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11 Guia y TP11 Protidos
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PROTIDOS
Los prótidos o proteínas, son moléculas complejas de gran importancia biológica debida a las múltiples funciones
que pueden desempenar. Constituyen en forma primordial las estructuras celulares vegetales y animales; y las
reacciones químicas que ocurren en el interior de las mismas, se producen principalmente por acción de enzimas de
estructura proteica.
Las proteínas forman la base de las moléculas con función especifica en el organismo, por ej. la hemoglobina, el
fibrinógeno plasmático (principal responsable de la coagulación sanguínea), etc.
Las proteínas son sustancias cuaternarias (C, O, H, N). Algunas tienen también otros elementos como S,P, Fe, etc.
Son macromoléculas que resultan de la unión de muchas moléculas pequeñas que guardan el mismo patrón
estructural (unidades básicas), llamadas aminoácidos. Al analizar la secuencia de unidades que compone una
proteína natural ,de origen animal o vegetal , se han encontrado 20 clases diferentes de aminoácidos que constituyen
la materia prima básica de construcción de todas ellas. Una proteína difiere de otra en el orden mediante el cual se
enlazan los aminoácidos, y de esto resultan diferencias macroestructurales que estudiaremos más adelante. No todos
los 20 aminoácidos están presentes en una proteína determinada; por lo general, algunos de éstos predominan en
abundancia al hacer el análisis de composición porcentual de la biomolécula.En general los aminoácidos que
constituyen las proteínas son α-aminoácidos.(tienen un grupo amino y un grupo acido carboxilico unido al C-2 o C-
α).
La cadena lateral R es distinta para cada amnioacido. H
O
un α-aminoácido. H2N C C
OH
Clasificación de los aminoácidos: R
Neutros ( monoaminocarboxilicos)
Integran este grupo como subclases, aminoácidos alifáticos o acíclicos,
aminoácidos aromáticos (homociclicos , heterociclicos), aminoacidos sulfurados, aminoacido ciclico
Tambien los aminoacidos neutros se pueden clasificar en base a la polaridad (mas importante biologicamente):
aminoacidos polares y aminoacidos no polares
Acidos (monoamino-dicarboxilicos): con carga neta negativa
Básicos (diamino-monocarboxilicos): con carga neta positiva
Péptidos O
O H H
Cuando dos o más moléculas +
+
H 3N H C O - H O H N H C O
de aminoácido se unen, por + C 2 3 C
OH + N C
reacción del carboxilo de una C H2N C C
O O
molécula con el grupo amino H CH3 H H CH3
H glicina
de la otra, etc., tiene lugar la alanina unión peptidica
formación de moléculas de
mayor tamaño, que también tienen, al menos un carboxilo y un grupo amino; reciben el nombre genérico de
peptidos.
La unión entre dos unidades de aminoácido se establece mediante una unión amida, que lleva el nombre de enlace
peptídico. Este enlace tiene una geometría particular ya que es plano (los átomos de N y C y los cuatro átomos
unidos a ellos se encuentran en el mismo plano), este se debe a que la unión C-N tiene cierto carácter de doble
enlace.
La unión de aminoácidos puede conducir a dipeptidos, tripeptidos, tetrapeptidos o polipeptidos, según el numero de
unidades de aminoácido enlazadas. La cadena resultante posee un carboxilo libre en un extremo y un grupo amino
libre en el otro extremo, por lo que la condensación puede seguir ocurriendo indefinidamente. Por esta razón se
encuentra que las proteínas pueden llegar a ser moléculas de altísimos pesos moleculares Los valores más bajos
están alrededor de 5000, mientras que los más altos pueden llegar a ser del orden de 1000000. Cuando el tamaño
molecular (expresado en términos de peso molecular) excede de cierto valor, arbitrariamente se toma el límite en un
PM de 5000, la sustancia se denomina peptona; luego, con mayor PM, albunosa y finalmente proteína. Algunos
valores de peso molecular de proteínas :Insulina bobina, 5700; zeina (presente en el maíz), 35.000; ovoalbumina
(presente el la clara del huevo), 45.0000; hemoglobina (presente dentro de los glóbulos rojos de la sangre), 65.000;
hemocianina (transportador del O2 en langostinos) 625.000.
1
CLASIFICACION DE LOS AMINOACIDOS
Grupos R, No Polares
O O O O
+ + +
H NH3 O C H NH3 O C H NH3 O C H NH+
O C
C C C C 3
Grupos R, Polares
O O O
O + + +
+ O C H NH3 O C H NH3 O C H NH3
O C H NH3 C C C
C
CH2 CH
H HO HO CH3
glicina serina treonlina tirosina
(alifatico) (alifatico) HO (aromatico)
O O O
+ + O
O C H NH3 O C H NH3
+ + O
C O C H NH3 O NH3 C
C +
C C CH
H2N CH2 CH2 HC NH3
C CH2 O
H2C H2C
glutamina HS CH2
O S-S
S
C cisteina
asparagina O NH2 (aa sulfurado) cistina (puente disulfuro)
2
PROPIEDADES y REACCIONES DE LOS AMINOÁCIDOS
Actividad Optica.
