Consulte las discusiones, las estadísticas y los perfiles de los autores de esta publicación en: https://www.researchgate.

net/publication/334107842

Manual práctico de laboratorio de microbiología y

fitopatología

Libro · Junio de 2019

CITACIONES LEE

0 9,696

5 autores , incluso:

Chandan Kumar Singh Fathi IbrahimA. Brima

Estación regional de cuarentena vegetal Amritsar Punjab Universidad de Bahri

57 PUBLICACIONES 10 CITACIONES 2 PUBLICACIONES 12 CITACIONES

VER EL PERFIL VER EL PERFIL

Algunos de los autores de esta publicación también están trabajando en estos proyectos relacionados:

ESTUDIOS DE VARIABILIDAD Y SUPERVIVENCIA DE Bipolaris sorokiniana (SACC.) ZAPATERO EN TRIGO (Triticum

aestivum L.) Ver Proyecto

Todo el contenido que sigue a esta página fue subido por Chandan Kumar Singh el 29 de junio de 2019.

El usuario ha solicitado una mejora del archivo descargado.

 Dr. Huma Naz
(Profesor asistente)
HACER, Plan de proteccion,
Agrícola Hamelmalo, Universidad,
Keren, Eritrea (África Oriental)

Dr. Hadi Husain Khan

Regional Estación de cuarentena vegetal,
Amritsar, India

Dr. Chandan Kumar Singh

Estación regional de cuarentena vegetal,
Amritsar, India

Asma Naz,
D / O, Protección Vegetal, AMU, Aligarh,
ARRIBA, India

Samiya Maqsood
AMU, Aligarh, UP, India

FIA Brima
Facultad de Agricultura, Universidad de Sudán,
Sudán

Ayesha
D / O Home Science, Krishna College, Bijnor,
ARRIBA, India

Publicaciones de AkiNik
Nueva Delhi
Publicado por

Publicaciones de AkiNik

169, C-11, Sector - 3,

Rohini, Delhi-110085, India

Número gratuito (India) - 18001234070

Autor: Dr. Huma Naz, Dr. Hadi Husain Khan, Dr. Chandan Kumar Singh,
Asma Naz, Samiya Maqsood FIA Brima y Ayesha

El autor / editor ha intentado rastrear y reconocer los materiales

reproducidos en esta publicación y se disculpa si no se ha otorgado el
permiso y el reconocimiento para publicar en este formulario. Si algún
material no ha sido reconocido por favor escríbanos y avísenos para que
podamos rectificarlo.

© Publicaciones AkiNik

1ra Edición: 2018

Paginas: 92

ISBN: 978-93-87072-35-0

Precio: 500 / -
 Prefacio

Este manual de laboratorio ha sido diseñado para Microbiología,

Fitopatología y Nematología. Aunque se describen varios ejercicios,
diferentes tipos de equipos, diferentes preparación de medios, prácticas
generales de laboratorio, recolección de muestras, ns, sintamología,
identificación, técnicas
económicode tinción,
importante planta enfermedades desde diferente
Recursos principalmente para estudiantes Los métodos de cultivo de diversos
patógenos pueden ser utilizados por el estudiante en General, Microbiología
Agrícola y Fitopatología. Se asume que el alumno ha tenido formación previa
en botánica general, bacteriología; un conocimiento de virología,
nematología y micología, y será de gran ayuda para llevar a cabo los
experimentos y comprender los resultados. Los autores agradecen a sus
asociados muchas sugerencias útiles.

Dr. Huma Naz

 Contenido

Capítulo No. de página

1. Prácticas generales de laboratorio 01-01

2. Cristalería común (cilindro de medición, tubo de ensayo, tubo de
cultivo y tapón de rosca 02-07
3. Herramientas de laboratorio (aguja de inoculación y asa de inoculación, mechero
Bunsen (lámpara de alcohol) 08-09
4. Limpieza general y esterilización de artículos de primera necesidad y cristalería 10-14
5. Equipos generales, sus usos y precauciones en su manipulación. 15-30
6. Diferentes medios y su preparación 31-34
7. Recogida de muestras 35-38
8. Aislamiento de patógenos vegetales de diferentes recursos. 39-51
9. Sintomología 52-63
10. Identificación 64-72
11. Técnicas de tinción 73-76
12. Enfermedades de las plantas de importancia económica 77-91
Referencias
Dedicado a
Mis padres
y
Mis abuelos
 Reconocimiento

En primer lugar, me gustaría agradecer a Todopoderoso por darme suficiente

coraje, paciencia y éxito para completar este trabajo.

Para atravesar los altibajos de la vida, la guía de alguien que ha caminado por estos
senderos es importante. La orientación de la (s) persona (s) experimentadas y expertas
contribuye en gran medida a moldear la actitud y el comportamiento de quienes deben ser
guiados. Lo mismo ocurre con los estudiantes y académicos que tienen que quemar aceite de
medianoche para llegar a su destino y lograr su objetivo.

