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Validacionmetodosanaliticos 130419073011 Phpapp02
Validacionmetodosanaliticos 130419073011 Phpapp02
Cuantitativos, Cualitativos y
SemiCuantitativos en el Lab. Clínico
Norma NCh2547.Of2008
(ISO 15189)
VALIDAR VERIFICAR
Validación
LL
LL = L. de linealidad
LC LC = L. de Cuantificación
LD = L. de Detección
LD
Intervalo
lineal
Concentración
Análisis Cuantitativo
- LINEALIDAD
Capacidad del método analítico de obtener resultados
linealmente proporcionales entre la concentración del analito
y su respuesta.
Análisis estadístico:
*Curva regresión y = a + b x
*Coeficiente de determinación r2
*Análisis de varianza (regresión) con
Si p>0,05 es
significativo y por Estimación falta de ajuste
ende los datos Error residual puro.
tienden a ser lineales.
Etapas De La Regresión
1 Selección del modelo: Normalmente una línea recta
y=a +bx
(donde a es la pendiente de la recta y b la ordenada al origen)
1200
1000
800
LECTURA
600
400
200
0
0 2 4 6 8 10 12
CONCENTRACION mg/dL
Curva Calibración IgG
INMUNONEFELOMETRÍA
3.4
3.2
log lectura
3
2.8
2.6
2.4
2.2
2
-0.5 -0.1 0.3 0.7 1.1
log conc.
Precisión
v/s
Exactitud
Precisión v/s Exactitud
Exactitud
Grado de concordancia entre el resultado de
una medición y el valor de referencia aceptado
o verdadero.
* Nota: El término “exactitud” cuando se
aplica a un conjunto de resultados de
mediciones implica la combinación de
los componentes aleatorios y de un
error sistemático común o de un
componente de sesgo (Norma ISO
5725-1 e ISO 3534-1)
Exactitud
(Norma ISO 3534-1)
Media
Desviación estándar
Coeficiente de variación
Análisis de varianza F (comparación de la desviación
estándar)
Muestra Contramuestra
n 6 6
Media 1557.50 1554.67
s 52.129 82.199
CV 3.347 % 5.287 %
PRECISIÓN
REPRODUCIBILIDAD:
Es la medida de la precisión de los resultados de un
método analítico efectuado sobre el mismo analito, pero
en condiciones diferentes (diferentes equipos utilizados,
el operador, el período de tiempo, etc.)
Reproducibilidad
Inmunonefelometría para
Determinación de IgG
IgG mg/dL
Análisis de Varianza
--------------------------------------------------------------------------------------
Fuente var. SC gl CM F P
--------------------------------------------------------------------------------------
Entre grupos 1496,78 2 748,389 0,28 0,7626
Intra grupos 40682,8 15 2712,19
--------------------------------------------------------------------------------------
Total (Corr.) 42179,6 17
ANÁLISIS CUANTITATIVO
VALIDACIÓN
VERACIDAD:
Grado de concordancia entre el valor medio
obtenido de una serie de resultados y el valor de
referencia aceptado (certificado). Norma ISO 3534
Análisis estadístico
Media experimental
Desviación estándar experimental
Prueba de “t” de Student
VERACIDAD INMUNONEFELOMETRIA
PARA DETERMINACIÓN DE IgG
n
gl = n - 1 (grado libertad)
nivel = 0,05
U MRC IgG exp. = ± 7,9 mg/dL
Análisis Cuantitativo
Validación
SELECTIVIDAD / ESPECIFICIDAD
Ejemplos:
Fluoresceína, EDTA , Azida de
Sodio, Lípidos, Complemento,
Fibrinógeno, Albúmina
Detección y Control de
Interferencias
LL
LC
LL = L. de linealidad
LD LC = L. de Cuantificación
LD = L. de Detección
Intervalo
lineal
Concentración
Análisis Cuantitativo
Validación
SENSIBILIDAD
Es la capacidad de un método analítico de
registrar ligeras variaciones de la concentración.
b
γ Sensibilidad
b = Pendiente obtenida desde la regresión lineal.
ROBUSTEZ:
5 Procedimiento de validación
5.1 Los laboratorios de ensayo y los organismos de acreditación
deben contar con procedimientos y directrices para planificar y
controlar el proceso de validación de métodos de ensayo. Sin
embargo, la discusión anterior ha indicado claramente que no
puede desarrollarse un procedimiento único. En consecuencia,
tiene que desarrollarse una gama de diferentes alternativas de
técnicas de validación. Cuán detallada deba ser la validación,
depende de las circunstancias (necesidades, costos, posibilidades,
riesgos, etc.).
DOCUMENTO A, 0/2 de la Soc. Española de
Bioq. Clín. y Patología Molecular
Sistema de Análisis
tamizaje cuantitativo
SI
(screening)
Presencia del analito
< 2 ng/mL
•Menor experimentación.
NO
•Decisión rápida.
•De fácil manejo, portátiles, etc.
•Sin necesidad de equipos.
•Ahorro.
No se
analiza
Sistemas de Medida Cualitativos
• Método Semicuantitativo.
• Se basan en una reacción inmunológica.
• La detección puede ser sensorial o
instrumental.
• Ej. Bacterias: C. difficile, E. coli .
• Ej. Virus: Hepatitis, SIDA, Sarampión, etc.
• Ej. Parásitos: Chagas
• Autoinmunidad: ENA, AAN, DNA, etc.
Validación Métodos Cualitativos
Métodos Cualitativos
Análisis Cualitativo / screening
SI / NO
Con probabilidad
de error
También tiene dos valores el primero binario y el
segundo es la probabilidad de error asociada a la
decisión tomada.
