Aplicaciones potenciales de los peces

transgénicos al monitoreo ambiental y

la toxicología
Ng, Lam, Sukardi & Gong
Grupo 1.2 - Ecotoxicología Acuática
Integrantes:
Stefanno Tang
Catalina Porras
Alexandra Mendoza

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Introducción
Controversia en su venta
Preocupación ecologica
Tasa de crecimiento Seguridad sanitaria
Desde 1980
Estudio en más de Resistencia a
Tecnología transgénica
35 especies congelación y
enfermedades

Herramientas:
● Promotores específicos Ingeniería de Construcción de genes
de tejido biomonitoreo de peces con promotor inducible
● Genes informadores de
transgénicos por contaminantes
colores vivos (GFP)
Gen indicador
Identificación y caracterización
Codificación de GFP
de nuevos promotores

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 Modelos en Toxicología acuática: Pez cebra y medaka
Caracteristicas
Tiempo de generación corto ★ Pez templado de agua
Facilidad en Alta fecundidad, dulce (0°C-30°C)
● Analisis geneticos Facilidad de manipulación, ★ Familia Adrianichthyidae
● Tecnología transgénica microinyección de embriones ★ Asia (Japon, Corea, China)
Oryzias latipes
transparentes, cría de peces

Caracteristicas
★ Pez tropical de agua dulce
(24°C-30°C)
★ Familia Cyprinidae
★ Rios del sur de Asia
(India, Pakistan, Nepal)
Amplio rango de
salinidad y temperatura
Ventajas en el Identificación sexual:
desarrollo de peces genético y morfológico
de biomonitoreo ↑ # de estudios toxicológicos
Danio rerio ↑ Transparencia en pared
corporal (mejor detección)

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Modelos de Biomonitorización de Peces

Promotores genéticos inducibles

Desarrollo de peces ● CAT (cloranfenicol
transgénicos de biomonitoreo Genes indicadores Clasicos acetiltransferasa)
de colores vivos ● LacZ (β-galactosidasa)
● Luciferasa
Modelos para
transgénicos ecotoxicología
Facilidad de Cuantificación de
detección (in vivo) actividad transgénica

GFP Intensidad de DP Cantidad de

Dinamismo de patrones
genéticos en tiempo real fluorescencia de GFP proteínas
en periodos largos Tiempo de
CCD
exposición

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Compuestos Estrogénicos
Naturales Bajo o nula
Estrogenos
Xenoestrogenos
(Hormonas) Indicador de
Sinteticos Inducción de En Hígado de
Vitelogeninas (Vtgs) Hembras maduras contaminación
Disruptores Deterioro estrogénica
endocrinos reproductivo

LOEC
Desarrollo medaka transgénico GFP Concentración mínima
bajo el promotor inducible por de efectos observados
estrógenos del gen medaka vtg1
E2 (Estradiol) Hemicigotos
Danio rerio Oryzias latipes 0,1 µg / L
Peces
ARNm Vtgs 17-β-estradiol transgenicos Homocigotos
inducible (E2) exógeno 0,05 µg / L
Efluente de
aguas residuales 0.027–0.24 µg / L
(Zeng et al.2005)

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Compuestos Estrogénicos
Inducción de 17-β-estradiol
● 17-α-etinilestradiol
Coriogenina H y L (E2) exógeno
● Estriol Inducción de Vtgs
● Dietilestilbestrol por GFP en medaka Oryzias latipes
● Bisfenol A transgénica
Salam et al. (2008) 0.025 µg / L
● 4-n-nonilfenol LOEC
Kurauchi et al. (2005) 0.1 µg / L
E2
(Zeng et al.2005) 0,171 µg / L

Leger et al. (2000)

Mayor sensibilidad al E2
tras segundo tratamiento Inducción de (E2)
en el mismo pez actividad luciferasa exógeno
(Zeng et al.2005)
Mayor actividad en
testículos e hígado
Danio rerio

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 METALES PESADOS

GFP
+ Utíl
Producción HSP70
Estrés Detección de
metales
pesados
Marcador de Pez cebra
Proteínas HSP70
toxicidad transgenico Epitelio
Piel
respiratorio
Branquias

HSP70 Expresión de GFP

Gen informador es
inducida por Luciferasa sensible al electrófilo
Arsenato de Sodio
(EPRE). En presencia de
mercurio, solo se
observó la presencia de
Línea útil para luciferasa en esta línea
categorías específicas de peces
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 CONTAMINANTES ORGÁNICOS PERSISTENTES

Se bioacumulan en la cadena trofica Persisten en el medio ambiente

COP
Presentan efectos adversos en la Incluyen HAP, dioxinas, bifenoles,
salud humana y medio ambiental pesticidas etc.

