Nº 192

Año LV 03/2021

Artículo de Investigación Pág. 1 El laboratorio práctico Pág. 6 Novedades Pág. 8

COVID-19 y coagulopatía ¿Qué necesitamos conocer acerca de los La importancia del agua
métodos serológicos para COVID-19? Pruebas diagnósticas
Artículo de Revisión Pág. 4
Evaluación de desempeño de pruebas de
detección de anticoagulante lúpico en el
programa externo de calidad ECAT

Artículo de Investigación
COVID-19 y coagulopatía
Bioq. Carina Tallano
Artículo on-line
carina.tallano@wiener-lab.com
Centro de Investigación y Biotecnología – Wiener Laboratorios SAIC, Rosario – Argentina

El betacoronavirus denominado SARS- mecanismos moleculares postulados en inicialmente ha sido denominada como
CoV-2 emergió en la región de Wuhan- los desórdenes hemostáticos inducidos Coagulación Intravascular Pulmonar. Si
China a fines del 2019 como un nuevo por SARS-CoV-2 y su asociación con las bien, la coagulopatía en COVID-19 pre-
patógeno capaz de provocar un síndrome alteraciones encontradas en el laborato- senta características comunes a SIC o
respiratorio agudo severo (COVID-19) y rio de Hemostasia. Remarcando, además, DIC, también, existen aspectos diferen-
en poco tiempo, se esparció por el mun- que el conocimiento de la fisiopatología ciales que permiten reconocerla como
do causando enfermedad y muerte en la de estas alteraciones hemostáticas repre- una entidad diferente. Esta coagulopatía
población. Los coronavirus generalmente senta la base principal para la estrategia inducida por SARS-CoV-2 se caracteriza
provocan infecciones virales leves; sin terapéutica en las complicaciones trom- por presentar niveles elevados de fibrinó-
embargo dos epidemias recientes pro- bóticas asociadas a COVID-19. geno y Dímero D (DD), producto de de-
vocadas por betacoronavirus –SARS en gradación de fibrina (FDP), prolongación
2003 y MERS en 2012 – se relaciona- Coagulopatía en COVID-19 moderada del PT (Tiempo de Protrombi-
ron con altas tasas de mortalidad (10% Las alteraciones hemostáticas encontra- na) sin descenso marcado en el recuento
y 35%, respectiva­mente). En el caso de das en COVID-19 han sido comparadas plaquetario; con un fenotipo predomi-
COVID-19, las tasas de mortalidad son con la coagulopatía inducida por sepsis nante pulmonar que puede manifestarse
más bajas que en las epidemias anterio- bacteriana (SIC) o con la coagulación in- con complicaciones trombóticas locales y
res pero la población en riesgo es mucho travascular diseminada (DIC) y por ello, algunas veces, sistémicas. Esta entidad es
mayor dada la elevada infectividad del
virus y la diseminación mundial de la en-
fermedad.
Las primeras publicaciones de autopsias
en pacientes con COVID-19 revelaron
trombosis pulmonar focal con microtrom-
bosis inflamatorias en espacios alveola-
res, importante daño endotelial y mar-
cada angiogénesis. Estas observaciones
destacaron que la inmunotrombosis y el
daño endotelial desempeñan un papel
fundamental en la neumopatía por CO-
VID-19 con características diferentes a las
encontradas en otras neumopatías.
Además de estos hallazgos, numero-
sos estudios asociaron al COVID-19 con
Figura 1: En el sector izquierdo de la imagen se observa un alvéolo sano mientras que
eventos trombóticos arteriales y venosos,
en el sector derecho se muestran los cambios alveolares inducidos por la infección
incluyendo trombosis venosa profunda por SARS-CoV-2. La presencia del virus induce activación de linfocitos, macrófagos y
(DVT), embolismo de pulmón (PE), stroke neutrófilos (NET), que representan un potente estímulo protrombótico que induce acti-
isquémico, infarto de miocardio y eventos vación plaquetaria, reducción de la actividad de anticoagulantes naturales e inhibición
arteriales sistémicos. de la actividad fibrinolítica. La confluencia localizada de estos sistemas activados
El objetivo de este artículo es revisar los resulta en la formación de un inmunotrombo.

NotiWiener Nº 192 - Marzo 2021 - 1

Artículo de Investigación
COVID-19 y coagulopatía

Figura 2: Mecanismos de trombosis en COVID-19: El SARS-CoV-2 infecta Monocitos, Macrófagos y células endoteliales vasculares.
Los monocitos/Macrófagos infectados expresan Factor Tisular (TF) que inicia la cascada de la coagulación. La célula endotelial
infectada libera FVIII y vWF de los cuerpos de Weibel Palade promoviendo la formación de más trombina. El vWF liberado estimula
la agregación plaquetaria. Los grandes multímeros de vWF (ULVWF) promueven la adhesión plaquetaria sobre la célula endotelial.
La sumatoria de todos estos eventos procoagulantes genera la formación de trombosis.

