F´ISICA DE LOS

MICROSCOPIOS
Jader Alejandro Mun˜oz Darwin Alexis Arrechea Castillo Harold Giovanny Patin˜o Leo
Galindez 102216010510 102216010162 ´n 102216021356
jadermu@unicauca.educo darwinc@unicauca.educo hgpatino@unicauca.educo

Abstract—El microscopio es un instrumento que permite

observar objetos demasido pequen˜ os para ser percibidos nueva amplificacio´n, de altura y”, de la imagen previamente
a simple vista. Esta pra´ctica se realizo´ en el Museo de formada en el objetivo.
Historia Natural, en el cual, se pudieron observar diferentes La imagen final es invertida, virtual y de mayor taman˜o que
microsco- pios o´pticos: De Campo Claro, De Campo Oscuro, el objeto original.
De Contraste de Fases, De Flurorescencia as´ı como el
microscopio Electo´nico de Trasmisio´n. A. Aumento
Se realizaron los respectivos funcionamientos de cada micro-
Se define el aumento total de un microscopio o´ptico
scopio as´ı como una introduccio´n de su fundamento f´ısico. como el producto del aumento lateral del objetivo por el
Las pruebas realizadas se realizaron con especimenes vegetales aumento angular del ocular. Su expresio´n:
y bucales, adema´s de una prueba con animales
microscopicos
(protozoarios). d xp
Finalmente, el microscopio Electo´nico de Trasmisio´n A = ALobj ∗ Aaoc = − ∗ (1)
estaba J f f J

en mantenimiento, por tal razo´ no se pudo observar obj oc

su
funcionamientos, sin embargo, la parte teo´rica fue dada as separacio´n entre las lentes es L y la distancia de separacio´n
´ı como la visualizacio´n de su montaje. de los focos llamada d. La imagen debe formarse dentro dentro
de la distancia focal del ocular.
Te´rminos Importantes: Microscopio, ocular, El ocular, entonces, actu´a como una lupa, produciendo una
objetivo, campo, claro,oscuro, fases, flurorescencia,
eletro´nica, trasmisio´n.

I. FUNDAMENTOS F´ISICOS DEL MICROSCOPIO

En esencia el microscopio consiste en dos lentes conver-
gentes. La lente ma´s proxima al objeto se denomina
objetivo. La lente ma´s pro´xima al ojo se denomina
ocular.

Fig. 1. Estructura ba´sica del microscopio

En la imagen se puede observar: Una primera lente con

una distancia focal, f’obj, pequen˜a, mientras que la
segunda (del ocular), f’oc, es mayor. La distancia de
 Donde:
A, ALobj, Aaoc: Aumento total del microscopio,
lateral del objetivo y angular del ocular. El signo
negativo, indica que la imagen es invertida.
d: Distancia entre la distancia focal imagen del
objetivo y angular del ocular.
f’obj, f’oc: Distancias focales imagen del objetivo y
del ocular.
xp: Distancia del punto pro´ximo considerada. Su
valor normalmente es 0.25 m.
Los tria´ngulos marcados en la figura son semejantes.
Se puede observar como, con la disposicio´n de
elementos de la figura, los rayos salen paralelos en el ocular
y no se produce fatiga visual al no ser necesaria la
acomodacio´n del cristalino.
II. MICROSCOPIO REAL
A la hora de construir un microscopio real, la estructura o
´ptica presentada sirve de base, pero se incluyen
algunas mejoras que permiten aumentar su funcionalidad.
Observa el siguiente esquema:
Donde se puede distinguir las siguientes partes:

Fig. 2. Aumento del microscopio

esta´ representado esquema´ticamente en la siguiente imagen.

