DISEÑO DE UN BIORREACTOR TIPO TANQUE AGITADO DE CULTIVO

SUMERGIDO PARA LA OBTENCIÓN DE COMPUESTOS BIOACTIVOS A

PARTIR DE LA SEMILLA DE AGUACATE (Persea americana)

DESIGN OF AN AGITATED TANK-TYPE BIOREACTOR OF SUBMERGED

CROP FOR OBTAINING BIOACTIVE COMPOUNDS FROM AVOCADO SEED
(Persea americana)

Ramón Gonzales, Jesús Núñez, Luis Salcedo, Andrés Núñez, Angélica Arias, Alejandra
Hoyos, Universidad De Sucre, Facultad De Ingeniería, Ingeniería Agroindustrial, (2020)

RESUMEN

El objetivo de este trabajo fue realizar el diseño y dimensionamiento de un biorreactor tipo

tanque agitado a escala de laboratorio para la obtención de compuestos bioactivos a partir de
la semilla de aguacate (Persea americana), para esto se tomaron los valores correspondientes
propios del microorganismo usado Aspergillus niger, y las condiciones óptimas para su
crecimiento, de trabajos previamente realizados por fuentes confiables, y con ayuda de esto
determinar las medidas correspondientes para el sistema de agitación y el biorreactor, al igual
que el gasto energético a ocupar en este, tomando algunas consideraciones termodinámica y
físicamente lógicas, se determinó la potencia requerida por el agitador y la transferencia de
calor por unidad de tiempo

Palabras clave: cultivo sumergido, biorreactor, gasto energético, condiciones.

ABSTRACT

The objective of this work was to carry out the design and sizing of a laboratory-scale stirred
tank bioreactor to obtain bioactive compounds from avocado seed (Persea americana), for
this the corresponding values of the microorganism used were taken. Aspergillus niger, and
the optimal conditions for its growth, from works previously carried out by reliable sources,
and with the help of this determine the corresponding measures for the agitation system and
the bioreactor, as well as the energy expenditure to be occupied in it, taking some
thermodynamic and physically logical considerations, the power required by the stirrer and
the heat transfer per unit time were determined

Keywords: submerged culture, bioreactor, energy expenditure, conditions.

1. INTRODUCCIÓN

Aguacate (Persea americana Mill.) es una fruta subtropical / tropical originaria de México y
América Central, y se produce y consume ampliamente en todo el mundo. Pertenece a la
familia Lauraceae y el género Persea, de las cuales existen más de 150 especies conocidas
(Araújo, Rodriguez-Jasso, Ruiz, Pintado, & Aguilar, 2018). Su consumo es principalmente
en frescos, pero también se procesan para extraer aceite y otros productos. Sin embargo,
componentes de la fruta, incluida la cáscara, la semilla y la pasta desgrasada, no se utilizan
comúnmente y, en cambio, se descartan (Rodríguez-Carpena, Morcuende, Andrade, Kylli, &
Estévez, 2011). De hecho, del 39.6 al 42.4% del aguacate termina como subproducto
descartado y desperdiciado, por lo que buscar alternativas para su uso minimizaría los
desperdicios y problemas ambientales, y genera importantes beneficios nutricionales,
sanitarios e industriales (Yepes, y otros, 2020).

En el caso de la semilla, se ha encontrado que es rico en compuestos biactivos tales como

polifenoles con poder antioxidante y antimicrobiano, incluyendo catequina, epicatequina y
ácido protocatechico (Soong & Barlow, 2004). De modo que explorar el contenido de
compuesto bioactivos de estos desechos como la semilla de aguacate puede conducir a
nuevos productos y agregar valor para la industria (Torres-León, y otros, 2019).

