Virus trasmitidos por insectos vectores en CA

tomatePÍ
en T
la UL
RegiónO 2 y Parinacota: situación actual y manejo
de Arica

PROSPECCIÓN Y DIAGNÓSTICO
DE VIRUS EN TOMATE
Marlene Rosales V.
Bioquímica Ph.D.
Claudia Medina V.
Bioquímica.
Roxana Mora R.
Técnica Química.
Claudia Rojas B.
Ingeniera Agrónoma.

E
l cultivo de tomate se ve afectado por más de 200 enfermedades
causadas por hongos, nematodos y virus, que afectan al cultivo
en diferentes estados de su desarrollo produciendo disminucio-
nes importantes en el rendimiento. En el año 2007, las condiciones
climáticas imperantes permitieron la dispersión y manifestación de en-
fermedades de origen viral, las que llegaron a producir considerables
pérdidas en la producción de tomates en el Valle de Azapa de la Re-
gión de Arica y Parinacota. Por ello, durante el desarrollo del proyecto
“Validación del paquete tecnológico para el manejo de virus transmiti-
dos por mosquitas blancas en el cultivo del tomate en la Región de
Arica y Parinacota” financiado por el gobierno regional, se clarificó la
etiología o identidad de los agentes causales de estas enfermedades
virales, así como sus agentes vectores, de forma de diseñar estrategias
de manejo y control para los distintos agentes virales y sus vectores.

METODOLOGÍA EMPLEADA
PARA EL DIAGNÓSTICO VIRAL

Dos técnicas fueron utilizadas para la detección y diagnostico viral: la

p ru eb a in mu no en zi má ti c a li ga da a e nz imas ( E nz yme L in ke d
Immunosorbent Assay, ELISA) y la reacción en cadena de la polimerasa
(Polymerase Chain Reaction, PCR).

Boletín INIA, Nº 224 21

 Virus trasmitidos por insectos vectores en tomate en la Región de Arica y Parinacota: situación actual y manejo

La prueba de ELISA es una técnica basada en la utilización de

anticuerpos policlonales o monoclonales que permiten detectar
antígenos específicos, es una técnica rápida, de sensibilidad interme-
dia y de fácil ejecución, lo que permite analizar un gran número de
muestra. Esta técnica se utilizó para analizar ocho virus que usualmen-
te afectan el cultivo de tomate como son: Virus pertenecientes al géne-
ro Potyvirus, Virus del mosaico del pepino (CMV), Virus del mosaico
de la alfalfa (AMV), Virus del mosaico del pepino dulce (PepMV), Virus
del mosaico del tomate (ToMV), el Virus del bronceado del tomate
(TSWV), Virus del grabado del tabaco (TEV) y Virus Y de la papa (PVY).

Por otro lado, para el análisis de un grupo de virus de gran importancia

en los cultivos de tomate como son los Begomovirus, se utilizó la técnica
de PCR, debido a que no existen anticuerpos comerciales que permitan
realizar una identificación confiable y reproducible. Esta técnica se basa
en la amplificación de fragmentos de ADN específicos. Para la mayoría
de los virus de plantas que tienen como material genético ARN, a dife-
rencia de los Begomovirus que son ADN, es necesario utilizar una va-
riante del PCR tradicional, correspondiente a la transcripción reversa
(RT-PCR) esto es a partir de la hebra de ARN generar un ADN comple-
mentario (c ADN) para realizar posteriormente el PCR tradicional.

Esta técnica es rápida y económica para hacer un número ilimitado de

copias de cualquier fragmento del ADN, es de mayor sensibilidad que
la prueba de ELISA. Considerando la gran sensibilidad de esta técnica,
se utilizó en este proyecto para la identificación de tres virus en los
Valles de la Región de Arica y Parinacota: Virus del mosaico peruano
del tomate (PtoMV) (perteneciente al grupo de los Potyvirus), Virus del
mosaico del pepino dulce (perteneciente al grupo de los Potexvirus) y
virus del grupo de los Begomovirus (Cuadro 1).

SITUACIÓN VIROLÓGICA DEL TOMATE

EN LA REGIÓN DE ARICA Y PARINACOTA

En los últimos años, en la Región de Arica y Parinacota se ha observa-

do en tomates, diferentes síntomas que pueden estar asociados a agen-
tes virales, ellos son: deformación, disminución del tamaño y manchas

22 Boletín INIA, Nº 224

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Cuadro 1. Partidores utilizados para diagnóstico viral

de PtoMV, PepMV y Begomovirus.