Fig. 4. Funcionamiento del ocular

B. Objetivo
Fig. 3. Esquema completo de un microscopio o Es la lente o sistema de lentes situadas ma´s pro´ximas al
´ptico objeto a observar. Algunos necesitan ser humedecidos con un l
´ıquido especial para poder funcionar (normalmente aceite de
cedro) y son denominados objetivos de inmersio´n. A los que no
A. Sistema o´ptico necesitan ser humedecidos con sustancia alguna
Su funcio´n principal es ampliar la imagen del objeto
observado. Sin embargo, el ocular y el objetivo suelen estar
constituidos en realidad por varias lentes. Adema´s, el
sistema o´ptico cuenta con espejos que permiten la separacio
´n necesaria entre el objetivo y el ocular y que adema´s
ajustan la trayectoria de los rayos a la forma del
microscopio:
Ocular: Es la lente o el sistema de lentes situadas en
el extremo superior del tubo, cerca del ojo del observador.
Multiplican el aumento logrado por el objetivo y este se
suele indicar mediante un nu´mero entero acompan˜ado
de una ’x’. Por ejemplo, 6x indica que el aumento angular
del ocular es 6. El aumento del ocular es en general inferior
al del objetivo. Los aumentos ma´s habituales son 5x, 10x,
15x y 20x. El aumento proporcionado por un ocular suele
estar inscrito en su parte lateral.
Mediante las lentes del ocular, la imagen real que ha
sido generada con el objetivo es otra vez aumentada dando
as´ı lugar a la imagen virtual que es observada por el
usuario del microscopio. Este principio de funcionamiento
se les llama objetivos secos. Normalmente los objetivos
se situ´an en el portaobjetivos, tambie´n llamado
revolver, de manera que un solo aparato pueda
utilizar objetivos de distintas caracter´ısticas con tan
solo girar el revolver. Como se a visto, el objetivo
tambie´n sirve para ampliar la imagen. Su valor
tambie´n se especifica mediante un nu´mero entero
acompan˜ado de una ’x’. Por ejemplo, 100x indica
que el aumento lateral del objetivo es -100. Para un
mayor entendimiento del objetivo, se presenta una
imagen con las especificaciones generales (figura 5).
lentes que concentran los rayos de luz sobre el objeto a
observar.
Fig. 6. Sistema de Iluminacio´n
D. Sistema de Meca´nico
Plantina: Suele ser una pieza meta´lica en cuyo
centro existe un orificio transparente. En dicho orificio
situaremos el objeto a observar, normalmente transparente o
tan fino que se transparente permitiendo el paso de la luz

Fig. 5. Partes del objetivo

C. Sistema de Iluminacio´n
Lampara: Es la fuente de luz utilizada para producir
la iluminacio´n. Los microscopios modernos utilizan
leds. Sistema de Focalizacio´n: Es el conjunto de
lentes y espejos que dirigen los rayos de la la´mpara
al condensador y que regulan la cantidad de luz que
llega a es´te. Condensador: Es la lente o sistema de procedente de la la´mpara hacia el objetivo.
Tornillos: Se utilizan para enfocar, variando la distancia a por aditamentos que cambien las propiedades de la luz (como
la que se situ´a el objetivo y el ocular del objeto. Normal- polarizadores o filtros). Se utiliza generalmente sobre muestras
mente el microscopio o´ptico cuenta con varios tornillos
que pueden mover la platina o el tubo, que es la ca´mara
oscura en la que se situ´a el ocular y el objetivo. Suele
haber un tornillo de amplio desplazamiento, utilizado para
el enfoque inicial y denominado macrome´trico y otro de
alta precisio´n que realiza desplazamientos muy cortos,
denominado mi- crome´trico.
Revolver: Como indicamos anteriormente, el portaobje-
tivos o revolver es el sistema que permite incorporar
distintos objetivos al microscopio y usar uno u otro sin ma´s
que girar el dispositivo para alinear el deseado con el coloreadas.
ocular.
III. TIPOS DE MICROSCOPIOS O´ PTICOS Fig. 7. Imagen de una muestra vegetal con microscopio de Campo Claro
A. De Campo Claro
En campo claro toda la luz desde el espe´cimen y B. De Campo Oscuro
sus alrededores es colectada por el objetivo para formar una
imagen contra un fondo brillante. El campo claro es la forma La microscop´ıa de campo oscuro es una te´cnica de con-
ma´s simple de microscop´ıa donde la luz pasa a trave´s de traste donde solo la luz difractada desde el espe´cimen se
o reflejada del espe´cimen. La iluminacio´n no se altera usa para formar la imagen. El espe´cimen aparece brillante
contra un fondo oscuro.
La microscop´ıa de campo oscuro crea contraste en espec-
imenes transparentes sin tincio´n como ce´lulas vivas. Este
depende de controlar la iluminacio´n del espe´cimen para que la
luz central que normalmente pasa a trave´s y alrededor del espe
´cimen se bloquee. En lugar de iluminar la muestra con un cono
de luz completo (como en microscop´ıa de campo claro) el
condensador forma un cono hueco con luz que pasa alrededor del
cono en lugar de pasar a trave´s de este (figura 8). La imagen se
forma gracias al feno´meno de Tyndall.
 Esta forma de iluminacio´n permite que
solamente los rayos de luz oblicuos peguen en el
espe´cimen la platina del microscopio y se forme la
imagen con rayos de luz dispersados por la muestras y
capturados por el objetivo. Cuando no hay muestra en
la platina del microscopio la observacio´n es
completamente oscura.
Se debe tener cuidado al preparar especimenes ya
que las caracter´ısticas de los planos de foco superior e
inferior tambie´n dispersan luz y comprometen la
calidad de la imagen (por ejemplo, polvo, huellas
dactilares). En general, los especimenes delgados son
mejores ya que la posibilidad de difraccio´n por
artefactos se reduce.