Me gustaría agradecer especialmente a nuestro decano, Er. Semere Amlesom, por

su ayuda y cooperación.

Las palabras serán muy pocas para agradecer al Sr. Fathi Ibrahim A. Brima por
ayudarme en la compilación del libro.

Me gustaría expresar mi agradecimiento a la Srta. Ayesha, al Dr. Hadi Huain Khan y

al Dr. Chandan Kumar Singh por su ayuda incondicional.

Me gustaría presentar un ramo de agradecimiento a mi padre, el Sr. Maqsood

Ahmed Siddiquie, a mi madre, la Sra. Shahana Parveen, a mis hermanos Zaaem Ahmed
y Sheikh Suleman, a mis hermanas Asma Naz, Ayesha y Samiya, por su amor
incondicional y cuidado sin fin. y apoyo. No dejaron piedra sin remover en el
cumplimiento de todos y cada uno de mis deseos y necesidades.

Antes de concluir, dudo que me hubiera olvidado mencionar a muchas

personas que me ayudaron durante mi trabajo.

Dr. Huma Naz

 Capítulo 1
Prácticas generales de laboratorio

Esterilidad y limpieza general:

• La esterilidad y la limpieza del laboratorio son necesarias para garantizar la

integridad de las muestras y los procedimientos analíticos.

• El tráfico a través del laboratorio está restringido a quienes realizan trabajo en el

laboratorio, especialmente cuando se está realizando trabajo analítico.

• Las superficies de las mesas se limpian con etanol al 70 por ciento, antes y después de su

uso.

• El jabón antimicrobiano está disponible en varios lavabos de laboratorio para

facilitar el lavado de manos antes y después del trabajo de laboratorio.

• Un material de vidrio limpio y estéril que no contenga residuos de detergente es

fundamental para garantizar resultados válidos en microbiología.

• Los platos sucios se colocan por separado después de su uso y no deben

almacenarse sobre las mesas. Los platos se lavan con agua caliente y detergente sin
fosfatos de laboratorio. Los platos se enjuagan con agua del grifo y luego con agua
desionizada.

Página | 1
 Capitulo 2
Cristalería común

1. Cilindro de medición

Una probeta graduada, una probeta graduada o un cilindro graduado es un equipo de

laboratorio que se utiliza para medir con precisión el volumen de un líquido. El
desplazamiento de agua se puede utilizar para averiguar el volumen de un sólido. Los
cilindros graduados son generalmente más exactos y precisos para este propósito que los
matraces y vasos de precipitados.

Un cilindro tradicional suele ser estrecho y alto (para aumentar la

precisión de la medición de volumen) y tiene un vástago de plástico o vidrio y
un "pico" para verter fácilmente el líquido medido.

Ciertos tipos de cilindros tienen juntas de vidrio esmerilado en lugar de un "pico",

de modo que pueden cerrarse con un tapón o conectarse directamente con otros
elementos de un colector; también se conocen como cilindros mezcladores. Con este
tipo de cilindro, el líquido dosificado no se vierte directamente, sino que a menudo se
elimina con una cánula.

El cilindro de medición se utiliza normalmente y con mayor frecuencia en los

laboratorios.

Fig .: Probeta graduada

Página | 2
2. Tubo de ensayo, tubo de cultivo y tubos con tapón de rosca

I.Estos se componen de vidrio, uno de cuyos extremos está cerrado y el

otro extremo abierto.

II. Si la pared lateral está abierta y el extremo está ligeramente curvado hacia afuera, se llama

tubo de ensayo; si la pared lateral es lisa, se llama tubo de cultivo. Cuando la pared
lateral del tubo tiene tornillos para poder colocar una tapa de plástico, se llama
tubo con tapón de rosca.

III. Estos se utilizan en laboratorio microbiológico.

IV. Estos tubos se utilizan para probar los productos químicos como el pH, etc.
Los tubos de cultivo se utilizan para la preparación de agar inclinados y la purificación de
microorganismos. El extremo abierto está tapado con un tapón de algodón no absorbente.

V.A veces, los microorganismos se purifican y conservan en tornillos.

Tubos tapados.

Fig .: Diagrama de tubo de ensayo (A), tubo de cultivo (B) y tubo con tapón de rosca (C)

3. Plato Perti

I. Por primera vez RJ Petri, un estudiante de la más renovada

El bacteriólogo Robert Koch ideó por primera vez este plato, por lo que se llama 'Placa de Petri'.

II. Consiste en dos platos de vidrio poco profundos, la mitad superior o tapa y el
mitad inferior o mitad inferior.

Página | 3
 III. Para aislamiento y cultivo de diferentes tipos de microorganismos.
estos platos se utilizan en todos los laboratorios microbiológicos.