Virus Partidor Secuencia nucleotidica Referencia

PtoMV CP-F 5‘ CGG CAA CCA AAA GTG AAT 3‘ Diseñados por
CP-R 5‘ CTC TTG CTC GGA CGG ATG T 3‘ Rosales M.
PepMV TGB-F 5‘ CAC ACC AGA AGT GCT TAA AGC A 3‘ Mumford y
UTR-R 5‘ CTC TGA TTA AGT TTC GAG TG 3‘ Metcalfe, 2001
Begomovirus AVcore 5‘ GCC HAT RTA YAG RAA GCC MAG RAT 3‘ Wyatt y Brown,
ACcore 5‘ GGR TTD GAR GCA TGH GTA CAN GCC 3‘ 1996.

en los frutos, además de reducción del tamaño de las plantas, amarilleo

intervenal en hojas, amarillez, mosaico y hojas abullonadas o con am-
pollas (Figura 3).

Figura 3. Síntomas observados en frutos (A, B y C) y

hojas (D, E, F y G) en la Región de Arica y Parinacota.
En los frutos se observa disminución del tamaño (A),
manchas (B) y deformación (C), por su parte en las
hojas se aprecia amarilleo intervenal (D), hojas
abullonadas o con ampollas (E), mosaico y amarillez
(F) y reducción del tamaño de la planta (G).

Boletín INIA, Nº 224 23

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Prospecciones realizadas a más de mil muestras de tomate en los dife-

rentes valles de la Región (Azapa, Lluta y Chaca), entre los años 2009-
2011, han demostrado que un 57,1% de las muestras fueron positivas a
Begomovirus, 26,9% de las muestras fueron positivas a PepMV y 26,9%
de ellas positivas a Potyvirus (Cuadro 2).

Cuadro 2. Resumen de muestras positivas para Begomovirus,

Potyvirus y PepMV en los Valles de Azapa, Chaca y Lluta
de la Región de Arica y Parinacota (2009-2010).

Valles de la Región de Arica y Parinacota

Número y porcentaje Total Total
de muestras positivas muestras muestras
Virus Azapa Chaca Lluta positivas (%) analizadas

Begomovirus 424 (65,4) 31 (38,8) 21 (19,8) 476 (57,1) 834

Potyvirus 231 (31,2) 2 (2,5) 11 (12,6) 244 (26,9) 908
PepMV 195 (26,3) 26 (32,5) 23 (26,4) 244 (26,9) 908

Los Begomovirus son los virus

que presentan mayor incidencia
en la Región de Arica y Parinaco-
ta. Como se observa en la Figura
4, este virus se presentó en los tres
valles; sin embargo, presenta una
mayor prevalencia en el Valle de
Azapa, donde su incidencia al-
canza al 65,4% y en menor me-
dida en el Valle de Lluta donde
su incidencia llega solo al 19,8%.

Los Begomovirus, también cono-

cidos como geminivirus, com- Figura 4. Distribución de virus en
prenden una numerosa y diversa cultivos de tomate presentes en los
Valles de Azapa, Chaca y Lluta en
familia (Geminiviridae) de virus
la Región de Arica y Parinacota.
de plantas. Estos han sido consi-
derado virus emergentes, pues su

24 Boletín INIA, Nº 224

 Virus trasmitidos por insectos vectores en tomate en la Región de Arica y Parinacota: situación actual y manejo

incidencia y distribución mundial ha aumentado considerablemente

en la última década. Su vector natural corresponde a la Mosquita blan-
ca del tabaco, Bemisia tabaci, la cual ha sido reportada en los valles de
la nortina región de Chile, encontrándose el biotipo B de este insecto,
considerado eficiente al igual que otros biotipos de B. tabaci, respecto
a su capacidad de actúar como vector de virus. Debido a su polifagia y
sus elevadas potencialidades multiplicativas, hacen que se le conside-
re como el principal agente de dispersión de Begomovirus.

Debido a la importancia que han presentado las infecciones de

Begomovirus en la Región de Arica y Parinacota y considerando la gran
diversidad de especies virales que pueden infectar tomate (unas 34 es-
pecies de Begomovirus reconocidas y 18 tentativas han sido encontra-
das infectando naturalmente al tomate), se realizó la secuenciación
parcial del genoma de los Begomovirus detectados en esta región. Los
resultados revelaron que la especie encontrada en la región presenta
un 94% de identidad con el Virus del estriado de las venas amarillas
del tomate (Tomato yellow vein streak virus, TYVSV), el cual ha sido
recientemente descrito por investigadores infectando papas y tomates
en Argentina y Brasil. En tanto, PepMV y Potyvirus han presentado un
porcentaje total de muestras positivas correspondientes al 26,9%, te-
niendo cada uno de ellos una distribución característica en los valles
de la Región (Figura 4 y Cuadro 2).