actualmente denominada: Coagulopatía
asociada a COVID-19 (CAC).
Es bien conocida la compleja interacción
entre inflamación y hemostasia. La infla-
mación sistémica observada en COVID-19
se acompaña de una cascada de citoqui-
nas inflamatorias, que representan un po-
tente estímulo protrombótico que induce
activación plaquetaria, reducción de la
actividad de anticoagulantes naturales e
inhibición de la actividad fibrinolítica. La
confluencia localizada de estos sistemas
activados resulta en la formación de un
inmunotrombo. Consecuentemente, los
productos de la activación de la coagu-
lación como trombina, FXa, fibrina y el
complejo TF-VIIa inducen más liberación
de citoquinas proinflamatorias y factores
de crecimiento. De esta manera ambos
sistemas participan en un circuito de re-
troalimentación positiva que produce ma-
yor inflamación e hipercoagulabilidad. A
la fecha se necesitan más estudios para
dilucidar si la activación de la coagula-
ción en pacientes con COVID-19 es parte
de una apropiada respuesta inmune hacia
el virus o si existe una excesiva respuesta
inflamatoria para intentar frenar el pro-
greso de una coagulación descontrolada.
Los neutrófilos son una parte importante
de esta compleja interacción entre la in-
munidad innata y la hemostasia. La neu-
trofilia relativa observada en COVID-19
sugiere un rol esencial de los neutrófilos
en la defensa innata del huésped. Los
neutrófilos sufren un proceso denomina-
do NETosis a partir de la activación de la
proteína Arginina Deaminasa 4 (PAD-4)
con desplegamiento de cromatina, per-
meabilidad nuclear, citólisis y finalmente,
liberación de las trampas extracelulares
de neutrófilos (NETs). Estas redes ricas en
cromatina e histonas son un soporte ideal
para la unión de plaquetas activadas, eri-
trocitos y leucocitos, activando factores
de coagulación y favoreciendo los depó-
sitos de fibrina. Es decir, las NETs son un
puente entre inflamación, coagulación e
inmunotrombosis. Los niveles de marca-
dores séricos de activación neutrofílica
y formación de NETs (complejos DNA-
mieloperoxidasa y DNA libre circulante)
se correlacionan con gravedad de enfer-
medad en pacientes con COVID-19.
Si bien pueden encontrarse niveles incre-
mentados de factor VIII (FVIII), factor von
Willebrand (vWF), anticoagulante lúpico y
marcadores de activación del sistema de
complemento, no constituyen biomarca-
dores prácticos y útiles en el monitoreo
de la enfermedad.
El test de laboratorio de mayor impor-
tancia para evaluar pronóstico de enfer-
medad en COVID-19 es el Dímero D. Ni-
veles elevados de DD en el momento de
la admisión o un incremento marcado en
el transcurso de la enfermedad (3 a 4 ve-
ces) se asocia con progreso a enfermedad
severa y predice la necesidad de un trata-
miento más agresivo.
El test de generación de Trombina (TGT)
mide la generación de trombina en plas-
ma tras la activación con Factor Tisular.
Se han descriptos niveles incrementados
de TGT incluso en pacientes COVID-19
con terapia anticoagulante. El principal
problema del test es la falta de estanda-
rización.
Otros ensayos potenciales para evaluar
el estado global y actual de la coagula-
ción en pacientes en cuidados intensivos
(UCI) son los test viscoelásticos. Los trom-
boelastogramas en estos pacientes ma-
nifiestan estados de hipercoagulabildad
asociados a COVID-19, pero en la actuali-
dad su utilidad permanece en estudio.
Endoteliopatía en COVID-19
Una característica importante de CAC es
el daño endotelial en la microcirculación
pulmonar y otros lechos vasculares. El
SARS-CoV-2 infecta directamente la cé-
lula endotelial causando daño celular y
apoptosis, conduciendo a pérdida de la
actividad antitrombótica del lumen de los
vasos. En COVID-19, el daño alveolar y el
disturbio en la microcirculación asociados
a la formación de trombos contribuyen a
la disfunción respiratoria.
La función del endotelio sano es regular el
tono y la permeabilidad vascular, la adhe-
sión celular y la fluidez de la sangre. El óxi-