Los compuestos bioactivos generalmente se extraen de fuentes naturales mediante extracción

sólido-líquido utilizando disolventes orgánicos (Martins, Mussato, Martínez, Aguilar, &
Teixeira, 2011). Sin embargo, recientemente se han promovido y fomentado el uso de
procedimientos verdes, con el fin de reducir el impacto ambiental y sanitario negativo de los
métodos utilizados para extraer compuestos bioactivos de los subproductos del aguacate, tal
como es el uso de tratamientos enzimáticos (Wen, Zhang, Sun, & Sivagnanam, 2020).

La fermentación de cultivo sumergido (SMF) implica la inmersión de los microorganismos

en una solución acuosa que contiene todos los nutrientes necesarios para el crecimiento. Es
la técnica más utilizada para la producción de una gran cantidad de productos utilizando una
amplia gama de microorganismos. Por lo general, los ingredientes altamente procesados se
utilizan en el medio para la fermentación sumergida. Las principales ventajas son una mejor
utilización del medio resultante de una mezcla uniforme y el menor costo del procesamiento
posterior, es decir, la extracción del producto. La fermentación sumergida se ha empleado
ampliamente en industrias para la producción a gran escala de alcohol, ácidos orgánicos,
enzimas, vitaminas y aminoácidos (Soccol, Pandey, & Larroche, 2013).

El objetivo de este trabajo es diseñar un biorreactor tipo tanque agitado de cultivo sumergido
a escala laboratorio, para la obtención de compuestos polifenólicos (bioactivos) a partir de la
semilla de aguacate usando Aspergillus Níger como agente biológico en dicho proceso.

2. MATERIALES Y METODOS

Basándonos en el trabajo realizado por Serrat & Mendez (2015), se tomaron en cuenta las
medidas más adaptables para un biorreactor a escala de laboratorio, En el diseño de este
biorreactor se enfatizó en tres cuestiones esenciales de su funcionamiento: capacidad de
garantizar la esterilidad en su interior durante un intervalo de tiempo relativamente largo y la
realización de muestreos periódicos, buena transferencia de oxígeno y mezclado uniforme de
la suspensión celular. Los dos últimos aspectos se relacionan muy estrechamente con los
procesos de agitación y aireación.

En el artículo citado anteriormente se usó como vaso del biorreactor un balón de 2 L, en

nuestro caso decidimos usar las medidas de la altura del cilindro y del diámetro interior para
realizar el diseño de nuestro baso, tomando como material de construcción vidrio borosilicato
el cual es comúnmente usado en los equipos de laboratorio que pueden ser usados para
calentamiento, como lo es el Erlenmeyer, entre otros, las medidas tomadas para la Hc (altura
del cilindro), Di (diámetro interior) y espesor del material de construcción (X) fueron 21 cm,
16 cm y 5 mm respectivamente, partiendo de estas se realizó el diseño de los artefactos de la
parte interna del biorreactor.
Adecuación de la semilla de aguacate

Las semillas de los aguacates se obtendrán en un óptimo estado de maduración

correspondiente a la etapa en la que las semillas son normalmente descartadas por el consumo
o industrialización de la fruta, estas se secarán a 60 ° C durante 24 h, triturados
consecutivamente y clasificados por el tamaño de partícula de 1,5 y 2,5 mm y almacenadas
en bolsas de polietileno a 22 ° C antes de su uso (Yepez et al., 2020).

Condiciones óptimas de trabajo

El pH óptimo para el microorganismo estudiado como agente biológico en la propuesta de

este biorreactor es de 4,5 (medio acido), según las pruebas llevadas a cabo por Meza et al. (
2007) en el laboratorio de microbiología en la universidad Zulia, Maracaibo-Venezuela. La
temperatura de trabajo en el caldo de trabajo será de 30±2 °C y presión atmosférica, para tal
valor nos seguimos por los resultados obtenidos por Revelo et al. (2018). La velocidad de
agitacion será de 80 rpm= 1.33rps, ya que es una velocidad de agitacion promedio según los
valores trabajados por Perez & Guerra (2014), la velocidad de suministro de oxigeno estará
condicionado según los resultados obtenidos por el trabajo antes citado con un vvm de 0,7.

