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ESTEROLES
Profesor
Alejandro Martínez Martínez
Facultad de Química Farmacéutica
E-mail:
amart@muiscas.udea.edu.co
21 22 24 26
20
18 23 25
12
17
11 27
16
19 13
1
2 9 14 15
10 8
3
7
HO 4
5
6
1. Varkony T.H., Smith D.H., Djerassi C., TETRAHEDRON 34, 841 (1978).
22 24
HO
Colesterol (R=H) HO
Campesterol (R=Me)
Sitosterol (R=Et) Ergosterol (insat. C-22)
Estigmasterol (R=Et, insat. C-22) Fucosterol (insat. 24-28)
HOCH2 HO
C
HO HO
PROPIEDADES FISICAS
La gran mayoría de esteroles conocidos son sólidos cristalinos incoloros, solubles
en solventes orgánicos relativamente apolares (Cloroformo, Benceno, etc.),
menos solubles en alcoholes de bajo peso molecular, y que funden sin
descomponerse (En forma libre o esterificada). Presentan además actividad óptica
debido a los carbonos asimétricos que poseen. Los esteroles se pueden
recristalizar en metanol caliente o en la mezcla metanol-tetrahidrofurano 10:1,
formando cristales en forma de agujas brillantes incoloras. Los que presentan
dobles enlaces conjugados son de color amarillento y tienden a descomponerse
R R
O2
hv HO O
HO
O
BIOGENESIS
Los esteroles se derivan biogenéticamente de la AcetilCoA (Ruta del Acetato) vía
mevalonato y escualeno. Los esteroles vegetales tienen como precursor inmediato
al cicloartenol2, mientras que los animales tienen al lanosterol (Figura 3). De una
forma análoga se originan los triterpenoides.
En la biogénesis de los esteroles también están implicados procesos tales como
hidrogenaciones y deshidrogenaciones C-C, metilaciones (vía S-
adenosilmetionina), hidroxilaciones, etc.
Un hecho estructural notable es que la gran mayoría de esteroles naturales tienen
sustituyentes alquílicos sobre los carbonos 4 y 24 fundamentalmente, y este
hecho es justificado por la misma biogénesis.
El conocimiento de la biosíntesis de esteroides ha contribuido al desarrollo de la
Quimotaxonomía vegetal, particularmente en el caso de las algas, y ha servido
para correlacionar la estructura de estas sustancias con aspectos evolutivos.
Para una revisión sobre el origen y la biosíntesis de esteroles de esponjas
marinas puede consultarse el artículo de Djerassi y Silva 3. Para procedimientos
de síntesis química análogos a la ciclización del escualeno consultar el trabajo de
Zoretic y col.4
HECHOS ESTRUCTURALES
Los esteroles naturales conocidos presentan las siguientes características
estructurales:
d. La cadena lateral presenta grupos alquilo (metilo, etilo, isopropilo, propilo, etc.)
principalmente en C-24.
5Duque, C.; Martínez, A.; Peñuela, G.; REV. COL. QUIM. 12(1) 51 (1983).
OPP
Farnesil-PP
[O]
O
Escualeno
HO
HO
Esteroles
vegetales
HO
Cicloartenol
a. EXTRACCION
El método más utilizado para la extracción de esteroles libres y esterificados es el
de Bligh y Dyer. El tejido vegetal seco y molido se extrae a temperaturas menores
de 40°C, con un volumen suficiente de una mezcla Cloroformo:Metanol 2:1. Toda
esta mezcla se filtra y al filtrado obtenido se le hace partición con un volumen
adecuado de agua. La fase clorofórmica contiene entonces todos los compuestos
liposolubles tales como esteroides, triglicéridos, otros terpenoides, ácidos grasos,
etc.
Cuando se sabe de antemano que la muestra contiene glicósidos esteroides, y se
desea estudiar sus respectivas agliconas, entonces el material vegetal se extrae
con alcohol o con una mezcla alcohol:agua, y el extracto obtenido se hidroliza con
HCl 2M.