2 - NotiWiener Nº 192 - Marzo 2021


do nítrico (NO) producido y liberado por la
célula endotelial previene la adhesión de
leucocitos y plaquetas, la migración de cé-
lulas inflamatorias, la proliferación de la
célula muscular lisa y suprime la apopto-
sis. Cuando esta célula es infectada pier-
de su actividad natural antitrombótica. El
daño subyacente y la muerte celular con-
ducen a un lecho vascular procoagulante
con la generación de inmunotrombos y
alteraciones circulatorias.
Los pericitos y células perivasculares lo-
calizados en la superficie abluminal de
pequeños vasos participan en la señaliza-
ción entre células endoteliales, en la repa-
ración y mantenimiento del tono vascular;
siendo claves en la mantención de la ho-
meostasis vascular. La vulnerabilidad de
estas células al SARS-CoV-2 lleva a pér-
dida de la integridad de los vasos, injuria
endotelial y disfunción microvascular.
El SARS-CoV-2 ingresa a la célula endote-
lial a través del receptor celular ACE2: en-
zyma convertidora de Angiotensina 2. La
endocitosis inducida por el virus conduce
a una reducción en el número de molé-
culas de ACE2 expuestas en la superficie
celular y por lo tanto, se reduce la velo-
cidad de conversión de Angiotensina II a
Angiotensina (1-7). Los mayores niveles
de Angiotensina II estimulan la constric-
ción vascular y la inflamación y los bajos
niveles de Angiotensina (1-7) reducen la
producción de NO favoreciendo la ad-
hesión plaquetaria y leucocitaria. Por lo
tanto el desbalance en receptores ACE2
inducido por SARS-CoV-2 promueve a un
estado de trombogenicidad en el lumen
de los vasos.
Los niveles aumentados de FVIII y vWF
en pacientes COVID-19, se producen en
repuesta al estímulo viral sobre la vascu-
latura. El factor VIII y vWF se almacenan
en los cuerpos Weibel-Palade de la célula
endotelial y son liberados en respuesta a
estímulos virales. Estos pacientes pueden
presentar niveles de vWF de 3 a 4 veces
más altos que los niveles normales con
predominio de multímeros de alto peso
molecular. Aún no se ha podido estable-
cer la importancia de estos multímeros
de vWF en la CAC, pero existen estudios
que evalúan su eliminación para reducir el
riesgo trombótico.
La mayoría de las infecciones virales
conducen a muerte celular en la célula
huésped. El SARS-CoV-2 induciría muerte
celular programada, principalmente por
piroptosis, que produce una gran respues-
ta inflamatoria local que podría volverse
sistémica debido a la liberación de poten-
tes citoquinas inflamatorias, tales como
Interleuquina IL-1b y IL-19.
Dentro de los biomarcadores de daño
endotelial tenemos al ácido hialurónico,
un componente principal del glicocálix.
Otros biomarcadores potenciales son los
componentes de los cuerpos de Weibel
Palade: FVIII, vWF y P-selectina. Además,
marcadores sensibles de actividad trom-
bótica como los complejos Trombina-
Antitrombina (TAT) y fragmentos 1+2 de
protrombina pueden ser marcadores de
microtrombosis. En casos severos de CO-
VID-19, se han encontrado niveles eleva-
dos de Ácido Hialurónico, TAT, FVIII y vWF.
Trombosis arterial en COVID-19
La trombosis arterial no es común en otras
coagulopatías asociadas a infecciones. Sin
embargo, en COVID-19 puede observarse
stroke, enfermedad coronaria isquémica e
isquemia trombótica de miembros.
El síndrome antifosfolipido (SAF) es una
enfermedad que puede darse secundaria
a una infección y puede causar trombosis
arterial. En pacientes COVID-19, pueden
encontrarse niveles incrementados de
anticoagulante lúpico, anticuerpos anti-
cardiolipina y anti-β2 glicoproteina I pero,
por el momento, no se ha podido estable-
cer el rol de estos anticuerpos en CAC.
La presencia inusual de multímeros de
alto peso molecular, la subsecuente ac-
tivación plaquetaria y la microtrombosis
podrían tener un rol potencial en la trom-
bosis arterial pero no existen estudios
concluyentes por el momento. Por ahora,
los mecanismos de trombosis arterial en
COVID-19 representan un misterio por
resolver.
Conclusión
El SARS-CoV-2 desencadena una respues-
ta inmune-hemostática que es esencial
para limitar la infección viral. La desregu-
lación hemostática pulmonar, consecuen-
cia de una compleja interacción entre el
sistema inmune y el sistema de coagula-
ción, se manifiesta como un proceso de
inmunotrombosis o trombo inflamación.
En este modelo, células inmunes, citoqui-
nas inflamatorias y proteínas propias del
virus promueven la activación de la coa-
gulación que culmina con la formación
del inmunotrombo. En primera instancia
su rol es protectivo por promover el re-
conocimiento del patógeno y crear una
barrera estéril contra la invasión del virus
hacia otros tejidos, pero su persistencia
puede alterar la perfusión normal del teji-
do pulmonar, produciendo hipoxia y más
Artículo de Investigación
COVID-19 y coagulopatía
daño tisular. En COVID-19, la respuesta
inmunotrombótica alveolar podría ser
el intento de limitar la diseminación del
SARS-CoV-2 hacia el resto del organismo.
En el complejo proceso tromboinflamato-
rio descripto en esta enfermedad, el daño
endotelial juega un rol preponderante.
La célula endotelial es afectada directa-
mente por la infección viral y también,
indirectamente, por la respuesta inmune
sobre dichas células. De esta manera, el