Sistema de agitación

La agitación del sistema se realizará por medio de un agitador mecánico de 150 W de potencia
y rango de agitación de 50-2000 min-1, el cual constará de 4 placas planas, similar al usado
por (Rolon, Acevedo , & Villamizar, 2017) y estará ubicado a una distancia del dispersor de
2.5 cm (Serrat & Mendez, 2015). se colocarán 2 deflectores equidistanciados para garantizar
la no formación de vórtice, cuyas medidas serán brindadas a partir del diseño de la parte
interna del biorreactor.

Suministro de oxigeno

El suministro de aire, estará constituido por una bomba de vacío (Sartorius, Alemana)
operando en reversa, con capacidad máxima de bombeo de 0.67 L·min -1, acoplada a un
rotámetro de gas el que estará conectado mediante una manguera de silicona a un filtro
microbiológico (Midisart® 2000, Alemania) de membrana hidrofóbica (0.2 µm de tamaño
de poro y 20 cm2 de área de filtrado), para garantizar la esterilidad del aire. El filtro se unió
mediante una manguera a la tubería de vidrio que se introduce al biorreactor por la parte
superior y que termina en un dispersor de vidrio horadado, de extremo en forma de espiral
(diámetro de orificios ≈ 3 mm) situado a 2,5 cm por debajo del sistema de agitación (Serrat
& Mendez , 2015).

Sistema de enchaquetado

El sistema de enchaquetado constara de una camisa de agua líquida similar a la usada por
Montesinos (2009), con un espesor de chaqueta (Xchaqueta) de 5 cm con una velocidad de
0,2 m/s, y una temperatura promedio de 40°C, ya que según Revelo et al. (2018) la
temperatura optima de trabajo para el microorganismo usado en este diseño varia entre 30 y
32 °C.

Sistema de medicion y control de temperatura en el caldo de trabajo

La constancia de la temperatura se establecerá por mediante termóstatos sumergidos en el

cultivo, está será controlada de forma automática por medio de una señal enviada señal al
flujo de agua de la chaqueta regulando así la entrada de este en dicho sistema para garantizar
la conservación de la temperatura optima de trabajo en el medio de trabajo.

Volumen de trabajo

Con base en el estudio realizado por Serrat & Mendez (2015) y en las recomendaciones dadas
por (Doran, 1998) el volumen del trabajo será correspondiente al 80% del volumen total, por
tanto, a continuacion se calcula el volumen de trabajo,

𝑉𝑡 = 0,8 ∗ 𝑉𝑏𝑖𝑜 = 0,8 ∗ 0,00463 𝑚3 = 0,003704𝑚3

Propiedades termofísicas del medio de cultivo

Las propiedades termofísicas para el medio de cultivo se tomarán como medidas

aproximadas de trabajos anteriores, en nuestro caso debido a la escasez de estudios
calorimétricos y físicos para el estudio en cuestión, se tomarán los valores brindados por
Montesinos (2009), los cuales son los siguientes:

Viscosidad a 30°C (𝜇): 0,00085 Ns/m2

Conductividad térmica a 30°C (K): 0,614 W/m*K

Numero de Prandtl a 30°C (Pr): 5,77

Sistema para la toma de muestra

Para tomar las muestras en los tiempos dispuestos por el operario en ensayos futuros, se
dispondrá de un orificio con la dimensión del diámetro externo de una pipeta milimetrada, la
cual será usada en la toma de muestra con un extractor manual, cabe mencionar que dicho
orificio estará herméticamente sellado en todo momento a excepción del pequeño intervalo
correspondiente a las tomas de muestra (Ortega, Perez, & Lopez , 2016)

Sistema de salida de gases

Estará conformado por un condensador de reflujo de 30×0,4 cm (largo×diámetro) acoplado

directamente al vaso del biorreactor. Este estará conectado a una trampa química, para evitar
la entrada de contaminantes desde el exterior y contribuir a regular la presión interna (Serrat
& Mendez , 2015).

