Vea discusiones, estadísticas y perfiles de autor para esta publicación en: https://www.researchgate.

net/publication/230049433

Una síntesis conveniente de tintes de cianina: reactivos para el etiquetado de biomoléculas

Artículo    en    Revista Europea de Química Orgánica · Abril de 2008

DOI: 10.1002 / ejoc.200701190

Citas LEA

30 704

7 autores , incluso:

Maksim Kvach Alexey V Ustinov

Universidad Massey Lumiprobe

23 PUBLICACIONES     169 Citas     48 PUBLICACIONES     446 Citas    

VER EL PERFIL VER EL PERFIL

Vadim V Shmanai Vladimir A Korshun

Academia Nacional de Ciencias de Bielorrusia Academia rusa de ciencias

69 PUBLICACIONES     512 Citas     156 PUBLICACIONES     1,691 Citas    

VER EL PERFIL VER EL PERFIL

Algunos de los autores de esta publicación también están trabajando en estos proyectos relacionados:

Reactivos y métodos para la modificación específica del sitio de proteínas, lípidos y ácidos nucleicos. Ver Proyecto

INA-5812 Ver proyecto

Todo el contenido que sigue a esta página fue subido por Maksim Kvach el 26 de noviembre de 2018.

El usuario ha solicitado la mejora del archivo descargado.

 PAPEL COMPLETO

DOI: 10.1002 / ejoc.200701190

Una síntesis conveniente de tintes de cianina: reactivos para el etiquetado de

Biomoléculas

Maksim V. Kvach, [ una] Alexey V. Ustinov, [ si] Irina A. Stepanova, [ si] Andrei D. Malakhov, [ si]
Mikhail V. Skorobogatyi, [ si] Vadim V. Shmanai, * [ una] y Vladimir A. Korshun * [ si]

Palabras clave: Química bioorgánica / cianinas / colorantes fluorescentes / fosforamiditas / ésteres

Cuatro Los ácidos carboxílicos derivados de tetrametilindo (di) carbocianina se han Se ha demostrado la eficacia de los reactivos en el marcado de oligonucleótidos y
preparado usando un procedimiento modificado de un recipiente para el ensamblaje proteínas. (© Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, 69451 Weinheim, Alemania,
del colorante. Los ácidos se convirtieron en ésteres de oxisuccinimida y reactivos de 2008)
fosforamidita. los

Introducción amiditas en solución fue confirmada por 31 Espectroscopía de RMN P, y trans-

Se sugirió el 4-aminociclohexanol como precursor de fosforamiditas más
Los tintes de cianina derivados del 3,3-dimetilindol son pobres intercaladores estables. [ 11] Muy recientemente, informamos la síntesis y el uso exitoso de trans-
de ADN o aglutinantes de surcos debido a la masa estérica introducida por los
grupos metilo geminales [ 1] y, por lo tanto, son muy útiles para el marcado Fosforamiditas de fluoresceína a base de 4-aminociclohexanol. [ 12]
covalente de ácidos nucleicos. Las tetrametilindo (di) -carbocianinas (Cy3,
Cy3.5, Cy5 y Cy5.5) exhiben fluorescencia brillante en la región visible ( λ max Los tintes de cianina son reactivos útiles para el etiquetado de proteínas y
péptidos. [ 13] Estos reactivos, especialmente los ésteres activados por
los valores son alrededor de 570, 615, 670 y 710 nm, respectivamente), y sus electroforesis en gel diferencial (DIGE) para proteómica, [ 14] Son extremadamente
propiedades espectroscópicas y fotofísicas no cambian significativamente después de la caros.
unión covalente al ADN. La aplicación de cianinas como donantes / aceptores en métodos Nuestro objetivo fue desarrollar un procedimiento para la preparación a gran
basados ​en transferencia de energía de resonancia de fluorescencia (FRET) es
escala de reactivos económicos basados ​en tetrametilindo (di) carbocianinas
especialmente popular. Los colorantes son adecuados para la obtención de imágenes de
convencionales que sean adecuados para el etiquetado de oligonucleótidos y
moléculas individuales en células vivas [ 2] y se usan ampliamente como marcadores
proteínas.
covalentes para ácidos nucleicos en la secuenciación, [ 3] tecnologías de matriz, [ 4] Ensayos
basados ​en PCR utilizando transferencia de energía, [ 5] hibridación fluorescente in situ
(FISH), [ 6] y los estudios estructurales de ácidos nucleicos, [ 7] incluyendo múltiples
Resultados y discusión
técnicas de FRET. [ 8]

Las tetrametilindo (di) carbocianinas simétricas que contienen diferentes grupos

alquilo en N y N se ensamblaron a partir de sales de indolio correspondientes

Un método conveniente para la síntesis de fragmentos de ADN marcados usando un proceso por etapas desarrollado por Waggoner y colaboradores. 15] Nuestra

es el uso de fosforamiditas basadas en colorantes de cianina en un modificación [ 10] nos permitió realizar la reacción como un procedimiento conveniente

sintetizador de ADN automatizado. Aunque se han descrito varios de un solo recipiente.

fosforamiditos de cianina en la literatura, [ 9,10] Cy comercialmente disponible • Los

fosforamiditos son bastante caros. Con una excepcion,[ 9p] Todos los Las sales de indolium de partida se prepararon por alquilación de indoles. 1a,

fosforamiditos de cianina informados se derivan de alcoholes primarios. b con haluros de alquilo. La alquilación con yoduro de metilo o butilo dio sales 2a,

Recientemente, la menor estabilidad del alquilfosfato primario b a temperatura ambiente, mientras que los derivados de carboxipentilo 3a, b se
obtuvieron después de calentar indoles 1 y ácido 6-bromohexanoico en
nitrometano. Para sintetizar ácidos cianina 4, las sales 3a, b primero se calentaron
con difenilformamidina o monoclorhidrato de malondialdehído bis (fenilimina) en
[a] Instituto de Química Orgánica Física,
Surganova 13, Minsk 220072, Bielorrusia Fax: + anhídrido acético para formar hemiccianinas. Estos últimos fueron tratados con
375-17-2842055 las sales correspondientes. 2a, b en piridina a temperatura ambiente. Las mezclas
Correo electrónico: shmanai@ifoch.bas-net.by
resultantes se separaron por cromatografía en columna para proporcionar
[b] Instituto Shemyakin-Ovchinnikov de Química Bioorgánica,
Miklukho-Maklaya 16/10, Moscú 117997, Rusia Fax: + 7-495-3306738 derivados 4a - re en rendimientos razonablemente buenos (49–67% para el
Correo electrónico: korshun@mail.ibch.ru procedimiento de dos pasos). Los ácidos 4a - re

La información de respaldo para este artículo está disponible en la WWW en

http://www.eurjoc.org o del autor.