PepMV perteneciente al grupo de Potexvirus, es reportado por primera

vez en 1974 en el Valle de Cañete, Perú. En Chile se comenzó a obser-
var desde 2001 en cultivos de tomates en invernaderos de distintos
sectores de la Región de Valparaíso. Estudios realizados por el Servicio
Agrícola y Ganadero entre los años 2001-2002 reportaron además la
presencia de este virus en cultivos comerciales de la Región de Tarapacá
(actualmente Región de Arica y Parinacota). Estos virus son transmiti-
dos principalmente por contacto y posiblemente por semillas. Los re-
sultados de las prospecciones realizadas en los valles de la Región de
Arica y Parinacota entre los años 2009-2011 han mostrado una distri-
bución similar de este virus en los Valles de Azapa, Chaca y Lluta,
presentándose levemente superior en el Valle de Chaca con un 32,5%
de incidencia (Cuadro 2 y Figura 4).

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 Virus trasmitidos por insectos vectores en tomate en la Región de Arica y Parinacota: situación actual y manejo

Finalmente, se han encontrado muestras infectadas con Potyvirus. Este

grupo de virus es transmitido por áfidos o pulgones, los que trasmiten
los virus en forma no persistente. Estos virus se ha encontrado presente
en los tres valles analizados, encontrándose una mayor incidencia en
el Valle de Azapa alcanzando un 31,2%, en tanto en el Valle de Chaca
solo se registraron dos muestras con este virus (Cuadro 2). Consideran-
do que el anticuerpo utilizado para la detección de Potyvirus permite
realizar la detección universal de este género viral, se debió realizar la
identificación a nivel de especie a través de la secuenciación del frag-
mento obtenido a partir de RT-
PCR utilizando partidores univer-
sales para Potyvirus. Los análisis
de las secu encia s ge nómi cas
virales revelaron una homología
del 94% con el aislado Cuzque-
ño-2 del Virus del mosaico perua-
no del tomate (PtoMV), siendo el
primer reporte de este virus en
Chile. En la prospección realiza-
da en los valles de la Región de
Arica y Parinacota, como se ob-
Figura 5. Distribución de infecciones
serva en la Figura 5, PtoMV se con el Virus del mosaico peruano
encontró en los Valles de Azapa del tomate, PtoMV, en los Valles
(15,2%) y Chaca (10%). de Azapa, Chaca y Lluta.

Las infecciones virales observadas en las plantas de tomate en los dife-

rentes valles pueden ser simples o mixtas (Figura 6 y Cuadro 3). De
esta se aprecia que en el Valle de Azapa aproximadamente el 79% de
las muestras analizadas presentan infección por uno o más virus, sien-
do las infecciones solo por Begomovirus (35,8%) las de mayor inciden-
cia en este valle. En el Valle de Chaca, aproximadamente el 62% de las
muestras analizadas presentan algún tipo de infección viral, sin embar-
go, no se presentaron infecciones simples con Potyvirus en este valle y
la mayor incidencia viral está concentrada en infecciones simples con
Begomovirus (28,8%) seguido de infecciones simples con PepMV
(22,5%).

26 Boletín INIA, Nº 224

 Virus trasmitidos por insectos vectores en tomate en la Región de Arica y Parinacota: situación actual y manejo

Figura 6. Infecciones virales simples y mixtas en cultivos

de tomate presentes en los Valles de Azapa, Chaca y Lluta
en la Región de Arica y Parinacota, 2009-2010.

Cuadro 3. Resumen de infecciones virales simples y mixtas entre

Begomovirus, Potyvirus y PepMV en los Valles de Azapa, Chaca
y Lluta de la Región de Arica y Parinacota, 2009-2010.

Valles de la Región de Arica y

Parinacota, número y porcentaje
de muestras positivas a infección
Virus Azapa Chaca Lluta
Begomovirus 224 (35,8) 23 (28,8) 6 (6,9)
Potyvirus 53 (8,5) 0 (0) 8 (9,2)
PepMV 33 (5,3) 18 (22,5) 7 (8,0)
Begomovirus + Potyvirus 67 (10,7) 1 (1,3) 1 (1,1)
Begomovirus + PepMV 57 (9,1) 7 (8,8) 14 (16,1)
Potyvirus + PepMV 24 (3,8) 1 (1,3) 2 (2,3)
Begomovirus + Potyvirus + PepMV 39 (6,2) 0 (0) 0 (0)
Negativas 128 (20,5) 30(37,5) 49 (56,3)
Total muestras analizadas 625 80 87

Finalmente, el Valle de Lluta es el que presenta una menor incidencia

viral alcanzando solo al 43% de las muestras, en este valle se observa
una mayor incidencia de infecciones mixtas por Begomovirus y PepMV
(16,1%).