Todos los -aminoácidos presentan actividad óptica, con excepción de la glicina, ya que tienen al
menos un C asimétrico, el C-alfa.
Los enantiomeros de cada aminoácido se designan, como los azucares, como pertenecientes a la serie
D o L. Un D- aminoácido presenta en la proyección de Fischer, su grupo amino en el C-alfa, hacia la
derecha, en otras palabras, puede afirmarse que su configuración corresponde a la de un L-gliceraldehido.
Recordemos aquí que las letras D- o L- son solo símbolos que indican la configuración (según Fischer), y
no guardan relación con su actividad óptica del enantiomero que consideraremos (es decir si es dextro o
levógiro).
Para indicar la rotación óptica que corresponde al estereoisomero del que se trata, se usan (como para
los azucares), las notaciones (+) o (-). COOH
NH 2 C H
CH 3
L-(+)-alanina
Carácter anfótero
Según sea el pH de la solución, o por ejemplo de un aminoácido , actúa este como base (aceptando
H+), generando cationes; o como ácido (liberando H+), generando aniones:
Punto isoeléctrico: es el valor de pH de la solución de un aminoácido, para el cual, en le equilibrio
definido por la ecuación anterior, la concentración de “zwiterion” es máxima.
Para cada aminoácido y también para cada proteína, el punto isoelectrico tiene valor diferente. En
dichas condiciones, la solubilidad de la molécula toma el valor mínimo.
3
Reacción con nitritos en medio ácido
Cuando un aminoácido es tratado por ácido nitroso generado in-situ, forma hidroxiacido y nitrógeno.
La medida del volumen de N2 formado permite determinar cualitativamente la cantidad de nitrógeno
presente en la muestra de aminoácidos o proteínas.
H H
+
H3 N C C O + HO N O HO C C O+ N2 + .H2O
O
R R O
Reacción Xantoproteica
Es positiva para prótidos que contienen aminoácidos con anillos aromáticos. En la reacción estos
anillos se nitran (con ácido nítrico en caliente), por lo que aparece el color amarillo intenso de sus
derivados nitrados. aa aa
_
HNO3/ o
HO HO
NO2
Reacción de Millon
Se debe a la presencia de la función Fenol del aminoácido Tyr en el prótido. Se forman un derivado
mercurado , sustituyéndose en el anillo fenólico un H por un Hg (reacción de mercuracion directa de
fenoles). El reactivo es una mezcla de nitratos de Hg (I) y Hg (II). El producto de reacción es un sólido
blanco que por calentamiento toma el color rojizo.
H aa Hg aa
Hg+1 o Hg+2
HO HO
Reacción de Hopkins-Cole
Verifican esta reacción los prótidos con núcleo indólico ( Triptofano), por una oxidación en medio
ácido, por el ácido glioxilico (Reactivo de Hopkins-Cole). Cuando se acidifica con ácido sulfúrico,
aparece color violeta en la interfase aa
solución H2SO4, debido a la formación COOH
de un colorante similar al índigo.
+
CHO /H
NH
derivado del indol colorante violeta
4
Reacción de Biuret *
Esta reacción es positiva cuando la molécula contiene dos uniones peptídicas o mas, cercanas entre
si. (tripeptidos en adelante). Se realiza tratando el prótido en solución , con CuSO4 en medio alcalino de
NaOH. Las proteínas dan color violeta, las peptonas (PM mayor 5000) color rojo-morado. El color
++
desarrollado se debe a la formación de un complejo de coordinación con el Cu
(*este ensayo sirve para cuantificar proteínas; ya que hay una relación entre intensidad de color y concentracion de prótidos. Este
es un método de cuantificación relativo ya que se debe comparar con un patrón de proteínas)
Desnaturalización
Cuando las proteínas son sometidas a la acción de ciertos agentes que trastornan su organización , se
alteran sus propiedades físicas, químicas y biológicas naturales , y se dice que las proteínas se
desnaturalizan.
Cuando esto ocurre, pierden las estructuras secundaria y terciaria (y cuaternaria si la tuviere), La
perdida de estructura varia, según el agente desnaturalizaste; la transformación puede ser reversible, o
irreversible (que es el caso mas común).
Entre los agentes desnaturalizantes mas comunes están: calor, ácidos, álcalis, solventes miscibles en
agua, soluciones concentradas de electrolitos.