EUR. J. Org. Chem 2008, 2107–2117 © 2008 Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim 2107
 VV Shmanai, VA Korshun y col.
PAPEL COMPLETO

Esquema 1. Condiciones de reacción y rendimientos: (a) RI, MeNO 2, temperatura ambiente, 12 h, 96% ( 2a), 90% ( 2b); ( b) Br (CH 2) 5 CO 2 H, MeNO 2, 80 ° C, 7 h, 92% ( 3a), 89% ( 3b); ( c)
PhNHCH = NPh, Ac 2 O, 120 ° C, 30 min, luego 2a o 2b, Py, temperatura ambiente, 12 h, 60% ( 4a), 49% ( 4b); ( d) PhN = CHCH 2 CH = NPh · HCl, Ac 2 O, 120 ° C, 30 min, luego 2a o 2b, Py,
temperatura ambiente, 12 h, 67% ( 4c), 51% ( 4d); ( e) PyBOP, DIEA, DMF, temperatura ambiente, 5 min, luego trans- 4-aminociclohexanol, 4 h, 77% ( 5a), 80% ( 5b), 76% ( 5c), 66% ( 5d); ( f) ( yo PrN)
2 PO (CH 2) 2 CN, tetrazolido de diisopropilamonio, DCM, temperatura ambiente, 3 h, 93% ( 6a), 96% ( 6b), 93% ( 6c), 95% ( 6d); ( g) DSC, DIEA, DCM, temperatura ambiente, 2 h, 96% ( 7a), 98% ( 7b),
96% ( 7c), 97% ( 7d); ( h) acoplamiento en sintetizador de oligonucleótidos, luego desprotección y purificación; (i) oligonucleótido modificado con aminoalquilo, DMF, ac. tampón, pH 8,5, 0 °
C, 12 h; (j) albúmina de suero bovino, ac. tampón, pH 8,5, 0 ° C, 12 h.

2108 www.eurjoc.org © 2008 Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim EUR. J. Org. Chem 2008, 2107–2117
Una síntesis conveniente de tintes de cianina

fueron utilizados para el NORTE- acilación de trans- 4-aminocyclohexanol usando

(benzotriazol-1-iloxi) hexafluorofosfato de tripirrolidinofosfonio

(PyBOP) como reactivo de acoplamiento para proporcionar las amidas 5a - re en
buenos rendimientos Como resultado de este paso, las cianinas adquieren un
contraión de hexafluorofosfato lipofílico. La fosforilación de los alcoholes
secundarios.
5a - re con bis (diisopropilamino) -2-cianoetoxifosfano en presencia de
tetrazoluro de diisopropilamonio dio los fosforamiditos deseados 6a - re como
sales de hexafluorofosfato ( 31 P NMR mostró una relación 1: 1 de
fosforamidita / hexafluorofosfato). Los ácidos 4a - re también se convirtieron en
los ésteres activados por oxisuccinimida 7a - d ( Esquema 1). Las estructuras
de los compuestos fueron confirmadas por 1 H 13 C y 31 Espectros de RMN P y
por espectros de masas de alta resolución (HRMS). Para los derivados de
cianina 4 4 - 7 7 el 1 H y 13 Las señales C en los espectros de RMN se asignaron
usando 2D 1 H– 13 C Técnicas HMQC y HMBC.
Figura 1. Espectros UV / Vis de purificado ON1a - re conjugados en agua a pH 7,5.

Fosforamiditas 6a - re fueron probados en síntesis automatizada de

oligonucleótidos. Son fácilmente solubles en acetonitrilo y sus 0.1 • Las soluciones
se almacenaron a temperatura ambiente y se usaron durante una semana para
sintetizar 5 oligonucleótidos marcados. Durante el período de prueba, no se
observó una disminución significativa en los rendimientos de acoplamiento
(estimado por comparación de la vista PAGE y los perfiles de HPLC de los
conjugados crudos). Sin embargo, el factor principal que produce una disminución
en los rendimientos de los conjugados deseados es la labilidad química de los
tintes de cianina en condiciones de oxidación de yodo (un paso en el ciclo de
síntesis de oligonucleótidos) y amonólisis (paso final de desprotección de
oligonucleótidos). [ dieciséis] En nuestros experimentos utilizamos la oxidación de
yodo estándar después del acoplamiento de fosforamidita modificado y la
amonólisis durante 72 ha 4 ° C como método de desprotección final. Los
oligonucleótidos marcados con cianina se aislaron / purificaron por PAGE o
HPLC. [ 17] El rendimiento de 5 purificados los conjugados marcados de una
columna de escala de 200 nmol usualmente eran de 15-20 nmol (7.5-10%), algo
Figura 2. Espectros de emisión normalizados de purificados ON1a - re se conjuga en agua a
disminuyendo de Cy3 a Cy5.5. los ON1a - re y ON2a - re los conjugados (Esquema pH 7,5. Longitudes de onda de excitación: 520 ( ON1a), 560 ( ON1b), 620 ( ON1c), y 650 nm ( ON1d).
1) son ejemplos representativos del enfoque. Los oligonucleótidos modificados
con cianina se caracterizaron por MALDITOF MS. [ 17]

Asumimos que para ampliar la síntesis de oligonucleótidos modificados con

La presencia de tintes de cianina en los conjugados fue confirmada por sus
espectros UV / Vis que contienen bandas distintivas de absorbancia de cianina
de longitud de onda larga (550, 602,
647 y 688 nm, respectivamente, para conjugados ON1a - re en soluciones
acuosas bajas en sal) junto con una banda de oligonucleótidos a
aproximadamente 260 nm (Figura 1). Los máximos de absorbancia y sus
intensidades están cerca de los valores informados. dieciséis] Los conjugados
también mostraron fluorescencia de cianina estándar con máximos de emisión a
568, 617, 673 y 711 nm, respectivamente (Figura 2).
A pesar del rendimiento global relativamente bajo de oligonucleótidos
fluorescentes preparados usando los fosforamiditos modificadores 6a - re, El
enfoque es eficaz en el caso de la producción extensiva de conjugados a
pequeña escala. Hay insumos laborales menores en comparación con la
síntesis de oligonucleótidos no modificados: la disolución de una
fosforamidita adicional y una etapa de amonolisis fría más prolongada.
cianina, un procedimiento de etiquetado posterior podría ser el método de
elección. Este procedimiento incluye la síntesis de oligonucleótidos que
contienen amina seguido de su reacción con los ésteres activados de los tintes
de cianina. Para probar el enfoque, un oligómero bruto modificado con amino [ 18]
fue acilado con ésteres 7a - re dar los conjugados ON3a - re
(Esquema 1). Descubrimos que después de una purificación similar de PAGE o HPLC, el
procedimiento generalmente daba 20-30 nmol de rendimiento aislado del conjugado
deseado (10-15% de rendimiento total). Aunque el procedimiento posterior al etiquetado
arrojó rendimientos similares, el consumo del reactivo de cianina fue aproximadamente 10
veces menor que en el caso del procedimiento de etiquetado de amidita (ca.
0.5 mg de éster activado vs. 5-6 mg de amidita por reacción). Por lo tanto, el
método de etiquetado posterior se puede ampliar fácilmente a varios µ mol del
oligonucleótido modificado con amino inicial sin un aumento significativo en
el costo del oligonucleótido.
Además, ésteres activados 7 7 Se puede utilizar para la acilación de
proteínas. Esto se ha demostrado para el etiquetado de albúmina de suero
bovino (BSA) con 7a y 7c ( Esquema 1). La reacción se realizó al enfriar y a
pH 8,5, y el

EUR. J. Org. Chem 2008, 2107–2117 © 2008 Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim www.eurjoc.org 2109
 VV Shmanai, VA Korshun y col.
PAPEL COMPLETO

proteína marcada Cy3-BSA o Cy5-BSA, se aisló usando cromatografía de pH 9.3 y temperatura ambiente, [ 19] probablemente debido a la mejor estabilidad
exclusión por tamaño (véase la sección Exptl.). BSA es una proteína de del éster de oxisuccinimida en nuestras condiciones (pH 8,5, 0 ° C).
alrededor de 66000 Da con ε 280 =
44000 Lmol –1 cm –1; su etiquetado con tinte de cianina Cy5 ya ha sido estudiado. [ 19]
Los espectros UV / Vis de BSA marcados con Cy3 y Cy5 muestran bandas
características de absorción de proteínas y colorantes (Figuras 3 y 4). Conclusiones