endotelio dañado pierde su rol protectivo
anticoagulante y adquiere un nuevo rol
procoagulante, convirtiéndose, entonces,
en un lecho trombogénico e inflamatorio
que predispone a la inmunotrombosis
pulmonar.
Si bien la patogénesis de la coagulopa-
tía en COVID-19 es compleja, la Coagu-
lopatía asociada a COVID-19 puede ser
reconocida en el laboratorio por aumento
de DD, niveles elevados de fibrinógeno y
vWF, pero con cambios poco significativos
en TP, aPTT y plaquetas. En cuanto al pro-
nóstico y seguimiento de la enfermedad,
el Dímero D representa un marcador que
permite la estratificación de pacientes por
criticidad y por lo tanto, contribuye al tra-
tamiento más adecuado de los mismos.
Durante este año de pandemia han sido
postulados numerosos mecanismos mo-
leculares subyacentes a la coagulopatía
asociada a COVID-19; sin embargo, al
día de hoy, quedan muchos aspectos por
esclarecer y dilucidar en miras de lograr
un tratamiento más adecuado y efectivo
para estos eventos inmunotrombóticos
inducidos por SARS-CoV-2.
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NotiWiener Nº 192 - Marzo 2021 - 3
Artículo de Revisión
Evaluación de desempeño de pruebas de
detección de anticoagulante lúpico en el
programa externo de calidad ECAT
Bioq. Laura González
Laura.gonzalez@Wiener-Lab.com
Centro De Investigación Y Biotecnología – Wiener Laboratorios Saic, Rosario – Argentina
La participación en un Programa Externo
de Calidad (EQA) provee al laboratorio
una visión acerca de su desempeño para
un determinado test en relación a otros
laboratorios que utilizan sus mismos reac-
tivos e instrumentos o incluso diferentes.
En el presente reporte se presentan los re-
sultados de nuestra participación durante
los años 2019 y 2020 en el Programa Ex-
terno de Calidad organizado por la ECAT
(External quality Control of diagnostic
Asays and Tests Foundation) para confir-
mar la presencia de Anticoagulante Lúpi-
co (LA) empleando los reactivos LA Screen
y LA Confirm de Wiener lab.
A lo largo de los años diferentes grupos
de expertos han publicado guías con re-
comendaciones para la detección de LA
en el laboratorio. Si bien existen algunas
diferencias entre ellas, todas coinciden
en que los tres hallazgos principales para
acreditar la presencia de LA son: prolon-
gación de un tiempo de coagulación de-
pendiente de fosfolípidos, demostración
de un efecto inhibidor a través de un test
de mezcla y demostración de que ese inhi-
bidor es dependiente de fosfolípidos. Para
cumplir con estos requisitos cada labora-
torio debe emplear dos test de screening
basados en principios distintos, los test
Tabla 1: Resultados obtenidos con los reactivos LA Screen y LA Confirm de Wiener lab. para las pruebas de
screening, mezcla y confirmatoria correspondientes a las rondas del ECAT de los años 2019 y 2020.
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de mezcla respectivos que permitan co-
rroborar la presencia de un inhibidor y un
único ensayo confirmatorio. En general se
recomienda una prueba de APTT sensible
a LA y el test dRVVT, veneno de víbora de
Russell diluido como test de screening;
el ensayo confirmatorio debe emplear el
mismo principio de los test de screening.
El programa externo del ECAT está acredi-
tado desde 2012 de acuerdo al standard
ISO/IEC 17043:2010 por el Dutch Council
for Accreditation y está focalizado única-
mente en pruebas de trombosis y hemos-
tasia agrupadas en 33 módulos, siendo
uno de ellos el “Lupus Anticoagulant/
Phopholipid Antibodies” con un número
aproximado de 600 participantes. Cada
laboratorio registrado en el programa re-
cibe 4 envíos anuales de una única mues-
tra incógnita. Las muestras son plasmas
humanos liofilizados para poder garanti-
zar su estabilidad durante el proceso de
distribución.
De la misma manera en que lo hacen los
distintos laboratorios, Wiener lab. evalúa
el desempeño de los productos que co-
mercializa a través de su participación en
diferentes programas externos de calidad.
Una vez recibida la muestra correspon-
diente a cada ronda, la misma se re-
Artículo on-line
constituye siguiendo las indicaciones del
programa para luego ser procesada en el
coagulometro COR 50. Cumpliendo con
el protocolo establecido para la pesquisa
de LA, se emplean dos métodos de scree-
ning: APTT Ellagic y LA Screen y un mé-
todo confirmatorio: LA Confirm. También
se realiza un test de mezcla, para lo cual
la muestra es mezclada en partes iguales
con un pool de plasmas normales que lue-
go es procesado con los dos métodos de
screening. Finalmente se calcula el Ratio
o Razón normalizada LAs/ LAc, como indi-
cador final de la presencia o ausencia de
LA. Todos los resultados son reportados
“on line” y se expresan como “ratios” o
“razones normalizadas”.
Para estimar el desempeño, el programa
ECAT emplea un indicador denominado
“Z score”. Este representa la distancia
entre el resultado del laboratorio parti-
cipante y el valor de consenso del grupo
par, expresado en unidades de desvío es-
tándar. Este indicador es calculado para
grupos de consenso a distintos niveles;
yendo de lo particular a lo más general:
marca de reactivo + instrumento hasta
método. Para que el grupo sea considera-
do en el análisis estadístico debe cumplir
con tener al menos 10 participantes. De

