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Escuela superior politécnica del litoral

Facultad de ciencias de la vida
Microbiología General
Facultad de ciencias
LABORATORIO PRÁCTICO de la vida

Microbiología General CÓDIGO

MATERIA
FMAR03749
LABORATORIO PROTAL
NOMBRE Mónica Adriana Rivera Jaramillo PARALELO 1
TEMA Cultivo Bacteriano
EXPERIENCIA Medios de Cultivo Bacteriano

Objetivos
Objetivo General.
Conocer características fundamentales de las bacterias y aprender a calcular la cantidad exacta
de Agar necesario para el cultivo bacteriano.
Objetivos Específicos.
Conocer los diversos tipos de Agar y sus respectivos usos.
Aprender a obtener mediante cálculos experimentales la cantidad de Agar que requeriremos
para el cultivo bacteriano.

Introducción
¿Qué son las bacterias?
Las bacterias son organismos unicelulares capaces de vivir independientemente (es decir
utilizar sus propios procesos químicos para crecer y reproducirse) fuera de otras células; su
material genético se encuentra en el citoplasma. La mayoría de antibióticos trabaja
interrumpiendo procesos químicos concretos que la bacteria precisa para sobrevivir y
reproducirse.
Procariota.- (Antes de llegar a ser una célula eucariota). No posee organelos ni núcleo, poseen
dos capas: pared celular y membrana celular.