IV. Según el diámetro su diámetro varía.

El medio de agar fundido se vierte asépticamente en la mitad inferior del

placa de Petri esterilizada y luego se cubre con la mitad superior.

VI. Las placas de Petri se esterilizan colocándolas en una placa de Petri.

recipiente y en un horno / autoclave.

VII. Ahora, las placas de Petri de plástico estériles desechables también están disponibles para el

mismo propósito.

Fig .: Diagrama de placa de Petri.

4. Pipeta

I. Es un aparato de vidrio cilíndrico y graduado.

II. Es un extremo (lado inferior) que se estrecha, mientras que el otro extremo (boquilla) es

normal. La parte media es más ancha o del mismo tamaño que el final de la boca.

III. Está graduado con los números 1,2, ……… 10.

IV. Tiene diferentes capacidades de medición como 0,1, 0,5, 1, 5, 10 ml, etc.
por tanto, mide diferentes cantidades.

V. Se utiliza para transferir la cantidad apropiada de líquido en otros

contenedores.

VI. Debe esterilizarse en un horno / autoclave antes de su uso manteniéndolo en

recipiente de pipeta después de taponado con algodón.

VII. Por motivos de seguridad, el líquido debe aspirarse colocando una pipeta.

Página | 4
ventosa en el extremo normal de la pipeta.

VIII. Las pipetas deben esterilizarse guardándolas primero en una lata de acero.
(robar contenedor); la lata de robo se esteriliza a 121 o C durante 30 minutos.

Fig .: Pipeta de vidrio (A) y pipeta Pateur (B)

5. Matraces Erlenmeyer

I) Por primera vez, el matraz fue ideado por Erlenmeyer, de ahí que se le llame
matraz Erlenmeyer.

II) Tiene un pico estrecho en la parte superior con una abertura y un fondo ancho.

III) Los matraces de diferentes tamaños, por lo tanto, miden diferentes volúmenes,
como 100, 250, 500, 1000, 2000 ml de líquido.

IV) Los matraces son de fondo redondo o de fondo plano.

V) A veces, los matraces también están graduados para representar el volumen de

líquido.

VI) Se realizan ciertas modificaciones en el matraz Erlenmeyer según los

requisitos, por ejemplo, se fabrica un pico cerca del cuello del matraz para
conectarlo a otros equipos con tubos de goma. Estos matraces se
denominan matraces de brazo lateral.

VII) Durante la esterilización, se inserta un tapón de algodón en la boca del matraz.

VIII) Debe esterilizarse antes de su uso microbiológico.

Página | 5
 Fig .: Matraz Erlenmeyer

6. Matraz volumétrico

I) Se utiliza para preparar una solución de concentración precisa.

II) Su parte superior es cilíndrica y estrecha, y marcada en un punto. Esta

marca indica el nivel del agua que se mantendrá en este punto.

III) La mitad inferior es redondeada y voluminosa.

IV) La base es plana para que pueda colocarse correctamente en la superficie.

Fig .: Matraz aforado

7. Esparcidor de vidrio

I) El esparcidor de vidrio se fabrica doblando una varilla de vidrio y haciendo una

estructura en forma de L.

II) Se utiliza para esparcir uniformemente los microorganismos sobre la superficie del agar

presentes en medio líquido.

Página | 6
III) El brazo largo se sostiene en la mano y el brazo pequeño se esteriliza a la llama y se coloca

sobre una superficie de agar.

IV) Se lleva hacia adelante y hacia atrás para que los microorganismos presentes en el líquido

puedan disociarse y esparcirse uniformemente sobre toda la superficie del agar.

Fig .: Esparcidor de vidrio (A) y método de esparcimiento) (B)

Página | 7
 Capítulo 3
Herramientas de laboratorio (aguja de inoculación y asa de inoculación,
Mechero Bunsen (lámpara de espíritu)

1. Aguja de inoculación y bucle de inoculación

I. Estas son las herramientas más utilizadas. La aguja / bucle de inoculación es

compuesto por un alambre largo de platino fijado a una varilla metálica.

II. Un lazo de alambre tiene un mango con eje de tornillo de acero en el que el nicrom
o varilla metálica. El cable está demasiado enrollado alrededor de un objeto pequeño y
redondo como un lápiz, etc. para formar un bucle girándolo mecánicamente. El bucle debe ser
tal que retenga una pequeña película circular sumergiéndolo en la solución. Para ello, se
recomienda un tamaño adecuado (5-7 cm) del cable.

III. El alambre recto o la aguja recta tienen un alambre en lugar de un bucle. El

extremo abierto o libre cuyo extremo romo. Ambos bucles son cables rectos que deben esterilizarse

utilizando un mechero Bunsen o un cable de bobina de calentamiento caliente hasta que la aguja o el

bucle se pongan al rojo vivo. Después de enfriar el bucle o el alambre, estos se utilizan generalmente

para transferir el cultivo del caldo líquido.