La desnaturalización no involucra perdida de estructura primaria.
Precipitabilidad
Las proteínas pueden precipitarse de sus soluciones acuosas llevando el pH al valor del punto isoeléctrico
correspondiente. Y también si, fuera ese valor de pH, se le agregan iones de carga opuesta a las de las
macromoléculas.
A pH mayor que el del punto isoeléctrico (la molécula sostiene cargas negativas) son precipitadas por
adición de sales de metales pesados (Fe III, Hg II). A pH por bajo del punto isoeléctrico, son precipitados
por adición de aniones tales como tricloroacetato, tiosalicilato, fosfotugstato, etc.
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CLASIFICACION DE LAS PROTEINAS
1 Según su composición
pueden clasificarse en proteínas "simples" y proteínas PROTEINAS CONJUGADAS
"conjugadas". Las "simples" son aquellas que al componente no proteico
hidrolizarse producen únicamente aminoácidos, Nombre (grupo prostetico)
mientras que las "conjugadas" son proteínas que al Nucleoproteínas Acidos nucléicos
hidrolizarse producen también, además de los
Lipoproteínas Lípidos
aminoácidos, otros componentes orgánicos o
Fosfoproteínas Grupos fosfato
inorgánicos. La porción no protéica de una proteína
conjugada se denomina "grupo prostético". Las Metaloproteínas Metales (Fe,Fe-S,Cu,Zn,Mo,etc)
proteínas cojugadas se subclasifican de acuerdo con la Hemoproteinas Hemo (Fe-Porfirina)
naturaleza de sus grupos prostéticos. Glucoproteínas Carbohidratos
2 Según su conformación
Se entiende como conformación, la orientación tridimensional que adquieren los grupos característicos de una
molécula en el espacio, en virtud de la libertad de giro de éstos sobre los ejes de sus enlaces . Existen dos clases de
proteínas que difieren en sus conformaciones características: "proteínas fibrosas" y "proteínas globulares".
Las proteínas fibrosas se constituyen por cadenas polipeptídicas alineadas en forma paralela. Esta alineación puede
producir dos macroestructuras diferentes: fibras que se trenzan sobre si mismas en grupos de varios haces formando
una "macrofibra", como en el caso del colágeno de los tendones o la α-queratina del cabello; la segunda posibilidad
es la formación de láminas como en el caso de las β-queratinas de las sedas naturales.
Las proteínas fibrosas poseen alta resistencia al corte por lo que son los principales soportes estructurales de los
tejidos; son insolubles en agua y en soluciones salinas diluidas y en general más resistentes a los factores que las
desnaturalizan.
Las proteínas globulares son conformaciones de cadenas polipeptídicas que se enrollan sobre si mismas en formas
intrincadas como un "nudillo de hilo enredado" . El resultado es una macroestructura de tipo esférico. La mayoría de
estas proteínas son solubles en agua y por lo general desempeñan funciones de transporte en el organismo. Las
enzimas, cuyo papel es la catálisis de las reacciones bioquímicas, son proteínas globulares.
3 Según su función
La diversidad en las funciones de las proteínas en el organismo es quizá la más extensas que se pueda atribuir a una
familia de biomoléculas.
Enzimas: Son proteínas cuya función es la "catalisis de las reacciones bioquímicas". Algunas de estas reacciones
son muy sencillas; otras requieren de la participación de verdaderos complejos multienzimáticos. El poder catalítico
de las enzimas es extraordinario: aumentan la velocidad de una reacción, al menos un millón de veces.
Las enzimas pertenecen al grupo de las proteínas globulares y muchas de ellas son proteínas conjugadas.
Proteínas de transporte y almacenamiento: Muchos iones y moléculas específicas son transportados por proteínas
específicas. Por ejemplo, la hemoglobina transporta el oxígeno y una porción del gas carbónico desde y hacia los
pulmones, respectivamente. Las apolipoproteinas transportan los trigligeridos y al colesterol. En la membrana
mitocondrial se encuentra una serie de proteínas que transportan electrones hasta el oxígeno en el proceso de
respiración aeróbica. La Ferritina almacena Fe y la Mioglobina O2
Proteínas del movimiento coordinado: El músculo está compuesto por una variedad de proteínas fibrosas (ej.
Actina y Miosina). Estas tienen la capacidad de modificar su estructura en relación con cambios en el ambiente
electroquímico que las rodea y producir a nivel macro el efecto de una contracción muscular. Otras son las proteinas
de los flagelos y las cilias.
Proteínas estructurales o de soporte: Las proteínas fibrosas como el colágeno y las α-queratinas constituyen la
estructura de muchos tejidos de soporte del organismo, como los tendones y los huesos.