Morfología Bacteriana.
Cocos.
Diplococos.
Tetracocos.
Streptococos.
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Estafilococos.
Bacilococos.
Bacterias Gram (+).- Estas bacterias poseen una capa gruesa de peptidoglicán y poseen una
membrana externa.
Bacterias Gram negativas.- Su pared celular está formada por dos membranas lipídicas, una
interna (citoplasmática y otra externa con un espacio entre ellas denominado espacio
periplasmático en el que se dispone de una sustancia llamada péptidoglucano.
Metabolismo de las bacterias.
El metabolismo de las bacterias no difiere en sus mecanismos básicos del de los demás seres
vivos; las bacterias necesitan obtener del medio externo los nutrientes para la síntesis de sus
materiales plásticos, de reservas energéticos.
Quimiosíntesis.- Es otra forma de adquirir alimento las bacterias.
Movilidad de las Bacterias.
La manera de desplazarse más común que utilizan las bacterias es el uso de flagelos.
De acuerdo al número de flagelos las bacterias se clasifican en:
Átricas
Monótricas
Anfítricas
Lofótricas
Perítricas
Plásmidos.- Son moléculas de ADN extracrosómico circular o lineal que se replican y
transcriben independientes del ADN cromosómico.
Reproducción de las Bacterias.
Peeling Sexual.- Para comunicar información genética de una bacteria a otra.
Agar
El Agar es una sustancia incolora e insípida, extraída del Alga de Agar la cual es roja y
gelatinosa; el Agar absorbe agua en una cantidad que varía entre 200 y 300 veces su peso
formando una gelatina. Se utiliza para preparar medios de cultivo
Tipos de Agar más comunes y sus principales usos
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Agar BCYE (Agar tamponado con extracto de levadura y carbón).- Es selectivo para Legionella
y Nocardia, inhibe bacterias Gram negativas, Gram positivas y levaduras, respectivamente.
Agar BHI (infusión cerebro-corazón, “brain-heart”).- Puede emplearse, ya sea como caldo o
medio sólido, con sangre adicional o sin ésta, para el crecimiento de una gran variedad de
microorganismos. Los caldos infusión cerebro-corazón se emplean con frecuencia como medio
para hemocultivo y como medio base para muchas pruebas metabólicas, en especial para la
identificación de estreptococos.
Agar BHI con antibióticos.- Se utiliza para el aislamiento selectivo de hongos patógenos.
Agar BHI con 5% sangre de oveja.- Se emplea como medio de aislamiento primario para el
crecimiento de hongos.
Agar Campy con sangre.- Utilizado para inhibir el desarrollo de la mayoría de las bacterias
Gram negativas, Gram positivas y levaduras.
Agar CCF (fructosa, cicloserina, cefoxitina).- Utilizado para el aislamiento selectivo de
Clostridium difficile en muestras de heces u otros materiales intestinales.
Agar chocolate.- Proporciona el factor V, vitaminas, aminoácidos, coenzimas, glucosa, iones
férricos y otros factores que favorecen el crecimiento de especies exigentes.
Agar chocolate con IsoVitaleX y vancomicina.- Modificado para el aislamiento de Neisseria
gonorrhoeae y N. meningitidis.
Agar CIN (cefsulodina, irgasán, novobiocina).- Medio selectivo para Yersinia.
Agar cistina-telurito.- Utilizado para el aislamiento de Corynebacterium diphtheriae.
Agar CLED (cistina, lactosa, deficiente en electrolitos).- Recomendado para el análisis
bacteriológico de orina.
Agar CNA (colistina, ácido nalidíxico).- Suprimen por completo el crecimiento de
enterobacterias y de Pseudomonas, pero permiten el desarrollo de estafilococos,
estreptococos, enterococos y levaduras.
Agar Columbia.- Excelente base para el crecimiento de microorganismos exigentes y para la
buena visualización de hemólisis con el agregado de sangre.
Agar desoxicolato-citrato (ADC).- Altamente selectivo para el aislamiento de Salmonella y
Shigella.
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Agar EMB (eosina, azul de metileno, “eosin-methylen blue”, Agar de Levine).- Es un medio
diferencial y selectivo para aislar y detectar enterobacterias en muestras mixtas.
Agar glucosa de Sabouraud.- Desarrollado para el cultivo de hongos patógenos, especialmente
de los productores de micosis superficiales.
Agar HE (agar entérico de Hektoen).- Está indicado para el aislamiento de Salmonella y
Shigella.
Agar inclinado de Loeffler.- Utilizado para el aislamiento de Corynebacterium diphtheriae.
Agar Lowenstein-Jensen.- Desarrollado como agar para enriquecimiento selectivo de
micobacterias
Agar MacConkey.- Utilizado para la recuperación de enterobacterias y bacilos Gram negativos
entéricos relacionados.
Agar Mueller-Hinton.- Diseñado especialmente para hacer ensayos de sensibilidad y
recomendado por el Comité de la Organización Mundial de la Salud sobre estandarización de
pruebas de susceptibilidad.
Agar NYC (“New York City”).- Medio selectivo para Neisseria gonorrhoeae. Suplementado con
3% de hemoglobina, plasma de caballo y vancomicina, colistina, anfotericina B y trimetoprim.
Agar PEA (alcohol feniletílico, “phenylethanol”).- Proporciona nutrientes para estreptococos y
estafilococos. Este medio también se emplea para el cultivo de microorganismos anaerobios
que no son inhibidos por el alcohol.
Agar SABHI (agar base de Sabouraud, infusión de cerebro y corazón).- Se emplea para el
aislamiento y cultivo de hongos patógenos como los dermatófitos y también no patógenos. Es
útil para la máxima recuperación de Blastomyces dermatitidis e Histoplasma capsulatum de
tejidos y fluidos corporales.
Agar salino manitol (SM, MS “mannitol saline”, Medio de Chapman).- Es un medio selectivo
para estafilococos.
Agar sangre (AS ó BA, blood agar).- Permite el crecimiento de todos los microorganismos con
importancia clínica excepto el de los más exigentes.
Agar sangre con disco de bacitracina.- Se utiliza para la identificación de estreptococos beta-
hemolíticos del grupo A de Lancefield.
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Agar sangre con suplementos para anaerobios.- Permite el desarrollo de gran cantidad de
especies anaerobias.
Agar sangre de caballo con bacitracina.- La infusión de cerebro y corazón proporciona los
nutrientes generales y la sangre de caballo los factores V y X para favorecer el crecimiento de
H. influenzae.
Agar sangre de caballo con carbón.- Es un medio selectivo para el aislamiento de Bordetella
pertussis y B. parapertussis.
Agar sangre kanamicina-vancomicina (KV).- Útil para el aislamiento selectivo de especies de
anaerobios (Bacteroides, Prevotella, Fusobacterium, Veilonella) en muestras clínicas que
contienen bacterias aerobias y anaerobias mezcladas.
Agar selectivo para estreptococos.- Adecuado para inhibir a la mayoría de los estreptococos
excepto Streptococcus pyogenes y S. agalactiae.
Agar Skirrow.- Preparado con una base como agar brucela, TSA o agar Columbia, enriquecida
con sangre de oveja al 5% y que se hace selectivo para Campylobacter por la adición de
vancomicina, polimixina y trimetoprim.
Agar sulfito de bismuto.- Medio para el aislamiento de Salmonella typhi.
Agar TCBS (tiosulfato, citrato, sales biliares).- Medio selectivo para especies del género Vibrio
debido a las altas concentraciones de tiosulfato sódico, citrato férrico y cloruro sódico que
inhiben a la mayoría de las enterobacterias.
Agar Thayer-Martin.- Este medio es una modificación del agar chocolate para que sea
selectivo para las neiserias patógenas.
Agar triptona-soja (TSA).- De uso general para el crecimiento de una amplia variedad de
microorganismos.
Agar verde brillante.- Medio altamente selectivo para el aislamiento de especies de
Salmonella excepto S. typhi y S. paratyphi.
Agar XLD (xilosa, lisina, desoxicolato).- Como el agar de Hektoen, este medio es diferencial y
selectivo para Salmonella y Shigella.