IV. El alambre recto de la aguja se utiliza para transferir cultivos de sólidos

medio. Se puede manipular una cantidad incluso menor de cultivo líquido utilizando
una aguja recta.

V. El lazo y el alambre también se utilizan para recoger pequeñas cantidades de sólidos

materiales de una colonia microbiana, y se puede utilizar para inocular un medio
líquido o sólido. Tanto el lazo como el alambre recto deben flamearse
inmediatamente después de su uso para evitar la contaminación.

Fig .: Aguja de inoculación (A) y asa (B).

Página | 8
2. Mechero Bunsen (lámpara de espíritu)

I) El dispositivo básico para proporcionar calor en el experimento de laboratorio es el

mechero Bunsen. Lleva el nombre del nombre de RW Burner. Se llama lámpara de
espíritu debido al uso del espíritu con el propósito de quemar.

II) El gas ingresa al quemador por la base, y su suministro es regulado externamente por la

llave de gas. A medida que el gas fluye hacia arriba a través de una entrada dentro de la

base, el aire se contamina a través de los orificios de entrada de aire justo encima de la

base.

III) La cantidad de aire se puede controlar girando una manga que se coloca sobre
el extremo superior del cañón.

IV) El método adecuado para encender el quemador es cerrar el suministro

de aire, encender el gas y encenderlo. La llama será grande y amarilla.
Poco a poco, abra la entrada de aire hasta que la llama tome un color
azul.

V) La aguja / asa de inoculación se esteriliza antes de insertarla en tubos de

cultivo o placas de Petri.

VI) También se utiliza durante la transferencia y purificación de cultivos

microbianos. Antes de abrir el tapón de algodón, se debe flamear la boca de
los tubos / matraces de cultivo para matar los microorganismos presentes en
la boca, si los hubiera.

VII) La esterilización de herramientas mediante el uso de una lámpara de alcohol se llama incineración.

Fig.s: Lámpara Spirit

Página | 9
 Capítulo 4
Limpieza general y esterilización de artículos esenciales y cristalería.

1. Limpieza de cristalería

El método convencional de lavado de cristalería implica remojar el vidrio en un

baño de ácido crómico-ácido sulfúrico seguido de enjuagues con agua del grifo,
enjuagues con agua destilada y finalmente enjuagues con agua bidestilada. Debido a la
naturaleza corrosiva del ácido crómico, se ha eliminado el uso de este procedimiento,
excepto para cristalería muy contaminada o sucia. La limpieza adecuada de la mayoría
de los artículos de vidrio para cultivo de tejidos se puede lograr lavando en agua
caliente (70 ° C +) con detergentes comerciales, enjuagando con agua caliente del grifo
(70 ° C +) y finalmente enjuagando con agua destilada y bidestilada. Sin embargo, el
material de vidrio altamente contaminado debe limpiarse en un baño de ácido
crómico-ácido sulfúrico o mediante algún otro método probado, como (1) limpieza
ultrasónica, (2) lavado con pirofosfato de sodio o (3) hirviendo en metafosfato (alconox),
enjuagar, luego hervir en una solución diluida de ácido clorhídrico y finalmente volver a
enjuagar. La cristalería limpia debe inspeccionarse, secarse a 150 ° C en un horno de
secado, taparse con papel de aluminio y almacenarse en un armario cerrado.

Se recomienda el siguiente procedimiento general para limpiar cristalería que

contenga medios y cultivos después de que se hayan recopilado todos los datos:

1) Esterilice en autoclave todo el material de vidrio con medios y cultivos todavía en su interior. Esto mata

cualquier microorganismo contaminante que pueda estar presente.

2) Una vez que el medio esterilizado en autoclave se haya enfriado, pero

en estado líquido, viértalo en bolsas de plástico de riesgo biológico o bolsas de plástico gruesas,

séllelo y deséchelo.

3) Lave toda la cristalería en agua caliente y jabón con un cepillo para botellas adecuado.

para limpiar las partes internas de la cristalería. Cualquier material de vidrio que esté
manchado debe sumergirse en un baño de ácido sulfúrico concentrado y dicromato de
potasio durante 4 horas, luego enjuagarlo 10 veces antes de lavarlo con agua jabonosa.

4) Toda la cristalería debe enjuagarse tres veces con agua del grifo, tres veces
en agua desionizada, tres veces en agua bidestilada, secada y almacenada en
lugar limpio.

Página | 10
 5) Lave todos los instrumentos y cristalería nueva de manera similar.

2. Principio de esterilización

La esterilización se refiere al uso de diferentes procedimientos para destruir todas las formas

de microorganismos, incluidas las esporas bacterianas.