3. CÁLCULOS PARA EL DIMENSIONAMIENTO DEL BIORREACTOR Y

GASTO ENERGÉTICO

Dimensiones del biorreactor

𝐷𝑡 = 16 𝑐𝑚 = 0,16 𝑚
𝐻𝑐 = 21 𝑐𝑚 = 0,21 𝑚
𝑥 = 5 𝑚𝑚
𝑥 = 0,005 𝑚

ℎ = 3,5 ∗ 𝑥 = 3,5 ∗ (0,005 𝑚) = 0,0175 𝑚

𝐻𝑓𝑡 = 0,193 ∗ 𝐷𝑡 + ℎ
𝐻𝑓𝑡 = 0,193 ∗ (0,16 𝑚) + 0,0175 𝑚
𝐻𝑓𝑡 = 0,04838 𝑚
 𝑉𝑓𝑡 = 0,1 ∗ 𝐷𝑡3
𝑉𝑓𝑡 = 0,1 ∗ (0,16 𝑚)3
𝑉𝑓𝑡 = 0,00041𝑚3

𝐷𝑡
𝑉𝑐 = 𝜋 ∗ 𝑟 2 ∗ 𝐻𝑐 = 𝜋 ∗ ∗ 𝐻𝑐
2
0,16
𝑉𝑐 = 𝜋 ∗ ( 𝑚) ∗ (0,21 𝑚)
2
𝑉𝑐 = 0,00422 𝑚3

𝐴𝑐 = 𝜋 ∗ 𝐷𝑡 ∗ 𝐻𝑐
𝐴𝑐 = 𝜋 ∗ (0,16 𝑚) ∗ (0,21 𝑚)
𝐴𝑐 = 0,105 𝑚2

𝑉𝑓𝑡
𝐴𝑓𝑡 =
𝐻𝑓𝑡
0,00422 𝑚3
𝐴𝑓𝑡 =
0,04838 𝑚
𝐴𝑓𝑡 = 0,00936 𝑚2

𝐶𝑖 = 0,33 ∗ 𝐷𝑡
𝐶𝑖 = 0,33 ∗ (0,16 𝑚)
𝐶𝑖 = 0,0528 𝑚

𝑊𝐵𝑓 = 0,1 ∗ (𝐷𝑡 )

𝑊𝐵𝑓 = 0,1 ∗ (0,16 𝑚)
𝑊𝐵𝑓 = 0,016 𝑚

𝐷𝑖 = 𝐷𝑖𝑎𝑚𝑒𝑡𝑟𝑜 𝑑𝑒𝑙 𝑎𝑔𝑖𝑡𝑎𝑑𝑜𝑟

𝐷𝑖 = 0,33 ∗ 𝐷𝑡
 𝐷𝑖 = 0,0528 𝑚

𝑊𝐵 = 0,2 ∗ 𝐷𝑖
𝑊𝐵 = 0,2 ∗ (0,0528 𝑚)
𝑊𝐵 = 0,01056 𝑚

𝐿𝐵 = 0,25 ∗ 𝐷𝑖
𝐿𝐵 = 0,25 ∗ (0,0528 𝑚)
𝐿𝐵 = 0,0132 𝑚

𝑊𝐵𝑓 = 0,1 ∗ (𝐷𝑡 ) = 0,016 𝑚

𝑉𝐵 = 𝑉𝑐 + 𝑉𝑓𝑡
𝑉𝐵 = 0,00422 𝑚3 + 0,00041𝑚3
𝑉𝐵 = 0,00463 𝑚3

𝐴𝐵𝐼𝑂 = 𝐴𝑐 + 𝐴𝑓𝑡
𝐴𝐵𝐼𝑂 = 0,105 𝑚2 + 0,00936 𝑚2
𝐴𝐵𝐼𝑂 = 0,11436 𝑚2

𝑑𝑑𝑖𝑓𝑢𝑠𝑜𝑟 = 0,003 𝑚

Necesidades energéticas

Determinamos los coeficientes convectivos de transferencia de calor a cada lado de la pared

que esta entre el agua de la chaqueta y el medio de trabajo, iniciamos hallando el valor
correspondiente a la pared en contacto con la chaqueta de calefacción.

