaño, textura, brillo y
elevación . Teniendo en cuenta que la morfología macroscópica de las
bacterias varía de acuerdo al medio de cultivo en el que se siembra,
ciertos microorganismos presentes en la flora natural de ambiente
marino no se desarrollan en agares nutritivos a nivel de laboratorio o
presentan características distintas a su medio natural.

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VII. CONCLUSION

 Las muestras de agua marina nos permiten concluir que hay gran
diversidad microbiana en esta matriz ya que se observaron colonias
con distintas características macroscópicas; esta variedad está
determinada por las condiciones ambientales presentes en distintas
áreas del suelo. Experimentalmente no se cumplió la regla del factor de
dilución, por ende, no es posible determinar una cifra exacta de la
concentración microbiana presente en las matrices analizadas al tener
en cuenta todas las diluciones

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VIII.ANEXOS

BACTERIAS HALÓFILAS
AISLADAS EN DIFERENTES
DILUSIONES

Realización de práctica

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