Presentamos la síntesis conveniente y escalable en un recipiente de cuatro

ácidos cianina (Cy3, Cy3.5, Cy5 y Cy5.5), compuestos adecuados para la
preparación de fosforamiditos o ésteres de oxisuccinimida. los trans- Fosforamiditas
a base de 4-aminociclohexanol 6a - re se puede sintetizar fácilmente en una
escala de milimoles para dar otros 170–200 de 5 oligonucleótidos marcados por
mmol de fosforamidita. Alternativamente, los ésteres de oxisuccinimida 7a - re fueron
preparados y utilizados para el marcado de oligonucleótidos modificados con
amino y albúmina de suero bovino.

seccion experimental

Métodos generales Los reactivos obtenidos de proveedores comerciales se usaron

sin purificación adicional; 1,1,2-trimetil-1 H- benzo [ mi] indol y 2,3,3-trimetil-3 H- indol
eran de Acros; trans- Clorhidrato de 4aminociclohexanol, yodobutano, DSC y BSA
fueron de Sigma-Aldrich; Ácido 6-bromohexanoico, N, N - la difenilformamidina y el
monoclorhidrato de malondialdehído bis (fenilimina) eran de Alfa Aesar; DIEA era de
Figura 3. Espectros UV / Vis de aislados Cy3-BSA [ BSA (Cy3) metro conjugados] en agua. 7a Fluka y PyBOP era de NovaBiochem; Bis( N, N- diisopropilamino) -2-cianoetoxifosfano,
/ Se usaron BSA en proporciones de 0,20, 0,50, 1,00 y 2,00 en la reacción de marcado y [ 20] y tetrazolido de diisopropilamonio [ 21]
dieron conjugados con m = 0.12 ( 1) 0.24 ( 2) 0.43 ( 3) y 0.59 ( 4), respectivamente.

fueron preparados como se describió anteriormente. Los solventes eran de Chimmed

(Rusia), principalmente de grado HPLC, y se usaron sin purificación adicional a menos
que se indique lo contrario. El diclorometano (DCM) siempre se usó recién destilado de
CaH 2) El DMF se destiló recientemente a presión reducida. 1 H (500 MHz) 13 C (125,7 MHz)
y 31 Los espectros de RMN P (202,4 MHz) se registraron con un espectrómetro Bruker
DRX-500 a 303 K y se referenciaron a [D 6] DMSO ( δ = 2.50 ppm para 1 H y 39.70 ppm para 13
C) y 85% ac. H 3 correos 4, ( δ = 0.00 ppm para 31 PAGS). 1 H– 13 Los espectros HMQC y HMBC
seleccionados en gradiente C se obtuvieron usando 2048 ( t 2) 256 ( t 1) conjuntos de datos de
puntos complejos, rellenos con cero hasta 2048 ( F 2) 1024 ( F 1)

puntos. Los anchos espectrales fueron 13 y 200 ppm para 1 H y 13 Dimensiones C,

respectivamente. Los espectros de HMBC se midieron con un retraso de 50 ms para la
evolución de los acoplamientos de largo alcance. 1 Las constantes de acoplamiento H NMR se
informan en Hz y se refieren a multiplicidades aparentes. Los espectros de masas de alta
resolución se registraron en modo de iones positivos usando un IonSpec FT ICR (MALDI) o
un espectrómetro de masas de pulsar PE SCIEX QSTAR (ESI). Los espectros de absorción
UV / Vis se registraron usando un espectrofotómetro Varian Cary-300. Los estudios de
Figura 4. Espectros UV / Vis de aislados Cy5-BSA [ BSA (Cy5) metro conjugados] en agua. 7c
fluorescencia se realizaron utilizando un aparato de gran apertura, como se describió
/ Se usaron BSA en proporciones de 0,20, 0,50, 1,00 y 2,00 en la reacción de marcado y
anteriormente. [ 22] Los puntos de fusión se determinaron usando una mesa de calentamiento
dieron conjugados con m = 0,06 ( 1) 0.13 ( 2) 0.23 ( 3) y 0.42 ( 4), respectivamente.
Boetius y no están corregidos. La cromatografía analítica de capa fina se realizó en Kieselgel
60 F 254 placas de aluminio pre-recubiertas (Merck). La cromatografía en columna de gel de
sílice se realizó en Merck Kieselgel 60 0,040-0,063 mm. La síntesis de oligonucleótidos se

Asumimos ε 280, Cy3 = 5000, ε 554, Cy3 = 136000, ε 280, Cy5 = realizó con un sintetizador de ADN / ARN BiosSet ASM-800 en una escala de 200 nmol
utilizando protocolos estándar del fabricante. El tiempo de paso de acoplamiento para las
6000 y ε 650, Cy5 = 250000 Lmol –1 cm –1, y usó estos valores para calcular las
fosforamiditas modificadoras terminales se extendió a 7,5 minutos (se omitió la limitación y
proporciones aproximadas de colorante / proteína en muestras preparadas de
eliminación del grupo dimetoxitritilo). Los oligonucleótidos se aislaron usando
Cy3-BSA y Cy5-BSA. El grado de fijación del tinte disminuyó con un aumento
desnaturalización al 20% (7 • urea) PAGE en tampón Tris-borato, pH 8.3, y desalado por
en el inicio
filtración en gel a través de una columna Sephadex G-25 eluyendo con tampón sin sal.
7 / BSA ratio y fue menor para 7c que para 7a ( Figuras 3 y
4) Mediante el uso 7a (7c) / BSA = 2 preparamos proteínas marcadas BSA (Cy3) 0,59
y BSA (Cy5) 0,42, respectivamente. Los resultados son superiores a los descritos
para el etiquetado Cy5 BSA en

2110 www.eurjoc.org © 2008 Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim EUR. J. Org. Chem 2008, 2107–2117
Una síntesis conveniente de tintes de cianina