Para el H2O, suponemos una temperatura promedio de 40°C

 𝑘𝑔
𝜌 = 992,1
𝑚3
𝑘𝑔
𝜇 = 0,653 × 10−3
𝑚𝑠
𝑊
𝑘 = 0,631
𝑚𝐾
𝐽
𝐶𝑝 = 4179
𝑘𝑔𝐾
𝑅 = 4,32
𝑚
𝑣 = 0,2
𝑠
𝑥𝑐ℎ ∗ 𝑣 ∗ 𝜌
𝑅𝑒 =
𝜇
𝑚 𝑘𝑔
(0,05 𝑚) ∗ (0,2 𝑠 ) ∗ (992,1 3 )
𝑅𝑒 = 𝑚
𝑘𝑔
0,653 × 10−3 𝑚𝑠

𝑅𝑒𝐻2 𝑂 = 15192,95

A partir del número de Reynolds se entiende entonces que el flujo es turbulento.

Con la siguiente correlación tomada del libro (Cengel, 2007)

1
ℎ∗𝑥
𝑁𝑢 = = 0,0296 ∗ 𝑅𝑒0,8 ∗ 𝑃𝑟3
𝑘
1
𝑁𝑢 = 0,0296 ∗ (15192,95)0,8 ∗ (4,32)3 = 106,78
𝑊
𝑁𝑢 ∗ 𝑘 (106,78) ∗ (0,631 𝑚𝐾 ) 𝑊
ℎ= = = 1347,31 2
𝑥 0,058 𝑚 𝑚 𝐾
En este mismo orden de ideas desarrollamos los cálculos necesarios para determinar el
coeficiente convectivo de transferencia de calor para el lado de la pared en contacto con el
medio de trabajo
𝑁𝑠 𝑘𝑔
𝜇 = 0,00085 = 0,00085
𝑚2 𝑚𝑠
𝑊
𝑘 = 0,614
𝑚𝐾
 𝑃𝑟 = 5,77
𝐶𝑝 ∗𝜇 𝑃𝑟 ∗𝑘
Como 𝑃𝑟 = ; entonces 𝐶𝑝 =
𝑘 𝜇

𝑊
(5,77) ∗ (0,614 𝑚𝐾 ) 𝐽
𝐶𝑝 = = 4167,97
𝑘𝑔 𝑘𝑔𝐾
0,00085 𝑚𝑠

𝑣 = 1,33 𝑟𝑝𝑠

𝑣 ∗ 𝐷𝑖 ∗ 𝜌
𝑅𝑒 =
𝜇

La densidad del fluido fue determinada mediante la correlación de Okos Choi (1986),
𝜌 = 9,2559 × 102 + 4,1757 × 10−1 𝑇, donde T es la temperatura promedio.

(32 + 30)°𝐶
𝑇𝑝𝑟𝑜 = = 31°𝐶 = 304,15 𝐾
2

𝜌 = 9,2559 × 102 + 4,1757 × 10−1 (304,15 𝐾)

𝑘𝑔
𝜌 = 1052,59
𝑚3

(0,0528) ∗ (1052,59) ∗ (1,33)

𝑅𝑒 = = 86961,59
0,00085

El número de Reynolds de 86961,59 nos indica que el flujo es turbulento. Para determinar
2
el número de Nusselt, se usó la formula dada en clase 𝑁𝑢 = 0,44 ∗ 𝑅𝑒3 ∗ (𝜇/𝜇𝑝 )0,24,
asumiendo que 𝜇𝑝 ≅ 𝜇.