Hay 4 principios de esterilización diferentes:

1. Esterilización por calor

2. Esterilización por radiación Método físico

3. Esterilización por filtración

4. Esterilización química (gaseosa y líquida) ---- Método químico

2.1. Esterilización por calor

La esterilización por calor es el método de esterilización más utilizado y fiable,

que implica la destrucción de enzimas y otros constituyentes celulares esenciales.
El proceso es más eficaz en estado hidratado donde en condiciones de alta
humedad, se produce hidrólisis y desnaturalización, por lo que se requiere un
menor aporte de calor. En estado seco, se producen cambios oxidativos y se
requiere un mayor aporte de calor.

Este método de esterilización solo se puede aplicar a los productos

termoestables.

2.1.1. Esterilización por calor seco: Ejemplos de esterilización por calor seco son:

1. Incineración

2. Al rojo vivo

3. Llameante

4. Horno de aire caliente

La esterilización por calor seco implica calentar a presión atmosférica y, a menudo, utiliza un

ventilador para obtener una temperatura uniforme por circulación. Calentar a 180º durante media

hora, 170º durante 1 hora o 160º C durante 2 horas son el rango de temperatura habitual en este

método. Los tiempos son los períodos durante los cuales el objeto se mantiene a la temperatura

respectiva.

El calor seco destruye las endotoxinas bacterianas (o pirógenos) que son

difíciles de eliminar por otros medios y esta propiedad lo hace aplicable para
esterilizar botellas de vidrio que deben llenarse asépticamente.

2.1.2. Esterilización por calor húmedo:

El calor húmedo se puede utilizar de tres formas para lograr la inactivación microbiana.

Página | 11
 0
La esterilización por calor húmedo implica el uso de vapor en el rango de 121-134
C. Se usa vapor a presión para generar la alta temperatura necesaria para la
esterilización.

Los autoclaves utilizan vapor presurizado para destruir microorganismos y son los
sistemas más confiables disponibles para la descontaminación de desechos de
laboratorio y la esterilización de material de vidrio, medios y reactivos de laboratorio. La
esterilización en autoclave es más eficaz cuando los organismos entran en contacto
directamente con el vapor o están contenidos en un pequeño volumen de líquido
acuoso (principalmente agua). En estas condiciones, vapor a una presión de
aproximadamente 15 psi; alcanzar la temperatura (121 o C) matará a todos los
organismos y sus endosporas en unos 15 minutos.

Principio: - Un principio básico de la química es que cuando aumenta la presión de

un gas, la temperatura del gas aumenta proporcionalmente. Por ejemplo, cuando el
vapor fluye libremente a una temperatura de 100 o C se coloca bajo una presión de 1
atmósfera sobre la presión del nivel del mar, es decir, alrededor de 15 libras de presión
por pulgada cuadrada (Psi), la temperatura se eleva a 121 o C. De esta manera el vapor es
un gas, al aumentar su presión en un sistema cerrado aumenta su temperatura. A
medida que las moléculas de agua en el vapor se vuelven más energizadas, su
penetración aumenta sustancialmente.

Los autoclaves o esterilizadores a vapor consisten esencialmente en lo siguiente:

I) Cámara cilíndrica o rectangular, con capacidades que van desde los 400
hasta los 800 litros.

II) Sistema de calentamiento de agua o sistema de generación de vapor

III) Válvulas de entrada y salida de vapor

IV) Puertas simples o dobles con mecanismo de cierre.

V) Termómetro o indicador de temperatura

VI) Manómetros

Página | 12
2.2. Esterilización por radiación:

Se utilizan muchos tipos de radiación para la esterilización, como la radiación electromagnética

(por ejemplo, rayos gamma y luz ultravioleta), radiación de partículas (por ejemplo, electrones

acelerados). El principal objetivo de estas radiaciones es el ADN microbiano. Los rayos gamma y los

electrones provocan ionización y producción de radicales libres, mientras que la luz ultravioleta

provoca excitación.

2.2.1. Esterilizador de rayos gamma:

Los rayos gamma para la esterilización generalmente se derivan de una fuente de cobalto-60, el

isótopo se mantiene como gránulos empaquetados en varillas de metal, cada varilla colocada

cuidadosamente dentro de la fuente. Esta fuente está alojada en un edificio de hormigón con muros

de 2 m de espesor. Los artículos que se esterilizan pasan a través de la cámara de irradiación en una

cinta transportadora y se mueven alrededor de la fuente elevada.

2.2.2 Irradiación ultravioleta:

La longitud de onda óptima para la esterilización UV es de 260 nm. Una lámpara de

mercurio que dé un pico de emisión a 254 nm es la fuente adecuada de luz ultravioleta en esta
región.

2.3. Esterilización por filtración:

El proceso de filtración no destruye sino que elimina los microorganismos. Se

utiliza tanto para la clarificación como para la esterilización de líquidos y gases, ya
que es capaz de evitar el paso de partículas viables y no viables.