Procedimiento general para la preparación de sales de indolium 2 y 3: (CO C H 2) 27.02 (NCH 2 C H 2) 25,49 (NCH 2 CH 2 C H 2) 24.09 (COCH 2 C H 2) 22.09 (2 C, 3-CH 3) 14.12
Un haluro de alquilo (0,10 mol) [o en el caso de la síntesis de sales (2-CH 3) ppm. EMAR (MALDI +): calculado. para C 17 H 24 NO 2+ [ M - Br] + 274.1802;
3, Se añadió ácido 6-bromohexanoico (0,10 mol)] a una solución del indol encontró
correspondiente. 1a o 1b ( 0,10 mol) en MeNO 2 ( 60 ml) y la mezcla de reacción se agitó 274.1799.
magnéticamente durante 12 ha temperatura ambiente (para la síntesis de 2a o 2b. Precaución:
3- (5-Carboxipentil) -1,1,2-trimetil-1 H- benzo [ mi] bromuro de indolium (3b): [ 25] Compuesto
En caso de una reacción exotérmica inicial, el matraz debe enfriarse utilizando un baño
3b se preparó a partir de 1,1,2-trimetil-1 H-
de agua fría) o durante 6 h con calentamiento (para la síntesis de 3a, b; baño de aceite,
benzo [ mi] indol 1b) y ácido 6-bromohexanoico. Rendimiento 36.1 g, (89%), cristales de color
80 ° C). La mezcla de reacción enfriada se trituró con éter dietílico (400 ml) y el
rosa pálido, pf 211–213 ° C. 1 H RMN ([D 6] DMSO): δ =
precipitado se separó por filtración, se lavó con éter dietílico (3). 100 ml) y se secó al
8,37 (d, J = 8.1 Hz, 1 H, 6-H o 9-H), 8.29 (d, J = 8.8 Hz, 1 H, 4H o 5-H), 8.22 (d, J = 8.1
vacío. Este procedimiento dio los siguientes compuestos.
Hz, 1 H, 6-H o 9-H), 8.16 (d, J =
8.8 Hz, 1 H, 4-H o 5-H), 7.79 (m, 1 H, 7-H u 8-H), 7.72 (m, 1
H, 7-H u 8-H), 4,60 (t, J = 7,6 Hz, 2 H, NCH 2) 2,97 (s, 3 H, 2 canales 3) 2,23 (t, J = 7.2 Hz,
2 H, COCH 2) 1,91 (m, 2 H, NCH 2 C H 2)
1,77 (s, 6 H, 1-CH 3) 1,58 (m, 2 H, COCH 2 C H 2) 1,47 (m, 2 H, NCH 2 CH 2 C H 2) ppm. 13 RMN
C ([D 6] DMSO): δ = 196,44 (C-2),
174.33 (CO), 138.55, 137.02, 133.09, 130.73, 129.77, 128.45, 127.30,
127.28, 123.47, 113.42, 55.55 (C-1), 47.77 (NCH 2) 33,43 (CO C H 2)
27,21 (NCH 2 C H 2) 25,45 (NCH 2 CH 2 C H 2) 24.11 (COCH 2 C H 2)
21,67 (2 C, 1-CH 3) 13,96 (2-CH 3) ppm. EMAR (MALDI +): calculado. para C 21 H 26 NO 2+ [ M -
Br] + 324.1958; encontrado 324,1951.

Procedimiento general para la preparación de ácidos cianínicos 4a – d: Una

solución de sal de indolium. 3a o 3b ( 50,0 mmol) y N, N - El monohidrocloruro de
difenilformamidina o malondialdehído bis (fenilimina) (60,0 mmol) en anhídrido acético
(150 ml) se calentó en un baño de aceite a 120 ° C durante 30 minutos. La mezcla de
reacción se enfrió a temperatura ambiente y una solución de la sal de indolio. 2a o 2b

(70,0 mmol), respectivamente, en piridina seca (150 ml) se añadió. La mezcla se

agitó a temperatura ambiente durante 12 h, se concentró y el residuo se disolvió en
cloroformo (100 ml) y se precipitó con hexano (1 l). El sobrenadante se decantó y el
1,2,3,3-tetrametil-3 H- yoduro de indolium (2a): [ 23] Compuesto 2a se preparó a partir de aceite residual se disolvió en cloroformo (500 ml) y se lavó sucesivamente con agua
(3500 ml) y 0,1 • ácido clorhídrico (500 ml). La capa orgánica se secó con Na. 2 ENTONCES
2,3,3-trimetil-3 H- indol 1a) y yoduro de metilo. Rendimiento 96%, cristales blanquecinos, mp 245
° C (desc.). 1 H RMN ([D 6] - 4, se evaporó y el residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando
DMSO): δ = 7,91 (m, 1 H, ArH), 7,83 (m, 1 H, ArH), 7,62 (m, 2 etanol en cloroformo como eluyente (gradiente de 0 10%).
H, ArH), 3.98 (s, 3 H), 2.77 (s, 3 H), 1.53 (s, 6 H, CH 3) ppm. 13 RMN C ([D 6] DMSO): δ = 196.04,
142.13, 141.64, 129.34, 128.84,
123.31, 115.15, 53.95, 34.73 (NCH 3) 27,74 (2 C), 14,16 ppm.
