Medios de cultivo

microbiológicos

http://www.avena-medica.com/Vault/upload/misc/bt_microbiology.jpg
 Composición química de
Escherichia coli
Molécula % del peso seco
(2.8x10-13 g)
•Macromoléculas totales 96
Proteínas 55
Polisacáridos 5
Lípidos 9.1
ADN 3.1
ARN 20.5
•Monómeros totales 3
Aminoácidos y precursores 0.5
Azucares y precursores 2
Nucleótidos y precursores 0.5
•Iones inorgánicos 1
http://www.dw.com/image/0
Total 100%
,,6533325_4,00.jpg
 Clasificación
Microorganismos

Fuente de energía

Oxido-reducción Luz
Quimiótrofas Fotótrofas

Compuestos orgánicos
Fuente de carbono
Quimioheterótrofos

Compuestos orgánicos
Fuente de carbono
Fotoheterótrofos

Compuestos orgánicos CO2

Quimioheterótrofos Fotoautótrofos

CO2

Compuestos inorgánicos
Quimiolitótrofos

Fuente de carbono

Compuestos Orgánicos
Mixótrofos

CO2
Litoautótrofos
 Macronutrientes en los
medios de cultivo
Elemento Forma encontrada en el
medio ambiente
Carbono (C) CO2, compuestos orgánicos
Forma química en los
medios de cultivo
Glucosa, malato, acetato,
piruvato, cientos de otros
compuestos o en mezclas
complejas (extracto de
levadura, peptona y otros)

Hidrógeno (H) H2O, compuestos orgánicos H2O, compuestos orgánicos

Oxígeno (O) H2O, O2, compuestos H2O, O2, compuestos orgánicos
orgánicos
Nitrógeno (N) NH3, NO3, N2, compuestos Inorgánicos: NH4Cl, (NH4)2SO4,
orgánicos nitrogenados KNO3, N2
Orgánicos: Aminoácidos, bases
nitrogenadas de nucleótidos y
otros compuestos de nitrógeno
 Macronutrientes en los
medios de cultivo
Elemento Forma encontrada en Forma química en los
el medio ambiente medios de cultivo
Fósforo (P) PO43- KH2PO4, Na2HPO4

Azufre (S) H2S, compuestos orgánicos Na2SO4, Na2S2O3, Na2S, cisteína

de S, metales (FeS, CuS, u otros compuestos orgánicos
ZnS, NiS y otros) con azufre

Potasio (K) K+ en solución o varias sales KCl, KH2PO4

de K

Magnesio (Mg) Mg2+ en solución o varias MgCl2, Mg2SO4

sales de Mg
 Macronutrientes en los
medios de cultivo
Elemento Forma encontrada en el Forma química en los
medio ambiente medios de cultivo
Sodio (Na) Na+ en solución o como NaCl NaCl
y otras sales de Na

Calcio (Ca) Ca2+ en solución o como CaCl2

CaSO4 y otras sales de Ca

Fierro (Fe) Fe2+ o Fe3+ en solución como FeCl3, FeSO4 y otras soluciones
FeS, Fe(OH), otras muchas de fierro (o Fe3+, EDTA, Fe2+
sales de Fe citrato)
 Micronutrientes en los medios
de cultivo
Elemento Función celular
Cobalto Vitamina B12, transcarboxilasa

Cobre Proteínas, citocromo c oxidasa, SOD

Manganeso Activador enzimático, SOD

Molibdeno Enzimas, nitrogenasa de molibdeno, nitrato reductasa

Níquel Hidrogenasa, monóxido de carbono deshidrogenasa

Selenio Hidrogenasas, aminoácido selenio-cisteina

Tungsteno Formato deshidrogenasa

Vanadio Nitrogenasa de vanadio

Zinc Anhidrasa carbónica, alcohol deshidrogenasa

 Factores de crecimiento
Vitamina Función
Ácido p-amino benzoico (PABA) Precursor del ácido fólico
Ácido fólico Metabolismo de un carbono, transferencia de
grupos metilo
Biotina Biosíntesis de ácido grasos, beta
descarboxilaciones, fijación de CO2
Niacina (ácido nicotínico) Precursor del NAD; transferencia de
electrones en reacciones redox
Cobalamina (B12) Reducción y transferencia de fragmentos de
un solo carbono.
Riboflavina Precursor de FAD, FMN, transporte de
electrones.
Ácido pantoténico Precursor de la CoA
Tiamina (B1) Alfa descarboxilaciones, transcetolasas.
Complejo B6 (piridoxal, Transformaciones de aminoácidos y
piridoxamina) cetoácidos.
Grupo Vitamina K, quinonas Transportadores de electrones (ubiquinonas,
menaquinonas, etc.)
 Medios de Cultivo
Composición Naturales o Complejos
Sintéticos