Fig. 8. Iluminacio´n microscopio de Campo Oscuro

Fig. 9. Imagen de una muestra de saliva con microscopio de Campo

Oscuro
C. De Contraste de Fases
La microscop´ıa de contraste de fases es una te
´cnica o´ptica que explota los cambios en el ´ındice de
refraccio´n para producir ima´genes de alto contraste de
especimenes transparentes. En las ima´genes de contraste,
los pequen˜os cambios en la longitud del camino o´ptico
(conforme la luz se mueve a trave´s de materiales
diferentes de diferentes
´ındices de refraccio´n, por ejemplo, agua, componentes
celulares) son trasladados o´pticamente dentro de los
cambios correspondientes en la intensidad de la luz, los
cuales pueden ser observados como diferencias en los
contrastes de la imagen. La luz desde una la´mpara
de halo´geno-tungsteno es dirigida a trave´s de un lente
colector y enfocada en anillos especializados (figura 10)
posicionado en el condensador. Los frentes de onda
pasando a trave´s del anillo iluminan al espe´cimen y Fig. 11. Imagen de una muestra de saliva con microscopio de Contraste
de Fases
pasan directamente a trave´s de estos o son difractados y
retardados por los gradientes de fase en el espe´cimen. La
luz sin desviar y difracta colectada por el objetivo es
separada por un plato de fases y enfocada en el plano
intermedio de la imagen para formar la imagen final. Una
desventaja de las ima´genes de contraste de fases es la
ocurrencia de ”halos” alrededor de las a´reas de alto
desplazamiento de fases.

Fig. 12. Imagen tomada desde Microscopio de Contraste de Interferencias

Fig. 10. Iluminacio´n Microscopio Contraste de Fases
En el Museo de Historia Natural, este tipo de
microscopio, se compon´ıa de 2 filtros, uno en el
condensador y otro en el objetivo. Adema´s, respecto a la
imagen, se puede observar mejores detalles que las dos
microscop´ıas ya descritas. Para cuadrar este tipo de
microscopios en el objetivo, se tiene que colocar los que
tengan las etiquetas ”ph1 y ph3”.
Adema´s, se observaron una muestra de
paramecios, aunque de dif´ıcil observacio´n debido a su
movimiento. Por ello no se logro´ captar una imagen.
D. De Contraste de Interferencias
A partir de que el haz luminosos atraviesa la muestra, es
posible observar una imagen como en relieve, parecida a
3D. igualmente se debe utilizar los objetivos disen˜ados para
ello, que estan etiquetados.
E. De Fluorescencia
La fluorescencia es una propiedad de una sustancia de
emitir luz, al ser expuesta a la luz o a radiaciones electro-
magne´ticas.
Los colorantes fluorescentes (flurocromos) son detectados
mediante este miscroscopio.
Este microscopio es similar a uno convencional, excepto
por la luz incidente, procedente de una potente fuente
atraviesa dos series de filtros, uno para interceptar la luz
antes de que llegue a la muestra y otro para filtrar la luz
obtenida a partir de la muestra (figura 13). Adema´s, la
fuente de luz se ubica en la parte superior del microscopio.
En el Museo de Historia Natural, este tipo de micrsocopio
contaba con tres filtros: azul, utravioleta y violeta.
Este microscopio suele usarse para detectar espec
´ıficamente prote´ınas u otras mole´culas en ce´lulas
o tejidos.
Una te´cnica es adicionar un colorantes fluorescente
(fluo- resce´ına, Rodamina) a mole´culas de un
anticuerpo el cual sirve como un reactivo que se une
selectivamente a las