2- [3- (1,3,3-trimetil-2,3-dihidro-1 H- indol-2-ilideno) -1-propenilo] -
3-butil-1,1,2-trimetil-1 H- benzo [ mi] yoduro de indolium (2b): [ 24] Compuesto 2b se 3,3-dimetil-1- (5-carboxipentil) -3 H- cloruro de indolium (4a): Compuesto 4a fue
preparó a partir de 1,1,2-trimetil-1 H- benzo [ mi] indol 1b) y yodobutano. Rendimiento de 35,5 preparado a partir de 3a, N, N - difenilformamidina, y
g (90%), cristales de color púrpura pálido, pf 165-168 ° C (ref. [ 24] pf 114-115 ° C). 1 H RMN 2a. Rendimiento 14,8 g (60%), espuma de color púrpura oscuro. TLC R f = 0.24 [10% MeOH en
([D 6] DMSO): δ = CHCl 3 ( v / v)]. 1 H RMN ([D 6] DMSO): δ = 12.05 (br. S, 1
8,37 (d, J = 8,2 Hz, 1 H, 6-H o 9-H), 8,29 (d, J = 8.8 Hz, 1 H, 4H o 5-H), 8.22 (d, J = 8.2 H, CO 2 H) 8,35 (t, J a, b = J b, c = 13,4 Hz, 1 H, bH), 7,64 (m, 2 H, 4-H, 4 -H), 7,45 (m, 4 H,
Hz, 1 H, 6-H o 9-H), 8.16 (d, J = 6-H, 7-H, 6 -H, 7 -H), 7.30 (m, 2 H, 5-
8.8 Hz, 1 H, 4-H o 5-H), 7.79 (m, 1 H, 7-H u 8-H), 7.73 (m, 1 H, 5 -H), 6,53 (d, J a, b = 13,4 Hz, 1 H, aH), 6,51 (d, J b, c = 13,4 Hz, 1 H, cH), 4,12 (t, J = 7,5
H, 7-H u 8-H), 4,59 (t, J = 7,6 Hz, 2 H, NCH 2) 2,96 (s, 3 H, 2 canales 3) 1,88 (m, 2 H, Hz, 2 H, NCH 2) 3,66 (s, 3 H, NCH 3)
NCH 2 C H 2) 1,77 (s, 6 H, 1-CH 3) 1,47 (m, 2 2,22 (t, J = 7.2 Hz, 2 H, COCH 2) 1,75 (m, 2 H, NCH 2 C H 2) 1,69 (s, 12 H, 3-CH 3, 3 -CH 3) 1,57
H, C H 2 CH 3) 0,96 (t, J = 7,5 Hz, 3 H, CH 2 C H 3) ppm. 13 RMN C ([D 6] DMSO): δ = 196.31 (m, 2 H, COCH 2 C H 2) 1,43 (m, 2
(C-2), 138.52, 137.03, 133.08, 130.72, H, NCH 2 CH 2 C H 2) ppm. 13 RMN C ([D 6] DMSO): δ = 174,54,
129.75, 128.45, 127.31, 127.26, 123.46, 113.38, 55.53 (C-1), 47.77 (NCH 2) 29,53 174,38 (C-2, C-2 ), 173,71 (CO), 149,76 (Cb), 142,70 (C-7a ),
(NCH 2 C H 2) 21,68 (2 C, 1-CH 3) 19,36 ( C H 2 CH 3) 141,96 (C-7a), 140,64 (2 C, C-3a, C-3a ), 128,72, 128,64 (C-6, C6 ), 125.31, 125.18
13,94 (CH 2 C H 3) 13,65 (2-CH 3) ppm. EMAR (MALDI +): calculado. para C 19 H 24 N + [M - I] +(C-5, C-5 ), 122.58, 122.47 (C-4, C-4 ), 111,59,
266.1903;
encontrado 266,1889. 111,54 (C-7, C-7 ), 103.06, 102.42 (Ca, Cc), 48.92 (2 C, C-3, C3 ), 43,75 (NCH 2) 33,55
(CO C H 2) 31,54 (NCH 3) 27,54 (2 C),
1- (5-Carboxipentil) -2,3,3-trimetil-3 H- bromuro de indolium (3a): [ 9o]
27,33 (2 C) (3-CH 3, 3 -CH 3) , 26,80 (NCH 2 C H 2) , 25. 75 (NCH 2 CH 2 C H 2) 24.30 (COCH 2 C H 2) ppm.
Compuesto 3a se preparó a partir de 2,3,3-trimetil-3 H- indol 1a)
EMAR (MALDI +): calculado. para C 30 H 37 norte 2 O 2+ [ M - Cl] + 457,2850; encontrado
y ácido 6-bromohexanoico. Rendimiento 32,6 g (92%), cristales de color rosa pálido,
457,2866.
pf 127-129 ° C. 1 H RMN ([D 6] DMSO): δ = 11,98 (br. S, 1 H, CO 2 H), 7,99 (m, 1 H, 7-H),
7,85 (m, 1 H, 4-H), 7,62 (m, 2 H, 5- 2- [3- (3-butil-1,1-dimetil-1,2-dihidro-3 H- benzo [ mi] indol-2-ilideno) 1-propenil]
H, 6-H), 4,46 (t, J = 7,6 Hz, 2 H, NCH 2) 2,86 (s, 3 H, 2-CH 3) -1,1-dimetil-3- (5-carboxipentil) -1 H- benzo [ mi] cloruro de indolium (4b): Compuesto 4b fue
2,23 (t, J = 7.2 Hz, 2 H, COCH 2) 1,85 (m, 2 H, NCH 2 C H 2) 1,56 (m, 2 H, COCH 2 C H 2) 1,54
preparado a partir de 3b, N, N - difenilformamidina, y 2b. Rendimiento 15,6 g (49%), espuma
(s, 6 H, 3-CH 3) 1,43 (m, 2 H, NCH 2 CH 2 C H 2) ppm. 13 RMN C ([D 6] DMSO): δ = 196,60 violeta oscura. TLC
(C-2), R f = 0,20 [10% MeOH en CHCl 3 ( v / v)]. 1 H RMN ([D 6] DMSO): δ
174.36 (CO), 141.95 (C-3a), 141.12 (C-7a), 129.47 (C-5), 129.02 (C- = 12.04 (br. S, 1 H, CO 2 H), 8,59 (t, J a, b = J b, c = 13,5 Hz, 1 H, b-
6), 123.59 (C-4), 115.58 (C-7), 54.24 (C-3), 47.53 (NCH 2) 33,44 H), 8,29 (d, J = 8,3 Hz, 2 H, 9-H, 9 -H), 8,11 (d, J = 8,7 Hz, 2 H,