Estado Líquido
Fluido 0.1% de agar
Semisólido 0.2 a 0.8% de agar
Sólido 1.5 a 2% de agar

Uso Enriquecidos o nutritivos

De enriquecimiento
Selectivos
Diferenciales
De transporte
De mantenimiento o conservación
Pruebas Bioquímicas
 Clasificación por composición
Naturales o complejos. Son medios que no tienen una
composición definida. Sangre, suelo, frutas, etc. o medios
que contengan ingredientes cuya composición no esté
completamente definida como el extracto de levadura,
peptonas o el agua de la llave.
Clasificación por composición
Los medios sintéticos son aquellos cuya composición en
completamente conocida, sus componentes son extra puros,
como en los medios empleados para investigación.

https://ucsandiegoextension.files.wordpress.com/2014/02/mammalian-fermentation1.jpg
 Medios de cultivo
deshidratados

http://img66.chem17.com/2/20151119/635835500516526333786.png
https://catalog.hardydiagnostics.com/cp_prod/product/images/catalog/Criterion%20Mylar
%20Pour%20to%20Beaker-WEB.jpg
 Clasificación por estado
Medios líquidos. Generalmente tienen componentes
completamente solubles. Son útiles en la propagación de
microorganismos pero tienen la desventaja de que no se
pueden detectar contaminaciones.

http://www.whatisthebiotechnology.com/blog/wp-content/uploads/2013/09/meddd.jpg
 Clasificación por estado
• Líquidos

http://www.thermoscientific.com/
https://www.nelsonlabs.com/NelsonLab
sCms/getattachment/e1e03dac-cbeb-
4b86-a6fd-
7f9304471600/NelsonLabsCms.aspx
http://cse.ksu.edu/REU/S11/bvosburg/FL
ASK.jpg
 Agar
Extraído a partir de un tipo
de algas rojas (de los
géneros Gelidium y
Gracilaria), Agar es un
gelificante que se emplea
en Japón desde el siglo XV.
En 1859 se introdujo en
Europa como alimento
característico de la cocina
china y a principios del siglo
XX se empezó a aplicar en
la industria alimentaria. Es
una fuente de fibra y tiene
capacidad de formación
de gel en proporciones muy
bajas. Permite la
elaboración de gelatinas
calientes.
 Clasificación por estado
Los medios fluidos contienen agar en una
concentración aproximada a 0.1%, el
medio tiene una consistencia líquida pero
la presencia de agar disminuye la
velocidad de disolución de O2 ambiental.
Se emplea generalmente en el cultivo de
microorganismos anaerobios y
microaerofílicos.

Medio fluido de tioglicolato

con resarzurina (indicador
de oxido/reducción)
 Clasificación por estado
Los medios de cultivo semisólidos contienen
de entre el 0.2 y el 0.8% de agar, son suaves y
permiten observar la movilidad de los
microorganismos. Esta consistencia es
utilizada en los medios de transporte, las
pruebas de movilidad, pruebas bioquímicas y
pruebas genéticas.
 Clasificación por estado
Los medios sólidos
contienen entre 1.5 a
2.0% de agar, esto los
hace tener una
consistencia dura y
forman un soporte
para el crecimiento
microbiano. Se
emplean para cultivo,
aislamiento,
diferenciación,
cuantificación,
pruebas de
sensibilidad y en
algunos casos para
conservación
(inclinados).
 Clasificación por estado

