29/08/18

CALIBRACIÓN ANALÍTICA COMO FUENTE DE

INCERTIDUMBRE
Subdirección de Metrología Química y Biomedicina

Diego Alejandro Ahumada Forigua

INCERTIDUMBRE DE UN MÉTODO ANALÍTICO

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Inglaterra: 80 mg/100mL
Tolerancia es 7 mg/100mL
u medida es de 3,5 mg/ 100mL= 3,5%

u calibración u preparación u combinada

(%) (%) (%)
0,10 3,00 3,00
0,20 3,00 3,01
0,30 3,00 3,01
1,00 3,00 3,16
3,00 3,00 4,24
5,00 3,00 5,83
8,00 3,00 8,54
8,20 3,00 8,73
8,30 3,00 8,83

Suponga que….

Concentración 1mg/kg Requisito en u= 10%

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upreparación = 9,5 % ucalibración= ?

u calibración u preparación ucombinada

0,1 10 10,000
0,2 10 10,002
0,3 10 10,004
0,40 10 10,008
0,50 10 10,012
0,60 10 10,018
0,80 10 10,032
1,00 10 10,050
2,00 10 10,198
5,00 10 11,180
10,00 10 14,142
0,1 10 10,000
0,2 10 10,002
0,3 10 10,004

¿Qué número ven acá?

3
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u calibración

95,1%
Tolerancia 0,1%

Calcular la el % u en
0,8%

¿Cuánto debe ser la

incertidumbre por
preparación y calibración?

¿Y Ahora que hacemos?

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Calcular la el % u en
0,8%
99,6% +/-0,4% (k=2)

¿Cuánto debe ser la

incertidumbre por
preparación y calibración?

Sigamos

Preparación de la curva

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Preparación de disoluciones

Fuente Unidades Valor u u relativa u2 relativa

Pureza 0,9960 0,0020 0,20% 4,0,E-06
Masa MRC g 0,0114 0,0002 1,75% 3,1,E-04
Volumen mL 100,0000 0,0600 0,06% 3,6,E-07
Alícuota mL 1,0000 0,0056 0,56% 3,1,E-05
Volumen final mL 10,0000 0,0144 0,14% 2,1,E-06
Concentración mg/mL 0,1135 0,0021 1,86% 3,46,E-04

1,86%
Ha ha

u
Incertidumbre

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Preparación de disoluciones
Fuente Unidades Valor u u relativa
Pureza 0,9960 0,0020 0,201%
Masa MRC g 0,0114 0,00004 0,350%
Volumen mL 100,0000 0,0600 0,060%
Alícuota mL 1,0000 0,0056 0,560%
Volumen final mL 10,0000 0,0144 0,144%
Concentración mg/mL 0,1135 0,0008 0,708%

Preparación de disoluciones
Fuente Unidades Valor u u relativa
Pureza 0,9960 0,00200 0,201%
Masa MRC g 0,0114 0,00004 0,350%
Volumen mL 100,0000 0,06000 0,060%
Alícuota mL 0,6589 0,00004 0,006%
Volumen final mL 65,9046 0,00050 0,0008%

Concentración mg/mL 0,1135 0,00046 0,408%

¿Cuál es el
aporte en la u
objetivo?

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Hagamos cuentas
• No me puedo pasar de 0.8%
• Ya gaste 6.23 % en MRC
• Por pesado 19.14%
• Con volumen 0.56%
• Por dilución 0.01%
Calcular cuánto
debería ser esta u • Me queda 74.00%

¿Será que lo podemos lograr?

Ahora si….

INCERTIDUMBRE POR
CALIBRACIÓN ANALÍTICA
Subdirección de metrología Química y
Biomedicina

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Modelos de calibración
Respuesta = aŸ Concentración + b
0,6 0,7

0,5 0,6
0,5
0,4
Respuesta

Respuesta
0,4
0,3
0,3
0,2
0,2
0,1 0,1
0 0
0 2 4 6 0 2 4 6
Cantidad de analito Cantidad de analito

Caso 1 Caso 2

Consideraciones previas a a calibración

• Linealidad: ü Incertidumbre
– Repetibilidad • Precisión intermedia.
– 5, 6, 7 niveles. • Rutina.
– 3, …5 réplicas. • 4 réplicas.
• (2) Diferentes preparaciones.
• (2) Diferentes analistas.