Existe un procedimiento a escala industrial para la obtención del colesterol de
médula de bovinos6. Así mismo se ha descrito un proceso de obtención de los
fitosteroles a partir de la "cachaza" de la caña de azúcar7.
La Cromatografía de Gases con fases estacionarias como OV-17 (1%, 3%, 5%),
SE-54, etc., con temperaturas de 250-280°C, permite una buena separación y
análisis de mezclas esterólicas. Además, si esta se acopla con un espectrómetro
de masas de impacto electrónico, se obtienen los respectivos espectros de
masas, los cuales facilitan la identificación.
9. Ikekawa N., Fujimoto Y., Kadota S., Kikuchi T., J. CHROMATOG. 468, 91 (1989).
10 Martínez, A., Duque, C., Resultados sin publicar.
11Popov, S.; Carlson, R. M. K., Weggmann, A.; Djerassi, C.; STEROIDS 28, 699 (1976).
ENSAYO DE LIEBERMANN-BURCHARD
Los esteroles se pueden reconocer fácilmente en los análisis fitoquímicos
preliminares de muestras vegetales y animales mediante el ensayo de
Liebermann-Burchard. En este ensayo, a una solución clorofórmica de la muestra
que se analiza, se le agrega un volumen igual de anhídrido acético y una gota de
ácido sulfúrico concentrado (98%). Si hay esteroles, se producen coloraciones
verdes, violetas, rojas o azules.
Aunque no se conoce el mecanismo de esta prueba, es muy utilizada. Algunos
autores aseguran que la dan positiva solamente los esteroles que tengan en su
estructura grupos dieno conjugados reales o potenciales (por ejemplo en los D5-3-
hidroxiesteroides la deshidratación genera un D3,5 dieno).
ESPECTROSCOPIA INFRARROJO
Los espectros infrarrojo de la mayoría de esteroles naturales son bastante simples
y similares a los de alcoholes alifáticos saturados o insaturados. Generalmente se
observan: Una banda de tensión O-H alrededor de 3600 cm-1, bandas de tensión
de enlaces C-H saturados alrededor de 2960-2780 cm-1, bandas de tensión de
enlaces =C-H alrededor de 3125-3030 cm-1, bandas de flexión de enlaces
saturados C-H alrededor de 1440 y 1380 cm-1 y bandas de tensión de enlaces
C=C olefínicos alrededor de 1670 cm-1 (Generalmente es una banda débil que a
veces no se observa). Existe una colección de espectros infrarrojo de esteroles.
Una aplicación interesante de la espectroscopia infrarrojo es que permite
diferenciar por ejemplo entre los ésteres de esteroles y otros tipos de sustancias
como los triglicéridos y los fosfolípidos13.
14a) Budzikiewicz et al., "Mass Spectrometry of Natural Products", Vol. II: Steroids; Holden-Day,
San Francisco, 1964. b) J. ORG. CHEM. 42 (4) 725 (1977). c) J. ORG. CHEM. 46 954 (1981). d) J.
AMER. CHEM. SOC. 102 (2) 807 (1980). e) REV. LATIN. QUIM. 15 (3) 107 (1984). f) PURE APPL.
CHEM. 50, 171 (1978). g) J. AMER. CHEM. SOC. 100, 7677 (1978). h) BULL. SOC. CHIM. BELG.
87 (7) 539 (1978). i) TETRAHEDRON 44 (5) 1359 (1982).