EUR. J. Org. Chem 2008, 2107–2117 © 2008 Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim www.eurjoc.org 2111
 VV Shmanai, VA Korshun y col.
PAPEL COMPLETO

5-H, 5 -H), 8,08 (d, J = 8,3 Hz, 2 H, 6-H, 6 -H), 7,79 (m, 2 H, 4- (MALDI +): calculado. para C 43 H 49 norte 2 O 2+ [ M - Cl] + 625.3789; encontró
H, 4 -H), 7,68 (m, 2 H, 8-H, 8 -H), 7,54 (m, 2 H, 7-H, 7 -H), 6,66 (d, J a, b = J b, c = 13,5 Hz, 2 625.3812.
H, aH, cH), 4,29 (m, 4 H, NCH 2)
Procedimiento general para la preparación de cianina amido alcoholes 5a – d: El
2,24 (t, J = 7.2 Hz, 2 H, COCH 2) 2.01 (s, 12 H, 1-CH 3, 1 -CH 3)
ácido cianina correspondiente 4a - d ( 15,0 mmol) y DIEA (4,96 ml, 30,0 mmol) se
1,81 (m, 4 H, NCH 2 C H 2) 1,60 (m, 2 H, COCH 2 C H 2) 1,50 (m, 4
disolvieron en DMF (60 ml). Se añadió PyBOP (7,81 g, 15,0 mmol) en una porción y la
H, NCH 2 CH 2 C H 2, C H 2 CH 3) , 0. 96 (t, J = 7) 3 Hz, 3 H, CH 2 C H 3) ppm. 13 RMN C ([D 6] DMSO):
mezcla de reacción se agitó durante 5 minutos a temperatura ambiente. Una solución
δ = 175,17, 175,13 (C-2, C-2 ), 174,35 (CO), 148,56 (Cb), 139,62 (2 C, C-3a, C-3a ),
de
133,21,
trans- Se añadió hidrocloruro de 4-aminociclohexanol (2,28 g, 15,0 mmol) en DMF (30
133,17 (C-9b, C-9b ), 131.54 (2 C, C-5a, C-5a ), 130,51 (2 C, C-5, C-5 ), 129,98 (2 C,
ml); la mezcla se agitó durante 4 h y luego se diluyó con cloroformo (500 ml), se lavó
C-6, C-6 ), 127,93 (2 C, C-8, C-8 ), 127,46 (2
con agua (2 200 ml) y salmuera (200 ml), se secó con Na 2 ENTONCES 4, y los
C, C-9a, C-9a ), 125.09 (2 C, C-7, C-7 ), 122,22 (2 C, C-9, C-9 ),
solventes se evaporaron. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice
111,82 (2 C, C-4, C-4 ), 102.19, 102.16 (Ca, Cc), 50.63 (2 C, C-1, C-1 ), 43,94 (2 C,
usando etanol en cloroformo como eluyente (gradiente de 0 5%) para dar la amida
NCH 2) 33,56 (CO C H 2) 29,59 ( C H 2 CH 2 CH 3)
deseada.
28,38 (COCH 2 CH 2 CH 2 C H 2) 27,18 (2 C), 27,17 (2 C) (1-CH 3, 1 CH 3) 25.71 (COCH 2 CH 2 C H 2)
24,34 (COCH 2 C H 2) 19,59 ( C H 2 CH 3) 13,90 (CH 2 C H 3) ppm. EMAR (MALDI +): calculado.
para C 41 H 47 norte 2 O 2+ [ M - Cl] + 599,3632; encontrado 599,3635. 2- [3- (1,3,3-trimetil-2,3-dihidroindol-2-ilideno) -1-propenil] -3,3-dimetil-1- [5- ( trans- 4-hidroxiciclohexila
pentil] -3 H- hexafluorofosfato de indolium (5a): Compuesto 5a fue preparado a partir de 4a.
Rendimiento 8,10 g (77%), espuma de color púrpura oscuro. TLC R f = 0.42 [15% MeOH en
2- [5- (1,3,3-trimetil-2,3-dihidro-1 H- indol-2-ilideno) -1,3-pentadienil] -3,3-dimetil-1- CHCl 3 ( v / v)]. 1 H RMN ([D 6] DMSO): δ = 8,35 (t,
(5-carboxipentil) -3 H- cloruro de indolium (4c):
Compuesto 4c fue preparado a partir de 3a, monoclorhidrato de malondialdehído bis
J a, b = J b, c = 13,4 Hz, 1 H, bH), 7,63 (m, 2 H, 4-H, 4 -H), 7,57 (d,
(fenilimina), y 2a. Rendimiento 17,4 g (67%), espuma azul oscuro. TLC R f = 0.26 [10%
J = 8,0 Hz, 1 H, NH), 7,45 (m, 4 H, 6-H, 7-H, 6 -H, 7 -H), 7,30 (m, 2 H, 5-H, 5 -H), 6,47
MeOH en CHCl 3 ( v / v)]. 1 HNMR ([D 6] -
(d, J a, b = J b, c = 13,4 Hz, 2 H, aH, cH),
DMSO): δ = 12.07 (br. S, 1 H, CO 2 H) 8,32 (t, J a, b = J b, c = J c, d = 4,49 (d, J = 4,3 Hz, 1 H, OH), 4,10 (t, J = 7,5 Hz, 2 H, NCH 2)
J d, e = 13,0 Hz, 2 H, bH, dH), 7,60 (m, 2 H, 4-H, 4 -H), 7,39 (m, 4 H, 6-H, 7-H, 6 -H, 7 -H), 3,66 (s, 3 H, NCH 3) 3,40 (m, 1 H, 4 -H), ca. 3,30 (m, 1 H, 1 -
7,25 (m, 2 H, 5-H, 5 -H), 6,58 (t, J antes de Cristo H), 2,03 (t, J = 7.0 Hz, 2 H, COCH 2) 1,80-1,60 (m, 18 H, 3-CH 3,
= J c, d = 13,0 Hz, 1 H, cH), 6,31 (d, J a, b = 13,0 Hz, 1 H, aH), 6,26 (d, J d, e = 13,0 Hz, 1 H, 3 -CH 3, 2 '' eq- H, 3 eq- H, 5 eq- H, 6 eq- H, NCH 2 C H 2) 1,54 (m, 2
eH), 4,09 (m, 2 H, NCH 2) 3,60 (s, 3 H, NCH 3) , 2,20 (t, J = 7.2 Hz, 2 H, COCH 2) , 1,70 (m, 2H, COCH 2 C H 2) 1,37 (m, 2 H, NCH 2 CH 2 C H 2) 1,10 (m, 4 H, 2 hacha- H, 3 hacha- H, 5 hacha- H, 6 hacha-
H, NCH 2 C H 2) 1,68 (s, 12 H, 3-CH 3, 3 -CH 3) 1,55 (m, 2 H, COCH 2 C H 2) 1,39 (m, 2 H, NCH CH 13 RMN C ([D 6] DMSO): δ
H) 2ppm.
2 C H 2) ppm. 13 RMN C ([D 6] - = 174.54, 173.76 (C-2, C-2 ), 171.07 (CO), 149.75 (Cb), 142.71 (C7a ), 141,99 (C-7a),
140,64 (2 C, C-3a, C-3a ), 128.70, 128.66 (C-
DMSO): δ = 174.30 (CO), 173.31 (C-2 ), 172,56 (C-2), 154,03 (2 6, C-6 ), 125.33, 125.20 (C-5, C-5 ), 122.55, 122.47 (C-4, C-4 ),
C, Cb, Cd), 142.80 (C-7a ), 142.06 (C-7a), 141.13 (C-3a), 141.06 (C-3a ), 128,45 ppm. 111,58 (2 C, C-7, C-7 ), 103.00, 102.45 (Ca, Cc), 68.22 (C-1 ),
128,38 (C-6, C-6 ), 125,41 (Cc), 124,77, 48,93 (2 C, C-3, C-3 ), 47.04 (C-4 ), 43,78 (NCH 2) 35,21 (CO C H 2) 34,04 (2 C, C-2 , C-6 ),
124,65 (C-5, C-5 ), 122.46, 122.34 (C-4, C-4 ), 111.08 (2 C, C-7, C7 ), 103.35 (Ce), 31,43 (NCH 3) 30,40 (2 C) (C3 , C-5 ), 27,52 (2 C), 27,33 (2 C) (3-CH 3, 3 -CH 3) 26,84 (NCH 2
103.09 (Ca), 48.91 (2 C, C-3, C-3 ), 43,28 (NCH 2) 33,52 (CO C H 2) 31,18 (NCH 3) 27,22 (2
C H 2) 25,74 (NCH 2 CH 2 C H 2) 25.00 (COCH 2 C H 2) ppm.
C), 27,05 (2 C) (3-CH 3, 3 -CH 3) 26,71 (NCH 2 C H 2) 25,68 (NCH 2 CH 2 C H 2) 24.22 (COCH 2 C H 2)
ppm. EMAR (MALDI +): calculado. para C 32 H 39 norte 2 O 2+ 31 P NMR ([D 6] DMSO): δ = –144,18 (sept, 1 J P, F = 711 Hz, PF 6–) ppm. EMAR (MALDI +):
calculado. para C 36 H 48 norte 3 O 2+ [ M - PF 6] + 554,3741; encontrado 554,3760.
[M - Cl] + 483.3006; encontrado 483.3018.