Evaluación de desempeño de pruebas de detección de anticoagulante lúpico en el programa externo de calidad ECAT
Tabla 2: Conclusión final a la que se llegó empleando los reactivos Wiener lab. y la respuesta de la totalidad
de los participantes del programa independientemente del método utilizado. La conclusión obtenida con
reactivos Wiener lab. coincide con más del 80% de los laboratorios participantes.
acuerdo a la ISO 17043 / ISO 15328, los
criterios de aceptabilidad del z score son
los siguientes:
-2 < z score < 2 resultado aceptable.
-3 < z score < 3 resultado cuestionable
cuya causa debe investigarse.
Z score < -3 y > 3 resultado inaceptable.
En la Tabla 1 se muestran los resultados
obtenidos con los reactivos LA Screen y
LA Confirm de Wiener lab. para las prue-
bas de screening, mezcla y confirmatoria
correspondientes a las rondas del ECAT
de los años 2019 y 2020. Como grupo
par se eligió el grupo que engloba todas
las marcas comerciales que emplean el
método dRVVT con más de 500 partici-
pantes.
Si bien como se dijo anteriormente se
debe realizar el screening con 2 méto-
dos, el objetivo del presente reporte es
evaluar el desempeño de los reactivos
basados en el principio dRVVT, por lo cual
y para no complicar el análisis, solo se
muestran los resultados obtenidos con
dichos reactivos. La ventaja de realizar la
comparación a través de la razón en lu-
gar de los tiempos de coagulación es que
se independiza de las diferencias debidas
a las distintas sensibilidades entre reacti-
vos comerciales.
De la tabla se concluye que los resulta-
dos obtenidos con reactivos LA Screen y
LA Confirm, son muy comparables con
la media del grupo de consenso. Esto se
desprende no solo de la simple compara-
ción de las razones para los tres tipos de
prueba: screening, mezcla y confirmato-
ria, sino a través de los valores de Z score,
que en todos los casos han caído dentro
del rango considerado aceptable (-2 < Z
score < 2).
Debe aclararse que no todos los partici-
pantes informan la totalidad de las prue-
bas e incluso algunos solo reportan la
conclusión final determinada por la razón
LAs/LAc. Esto sumado a que resultados
con errores son excluidos del análisis es-
tadístico, hacen que la comparación de
los “N” no sea coincidente para todas las
pruebas.
De la correcta interpretación de los resul-
tados obtenidos para todas las pruebas
finalmente, el laboratorio debe concluir
la presencia o no de Anticoagulante Lú-
pico en la muestra. En la Tabla 2 se mues-
tra la conclusión final a la que se llegó
empleando los reactivos Wiener lab. y
la respuesta de la totalidad de los par-
ticipantes del programa independiente-
mente del método utilizado. Como puede
observarse, la conclusión obtenida con
reactivos Wiener lab. coincide con más
del 80% de los laboratorios participantes.
La muestra 20.151 merece algún análisis
adicional ya que a pesar de ser una mues-
tra negativa para LA, posee un porcentaje
de resultados “NEGATIVO” relativamen-
te bajo (77%). Para esta muestra hubo
32 laboratorios (6.9%) que informaron la
muestra como “BORDERLINE” y 64 labo-
Artículo de Revisión
ratorios que la informaron como “POSI-
TIVA”. Esta muestra, según consta en el
reporte de ECAT es una muestra con un
nivel elevado de PCR. Es sabido que entre
los interferentes para la detección de LA,
figuran los reactantes de fase aguda, los
cuales pueden provocar falsos positivos
con algún tipo de reactivos.
Las muestras 19.37, 19.69 y 19.154 tu-
vieron un porcentaje significativo de re-
sultados “BORDERLINE” (10.6%, 9.7%
y 9.7%) que generaron una disminución
de la tasa de positivos. Esto se explica
porque son muestras con presencia de
LA débilmente positivo lo cual en oca-
siones y debido a la falta de sensibilidad
de algunas pruebas puede dar resultados
dudosos. En estos casos se aconseja que
la prueba sea reevaluada en un plazo no
mayor a 12 semanas.
La contribución del laboratorio en pato-
logías como el Síndrome Antifosfolipí-
dico es de crucial importancia y por eso
la selección de los sistemas analíticos a
emplear, debe garantizar una detección
precisa que asegure el correcto diagnós-
tico y tratamiento de la enfermedad.
En este sentido se destaca también la
importancia de que los laboratorios parti-
cipen en Programas Externos de Calidad
ya que les permitirá evaluar su desempe-
ño respecto al resto de los laboratorios
y monitorear que el mismo se mantenga
estable en el tiempo.
NotiWiener Nº 192 - Marzo 2021 - 5
 El laboratorio práctico
¿Qué necesitamos conocer acerca de los
métodos serológicos para COVID-19?
Dra. Claudia Elena / Bioq. Ayrton Dovetta
claudia.elena@wiener-lab.com / ayrton.dovetta@wiener-lab.com
Artículo on-line Marketing Corporativo – Wiener Laboratorios SAIC, Rosario – Argentina
Las pruebas de anticuerpos para SARS-
CoV-2 pueden desempeñar un papel
importante en la comprensión epidemio-
lógica del virus. Estas pruebas permiten
estudiar si la persona estuvo infectada,
o en contacto con alguno de los compo-
nentes del virus, mediante la medición de
la respuesta inmunitaria humoral. A dife-
rencia de los métodos directos, como los
test de diagnóstico molecular y los test de
detección de antígenos para SARS-CoV-2,
los test de anticuerpos no son de utilidad
para detectar la infección aguda, y por
lo tanto, no deben ser utilizados para el
diagnóstico. Aun así, la utilidad de los test
de anticuerpos está relacionada al moni-
toreo de la pandemia y la toma de deci-