Equipos y materiales
Lápiz
Calculadora
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Fórmulas para cálculo de Agar.

PROCEDIMIENTO:
Prepare un Agar PDC en 250ml de agua.
23.5 → 1000 ml
X → 250 ml
X = 5.9 gramos.
¿Cuánto de Agar PPC se necesita para preparar 370 ml de agua?
38g → 1000 ml
X → 370 ml
X = 14 gramos de Agar necesitamos colocar en la Fiola.

Si requiere preparar Agar TSBS al 8% de sal para el crecimiento de Vibrio parahaemolyticus y

la receta me dice que son 45 g por L ¿cuánto de Agar y cuánto de sal necesito para preparar?
%≈ml-g
A 200 ml 8%
B 700 ml
C 220 ml 8 g NaCl
D 500 ml
E 800 ml
A)
45g → 1000 ml
X → 200 ml
X = 9g de Agar.

8g → 1000 ml
X → 200 ml
X = 16 g NaCl

Si requiero preparar Agar TCS al 4.5% de glicerina para el crecimiento de Vibrio

parahaemolyticus y la receta me dice que son 45 g por L ¿cuánto de Agar y cuánto de sal
necesito para preparar?
4.5 g Glicerina %≈ml-g
45g → 1000 ml
X → 200 ml
X = 9 g de Agar

4.5 g → 1000 ml
X → 200 ml
X = 16 g de glicerina.

B)
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Si requiero preparar Agar TCS al 4.5% de glicerina para el crecimiento de Vibrio

parahaemolyticus y la receta me dice que son 45 g por L ¿cuánto de Agar y cuánto de sal
necesito para preparar?
4.5g Glicerina %≈ml-g
45 g → 1000 ml
X → 700 ml
X = 31.5 g de Agar

4.5 g 1000 ml
X → 700 ml
X= → 3.15 g de Glicerina

C)
Si requiero preparar Agar TCS al 4.5% de glicerina para el crecimiento de Vibrio
parahaemolyticus y la receta me dice que son 45 g por L ¿cuánto de Agar y cuánto de sal
necesito para preparar?
4.5 g Glicerina %≈ml-g
45 g → 1000 ml
X → 220 ml
X = 9.9 g de Agar

4.5 g → 1000 ml
X → 220 ml
X = 0.99 g de Glicerina

D)
Si requiero preparar Agar TCS al 4.5% de glicerina para el crecimiento de Vibrio
parahaemolyticus y la receta me dice que son 45 g por L ¿cuánto de Agar y cuánto de sal
necesito para preparar?
4.5 g Glicerina %≈ml-g

45 g → 1000 ml
X → 500 ml
X = 22.5 g de Agar

4.5 g → 1000 ml
X → 500 ml
X = 2.25 g Glicerina

E)
Si requiero preparar Agar TCS al 4.5% de glicerina para el crecimiento de Vibrio
parahaemolyticus y la receta me dice que son 45 g por L ¿cuánto de Agar y cuanto de sal
necesito para preparar?
4.5 g Glicerina %≈ml-g
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45g → 1000 ml
X → 800 ml
X = 36 g de Agar

4.5 g → 1000 ml
X → 800 ml
X = 3.6 g de Glicerina.

Resultados

Observaciones
El material genético de las bacterias lo encontramos en el citoplasma.
Entre las principales condiciones para la proliferación de bacterias tendremos en cuenta el PH,
la temperatura y la salinilidad.

Conclusiones
Las bacterias como seres microscópicos están constituidas por una región nuclear, membrana
celular, pared bacteriana, citoplasma y ribosoma.
Las bacterias suelen donar su peeling a otras bacterias para que estas se vuelvan más
resistentes.
El Agar como medio de cultivo es muy utilizado para la proliferación de microorganismos,
específicamente las bacterias.

Bibliografía
Ramiro Fonnega G. y Silvia Jiménez R Plantas Medicinales aprobadas en Colombia 2da Edición
Editorial ciudad de Antioquía.
Patrick Collard El Desarrollo de la Microbiología Barcelona-Bogotá-Buenos Aires-Caracas-
México Editorial Reverté, S. A.
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