Los principales mecanismos de filtración son el tamizado, la adsorción y el atrapamiento

dentro de la matriz del material filtrante. Los filtros de grado esterilizante se utilizan en el
tratamiento de inyecciones sensibles al calor y soluciones oftálmicas, productos biológicos y
aire y otros gases para el suministro a áreas asépticas. También se utilizan en la industria
como parte de los sistemas de ventilación en fermentadores, centrifugadoras, autoclaves y
liofilizadores. Los filtros de membrana se utilizan para las pruebas de esterilidad.

2.4 Esterilización química:

Los compuestos químicos utilizados pueden ser:

a) Esterilización por gas b) Esterilización por líquido

Generalmente, los procedimientos de esterilización química tienen las desventajas de presentar

riesgos para la salud de los usuarios (por ejemplo, venenosos, inflamables).

2.4.1 Esterilización gaseosa:

Los gases químicamente reactivos como el formaldehído (metanol,

H.CHO) y óxido de etileno (CH 2) 2 O poseen actividad biocida. El óxido de
etileno es un gas incoloro, inodoro e inflamable.

Página | 13
2.4.1.1 Esterilizador de óxido de etileno:

Un esterilizador de óxido de etileno consta de una cámara de 100 a 300 litros de

capacidad y está rodeada por una camisa de agua. El aire se extrae del esterilizador por
evacuación, la humidificación y acondicionamiento de la carga se hace pasando vapor a
presión subatmosférica, luego se hace nuevamente la evacuación y se pasa óxido de
etileno vaporizado precalentado. Después del tratamiento, los gases se evacuan
directamente a la atmósfera exterior o mediante un sistema de escape especial.

Los autoclaves de óxido de etileno (y formalina) tienen las siguientes

desventajas: -

Difícil de operar. No apto para hospitales pero utilizado en la industria (por

ejemplo, para esterilizar materiales desechables que no toleran altas temperaturas)

2.4.1.2 Esterilizador de formaldehído a vapor a baja temperatura (LTSF):

Un esterilizador LTSF funciona con vapor a presión subatmosférica. Al

principio, el aire se elimina por evacuación y se admite vapor a la cámara.

2.4.2 Esterilización de líquidos:

2.4.2.1 Esterilización líquida por ácido acético:

Se encontró que el ácido peracético es esporicida a bajas concentraciones. También se

demostró que no tiene efectos nocivos para la salud o el medio ambiente. Interrumpe los
enlaces en proteínas y enzimas y también puede interferir con el transporte de la membrana
celular a través de la ruptura de las paredes celulares y puede oxidar las enzimas esenciales y
deteriorar las vías bioquímicas vitales.

2.4.2.2 Esterilización con peróxido de hidrógeno:

Este método dispersa una solución de peróxido de hidrógeno en una cámara de

vacío, creando una nube de plasma. Este agente esteriliza oxidando componentes
celulares clave, lo que inactiva los microorganismos. La nube de plasma existe solo
mientras la fuente de energía está encendida. Cuando se apaga la fuente de energía, se
forman vapor de agua y oxígeno, lo que no genera residuos tóxicos ni emisiones
nocivas. La temperatura de este método de esterilización se mantiene en el rango de
40-50 ° C, lo que lo hace particularmente adecuado para su uso con dispositivos
médicos sensibles al calor y sensibles a la humedad. Los instrumentos se envuelven
antes de la esterilización y pueden almacenarse o utilizarse inmediatamente.

Página | 14
 Capítulo 5
Equipos generales, sus usos y precauciones de manipulación

1. El microscopio compuesto Las

partes del microscopio:

1. Lente del ocular: La lente en la parte superior por la que miras. Suelen tener
una potencia de 10X o 15X.

2. Tubo: Conecta el ocular a las lentes del objetivo.

3. Brazo: Soporta el tubo y lo conecta a la base.

4. Base: La parte inferior del microscopio, utilizada como soporte.

5. Iluminador: Una fuente de luz fija (110 voltios) que se usa en lugar de un
espejo.

6. Etapa: La plataforma plana donde colocas tus toboganes. Clips de escenario

Mantenga las diapositivas en su lugar. Si su microscopio tiene una platina mecánica, podrá
mover el portaobjetos girando dos perillas. Uno lo mueve hacia la izquierda y hacia la derecha,
el otro lo mueve hacia arriba y hacia abajo.

7. Punta giratoria o torreta: Esta parte tiene dos o más lentes de objetivo y
se puede girar para cambiar fácilmente la potencia.

8. Lentes objetivo: Por lo general, encontrará 3 o 4 lentes de objetivo en el

microscopio. Por lo general, constan de potencias 4X, 10X, 40X y 100X.

9. Parada de la rejilla: Este es un ajuste que determina qué tan cerca de la lente del
objetivo puede llegar a la diapositiva.

10. Lente del condensador: El propósito de la lente del condensador es enfocar la

luz sobre la muestra.

11. Diafragma o iris: Muchos microscopios tienen un disco giratorio debajo del
escenario. Este diafragma tiene orificios de diferentes tamaños y se utiliza para variar la
intensidad y el tamaño del cono de la luz que se proyecta hacia arriba en la diapositiva.