Anticuerpos: Son proteínas altamente específicas que tienen la capacidad de identificar sustancias extrañas tales
como los virus, las bacterias y las células de otros organismos.
Proteínas receptoras: Son proteínas que participan activamente en el proceso de recepción de señales hormonales y
de los impulsos nerviosos como en el caso de la "rodapsina" presente en los bastoncillos de la retina del ojo.
Hormonas, Neuropeptidos: Hormonas: son proteínas y peptidos que participan en la regulación de procesos
metabólicos (Ej Insulina); Neupeptidos: moleculas que actuan sobre neuronas (Ej.Endorfinas, que inhiben el dolor).
Ribosomas, Proteínas reguladoras: Proteínas que intervienen en la decodificación de la información celular. Las
proteínas de ribosomas se unen a ARN y son necesarios en traducción y otras desempeñan algún papel en la
regulación (activación o inhibición) de la expresión de genes para lo cual se unen al ADN. Son elementos
importantes dentro del proceso de transmisión de la información genética
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DIFERENTES ORDENES ESTRUCTURALES DE LAS PROTEINAS
Al estudiar la conformación y la estructura tridimensional de las proteínas fibrosas y globulares se han encontrado
diferentes ordenes estructurales de las cadenas polipeptídicas que las conforman.
Para tratar de explicar esto de una forma sencilla ,realicemos el siguiente ejercicio mental: si fuésemos tan pequeños
como un átomo y pudiésemos simular un acercamiento a una proteína globular, inicialmente, "desde lejos ",
percibiríamos una fibra enrollándose sobre si misma como un ovillo de hilo enredada. A medida que nos vamos
acercando notamos que la fibra no es una secuencia lineal sino una estructura helicoidal, como un resorte, y
finalmente, al lograr el mayor acercamiento, podremos ver la secuencia de aminoácidos que conforman la hélice y
que se unen entre sí mediante enlaces peptídicos.
Los ordenes estructurales de las proteínas se han clasificado así:
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I- Parte Experimental
1. Reacción de Biuret
En un tubo de ensayo coloque 2 ml de solución de proteína, añada 1 ml de solución de NaOH al 10 % y agite.
Agreque una gota de solución de CuSO4 al 1 %. Interprete con ecuaciones.
2- Reacción de Millon
En un tubo de ensayo coloque 2 ml de solución de caseína o peptona, y agregue de 5-10 gotas de reactivo de Millon.
caliente suavemente 1-2 minutos. Observe e interprete.
3- Reacción xantoprotéica
En un tubo de ensayo coloque de 2 a 3 ml de solución de prótido, agregue 1 ml de ácido nítrico. Observe. Deje
enfriar y alcalinice con solución de NaOH al 40 %.
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II- Cuestionario
4) ¿Qué tipos de estructuras tienen las proteínas y cuáles son las interacciones que las
estabilizan?
9) El glutation es un tripéptido que tiene importancia como regulador de las reacciones de óxido
reducción en células animales. Sugiera una estructura para la misma basándose en los
siguientes resultados experimentales:
• Por hidrólisis ácida se obtienen cantidades equimoleculares de glicina, cisteína y ácido
glutámico.
• Por hidrólisis suave se obtienen dos dipéptidos: el primero da por hidrólisis posterior
cisteína y ácido glutámico, y el otro da cisteína y glicina.
• Por acción de la enzima carboxipeptidasa se libera glicina.
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Quimica Orgánica
H2 N COOH
CH3OH / H+ CH HNO2
CH2
HNO3
CH3CH2Cl
OH
Tyr
HgNO3 / Hg(NO3)2
4) ¿Mediante qué ensayos de laboratorio podrá distinguir entre los siguientes pares de
aminoácidos?:
a) Alanina de tirosina.
b) Serina de cisteína.
c) Triptofano de lisina.
d) Fenilalanina de tirosina.
Gly pI = 6,0.
Ser pI = 5,7.
Lys pI = 9,7.
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a) Representar las formas catiónica y aniónica para c/u.
b) ¿Hacia qué polo migrarán si en una electroforesis a pH = 5?
c) ¿Hacia qué polo migrarán si en una electroforesis a pH = 7?
d) ¿Hacia qué polo migrarán si en una electroforesis a pH = 10?
e) ¿En qué rango de pH deberá trabajarse una electroforesis para que la glicina y la serina
migren hacia polos opuestos?
f) ¿En qué condiciones de pH podrán separarse los tres aminoácidos?
Ile-Ser
Phe-Ala-Gly
Gly-Leu-Met
Ala-Gly-Leu
Val-Phe-Ala
Ser-Val
Ser-Val-Phe
La hidrólisis total demostró que dicho péptido contiene una unidad de c/u de los aminoácidos.
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