XO M+. HO
m/z 233
-XOH
-H2O
R
X=Ac -R
[M-AcOH-41]+
-CH3
M-XOH m/z 257
R
m/z 316 si
insat. en C-24
X=H
m/z 215
m/z 147
m/z 330 si
insat. en C-25
X=H
X=H X=H
[M-85]+
[M-111]+ -R
XO M+. HO
m/z 273
-XOH
-H2O
R
X=Ac -R
[M-AcOH-41]+
-CH3
M-XOH m/z 255
R
m/z 314 si
insat. en C-24
X=H
m/z 213
m/z 145
m/z 328 si
insat. en C-25
X=H
-CH3 X=H
[M-CH3]+
XO M+. HO
m/z 246
-XOH
R
X=Ac -R
[M-AcOH-41]+
-CH3
M-XOH m/z 255
R
m/z 314 si
insat. en C-24
X=H
m/z 213
m/z 145
m/z 328 si
insat. en C-25
X=H
-CH3 X=H
[M-CH3]+
-R
XO M+. HO
m/z 271
-XOH
-H2O
R
X=Ac -R
[M-AcOH-41]+
-CH3
m/z 253
M-XOH
R
[M-XOH-15]+
m/z 158
-CH3
-CH3
m/z 211
m/z 143 m/z 128
ESPECTROSCOPIA ULTRAVIOLETA
Debido a que la mayoría de esteroles naturales contienen grupos funcionales tales
como enlaces dobles C=C y el grupo hidroxilo, sus espectros ultravioleta en
metanol (200-360 nm) únicamente muestran un máximo de absorción alrededor
de 205 nm, debido a transiciones p-p* del enlace doble aislado. Sin embargo, para
esteroles con grupos dienos conjugados como por ejemplo el ergosterol, estos sí
absorben intensamente en la región citada y la posición de los máximos de
absorción se puede predecir con las reglas de Woodward-Fieser para dienos
conjugados. Por ejemplo, los esteroles con núcleo D5,7-3-hidroxiandrostadieno
presentan máximos de absorción alrededor de 240, 270, 280 y 290 nm (Figura 7),
mientras que los esteroles con núcleo D5,7,9(11)-3-hidroxiandrostatrieno
presentan máximos de absorción alrededor de 310, 325 y 340 nm19.
Los esteroides con el cromóforo D4-3-oxa muestran un máximo característico
alrededor de 240 nm.
Absorbancia
20 Nota: Rehman y col. reportan que si el desplazamiento químico del C-3 es alrededor de 77 ppm,
este es un indicio de un esterol con un carbohidrato ligado a través del C-3. (Rehnan, A-U. y col.,
PHYTOCHEMISTRY 45 (8) 1721 (1997).
21Kalinowski, H-O.; Berger, S.; Braun, S.; "Carbon-13 NMR Spectroscopy", John Wiley & sons,
DIFRACTOMETRIA DE RAYOS-X
Aunque el notable desarrollo de las técnicas de RMN ha ayudado mucho en la
asignación estereoquímica de los esteroles, más recientemente, y gracias a la
ayuda del computador, actualmente es posible la asignación espacial completa de
los esteroles por difractometría de Rayos-X. Un ejemplo de esto es la asignación
estereoquímica y espacial hecha para el numersterol-A aislado del coral Sinularia
numerosa27.
1983.
24-METILCOLESTA-5,7,22-TRIEN-3-OL
Los sufijos dependen del grupo más oxidado, p. ej. el carbonilo es un sufijo
preferible frente a un grupo hidroxilo.
Los esteroles que posean un anillo contraído, por ejemplo algunos esteroles
marinos en los cuales el anillo A es de 5 carbonos, se les denomina nor-
esteroles, por ejemplo: A-Norcolesterol. Los que poseen un anillo expandido se
les denomina homo-esteroles. Los esteroles con un enlace roto o ausente en
alguno de los anillos se los denomina seco-esteroles.
(24S)-24-ETILCOLEST-7,22E-DIEN-3b-OL
24x-ETILCOLEST-7,22E-DIEN-3b-OL
29En orden de prioridad: alquilos>haluros>nitro, pero los dos últimos no se encuentran presentes
en esteroles de origen natural. En el caso de los esteroles sintéticos que poseen heteroátomos
conformando alguno de los anillos, se los nombra con los prefijos aza, tia u oxa, según si el
heteroátomo involucrado es N, S u O, respectivamente.