Página | 15
Fig .: El microscopio compuesto

Página | dieciséis
2. Equilibrio

Para experimentos químicos o biológicos, se debe pesar la cantidad exacta de

químico usando una balanza. Sin embargo, no se puede realizar ningún
experimento sin un equilibrio. Hay varios tipos de balanzas que se utilizan para
pesar, como balanzas de un solo plato, químicas o analíticas y eléctricas. Los
saldos se utilizan según el requisito y la cantidad más de 100 g; Se utiliza una
balanza química o eléctrica para pesar una cantidad de 10 mg, pero su capacidad
total de pesaje es de 100 g. Además, la ultramicrobalanza puede pesar materiales
de 0,01 µg a 2 mg.

Equilibrio eléctrico:

I. Funciona en presencia de electricidad que muestra una pantalla digital de

pesos.

II. Contiene una sola sartén, cuyo peso es contrabalanceado por

pesos y se pone a cero.

III. El material a pesar se coloca en el plato de la balanza y

los contrapesos necesarios se eliminan utilizando las perillas. Pronto la balanza digital se mueve hacia

arriba y hacia abajo.

IV. Retire siempre los contrapesos correspondientes al peso de

materiales.

Balance analítico: Las balanzas analíticas se utilizan para el pesaje preciso de

reactivos y medios. Se revisan y calibran anualmente. Las balanzas deben descansar
sobre una superficie firme y nivelada. Las bandejas de equilibrio se limpian a diario con
agua o un desinfectante de superficies como etanol al 70%.

Página | 17
 Balance electrónico

3. Placa caliente

Las placas calefactoras de laboratorio se utilizan normalmente para calentar soluciones a 100 o C

o superior cuando no se pueden utilizar baños de vapor intrínsecamente más seguros. Cualquier

placa calefactora recién comprada debe diseñarse de manera que se eviten las chispas eléctricas. Sin

embargo, muchas placas calientes más antiguas presentan un riesgo de chispas eléctricas derivadas

del interruptor de encendido y apagado ubicado en la placa calefactora, del termostato bimetálico

que se usa para regular la temperatura o de ambos. Se debe advertir a los trabajadores de

laboratorio del peligro de chispas asociado con las placas calientes más antiguas.

Además del peligro de chispas, los termostatos bimetálicos viejos y corroídos en estos

dispositivos pueden eventualmente cerrarse por fusión y entregar una corriente completa y continua

a una placa caliente.

No almacene materiales inflamables volátiles cerca de una placa calefactora

Limite el uso de placas calefactoras antiguas para materiales inflamables.

Verifique la corrosión de los termostatos. Los termostatos bimetálicos corroídos se

pueden reparar o reconfigurar para evitar el riesgo de chispas.

Página | 18
 Fig .: Placa calefactora

4. Horno de aire caliente

I) El horno de aire caliente se utiliza generalmente para la esterilización de cristalería, metal

dispositivos y otros artículos que se estropean por esterilización en autoclave. Para tal
fin se utiliza la esterilización por calor seco. Los hornos se basan en este principio.
Aunque la esterilización se puede realizar en una incubadora, la cristalería requiere
calor seco en lugar de calor húmedo. Mata a los microbios oxidando sus componentes
químicos. Es menos eficaz en comparación con el calor húmedo.

II) Hoy en día también se venden en el mercado hornos a base de microondas

pero, en general, no se utilizan mucho en laboratorio.

III) El horno generalmente consta de una cámara de doble pared, el espacio

entre dos paredes está aislado. Se calienta desde abajo mediante el uso de corriente eléctrica
y los elementos calefactores están dispuestos de manera que se caliente la cámara interior de
manera uniforme.

IV) Hay un termostato incorporado cuando es necesario, ayuda a regular

la temperatura. La perilla de calibración establece la temperatura deseada.

V) Para la esterilización, el tiempo de mantenimiento depende de la temperatura. Si

la temperatura del horno es 160 o C, el tiempo de espera debe ser de 1 hora pero a 180 o C debe
ser de 30 minutos. El tiempo de espera puede ser un poco más para una mejor esterilización.

VI) Los materiales de vidrio deben limpiarse y secarse antes de guardarlos.

dentro de la cámara del horno, de lo contrario podría romperse. Una vez finalizado
el tiempo de espera, la cristalería no debe sacarse inmediatamente, sino que la
temperatura debe bajar para que el aire frío del ambiente exterior no pueda dañar
o romper la cristalería.

Página | 19
 VII) El aire, dentro del horno, debe ser circulado por un ventilador para asegurar que
todas las partes se mantienen a la temperatura requerida; los artículos deben colocarse
correctamente para no obstruir el flujo de aire.