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Ejemplo
8000
Muestra 1:
4561,257000 y = 5346,2x - 55,714
R² = 0,9973
6000
Respuesta

5000
4000
Muestra 2:
3000 1288,5

2000
1000
0
0 0,5 1 1,5
Concentración DDT (ug/mL)

Respuesta promedio de
la muestra Respuesta promedio de
Desviación estándar de los los niveles de la curva
residuales de y

Pendiente
Concentración promedio
de los niveles de la curva

Número de datos Concentración i curva

con los que se
construye la cc

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Vamos a calcular la u regresión

Respuesta instrumental
Concentración
(ug/mL) 1 2 3 4
0,2 1060 1100 1095 1135
0,4 1990 1805 1910 1935
0,6 3340 3365 3240 3135
0,8 4250 3980 4110 4020
1,0 5495 5220 5380 5550
1,2 6400 6510 6350 6340
1,4 7250 7480 7350 7400
Respuesta
Muestra 1 4561,25
Muestra 2 1288,5

Y el ganador es…..
Muestra 1 Muestra 2
Y promedio 4561,25 1288,5
Sy/x 146,453818 146,453818
b 5346,205357 5346,205357
n 28 28
m2 28581911,72 28581911,72
(Yo-Y prom)2 115600 8601022,563
Sxx 4,48 4,48
u(x) 0,02789101 0,028768698
Concentración 0,864 0,251
% u (x) relativa 3,23 11,44
¿Y Ahora qué hacemos?

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9,03x10-4
2,73x10-2 ug/mL

3,57x10-4 70 à u(x)=3,20% Caso 1 y 11,33% Caso 2

Respuesta promedio de
la muestra Respuesta promedio de
Desviación estándar de los los niveles de la curva
residuales de y

Pendiente

Número datos con los

Número de réplicas que se construye la cc
de la muestra

Concentración i curva Concentración promedio

de los niveles de la curva

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Con réplicas….
Muestra 1 Muestra 2
Y promedio 4561,25 1288,5
Sy/x 146,453818 146,453818
b 5346,205357 5346,205357
n 28 28
b2 28581911,72 28581911,72
(Yo-YY prom)2 115600 8601022,563
m 4 4

u(x) 0,014665811 0,016273154

Concentración 0,864 0,251
u (x) relativa 1,70 6,47
Vs

u (x) relativa 3,23 11,44

14,00
Aumentando el número de réplicas
12,54
Muestra 1 Muestra 2
12,00

10,00 9,27
¿Qué hacemos?
Número de répicas

7,89
8,00
7,10
6,58
5,92
6,00 5,38
4,92
4,19
4,00 3,52
2,53
2,10 1,85
2,00 1,68 1,46 1,28 1,11
0,82

0,00
1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 7,00 10,00 15,00 50,00
%u(x)

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Devolvámonos en el tiempo

Modelos de regresión
Datos

d Durbin-Watson

No Autocorrelación Autocorrelación

Homocesticidad Heterocesticidad
MCG
MCO MCP

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Mínimos cuadrados

x
y x3
x1

x2

Mínimos cuadrados
y3 + d y
y y3
y2 + d y
y3 - d y
y2

y2 - d y
y1 + d y
y1
y = A+ B× x
y1 - d y
x1 x2 x3
x

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Mínimos cuadrados ponderados

y2 + d y2
y y2
y2 - d y2
y3 + d y3
y3

y3 - d y3
y1 + d y1
y1

y1 - d y1
x1 x2 x3
x

Modelo de mínimos cuadrados ponderados

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¿Cuales pesos asignamos?