siones, pudiéndo ser usados en estudios
de seroprevalencia, titulación del plasma
de donantes para tratamiento con plasma
convaleciente, estudios de la respuesta
humoral en la población vacunada, y en
casos de alta sospecha clínica de infec-
ción con resultados de RT-PCR negativos.
Antígenos utilizados en los test de anti-
cuerpos
En lo que respecta a la composición pro-
teica del virus SARS-CoV-2, tenemos 4
proteínas estructurales conocidas como: S
(Spike o espícula), E (Envoltura), M (Mem-
brana) y N (Nucleocápside). La proteína N
forma la nucleocápside que rodea y con-
tiene el genoma del RNA viral, mientras
que las proteínas S, E y M conforman la
envoltura viral (Figura 1).
Los dos targets antigénicos de SARS-
CoV-2 más utilizados en los métodos se-
rológicos para la detección de anticuerpos
son la glicoproteína S de la espícula del
virus y la fosfoproteína N de la nucleo-
cápside. Mientras que la proteína S está
presente en la superficie del virus y es
esencial para la entrada a la célula que
infecta, la proteína N es la que se expresa
de forma más abundante e interacciona
con el RNA viral. Múltiples formas de la
proteína S, ya sea completa (subunidades
S1 + S2) o parcial a través de la subuni-
dad S1 o su dominio RBD (Receptor bin-
ding Domain) son utilizadas como antí-
genos. La proteína N es más conservada
entre los coronavirus que la proteína S,
mientras que dentro de esta última, el do-
6 - NotiWiener Nº 192 - Marzo 2021
minio RBD (perteneciente a la subunidad
S1) es la región menos variable. Según
cual o cuales de estas proteínas targets
estén utilizadas en el diseño del ensayo,
estas van a determinar la especificidad y
la posible reactividad cruzada del mismo.
Tipos de pruebas de detección de anti-
cuerpos
En general estas pruebas pueden ser rea-
lizadas en laboratorios sin requerimiento
de altos niveles de bioseguridad, ya que
las muestras utilizadas poseen baja car-
ga viral o no detectable. Algunas pruebas
pueden diferenciar IgG, IgM e IgA, mien-
tras que otras detectan Inmunoglobulinas
totales.
Se puede clasificar estas pruebas en 2 am-
plias categorías:
• Point of Care (POC): generalmente son
inmunocromatografías de flujo lateral,
conocidas como “test rápidos”, pueden
presentarse en tiras o casetes, los resul-
tados pueden obtenerse en 15 minutos,
no se requiere equipamiento específico
y las muestras más utilizadas son suero,
plasma, sangre entera y/o sangre capilar.
La posibilidad de utilizar sangre capilar
genera que este tipo de test puedan ser
utilizados en estudios masivos y zonas
con escasa infraestructura.
• Laboratorio central: en esta categoría se
agrupan ensayos con métodos de ELISA
y de quimioluminiscencia, los cuales re-
quieren mayor infraestructura y/o equipa-
miento. La mayoría de estas técnicas no
utilizan sangre entera, por lo que requie-
ren un paso de centrifugación para obte-
ner el suero o plasma del paciente.
En muchos casos, aún no está clara la ci-
nética de anticuerpos. Diversos estudios
señalan que la aparición de anticuerpos
específicos a-SARS-CoV-2 de tipo IgM,
IgA e IgG se da aproximadamente entre
los días 5 a 14 del inicio de los síntomas.
Sin embargo, existe evidencia que cam-
bian el principio ya asumido de la sero-
conversión temprana para anticuerpos
IgM seguida de una respuesta más tardía
de anticuerpos de tipo IgG. En un trabajo
reciente publicado se describe 3 tipos de
respuestas inmunes distintas: serocon-
versión temprana de IgM seguida de IgG,
seroconversión sincrónica de anticuerpos
L ABOR
ATORIO
PRÁCTI
CO
Figura 1: Proteínas estructurales del
virus SARS-CoV-2: S (Spike o espícula), E
(Envoltura), M (Membrana) y N (Nucleo-
capside). La proteína S es la responsable
de permitir al virus adherirse y fusionar-
se con la membrana de la célula huésped,
por lo que representa el principal target
de los anticuerpos neutralizantes.
IgM/IgG e incluso casos de seroconver-
sión para anticuerpos IgG seguida de la
aparición de anticuerpos IgM (1).
Por otro lado, con la introducción de las
distintas alternativas de vacunación se
han sumado técnicas cuantitativas que
permiten dosar los niveles de anticuerpos
neutralizantes, específicamente, cuantifi-
cando los niveles de anticuerpos dirigidos
contra la proteína S del virus. Otro for-
mato de reciente aparición son los ensa-
yos de actividad que permiten medir los
niveles de los anticuerpos neutralizantes
(NAbs) midiendo el bloqueo de la interac-
ción entre la proteína Spike y su receptor
ACE2. Este tipo de tests en general se
basan en el principio de inhibición com-
petitiva. En presencia de anticuerpos neu-
tralizantes, la interacción entre el dominio
RBD y ACE2 es obstaculizada/interrumpi-
da, lo que provoca ausencia de señal en
el revelado. El método de referencia para
la medición de actividad de anticuerpos
neutralizantes es el ensayo de neutrali-
zación por reducción de placas (PNRT) el
cual resulta bastante complejo y requiere
niveles de bioseguridad de tipo 3, por lo
que la simplicidad de este tipo de ensayo
de actividad (generalmente en formato
ELISA) lo hace más conveniente y adapta-
ble al uso del laboratorio clínico.
Performance de tests serológicos para an-
ticuerpos a-SARS-CoV-2
A la hora de conocer la performance para
comparar y decidir la prueba de laborato-
rio a utilizar, uno de los criterios más influ-
yentes son la sensibilidad y especificidad
 Laboratorio Práctico
¿Qué necesitamos conocer acerca de los métodos serológicos para COVID-19?