Medio de Tinción de Ziehl-Neelsen Colonias de

Löwenstein-Jensen de M. tuberculosis Mycobacterium

Granuloma de Mycobacterium
marinum
https://images.sciencedaily.com/2014/09/140923090204_1_90
0x600.jpg
http://media.tumblr.com/b671a765e1d980369d5f747b62d5a0
36/tumblr_inline_mkpd41UPkl1qz4rgp.jpg
https://microbewiki.kenyon.edu/images/thumb/a/a5/Sputum
_Sample.jpg/325px-Sputum_Sample.jpg
http://www.oocities.org/gbruno_2000/Foto05.jpg
 Uso. Medios enriquecidos
Contienen componentes ricos nutritivamente y permite el
crecimiento de microorganismos no exigentes. Ejemplos:

•Agar cuenta estándar (cuenta en placa)

•Agar Mueller Hinton (Antibiogramas)
•Infusión cerebro y corazón (BHI)
•Agar Soya Tripticaseína (TSA)
•Agar nutritivo (AN)
•Agar sangre (AS)
Uso. Medios de enriquecimiento
Contiene componentes y condiciones que permiten el
desarrollo de un tipo microbiano y disminuyen la velocidad de
crecimiento de la flora acompañante. Ejemplos:

Agua peptonada
alcalina (pH 9)
Detección de
V. cholerae
http://www.portal.prosac.com.pe/REDISWAB-BIOTRACE.jpg?resizeid=-2&resizeh=240&resizew=240
https://images.sciencedaily.com/2009/02/090224133505_1_900x600.jpg
Uso. Medios de enriquecimiento
•Caldo tetrationato
Pre-enriquecimiento para Salmonella
Fórmulas por litro de agua purificada
•Caldo Base BD
Bacto Proteose Peptone 5.0 g
Bacto Sales biliares 1.0
Tiosulfato sódico 30.0
Carbonato de calcio 10.0
pH 8,4 ± 0,2
Aspecto casi incoloro a ligeramente
amarillento, con precipitado denso
de color
Blanco. Después de añadir solución
Tetrathionate brilliant
de yodo color marrón, precipitado green bile broth
denso
• Solución de yodo http://www.bd.com/europe/regulatory/asset
Yodo 300.0 g s/ifu/hb/ce/ba/es-ba-257103.pdf
http://www.himedialabs.com/HML/images/pr
Yoduro potásico 250.0 oduct/M1255.jpg
Uso. Medios de enriquecimiento
•Caldo Rappaport Vassiliadis
Enriquecimiento selectivo de Salmonella a partir de carne
vacuna y productos lácteos, heces y agua contaminada.

Fórmula por litro de agua purificada

Bacto Tryptone 4.54 g

Cloruro sódico 7.2
Fosfato monopotásico 1.45
Cloruro de magnesio, anhidro 13.4
Oxalato de verde malaquita 0.036 pH
5.1 ± 0.2

http://www.bd.com/europe/regulatory/ass
ets/ifu/hb/ce/ba/es-ba-257257.pdf
http://www.medioscultivo.com/wp-
content/uploads/2014/01/mueller2.png
Uso. Medios de enriquecimiento
•Caldo Selenito-Cistina
Pre-enriquecimiento para Salmonella

Fórmula por litro de agua purificada

Peptona 5.0 g
Lactosa 4.0
Fosfato de sódio 10.0
Selenito de sódio 4.0
L-Cistina 0.01
pH final: 7.0 ± 0.2

http://britanialab.com.ar/esp/productos/b02/selenitocistc
aldo.htm
http://www.oxoid.com/omd/library/fullsize/CM1007D.jpg
 Uso. Medios selectivos
Contiene componentes que permiten el desarrollo de un tipo
microbiano e inhiben el crecimiento de los demás
microorganismos. Ejemplos:

•Agar cetrimida
•Caldo bilis verde brillante
•Agar Bacillus cereus
•Agar Sabouraud cicloheximida
Uso. Medios selectivos
 Uso. Medios diferenciales
Contiene componentes que permiten diferenciar las
actividades metabólicas de los microorganismos inoculados. La
presencia de indicadores o el uso de reveladores después de
la incubación ponen de manifiesto la actividad. Ejemplos:

•Agar DNAsa
•Agar almidón
•Agar Braid Parker (diferencial y selectivo)
 Uso. Medios diferenciales y
Selectivos
•Agar sal y manitol •Agar Vogel Johnson
 Uso. Medios diferenciales y
Selectivos
•Agar Mc Conkey