2- [5- (3-butil-1,1-dimetil-1,2-dihidro-3 H- benzo [ mi] indol-2-ilideno) - 2- [3- (3-butil-1,1-dimetil-1,2-dihidrobenzo [ mi] indol-2-ilideno) -1-propenil]
1,3-pentadienil] -1,1-dimetil-3- (5-carboxipentil) -1 H- benzo [ mi] cloruro de -1,1-dimetil-3- [5- ( trans- 4-hidroxiciclohexilaminocarbonil) pentil] -1 H- benzo [ mi] hexafluorofosfato
indolium (4d): Compuesto 4d fue preparado a partir de 3b, monoclorhidrato de de indolium (5b): Compuesto
malondialdehído bis (fenilimina), y 2b. Rendimiento 16,7 g (51%), espuma verde 5b fue preparado a partir de 4b. Rendimiento 10,16 g (80%), espuma violeta oscura. TLC R f = 0,40
oscuro. TLC R f = 0.25 [EtOH al 10% en DCM (v / v)]. 1 H RMN ([D 6] DMSO): δ = 12.17 (br. [15% de MeOH en CHCl 3 ( v / v)]. 1 H RMN ([D 6] -
DMSO): δ = 8,59 (t, J a, b = J b, c = 13,4 Hz, 1 H, bH), 8,30 (m, 2
S, 1 H, CO 2 H), 8,46 (t, J b, c = J c, d = 13,4 Hz, 2 H, bH, dH), 8,26 (d, J = 8,2 Hz, 2 H, 9-H, 9 -H),
8.07 (m, 4 H, 5-H, 5 -H, 6-H, 6 -H), 7,74 (m, 2 H, 4- H, 9-H, 9 -H), 8,11 (m, 4 H, 5-H, 5 -H, 6-H, 6 -H), 7,79 (m, 2 H, 4-H, 4 -H), 7,69 (m, 2 H,
8-H, 8 -H), 7,55 (m, 3 H, 7-H, 7 -H, NH), 6,58 (m, 2 H, aH, cH), 4,44 (d, J = 4,6 Hz, 1 H,
H, 4 -H), 7,68 (m, 2 H, 8-H, 8 -H), 7,51 (m, 2 H, 7-H, 7 -H), 6,66 (t, J b, c = J c, d = 13,0 Hz, 1 OH), 4,27 (m, 4 H, NCH 2) 3,39 (m, 1 H, 4 -H), 3.24 (m, 1 H, 1 -H), 2,02 (m, 14 H, COCH 2,
H, cH), 6,37 (d, J a, b = J d, e = 13,4 Hz, 2 H, aH, eH), 4,24 (m, 4 H, NCH 2) 2,21 (m, 2 H, 1-CH 3, 1 -CH 3) 1,80 (m, 4 H, NCH 2 C H 2)
COCH 2) 1,97 (s, 12 H, 1-CH 3, 1 -CH 3) 1,74 (m, 4 H, NCH 2 C H 2) 1,57 (m, 2 H, COCH 2 C H 2) 1,44
(m, 4 H, NCH 2 CH 2 C H 2, C H 2 CH 3) 0,95 (t, J 1.71–1.37 (m, 10 H, COCH 2 C H 2 C H 2, 2 eq- H, 3 eq- H, 5 eq- H, 6 eq- H, C H 2 CH 3) 1,05 (m, 4 H, 2 hacha-
H, 3 hacha- H, 5 hacha- H, 6 hacha- H)
= 7,3 Hz, 3 H, CH 2 C H 3) ppm. 13 RMN C ([D 6] DMSO): δ = 174,31, 0,97 (t, J = 7,3 Hz, 3 H, CH 2 C H 3) ppm. 13 RMN C ([D 6] DMSO): δ
173,70, 171,31 (CO, C-2, C-2 ), 152.87 (2 C, Cb, Cd), 139.76 (2 = 175,18 (2 C, C-2, C-2 ), 171.03 (CO), 148.54 (Cb), 139.68, 139.64 (C-3a, C-3a ),
C, C-3a, C-3a ), 133.20 (2 C, C-9b, C-9b ), 131.33 (2 C, C-5a, C5a ), 130,34 (2 C, C-5, 133,22, 133,15 (C-9b, C-9b ), 131.57 (2 C, C-5a, C5a ), 130.55, 130.51 (C-5, C-5 ),
C-5 ), 129.95 (2 C, C-6, C-6 ), 127,77 (2 C, C-8, C-8 ), 127,64 (2 C, C-9a, C-9a ), 126.16 129,99 (2 C, C-6, C-6 ), 127,96 (2
(Cc), 124.82 (2 C, C- C, C-8, C-8 ), 127,48 (2 C, C-9a, C-9a ), 125,14 (2 C, C-7, C-7 ),
7, C-7 ), 122.09 (2 C, C-9, C-9 ), 111,65 (2 C, C-4, C-4 ), 103.01 (2 122.25 (2 C, C-9, C-9 ), 111.84 (2 C, C-4, C-4 ), 102.11 (2 C, Ca, Cc), 68.21 (C-1 ),
C, Ca, Ce), 50.75 (2 C, C-1, C-1 ) 43.44 (2 C, NCH 2) 33,54 (CO C H 2) 29,43 ( C H 2 CH 2 CH
50,68
3) (2 C, C-1, C-1 ), 47.02 (C-4 ), 43,92 (2
27.01 (COCH 2 CH 2 CH 2 C H 2) C, NCH 2) 35.20 (CO C H 2) 34,00 (2 C, C-2 , C-6 ), 30,38 (2 C, C-3 , C-5 ), 29,59 ( C H 2 CH 2 CH
26.86 (4 C, 1-CH 3, 1 -CH 3) 25,68 (COCH 2 CH 2 C H 2) 24.27 (COCH 2 C H 2) 19,51 ( C H 2 CH
3) 27.19 (2 C), 27.13 (2 C) (1CH 3, 1 -CH 3) 25,67 (COCH 2 CH 2 C H 2) 25.02 (COCH 2 C H 2) 19,63
3) 13,82

(CH 2 C H 3) ppm. HRMS

2112 www.eurjoc.org © 2008 Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim EUR. J. Org. Chem 2008, 2107–2117
Una síntesis conveniente de tintes de cianina

( C H 2 CH 3) 13,91 (CH 2 C H 3) ppm. 31 P NMR ([D 6] DMSO): δ = Se añadieron tetrazolido de amonio (1,70 g, 10,0 mmol) y bis (diisopropilamino)
- 144,19 (sept, 1 J P, F = 710 Hz, PF 6–) ppm. EMAR (MALDI +): calculado. para C 47 H 58 norte 3 -2-cianoetoxifosfano
O (3,84 ml, 12,0 mmol) a la solución que se agitó en argón durante
2+ [ M - PF 6] + 696.4524; encontrado 696,4509. 3 h. Después de completar la conversión del compuesto de partida [monitorización
por TLC, CHCl 3 / acetona (1: 1) + 1% Et 3 N (v / v / v)], la mezcla se diluyó con CHCl 3 ( 150
2- [5- (1,3,3-trimetil-2,3-dihidroindol-2-ilideno) -1,3-pentadienilo] -
ml) y se lavó con NaHCO al 5% 3
3,3-dimetil-1- [5- ( trans- 4-hidroxiciclohexilaminocarbonil) pentilo] 3 H- hexafluorofosfato
de indolium (5c): Compuesto 5c fue preparado a partir de 4c. Rendimiento 8,25 g (76%),
(2 100 ml) y NaCl al 20% (100 ml). La capa orgánica seca (Na 2 ENTONCES 4) se
espuma azul oscuro. TLC R f = 0.44 [15% MeOH en CHCl 3 ( v / v)]. 1 H RMN ([D 6] DMSO): δ = 8,32
evaporó a sequedad. El residuo se disolvió en DCM seco (30 ml) y se precipitó en
(t,
éter dietílico frío (–10 ° C) (1 L). El sólido se recogió y se secó al vacío para
J a, b = J b, c = J c, d = J d, e = 13,0 Hz, 2 H, bH, dH), 7,61 (m, 2 H, 4-H, 4 -H), 7,55 (d, J = 8,0 Hz, 1
proporcionar compuestos 6a - re como sólidos amorfos.
H, NH), 7,38 (m, 4 H, 6-H, 7-
H, 6 -H, 7 -H), 7,25 (m, 2 H, 5-H, 5 -H), 6,56 (t, J b, c = J c, d =
13,0 Hz, 1 H, cH), 6,30 (d, J d, e = 13,0 Hz, 1 H, eH), 6,24 (d, J a, b
= 13.0 Hz, 1 H, aH), 4.09 (m, 2 H, NCH 2) 3,60 (s, 3 H, NCH 3)
3,42 (m, 1 H, 4 -H), ca. 3,30 (m, 1 H, 1 -H), 2,01 (t, J = 7.0 Hz, 2 H, COCH 2) 1,80-1,60
(m, 18 H, 2 eq- H, 3 eq- H, 5 eq- H, 6 eq-
H, NCH 2 C H 2, 3-CH 3, 3 -CH 3) 1,52 (m, 2 H, COCH 2 C H 2) 1,31 (m, 2 H, NCH 2 CH 2 C H 2) 1,10
(m, 4 H, 2 hacha- H, 3 hacha- H, 5 hacha- H, 6 hacha- H) ppm. 13 RMN C ([D 6] DMSO): δ = 173,27,
172,67 (C-2, C2 ), 170,98 (CO), 154,11, 153,98 (Cb, Cd), 142,82 (C-7a ), 142.06
(C-7a), 141.13 (C-3a), 141.05 (C-3a ), 128.43, 128.39 (C-6, C-6 ),