de la prueba en cuestión. La sensibilidad tivos + Falsos Positivos)], mientras que el del test, son afectados considerablemen-
de un test corresponde a la proporción VPN es la probabilidad de que las perso- te por la prevalencia de la población es-
de verdaderos positivos correctamente nas con resultados negativos no posean tudiada, ya que definirá la proporción de
identificados por el test. Para realizar esta anticuerpos [(Verdaderos Negativos / Ver­ verdaderos positivos y verdaderos negati-
evaluación, se utiliza un conjunto defi- daderos Negativos + Falsos Negativos)]. . vos analizada.
nido de muestras positivas [(Verdaderos Los cuadros 1; 2; 3 y 4, ejemplifican si- Para mitigar el efecto de las bajas pre-
Positivos) / (Verdaderos Positivos + falsos tuaciones teóricas diferentes, donde se valencias sobre el VPP pueden aplicarse
negativos)]. Por el otro lado, la especifici- utilizan 2 test con diferente especificidad diferentes estrategias, como estudiar a
dad corresponde a la proporción de ver- (95% y 99%) en 2 poblaciones diferentes, individuos con altas probabilidades de
daderos negativos correctamente identi- con 5% y 10% de prevalencia respecti- tener anticuerpos positivos (aumentando
ficados. Para evaluar la especificidad, se vamente. El objetivo de estos cuadros es indirectamente la “prevalencia” de la po-
utiliza un conjunto de muestras negativas demostrar como el VPP aumenta conside- blación estudiada) o confirmar los resul-
[(Verda­deros Negativos) / (Verdaderos rablemente al aumentar la prevalencia de tados positivos con un segundo test con
Negativos + Falsos Positivos)]. Tanto la la población y/o la especificidad del test un diseño diferente.
sensibilidad, como la especificidad son utilizado.
intrínsecos al test, es decir no dependen Las columnas “Posee anticuerpos” y “No Consideraciones prácticas a la hora de
de la población estudiada. posee anticuerpos” representan el estado utilizar e interpretar los resultados de las
Otros parámetros de utilidad son el Valor real, mientras que las filas indican el re- pruebas serológicas para COVID-19
Predictivo Positivo (VPP) y el Valor Predic- sultado obtenido con el test evaluado. • Los test de anticuerpos para SARS-
tivo Negativo (VPN). El VPP es la probabi- Como puede observarse, del análisis de CoV-2 no deben ser utilizados para rea-
lidad de que las personas con resultados los ejemplos anteriores surge que ambos lizar diagnóstico. No reemplazan a los
positivos posean realmente anticuerpos parámetros, VPP y VPN, además de de- métodos de detección directa.
[(Verdaderos Positivos) / (Verdaderos Posi­ pender de la sensibilidad y especificidad • Aún no es clara la cinética de los an-
ticuerpos, por lo tanto, es recomendable
Posee anticuerpos No posee anticuerpos
utilizar test que detecten tanto IgG como
Test Positivo 475 verdaderos 475 falsos positivos VPP: 475/950 = 50%
IgM, o bien anticuerpos totales.
positivos • Según el ensayo utilizado, un resultado
Test Negativo 25 falsos negativos 9025 verdaderos VPN: 9025/9050 = 99,7% positivo para anticuerpos, indicaría que el
negativos
individuo estuvo en contacto con el virus
Sensibilidad: Especificidad: SARS-CoV-2 o con alguno de sus compo-
475/500 = 95% 9025/9500 = 95%
nentes (en caso de respuesta a vacunas).
Cuadro 1: Sensibilidad 95%; Especificidad 95%; Prevalencia 5% (cada 10.000 per-
sonas evaluadas, 500 poseen anticuerpos) Esto no significa que esté cursando la in-
fección al momento de la toma de muestra.
Posee anticuerpos No posee anticuerpos • A la hora de utilizar un test de anticuer-
950 verdaderos
pos, verificar que antígenos utiliza para la
Test Positivo 450 falsos positivos VPP: 950/1400 = 67,9% detección de los anticuerpos, de manera
positivos
8550 verdaderos de revisar si detecta individuos que tuvie-
Test Negativo 50 falsos negativos VPN: 8550/8600 = 99,4%
negativos ron en contacto con el virus y si puede ser
Sensibilidad: Especificidad: utilizado para el estudio de la respuesta
950/1000 = 95% 8550/9000 = 95% inmune frente a vacunas en personas que
Cuadro 2: Sensibilidad 95%; Especificidad 95%; Prevalencia 10% (cada 10.000 no han estado infectadas.
personas evaluadas, 1000 poseen anticuerpos realmente) • Dentro de las posibilidades, seleccionar
Posee anticuerpos No posee anticuerpos test de anticuerpos con alta especificidad, a
fin de minimizar la tasa de falsos positivos.
475 verdaderos • Se recomienda a las personas con an-
Test Positivo 95 falsos positivos VPP: 475/570 = 83,3%
positivos
ticuerpos positivos continuar cumpliendo
9405 verdaderos
Test Negativo 25 falsos negativos negativos VPN: 9405/9430 = 99,7% con las medidas de prevención. Aún no
Sensibilidad: Especificidad:
está establecido el grado de protección
475/500 = 95% 9405/9500 = 99% generado por los anticuerpos.
Cuadro 3: Sensibilidad 95%; Especificidad 99%; Prevalencia 5% (cada 10.000 per- Bibliografía
sonas evaluadas, 500 poseen anticuerpos)
1- Long, QX, Liu, BZ, Deng, HJ. et al. Anti-
Posee anticuerpos No posee anticuerpos body responses to SARS-CoV-2 in patients
with COVID-19. Nat Med 26, 845–848
950 verdaderos
Test Positivo 90 falsos positivos VPP: 950/1040 = 91,3% (2020). https://doi.org/10.1038/s41591-
positivos
8910 verdaderos 020-0897-1
Test Negativo 50 falsos negativos VPN: 8910/8960 = 99,4%
negativos 2- CDC. Interim Guidelines for COVID-19
Sensibilidad: Especificidad: Antibody Testing. https://www.cdc.gov/
950/1000 = 95% 8910/9000 = 99% coronavirus/2019-ncov/lab/resources/
Cuadro 4: Sensibilidad 95%; Especificidad 99%; Prevalencia 10% (cada 10.000 antibody-tests-guidelines.html
personas evaluadas, 1000 poseen anticuerpos realmente)