Boletín INIA, Nº 224 27

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OTROS HOSPEDEROS VIRALES

La Región de Arica y Parinacota es la principal proveedora de hortali-

zas entre los meses de Mayo a Noviembre para el centro y sur del país,
los cultivos que siguen en importancia después del tomate correspon-
den a porotos verdes, pimiento morrón, pepino de ensalada y zapallo
italiano. Se analizaron muestras de porotos verdes, pimiento, malezas
y Solanum chilense, debido a la capacidad de estas dos últimas como
importantes reservorios virales. Las Figuras 7 a 9, reflejan los resulta-
dos de la contaminación por los diferentes agentes virales en las espe-
cies analizadas.

Figura 7. Porcentaje de muestras positivas a infeccio-

nes por Begomovirus en distintos hospederos en la
Región de Arica y Parinacota.

Figura 8. Porcentaje de muestras positivas a infeccio-

nes por PepMV en distintos hospederos en la Región
de Arica y Parinacota.

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 Virus trasmitidos por insectos vectores en tomate en la Región de Arica y Parinacota: situación actual y manejo

Figura 9. Porcentaje de muestras positivas a infeccio-

nes por PtoMV en distintos hospederos en la Región
de Arica y Parinacota.

En cultivos de porotos verdes se encontró un 8,6%

de muestras positivas a Begomovirus, a diferencia
de lo que ocurre en cultivos de pimiento en los
que se encontraron infecciones con tres virus, pre-
sentando una mayor incidencia de infecciones con
PepMV (25%), seguidas por PtoMV (22,7%) y fi-
nalmente Begomovirus (8,7%).

Por otra parte, en las muestras analizadas de la planta

endémica Solanum chilense, las cuales pueden ser-
vir como importantes reservorios virales a pesar de
no presentar síntomas, se encontraron infecciones
con Begomovirus y en mayor medida con PtoMV,
en el cual alcanza al 41,9%.

Los resultados del análisis a malezas reflejaron que

un 15,4% de ellas fueron positivas a Begomovirus.

En la Figura 10, se consolidan los resultados para

los distintos agentes virales analizados por cada
especie vegetal. Se destaca Solanum chilense como
reservorio del Virus del mosaico peruano del to-
mate.

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 Virus trasmitidos por insectos vectores en tomate en la Región de Arica y Parinacota: situación actual y manejo

Figura 10. Distribución de virus en cultivos de tomate,

pimiento, porotos verdes, malezas y Solanum chilense,
en los Valles de la Región de Arica y Parinacota.

CONCLUSIONES
En los cultivos de tomate en los valles de la Región de Arica y Parinacota se
ha encontrado la presencia de un Potexvirus (PepMV) y de dos virus que no
habían sido reportados con anterioridad en el país correspondientes a un
Begomovirus (TYVSV) y Potyvirus (PtoMV), presentando una mayor inci-
dencia en los valles hortícolas de esta Región las infecciones causadas por
Begomovirus. Además, se han observado infecciones virales simples y mix-
tas en los cultivos de tomate en los Valles de Azapa, Chaca y Lluta.

El Valle de Azapa es el que presentó mayor incidencia de infecciones virales,

siendo la más prevalente las infecciones causadas por Begomovirus. Por
otra parte, en el Valle de Lluta prevalecieron las infecciones mixtas con
Begomovirus y PepMV. En el Valle de Chaca las infecciones simples de
Begomovirus, seguida por las infecciones por PepMV, siendo escasas en
este valle las infecciones con Potyvirus.

También fue importante la presencia de estos virus en otros cultivos como

pimiento y porotos verdes, además de malezas y Solanum chilense; los cua-
les podría ser importantes reservorios virales, por lo que se debe considerar
el adecuado control de estas especies, de forma de disminuir la presencia
de inóculo primario y secundario a lo largo del período productivo del cul-
tivo del tomate.

30 Boletín INIA, Nº 224

 Virus trasmitidos por insectos vectores en tomate en la Región de Arica y Parinacota: situación actual y manejo
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