Fig. 13. Fuente de iluminacio´n Microscopio de Fluorescencia
macromole´culas que reconoce en la matriz extracelular.
Algo para tener en cuenta, es que la fluorescencia se
puede acabar, por esta razo´n es conveniente trabajar
con entornos cerrados, para no intervenir con mole
´culas del medio exterior. Cuando dicha fluorescencia se
acaba, se
denomina ’fotoblanqueo’.
IV. MICROSCOPIO ELECTRO´ NICO
DE TRASNMISIO´ N
Fig. 14. Microscopio Electro´nico de Transmisio´n (Museo Historia Natural)
Instrumento de gran utilidad en la investigacio´n cient
´ıfica gracias a su gran poder de aumento. Mediante este tipo
de microscopio es posible aumentar ima´genes de muestras
hasta niveles muy superiores a los del microscopio o´ptico.
El principio de funcionamiento de un microscopio electro
´nico se basa en utilizar electrones en lugar de luz
visible. La longitud de onda con la que se mueve un electro
´n es inversamente proporcional a su velocidad. Esto
significa que si los electrones son acelerados a altas
velocidades pueden obtenerse longitudes de onda muy
cortas.
Un microscopio electro´nico utiliza esta idea para
observar las muestras. A un nivel muy ba´sico consiste en
una fuente de electrones que son acelerados a gran
velocidad. Estos electrones impactan con la muestra de
modo equivalente a como la luz podr´ıa iluminarla. Algunos
de estos electrones son reflejados por la muestra y otros la
atraviesan. Mediante la deteccio´n estos electrones es
posible reconstruir una imagen de la muestra.
Tero´icamente la resolucio´n ma´xima Rma´x alcanzable
con un microscopio o´ptico se encuentra en principio
limitada por la longitud de onda de la luz que se utiliza para
examinar la muestra, y por la apertura nume´rica NA del
sistema.
λ
Rma = (2)
x 2NA
Como toda la materia, los electrones exhiben propiedades
tanto de onda como de part´ıcula (como ya propuso Louis-
Victor de Broglie). Como consecuencia se puede hacer que
un haz de electrones se comporte como un haz de radiacio
´n electromagne´tica. La longitud de onda del electro´n se
obtiene
igualando la ecuacin´ de De Broglie a la energ´ıa cine´tica
de un electro´n. Debe introducirse una correccio´n relativista
adicional, ya que los electrones en un equipo TEM alcanzan
velocidades pro´ximas a la de la luz c.
λe = . h
. (3)
E Σ
2moE 2mo c 1
2
+
Este microscopio esta´ compuesto por las siguientes partes
(figura 15):
Fig. 15. Partes del Microscopio Elctro´nico de Transmisi
 Fuente de electrones: Es equivalente a la fuente de luz ulacio
en un microscopio o´ptico. En este caso es necesario ´n.
disponer de un emisor de electrones. En general se utiliza V. CONCLUSIONES
un filamento
de tungsteno. Este filamento es calentado de modo que la El microscopio de contraste de fases, sera´ de mayor
energ´ıa de sus a´tomos y electrones aumenta. A partir utilidad que el de campo claro y oscuro cuando es necesario
de un cierto nivel energe´tico los electrones poseen observar detalladamente la muestra, esto se pudo observar en
suficiente energ´ıa para escapar de sus a´tomos (efecto los especimenes vegetales que se visualizaron anteriormente.
termoio´nico). Estos electrones libres son a continuacio´n Para especimenes en movimiento, se dificulta mucho la
dirigidos hacia la muestra. observacio´n con estos microscopios.
Lentes electromagne´ticas: Generan campos ele´ctricos Para muestras que tienen el intrinsecamente el feno´meno