Mínimo cuadrados ponderados

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Modelo de mínimos cuadrados ponderados

Robusto a la Heterocesticidad à Cálculos relativamente más difíciles.

diferente calidad de datos
Conocimiento exacto de desviaciones.
Hace buen uso de los pequeños
conjuntos de datos.
Pocas replicas à pueden afectar los
Intervalos de confianza más pequeños estimadores.

Mayor peso a los mejores datos Sensible a datos atípicos

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Incertidumbre en regresión ponderada

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Incertidumbre en regresión ponderada

Muestra 1 Muestra 2
u(x) 0,0043 u(x) 0,0043

u relativa (%) 0,57697 2,05185 u relativa (%)

Regresión Ponderada

No Ponderada

u relativa (%) 1,56911 u relativa (%) 6,47703

Hagamos un balance

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¿Ya lo logramos?
Prepar
u curva u curva
Número ación
muestra 1 muestra 2 Muestra 1 Muestra 2
curva
No ponderada sin
0,41% 3,23% 11,44% 10,52% 15,20%
repeticiones
No ponderada con
0,41% 1,57% 6,47% 10,13% 11,92%
repeticiones
Ponderada 0,41% 0,58% 2,05% 10,02% 10,22%

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Otros tipos de calibración

Calibración por un punto Calibración dos puntos

Calibración con un punto

¿Cómo es la incertidumbre?

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Calibración con dos puntos

Concentración Promedio señal Promedio señal Promedio señal
calibrante 2 calibrante 1 muestra calibrante 2

¿Cómo es la incertidumbre?
Concentración
calibrante 1

Por favor calcular

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Resultados u(x) para un nivel

Muestra 1
0,28%

0,21%

0,18% 0,19%
0,17%
0,15% 0,15%

0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4

Cuantificando con diferentes puntos de calibración (ug/mL)

Resultados u(x) para un nivel

Muestra 2

4,75%

4,75%

4,75% 4,75%
4,75%
4,75% 4,75%

0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4

Concentación del punto de calibración (ug/mL)

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Resultados u(x) para dos niveles

u calibración Muestra 1 u calibración Muestra 2

0,21% 4,75%

DOS PUNTOS CALIBRACIÓN

Puntos u calibración u calibración
Puntos
Muestra 1 Muestra 2
0,6 y 0,8 0,25%
0,8 y 1,0 0,25% 0,2 y 0,4 ug/mL 4,75%

Consideraciones de la calibración
con uno o dos niveles

• 1 puntoà R=1
• 1 punto à Tomar el nivel con la más
baja dispersión.
• 2 Puntosà Linealidad perfecta.

¿Esto esta bien? ¿Es esto cierto?

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Haciendo otro balance

Variación de la incertidumbre con el método de calibración

Muestra 1 Muestra 2

11,44%

6,47%

4,75%

3,23%
2,05%
1,57%
0,58%
0,21% 0,25% 0,30%

No ponderada sin No ponderada con Ponderada Un nivel Dos niveles

repeticiones repeticiones

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Variación de la incertidumbre con el método de calibración

15,20%
Muestra 1 Muestra 2

11,92%
11,08% 11,08%
10,52%
10,13% 10,02% 10,22% 10,01% 10,01%

No ponderada sin No ponderada con Ponderada Un nivel Dos niveles

repeticiones repeticiones

¿Y entonces qué hacemos?

Lo siento, soy un
químico analítico
no un mago

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¿Qué proponen ustedes?

No se desanimen
u(c)
Preparación u curva u curva u(c)
Número Muestra
curva muestra 1 muestra 2 Muestra 1
1
No ponderada
sin 0,41% 3,23% 11,44% 10,52% 15,20%
repeticiones
No ponderada
con 0,41% 1,57% 6,47% 10,13% 11,92%
repeticiones
Ponderada 0,41% 0,58% 2,05% 10,02% 10,22%
Un nivel 0,41% 0,21% 4,75% 10,01% 11,08%
Dos niveles 0,41% 0,25% 4,75% 10,01% 11,08%

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GRACIAS

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