OOH
OH
HO HO
OH
OOH
HO HO
CHO
N
2 etapas
HO O
O
Estigmasterol
O
OAc
HO O
R O
F OH
HO 9 etapas
O
O O
9-fluorocorticoides
Figura 9. Esquema del proceso de conversión química y microbiológica de
estigmasterol en fluorocorticoides
R
O
2 etapas
HO F
O
2 etapas
OH OH
COOH
etc.
O O
Etisterona
Figura 10. Esquema del proceso químico y microbiológico para la conversión de
colesterol y sitosterol en medicamentos esteroides
O O
O
O
Espectro infrarrojo en KBr: 3400, 2970, 2870, 1450, 1380, 1370, 1140, 970, 850,
830 cm-1, etc.
Espectro de masas I.E.: 412 (22%), 397(7), 369(7), 300(14), 299(8), 285(5),
273(24), 272(27), 271(100), 257(8), 256(7), 255(32), 253(8), 247(5), 246(14),
231(11), 229(14), 215(7), 213(15), etc.
Espectro infrarrojo: 3500, 2900, 1480, 1400, 1070, 970 cm-1, etc.
0.690 ppm, s, 3H
0.815 ppm, d, 3H, J=6.8 Hz
0.833 ppm, d, 3H, J=6.8 Hz
0.906 ppm, d, 3H, J=6.8 Hz
1.003 ppm, d, 3H, J=6.5 Hz
1.016 ppm, s, 3H
2.031 ppm, s, 3H
4.5-4.7 ppm, m, 1H
5.16-5.19 ppm, m, 2H
5.38 ppm, m, 1H
6) Determine la estructura más probable para una sustancia animal cuyo espectro
de masas de impacto electrónico muestra entre otros los siguientes fragmentos:
P.F. 112-112.5°C
[a]D = -43° (c= 0.39, Diclorometano)
Espectro RMN-13C:
d: 153.9, 140.9, 121.7, 107.9, 71.8, 56.9, 56.1, 50.3, 49.1, 42.4, 39.9, 37.4, 36.6,
36.1, 33.9, 32.0, 31.7, 30.3, 28.1, 26.6, 25.5, 24.3, 21.2, 19.4, 18.9, 12.3, 11.9
ppm
De la esponja Ircinia campana se aisló una mezcla de esteroles con las siguientes
características espectrales:
EMIE m/z (% I.R.): 396 (73%), 363 (100), 337 (38), 271 (10), 253 (28), 211 (23),
157 (25), 143 (35), 69 (45). RMN-1H (400 MHz, CDCl3): 0.630 (s, 3H), 0.840 (d,
6H, J=7.81 Hz), 0.935 (d, 3H, J=7.81 Hz), 0.945 (s, 3H), 1.030 (d, 3H, J=6.84 Hz),
3.647 (m, 1H), 5.171 (m, 1H), 5.182 (m, 1H), 5.394 (m, 1H). EMIE (derivado
acetilado) m/z: 438 (9%), 378 (100), 363 (37), 337 (7), 253 (33), 211 (12), 157
(35), 143 (26), 109 (16), 43 (35). UV máx (metanol): 260h, 270, 282, 294 nm.
EMIE m/z (% I.R.): 396 (63%), 363 (100), 337 (38), 271 (12), 251 (13), 211 (22),
157 (20), 143 (45), 69 (33), 55 (42). RMN-1H (400 MHz, CDCl3): 0.625 (s, 3H),
0.975 (d, 3H, J=6.35 Hz), 0.947 (s, 3H), 1.027 (d, 3H, J=6.83 Hz), 1.032 (d, 3H,
J=6.84 Hz), 3.65 (m, 1H), 4.662 (m, 1H), 4.664 (m, 1H), 5.4 (m, 1H). UV máx
(metanol): 260h, 269, 280, 292 nm.
EMIE m/z (% I.R.): 400 (100%), 385 (38), 382 (48), 367 (30), 315 (45), 289 (55),
273 (32), 255 (28), 231 (10), 213 (18), 145 (38), 107 (35), 55 (42), 43 (50). EMIE
(derivado acetilado) m/z: 442 (21%), 382 (100), 367 (26), 281 (16), 255 (21), 207
(28), 147 (42), 145 (33), 133 (28), 43 (88).