NotiWiener Nº 192 - Marzo 2021 - 7

 Novedades
La importancia del agua
En marzo de cada año se celebra el “Día Mundial del Agua”; el-
principal objetivo es crear conciencia de la importancia de cuidar
este recurso natural tan importante para todas las especies. Así
también, reconocer la problemática de millones de personas en
el mundo que no tienen acceso al suministro de agua potable.
Las distintas organizaciones mundiales, como la OMS y la ONU,
emiten continuamente campañas para concientizar sobre su uso,
apuntando al cuidado y preservación del agua dulce en todo el
mundo como parte del desarrollo sostenible.
El agua propicia el bienestar de la población y el crecimiento
inclusivo, y tiene un impacto positivo en la vida de millones de
personas, al incidir en cuestiones que afectan a la seguridad ali-
mentaria y energética, a la salud humana y al medio ambiente.
Cada vez es mayor la preocupación que genera esta problemáti-
ca, dado que en los últimos años se ha notado una disminución
significativa de los recursos hídricos por el uso indebido de éstos
como consecuencia de:
• Un crecimiento acelerado de la población en todo el mundo
• Un incremento en la explotación de los acuíferos
• Contaminación y cambio climático
• Guerras entre los pueblos y naciones
En 2010 las Naciones Unidas reconocieron que, “el derecho al
agua potable y el saneamiento es un derecho humano esencial
Pruebas diagnósticas
La OMS actualizó la Lista de pruebas diagnósticas esenciales y
solicita a los países a priorizar las inversiones en este tipo de
pruebas.
Desde 2018 la OMS publica una Lista anual de pruebas diagnós-
ticas esenciales en la que figuran las pruebas de diagnóstico in
vitro recomendadas que deberían estar disponibles en los pun-
tos de atención y en los laboratorios de todos los países, para
aumentar los diagnósticos oportunos que salvan vidas.
Esta lista es una guía basada en la evidencia que analiza la pre-
valencia de la enfermedad a nivel mundial y, para cada afección,
recomienda la prueba adecuada. De esta forma no solo se pre-
tende mejorar la capacidad del sistema de salud para proporcio-
nar diagnósticos precisos, sino también ahorrar valiosos recursos
sanitarios que de otro modo se desperdiciarían en tratamientos
inadecuados o largas estancias hospitalarias.
En la última edición, publicada en enero de 2021, se incluyeron
las pruebas de diagnóstico para detección de COVID-19 reco-
mendadas por la OMS (prueba de PCR y prueba de antígenos).
Además, se amplió el conjunto de pruebas para enfermedades
infecciosas y prevenibles mediante vacunación y enfermedades
no transmisibles (como el cáncer y la diabetes) y se introdujo una
sección sobre endocrinología, la cual es importante para la salud
reproductiva y de la mujer.
Con el advenimiento de la pandemia de COVID-19, se puso de
manifiesto y acentuó la importancia del uso de pruebas diag-
Boletín del Servicio Bibliográfico de Wiener Laboratorios S.A.I.C.
Número 192 - Año LV - Marzo de 2021
Directora: Luisina Passarelli (luisina.passarelli@wiener-lab.com)
Redactor: Centro de Investigación y Biotecnología (CIBIO) - Marketing Corporativo Wiener lab.
Editor Responsable: Wiener Laboratorios S.A.I.C.
www.wiener-lab.com
8 - NotiWiener Nº 192 - Marzo 2021
Artículo on-line
para el pleno disfrute de la vida y de todos los derechos huma-
nos”. Por lo tanto, el agua es un derecho fundamental para la
preservación de la vida en todas sus formas. Lamentablemente,
no llega de manera segura a un gran número de personas en
distintos países, sobre todo a los más pobres, donde el agua po-
table no es accesible. La población más afectada es la carente de
recursos económicos, donde el saneamiento de las aguas, sólo
es posible para las sociedades más avanzadas y los países desa-
rrollados. Más de un tercio de la población mundial no goza de
los servicios de agua potable segura, lo que se traduce a más de
2.000 millones de personas que no reciben el agua de calidad
en sus hogares, lo que trae como consecuencia la muerte de
hombres, mujeres y niños cada año.
Es fundamental tomar conciencia y modificar todas las conduc-
tas que sean posibles en favor de la conservación del agua como
recurso de todos.
Fuente: ONU
nósticas precisas y de calidad como el pri-
mer paso para la elaboración y aplicación
de estrategias de tratamiento, control y, en
muchos casos, prevención de enfermedades
y brotes.
Además de las pruebas destinadas a ser Artículo on-line
utilizadas en laboratorios, en la Lista de
pruebas diagnósticas esenciales se recomiendan numerosos test
que deberían estar disponibles en la atención primaria o a nivel
comunitario. Esto es especialmente importante para las zonas
rurales de los países de ingresos bajos y medios, donde pueden
faltar instalaciones y equipos médicos y el personal sanitario
suele verse obligado a tomar decisiones terapéuticas basándose
únicamente en los síntomas del paciente.
Las recomendaciones que figuran en dicha Lista tienen en cuen-
ta la idoneidad de las pruebas para los distintos países. El pro-
ceso de confección de la misma está supervisado por el Grupo
de Expertos de Asesoramiento Estratégico sobre Pruebas Diag-
nósticas In Vitro (SAGE-IVD), un grupo de especialistas de todo
el mundo con una larga experiencia en el campo de las pruebas
diagnósticas in vitro y su implantación, uso, regulación y eva-
luación. Estos expertos evalúan los datos sobre la utilidad, el
impacto y la precisión de cada prueba considerada para decidir
cuál debe recomendarse.
Fuente: OMS
Wiener lab.
@Wiener_lab
@Wienerlabgroup
Wiener lab Group
marketing@wiener-lab.com