2
1/3
𝑁𝑢 = 0,44 ∗ 𝑅𝑒3 ∗ 𝑃𝑟

2 1
𝑁𝑢 = 0,44 ∗ (86961,59)3 ∗ (5,77)3 = 1549,04
 𝑊
𝑁𝑢 ∗ 𝑘 (1549,04) ∗ (0,614 𝑚𝐾 )
ℎ= =
𝑥 0,0528 𝑚

𝑊
ℎ = 18013,47
𝑚2 𝐾

según (De Dietrich, 2020), la conductividad del material de conducción entre 20 – 200°C es
𝑊
𝑘 = 1,2 𝑚𝐾.

Con los datos hallados anteriormente, determinamos el coeficiente global de transferencia de

calor U.

1 1 𝑥 1
= + +
𝑈 ℎ1 𝑘 ℎ2

1 1 0,005 𝑚 1
= + +
𝑈 18013,47 𝑊 𝑊 𝑊
1,2 𝑚𝐾 1347,31 2
𝑚2 𝐾 𝑚 𝐾

𝑊
𝑈 = 201,43
𝑚2 𝐾

El área de trabajo del biorreactor es el 80% del área total.

𝐴𝑡𝑟𝑎𝑏 = 0,80 ∗ 𝐴𝐵𝐼𝑂 = 0,8 ∗ (0,11436 𝑚2 )

𝐴𝑡𝑟𝑎𝑏 = 0,091488 𝑚2

𝑄 = 𝑈𝐴𝑡𝑟𝑎𝑏 (𝑇𝑝𝑟𝑜𝑚𝐻2 𝑂 𝑇𝑝𝑟𝑜𝑚𝐶𝑎𝑙𝑑𝑜 )

𝑊
𝑄 = (201,43 ) ∗ (0,091488 𝑚2 )(40°𝐶 − 30°𝐶)
𝑚2 𝐾

𝑄 = 184,28 𝑊

Gasto energético del sistema.

Basándonos en el Re impulsor de trabajo, determinamos la potencia del agitador.

𝑃 = 𝑁𝑝𝑜 ∗ 𝑁 3 ∗ 𝐷𝑖5 ∗ 𝜌, donde 𝑁𝑝𝑜 = 5,9

𝑘𝑔
𝑃 = (5,9) ∗ (1,33)3 ∗ (0,0528 𝑚)5 ∗ (1052,59 )
𝑚3
 𝑃 = 0,010 𝑊

Partiendo de los resultados anteriores podemos decir que el gasto energético para mantener
la temperatura del sistema en un rango optimo en el cual el agente biológico usado se
mantenga trabajando de la mejor manera posible, según Revelo et al. (2018), es de 184,28
W, el valor relativamente bajo de este calor requerido viene afectado por las condiciones de
trabajo, al igual que las dimensiones del biorreactor en cuestion y la cantidad de medio de
trabajo (Doran, 1998).

Tambien se pudo determinar la potencia requerida para el sistema de agitacion basandonos

en el numero de Reynolds y las graficas de potensian suponiendo una turbina tipo Rushton
de aspas planas, con 4 deflectores, según las correlaciones brindadas por Doran (1998), el
cual resultó en un valor de 0,010 W

4. CONCLUSIONES

A partir de datos experimentals previamene obtenidos se pudo diseñar un biorreactor tipo

tanque agitado a escala de laboratorio para la produccion de compuestos bioactivos a partir
de la semilla de aguacate, usando como agene biologico el microorganismo Aspergillus
niger, se determinaron las medidas correspondientes a las dimensiones del sistema de
agitación y el biorreactor, al igual que el gasto energético y la potencia requerida por el
sistema de agitación.
 5. REFERENCIAS

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