EMIE m/z (% I.R.): 410 (63%), 377 (100), 351 (30), 271 (8), 253 (28), 211 (23),
143 (25), 83 (38), 55 (39). RMN-1H (500 MHz, CDCl3): 0.638 (s, 3H), 0.811 (t, 3H,
J=7.34 Hz), 0.849 (d, 3H, J=6.42 Hz), 0.855 (d, 3H, J=6.42 Hz), 0.950 (s, 3H),
1.051 (d, 3H, J=6.42 Hz), 3.6 (m, 1H), 5.041 (dd, 1H, J=14.66 y 8.71 Hz), 5.163
(dd, 1H, J=15.12 y 6.41 Hz), 5.389 (m, 1H), 5.576 (m, 1H). EMIE (derivado
acetilado) m/z: 452 (7%), 392 (100), 377 (31), 349 (5), 253 (31), 211 (12), 157
(36), 143 (24), 43 (31). UVmáx (metanol): 260h, 270, 282, 294 nm.
Problema 16a
El espectro de masas muestra el ion molecular en m/z 384 consistente con la
fórmula molecular C27H44O. También pueden observarse los iones m/z 369
(pérdida de un grupo metilo), 366 (pérdida de una molécula de agua) y 351
(pérdida de un grupo metilo y una molécula de agua), característicos de esteroles.
Los iones m/z 271 (pérdida de la cadena lateral), 253 (pérdida de la cadena lateral
y una molécula de agua), 253 (pérdida de la cadena lateral y una molécula de
agua) y 211 (fisión del anillo D menos agua), indican claramente la presencia de
dos insaturaciones en el núcleo, y los iones m/z 158 (fisión entre anillos B y C),
143 (158 menos un grupo metilo) y 128 (158 menos dos grupos metilo) hacen
evidente que las insaturaciones están en el C-5 y en el C-7 (ver Figura 6.d). La
diferencia entre el ion molecular y el ion m/z 271 (pérdida de la cadena lateral)
indica que la cadena lateral de este esterol es saturada con la fórmula C 8H17.
Todo este análisis lleva a la conclusión de que este compuesto es un esterol con
núcleo D5,7-3-hidroxiandrostadieno con una cadena lateral saturada de ocho
átomos de carbono.
HO
Problema 16b
El espectro de masas muestra el ion molecular m/z: 410 consistente con la
fórmula C29H46O. También se observa el fragmento m/z 377 (M-metilo-agua)
característico de esteroles. Los iones m/z 271 (M-cadena lateral), 253 (271-agua)
y 211 (fisión del anillo D y pérdida de una molécula de agua) indican claramente la
presencia de dos insaturaciones en el núcleo y los iones m/z 128, 143 y 158
hacen evidente que estas insaturaciones están en el C-5 y el C-7. La diferencia
entre el ion molecular y el ion m/z 271 (M-cadena lateral) indica que la cadena
lateral de este componente es monoinsaturada con una fórmula C10H19. Todo
este análisis lleva a la conclusión de que este es un esterol con un núcleo D5,7-3b-
hidroxiandrostadieno con una cadena lateral monoinsaturada.
El espectro de RMN-1H muestra las señales d 0.638 (s, CH3-18), 0.950 (s, CH3-
19), 3.6 (m, H-3), 5.389 (m, H-6), 5.576 (m, H-7). Las señales d5.046 (dd, J=15.6 y
8.7 Hz) y 5.181 (dd, J=15.1 y 6.4 Hz) corresponden a los protones H-22 y H-23
con geometría E. La señal 0.811 (t, J=7.3 Hz) es la del grupo CH 3-29 que está
ligado a un grupo metileno. Este análisis permitió asignar la estructura del (22E,24
x)-24-Etilcolesta-5,7,22E-trién-3ß-ol para esta sustancia.
HO