y magne´ticos de modo que su interaccio´n con los de flurorescencia, sin duda alguna, el mejor microscopio es
electrones hace que sus trayectorias diverjan o converjan en de fluorescencia, debido a que los flurocromos son detecta-
un punto. De las lentes condensadoras a las lentes objetivos, dos fa´cilmente mediante este instrumento.
y de estas a las lentes proyectoras que generan luego la Si se necesita mayor aumento, sin duda alguna el que se
imagen. utiliza´ıa ser´ıa el microscopio electro´nico de transmisio´n,
pues tiene aumentos de hasta 1200 y una mejor resolucio´n
Ca´mara de vac´ıo: El procedimiento expuesto
que los microscopios o´pticos.
anteri- ormente debe llevarse a cabo dentro de una ca
´mara de vac´ıo. De lo contrario, los electrones interactuar REFERENCES
´ıan con las mole´culas del aire y no ser´ıa posible [1] https://www.fisicalab.com/apartado/microscopioestructura
determinar sus trayectorias adecuadamente. La muestra que [2] http://www.tecnicaenlaboratorios.com/Nikon/Info campoclaro.h
se observa debe colocarse tambie´n dentro de la ca´mara de tm
vac´ıo. Este es uno de los motivos por el cual no es posible [3] https://www.tecnicaenlaboratorios.com/Nikon/Infocampooscuro.htm
[4] http://www.tecnicaenlaboratorios.com/Nikon/Infoc ontrasted ef ases.htm
observar muestras vivas con un microscopio electro´nico. [5] https://prezi.com/d7nkabhssg1k/microscopio-de-fluorescencia/
Detector: Una vez los electrones han impactado contra la [6] https://www.mundomicroscopio.com/microscopio-electronico/
muestra es necesario medir algu´n tipo de informacio´n
para poder reconstruir la imagen de la muestra. Una opcio
´n consiste en utilizar una pantalla fluorescente. Esta
pantalla reacciona de modo distinto segu´n cual sea el
nu´mero de electrones que impactan en ella. De este modo
es posible detectar las zonas donde impactan ma´s o
menos electrones y deducir as´ı la imagen de la muestra
(blanco y negro). Ex- isten alternativas a las pantallas
fluorescentes, por ejemplo, sensores CCD.
A continuacio´n, la informacio´n capturada por la
pantalla fluorescente es transmitida a un ordenador que
puede asignar colores artificiales a la imagen obtenida. En
los microscopios o´pticos estos componentes no son
necesarios porque la luz proveniente de la muestra es
directamente observada con el ojo humano. Dado que
nuestros ojos no esta´n preparados para detectar electrones
debemos incorporar este elemento detector en un
microscopio electro´nico. Esta te´cnica de microscop´ıa
es muy u´til para visualizar los detalles internos de una
muestra, por ejemplo, estructuras cristalinas. A nivel
conceptual esta te´cnica es similar a realizar una radiograf
´ıa de la muestra.
La principal limitacio´n que tiene esta te´cnica es que
no permite extraer informacio´n de la superficie de la
muestra. Es decir, no permite observar detalles como la
forma o rugosidad de la muestra que se observa. Para
observar este tipo de caracterA˜ ´ısticas es necesario utilizar
la microscop´ıa electro´nica de barrido.
En particular, en el microscopio electro´nico ubicado
en el Museo de Historia Natural: Las muestras se colocan
en
rejillas (de zafiro), y tiene espacio u´nicamente para dos.
Cabe resaltar que los voltajes que maneja es de los 80kV.
Genera aumentos entre 800 y 1200 aumentos. Resolucio
´n:
1.2 nano´metros y Tiene 4 paneles de mando para su manip-