P1a1Luc (gen luciferasa)

Inducibles por los COP Citocromo P450
P1a1GFP (gen GFP) CYP1a1

Métabolismo xenobiotico

Actividad de la
Transfección de P1a1Luc Células del hígado (pez cebra)
luciferasa

Expresión de GFP
Embriones de pez En ojos, nariz y vértebras COP - Dioxina
por presencia de
cebra con P1a1GFP
TCDD
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 MUTAGENOS

COP’s + Aminas Exposición a mutagenos Extracción de

heterociclicas ADN genómico de
los peces

Medaka transgenica lambda

Mutagenos (tiene copias del baceriofago Transferencia a
lambda) células bacterianas
para el análisis de
mutaciones

Contienen el gen lacI o cII

Análisis de perfiles
mutacionales para
deducir los COP’s

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 DETECCIÓN DE TOXICIDAD DE COMPUESTOS UTILIZANDO LARVAS Y
EMBRIONES TRANSGÉNICOS FLUORESCENTES

Peces
transgénicos que D muestra la
expresan expresión del GFP
proteínas en el sistema
fluorescentes en nervioso
tejidos u órganos
específicos
F revela la
neurotoxicidad
causada por el
aumento de E2
(estradiol) en la
Detección de
médula espinal
compuestos
que causan
toxicidad

G y H: Efectos inhibidores de E2 sobre la vascularización y el tamaño del hígado

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 VENTAJAS DE LOS BIOMONITORIZADORES EN
PECES TRANSGÉNICOS

SIN SACRIFICIO IN VIVO

No requiere de sacrificio en los Estas pruebas demuestran la
organismos, permite el seguimiento biodisponibilidad del
continuo de un pez y reducen las producto químico y la
variaciones biológicas y técnicas potencia del mismo
(menos peces)
CARACTERIZACIÓN DE INDICADOR EFICIENTE
CONTAMINANTES Funcionan como indicadores
No requiere de una caracterización tempranos y sensibles de
de contaminantes , ya la proporciona estresores ambientales

FACTIBILIDAD
Las instalaciones son económicas y sencillas. No requieren de instalaciones sofisticadas. La mayor
ventaja del biomonitoreo de peces es la viabilidad de desarrollar un sistema de monitoreo en el
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sitio y / o en línea, detectando y reportando inmediatamente la contaminación acuática
Perspectiva 1 : Promotores de diseño en peces transgénicos
Crear promotores artificiales
Leger et al. 2000
● Promotor artificial → 3
repeticiones en tándem →
Actividad del estrógeno
(EREs)
zebrafish
Elementos respuesta (REs)
Mejora la transcripción
de genes
Aumenta la sensibilidad
al monitoreo ambiental
Xenobiótico
Carvan et al. 2000
● Exposición de estrés
oxidativo y tratamientos
con mercurio → Gen
Proteico Luciferase-GFP
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 Perspectiva 2: Biomonitoreo de peces transgénicos multicolores
Propiedades fluorescentes mediante la modificación del cromatóforo

¿Doble expresión?
Green Fluorescent
Protein (GFP)

Expresión de Expresión de GFP

GFP en células en páncreas
de piel y RFP exocrino y RFP en
Yellow Fluorescent en músculo. hígado.
Protein (YFP)

OBJETIVO
Desarrollar peces transgénicos
Red Fluorescent multicolores para monitorear
Protein (RFP) múltiples contaminantes
ambientales simultáneamente

Cyan Fluorescent Blue Fluorescent

Protein (CFP) Protein (BFP)

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 Perspectiva 3 : Microarrays y toxicogenómica

Permite identificar la
“huella”que produce
estar expuesto al
contaminante

Mecanismos de acción Riesgos de salud Biomarcadores Compuestos que pueden actuar de

forma similar

Conjuntos de genes biomarcadores que son

altamente sensibles a factores estresantes específicos, pueden usarse
como "estándares referencia ”para detectar la presencia de ciertos
tóxicos o predecir el modo de acción de compuestos desconocidos

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● CONCLUSIONES