Fórmula por litro de agua purificada

Digerido pancreático de gelatina 17.0 g
Digerido pancreático de caseína 1.5
Digerido péptico de tejido animal 1.5
Lactosa 10.0
Sales biliares 1.5
Cloruro sódico 5.0
Rojo neutro 0.03
Cristal violeta 0.001
Agar 13.5
pH 7.1 ± 0.2

http://www.bd.com/resource.aspx%3FIDX%3D8770

•Agar XLD
 Uso. Medios diferenciales y
Selectivos
•Agar eosina azul de metileno (EMB)
Fórmula por litro de agua destilada
Digerido pancreático de gelatina 10.0 g
Lactosa 5.0
Sacarosa 5.0
Fosfato dipotásico 2.0
Agar 13.5
Eosina Y 0.4
Azul de metileno 0.065
pH 7.2 +/- 0.2

•Agar Endo

https://www.bd.com/resour
ce.aspx?IDX=8765
https://farm1.static.flickr.co
m/48/150008321_42652fd848
.jpg
 Uso. Medios diferenciales y
Selectivos
•Agar Salmonella y Shigella

Fórmula por litro de agua purificada

Extracto de carne bovina 5.0 g

Digerido pancreático de caseína 2.5
Digerido péptico de tejido animal 2.5
Lactosa 10.0
Sales biliares 8.5
Citrato sódico 8.5
Tiosulfato sódico 8.5
Citrato férrico 1.0
Rojo neutro 0.025
Agar 13.5
Verde brillante 0.330 mg
pH 7.2 ± 0.2

http://www.bd.com/resource.aspx?idx=8779
http://www.thermoscientific.com/
 Uso. Medios cromogénicos
• Principio de chromID™
Salmonella

Tres substratos cromogénicos

optimizan el aislamiento selectivo y
la diferenciación de Salmonella:

− Detección específica de la actividad

esterasa sobre un fondo incoloro =
Colonias rosa
pálido a malva, colonias
de Salmonella* (lectura entre 18 a 24
horas)
− Diferenciación de otras bacterias
(colonias de un color diferente)
http://www.biomerieux.com.co/upl
oad/SM2_thumb4_thumb21.jpg
− Inhibición de bacterias Gram–
positivas y levaduras
 Uso. Medios cromogénicos
• BBL™ CHROMagar™ Candida
Es un medio selectivo para el
aislamiento y posible identificación
de levaduras y hongos filamentosos
y la diferenciación de Candida
albicans, C. tropicalis and C. krusei.
http://www.bd.com/ds/technicalCenter/insert
s/8012620(01)(1008).pdf#page=1&view=Fit
http://www.bd.com/ds/images/products/img_
candida_400px.jpg
• chromID™ Range
Medios cromogénicos para el
cultivo e identificación de
microorganismos en muestras
clínicas
http://www.biomerieux-
diagnostics.com/chromidr-
range#sthash.qRxTHrQZ.dpuf
 Uso. Medios de conservación
Algunos medios de cultivo son
empleados para la conservación
temporal de microorganismos,
como son:
•Medio sólido en caja a 4ºC (hasta
1 semana).
•Medio de agar inclinado 4ºC
(hasta 2 semanas) con sello de
glicerol estéril a 4ºC (varios meses
dependiendo del
microorganismo).
•Medio fluido de tioglicolato con
carne molida con sello de aceite
mineral estéril a temperatura
ambiente (varios meses
dependiendo del
microorganismo).
Uso. Medios de conservación
• En la liofilización también se emplea la leche descremada
(años).
 Uso. Medios de transporte
Son medios que se emplean para el transporte de muestras sin
alterar la viabilidad y la proporción de microorganismos.
Tienen consistencia semisólida, con amortiguador de pH y
reducidos en nutrientes para preservar la proliferación de
microorganismos por varias horas.
Las muestras se recolectan con asas o con hisopos de
alginatos que no inhiben a los microorganismos.

•Medio Amies
•Medio de Stuart
Uso. Medios de transporte

http://www.nirco.com/web/upload/productes/466.jpg
 Uso. Pruebas Bioquímicas
Son medios de cultivo que tienen los nutrientes para poner en
evidencia la actividad metabólica de un microorganismo puro.
Pueden emplear reveladores y/o indicadores.
Uso. Pruebas Bioquímicas