Fig .: Horno de aire caliente

5. pHmetros

I) Por primera vez en 1909, Sorenson usó el término pH para denotar la

concentración de iones de hidrógeno de la solución.

II) El pH se puede definir como un logaritmo negativo de la concentración de iones

de hidrógeno (H +): pH = –log 10 ( H +) = 7

III) El pH es el grado de acidez y alcalinidad de una solución en una escala de 1 a

14.

IV) Los valores de pH 1 a 7 muestran los valores de acidez, pH 7 neutralidad y pH 7 a

14 alcalinidad. El pH del agua es 7 a 25 o C.

V) El ácido es el donante de protones y la base es el aceptor de protones (ácido =

base + H +), es decir, el ácido se disocia y produce una concentración de iones de
hidrógeno (H +).

VI) El mantenimiento de los valores de pH es un parámetro importante para el

crecimiento y proceso de cualquier organismo.

VII) El pH se mide usando un medidor de pH que es un instrumento calibrado

contra una serie de tampones de valores de pH conocidos.

Página | 20
 VIII) Un medidor de pH estándar tiene dos electrodos, un electrodo de vidrio y el
segundo electrodo de referencia de cloruro de mercurio-mercurio (calome) o
de plata-cloruro de plata. El electrodo de referencia emerge es una solución
saturada de KCl.

IX) Un medidor de pH normal consiste en un electrodo de vidrio formado por una

fina membrana de vidrio que es selectivamente permeable al H +.

X) Por tanto, la función del electrodo es formar un puente conductor entre

el elemento metálico y la solución de muestra en la que se colocan dos
electrodos.

XI) También se encuentran disponibles medidores de pH actuales con electrodos

combinados.

XII) Usando un medidor de pH, se mide el pH de una solución desconocida.

XIII) Cada equipo tiene un cuaderno de bitácora diario; Registre todas las calibraciones en el

libro de registro correspondiente.

Precauciones:

Un medidor de pH debe manipularse con cuidado para que su electrodo no se

rompa. Los electrodos siempre deben mantenerse dentro de agua destilada para que el
electrodo no deje de funcionar. Figura. puré dubey.

Fig .: medidor de pH

Página | 21
6. Flujo de aire laminar

I) El flujo laminar es un aparato que consta de un soplador de aire en la parte

posterior de la cámara que puede producir un flujo de aire con velocidad
uniforme a lo largo de líneas de flujo paralelas. Hay un sistema de filtro especial
de filtro de aire particular de alta eficiencia (HEPA) que puede eliminar partículas
tan pequeñas como 0,3 mm.

II) Delante del soplador, se encuentra un mecanismo a través del cual el aire soplado
desde el soplador produce velocidad del aire a lo largo de líneas de flujo paralelas.

III) El laminar se basa en el flujo de corriente de aire de velocidad uniforme a lo

largo de líneas de flujo paralelas que ayudan a transferir cultivos
microbianos en condiciones asépticas. El aire pasa a través de los filtros al
interior del recinto y los filtros no permiten que ningún tipo de microbio
entre en el sistema.

IV) Dentro de la cámara se colocan un tubo fluorescente y el otro tubo UV. Dos
interruptores para estos tubos y un interruptor separado para regular el
flujo de aire están instalados fuera del aparato. Debido a la velocidad
uniforme y al flujo paralelo de la corriente de aire, se realizan vertidos de
medios, enchapado, preparaciones inclinadas, rayado, etc. sin ningún tipo
de contaminación.

V) Inicialmente, las partículas de polvo se eliminan de la superficie del flujo

laminar con la ayuda de un paño suave que contiene alcohol. Encienda la luz
ultravioleta durante un período de 30 minutos para matar los gérmenes, si
los hubiera, presentes en el área de trabajo.

VI) La hoja de la cubierta frontal del aparato se abre para mantener dentro el
material deseado. El soplador de aire se ajusta al grado deseado para que el
aire dentro de la cámara sea expulsado porque el aire dentro de la cámara
puede estar contaminado / puede traer contaminantes.

VII) Siéntese correctamente frente a la cámara nuevamente; Limpie la mesa de trabajo

con alcohol para reducir los contaminantes. Todos los trabajos relacionados con el
vertido, el rayado de las planchas, etc. se realizarán en la zona de llama del
quemador o lámpara de alcohol.

VIII) En el laboratorio de microbiología, el tipo de flujo de aire laminar horizontal se utiliza para

suministrar el aire a través del filtro.

Precauciones:

Quítese los zapatos antes de entrar a operar el aparato. Lava el

Página | 22
manos con detergente o jabón. No se debe hablar dentro de la cámara
mientras se realiza la transferencia de cultivo microbiano, en su defecto las
posibilidades de contaminación pueden ser mayores, ya sea por boca,
estornudos o aire.

Fig .: Sistema de flujo de aire laminar

7. Incubadora

I) Una incubadora es un instrumento que consta de cobre / acero

Página | 23