Se expresan en términos probabilísticos.
Requisitos de Calidad
Linealidad. Especificidad.
- Homogeneidad. Sensibilidad.
Precisión: Valor predictivo positivo (VPP).
- Repetibilidad. Valor predictivo negativo (VPN).
- Reproducibilidad. Exactitud diagnóstica.
- Robustez. Límite de corte (cut-off).
Veracidad (exactitud). Incertidumbre o región de error.
Incertidumbre. Límite de detección.
Limite de detección. Robustez.
Límite de cuantificación.
Rango de cuantificación
Selectividad e Interferentes.
Especificidad
Analito Analito
presente ausente
Analito Analito
presente ausente
• Desviación negativa.
• El método a validar da un resultado negativo y el
método de referencia da positivo.
• Probabilidad de que la muestra conocida como
positiva, dé como negativa por el método.
• Corresponden a muestras que contienen uno o más
analitos por encima del valor límite permitido y que en
prueba de screening dan respuesta negativa.
• Se concluye con este resultado previo que la muestra
no contiene el analito en los niveles fijados cuando si
lo contiene.
Falsos Positivos (FP)
• Desviación positiva.
• Probabilidad de que la muestra clasificada como
negativa, dé como positiva por el método.
• Corresponden a aquellas muestras que realmente no
contienen el analito en el nivel definido y que por Ej. la
prueba de screening lo detecta.
• Se produce cuando el método a validar proporciona
un resultado positivo sin confirmación y el método de
referencia da un resultado negativo.
Exactitud Diagnóstica
Analito Analito
presente ausente
• Limite de cuantificación??
• Número mínimo de microorganismos dentro de una
variabilidad definida que pueden determinarse bajo
las condiciones experimentales del método
evaluado.
• Aplicado a análisis microbiológicos cuantitativos.
• Relacionado a la sensibilidad, corresponde al nivel
de concentración donde la sensibilidad es un 95% y
la probabilidad de error tipo β es de un 5%.
Límite de Corte (cut-off)
Resultados métodos
Definiciones de Requisitos de
Calidad
• Valor del Límite de Corte (cut-off). Valor de corte del método, dado
principalmente por el fabricante, sobre el cut-off resultados positivos y
bajo cut-off, resultados negativos. Se basa en una dicotomía
(presencia/ausencia, si/no, etc.).
C= 2ng/mL
Definiciones de Requisitos de
Calidad
• Región de Incertidumbre. Corresponde a la imprecisión del
método, es un rango donde encontramos error Tipo I o α (Falsos
positivos) y Tipo II o β (falsos negativos) del método.
α C= 2ng/mL β
Definiciones de Requisitos de
Calidad
• Región de Incertidumbre (*CLSI: EP12-A2):
– C50: Concentración del analito donde se produce un 50% de resultados
positivos y un 50% de resultados negativos.
– Intervalo C5 – C95: Rango de concentraciones requeridas del analito
donde a concentraciones < de C5, son resultados concretamente
negativos y > C95 son concretos positivos.
„Normal‟ Enfermo
Nr de individuos
+2SD
Valores
Falsos Falsos Método
Negativos Positivos
Definiciones del ejemplo
Verdaderos Positivos
Sin enfermedad
Resultados métodos
Con enfermedad
Definiciones del ejemplo
Verdaderos
negativos
Resultados métodos
Sin enfermedad
Con enfermedad
Definiciones del ejemplo
Falsos
negativos
Resultados método
Sin enfermedad
Con enfermedad
Evaluador de los requisitos de
Calidad
• Tablas de Contingencia. Diferencian las muestras en dos
categorías, (+)/(-) según el método, y establecen una tabla de
comparación respecto del resultado obtenido mediante el
criterio de exactitud diagnóstica analítica.
POSITIVOS VP FP VP + FP
NEGATIVOS FN VN FN + VN
*CLSI: EP12-A2
Tablas de Contingencia
* A. Pulido, I. Ruisánchez, R.
Boqué , F.X. Rius
Sensibilidad vs. Especificidad.
100
80
SENSIBILIDAD
80
SENSIBILIDAD
60
60
40
40
20
20
0
0 0 20 40 60 80 100
0 20 40 60 80 100
ESPECIFICIDAD (Fracción verdaderos 1-ESPECIFICIDAD (Fracción falsos
negativos) positivos, FFP)
* http://ludwig-sun2.unil.ch/~darlene/module4/
PROTOCOLO DE VALIDACIÓN DE UN
- Identificación MÉTODO ANALÍTICO
- Titulo
- Protocolo redactado por
- Protocolo aprobado por
- Objetivo
- Alcance
- Factores críticos
- Selección y tratamiento muestra y MRC
- Identificación equipo: certificado calibración
- Método analítico:
- Variables a determinar : análisis estadístico
- Personal que desarrollará la validación
- Criterio de aceptación para cada parámetro de desempeño
- Conclusiones
- Registros
- Referencias
INFORME DE VALIDACIÓN DE UN
- Identificación MÉTODO ANALÍTICO
- Titulo
- Informe redactado por
- Informe aprobado por
- Objetivo
- Alcance
- Responsabilidad
- Equipo, materiales, documentos
- Procedimiento
- Cálculos y análisis estadísticos
- Criterio de aceptación vs Resultados
- Informe de desviaciones
- Informe resultados y conclusiones de validación del
método
Cuándo Verificar y
cuándo Validar ???
VALIDAR VERIFICAR
Gracias…