125,40 (Cc), 124,75, 124,68 (C-5, C-5 ), 122.44, 122.33 (C-4, C4 ), 111.14, 111.05
(C-7, C-7 ), 103.23 (Ce), 103.17 (Ca), 68.21 (C-1 ), 48.92, 48.90 (C-3, C-3 ), 47.01 (C-4 ),
43,35 (NCH 2) 35,14 (CO C H 2) 34,04 (2 C, C-2 , C-6 ), 31,10 (NCH 3) 30.40 (2 C, C3 , C-5 ),
2- [3- (1,3,3-trimetil-2,3-dihidro-1 H- indol-2-ilideno) -1-propenilo] -1 {5- [ trans- 4-
27.20 (2 C), 27.06 (2 C) (3-CH 3, 3 -CH 3) 26,81 (NCH 2 C H 2) 25,64 (NCH 2 CH 2 C H 2) 24.95
(diisopropilamino-2-cianoetoxifosfiniloxi) ciclohexilaminocarbonil] pentil}
(COCH 2 C H 2) ppm.
-3,3-dimetil-3 H- hexafluorofosfato de indio (6a): Compuesto 6a fue preparado a
partir de 5a. rendimiento
31 P NMR ([D 6] DMSO): δ = –144,18 (sept, 1 J P, F = 710 Hz, PF 6–) ppm. EMAR (MALDI +):
8,38 g (93%), espuma de color púrpura oscuro. TLC R f = 0.28 [acetona al 20% en CH 2 Cl 2 + 1%
calculado. para C 38 H 50 norte 3 O 2+ [ M - PF 6] + 580.3898; encontrado 580,3890.
Et 3 N (v / v / v)]. 1 H RMN ([D 6] DMSO): δ = 8,35 (t,
J a, b = J b, c = 13,4 Hz, 1 H, bH), 7,62 (m, 2 H, 4-H, 4 -H), 7,59 (d,
2- [5- (3-butil-1,1-dimetil-1,2-dihidrobenzo [ mi] indol-2-ilideno) -1,3pentadienil] J = 7,6 Hz, 1 H, NH), 7,45 (m, 4 H, 6-H, 7-H, 6 -H, 7 -H), 7,30 (m, 2 H, 5-H, 5 -H), 6,48
(d, J a, b = J b, c = 13,4 Hz, 2 H, aH, cH),
-1,1-dimetil-3- [5- ( trans- 4-hidroxiciclohexilaminocarbonil) pentil] -1 H- benzo [ mi] hexafluorofosfato
de indolium (5d): Compuesto 5d fue preparado a partir de 4d. Rendimiento 8,66 g (66%), 4,10 (t, J = 7,3 Hz, 2 H, NCH 2) 3,72-3,60 (m, 6 H, NCH 3, 1 -H, POCH 2) 3,58–3,43 (m, 3 H,
espuma verde oscuro. TCL R f = 0.52 [10% EtOH en CH 2 Cl 2 ( v / v)]. 1 H RMN ([D 6] - 4 -H, yo 2 C H N), 2,73 (t, J = 5,8 Hz, 2 H, CH 2 CN), 2,04 (t, J = 7.0 Hz, 2 H, COCH 2) 1,93–1,68
(m, 18
DMSO): δ = 8,46 (t, J b, c = J c, d = 13,1 Hz, 2 H, bH, dH), 8,30 (d, H, 2 eq- H, 3 eq- H, 5 eq- H, 6 eq- H, NCH 2 C H 2, 3-CH 3, 3 -CH 3)
J 8,9 = J 8 , 9 = 8,6 Hz, 2 H, 9-H, 9 -H), 8,08 (m, 4 H, 5-H, 5 -H, 6- 1,56 (m, 2 H, COCH 2 C H 2) 1,36 (m, 4 H, 2 hacha- H, 3 hacha- H, 5 hacha-
H, 6 -H), 7,73 (m, 2 H, 4-H, 4 -H), 7,68 (m, 2 H, 8-H, 8 -H), 7,52 (m, 3 H, 7-H, 7 -H, NH), H, 6 hacha- H), 1.12 (m, 14 H, NCH 2 CH 2 C H 2, CHC H 3) ppm. 13 RMN C ([D 6] DMSO): δ = 174,51,
6,63 (t, J b, c = J c, d = 13,1 Hz, 1 H, cH), 173,78 (C-2, C-2 ), 171.10 (CO),
6,36 (m, 2 H, aH, eH), 4,43 (br. S, 1 H, OH), 4,23 (m, 4 H, NCH 2) 149,74 (Cb), 142,68 (C-7a ), 141,96 (C-7a), 140,63, 140,60 (C-3a, C-3a ), 128,67,
3,35 (m, 1 H, 4 -H), 3.25 (m, 1 H, 1 -H), 2,01 (t, J = 7,0 Hz, 2 128,63 (C-6, C-6 ), 125.30, 125.16 (C-5, C-5 ),
H, COCH 2) 1,97 (m, 12 H, 1-CH 3, 1 -CH 3) 1,74 (m, 4 H, NCH 2 C H 2) 1,69 (m, 2 H), 1,60 (m, 122,51, 122,42 (C-4, C-4 ), 119.05 (CN), 111.54 (2 C, C-7, C-7 ),
2 H, 2 eq- H, 3 eq- H, 5 eq- H, 6 eq - H), 1. 5 4 (m, 2 H), 1. 4 3 (m, 2 H), 1. 35 (m, 2 H, COCH 2 C102,96,
H 102,44 (Ca, Cc), 71,69 (d, 2 J P, C = 18,4 Hz, C-1 ), 57,92 (d, 2 J P, C = 18,4 Hz,
2 C H 2, C H 2 CH 3) 1,07 (m, 4 H, 2 hacha- H, 3 hacha- H, 5 hacha- POCH 2) 48,91 (2 C, C-3, C-3 ), 46,45 (C-4 ),
43,77 (NCH 2) 42,51 (d, 2 J P, C = 12,6 Hz, PNCH), 35,17 (CO C H 2)
H, 6 hacha- H), 0,96 (t, J = 7,3 Hz, 3 H, CH 2 C H 3) ppm. 13 RMN C ([D 6] DMSO): δ = 173,80, 32,46 (m), 32,37 (m, C-2 , C-6 ), 31,40 (NCH 3) 29,91, 29,87 (C3 , C-5 ), 27,49 (2 C),
173,69 (C-2, C-2 ), 170,97 (CO), 152,85 (2 C, Cb, Cd), 139,79 (2 C, C-3a, C-3a ), 27,32 (2 C) (3-CH 3, 3 -CH 3) 26,80 (NCH 2 C H 2) 25,71 (NCH 2 CH 2 C H 2) 24,93 (COCH 2 C H 2) 24,40
133.20 (2 C, C-9b, C9b ), 131.34 (2 C, C-5a, C-5a ), 130,37 (2 C, C-5, C-5 ), 129,97 (2) (d, 3 J P, C = 6,9 Hz, 2 C), 24,28 (d, 3 J P, C = 7,4 Hz, 2 C, CH C H 3)

C, C-6, C-6 ), 127,80 (2 C, C-8, C-8 ), 127,65 (2 C, C-9a, C-9a ), 19,87 (d, 3 J P, C = 7,4 Hz, CH 2 C N) ppm. 31 P NMR ([D 6] DMSO): δ
125.83 (Cc), 124.84 (2 C, C-7, C-7 ), 122,19 (2 C, C-9, C-9 ), = 144.88 (s, 1 P, fosforamidita), –144.18 (sept, 1 J P, F = 711 Hz, 1 P, PF 6–) ppm. EMAR (ESI +):

111.71, 111.67 (C-4, C-4 ), 103.11, 102.95 (Ca, Ce), 68.20 (C-1 ), calculado. para C 45 H sesenta y cinco norte 5 5 O 3 P + [M - PF 6] + 754.4820; encontrado 754,4840.

50,77 (2 C, C-1, C-1 ), 47.01 (C-4 ), 43.53, 43.44 (NCH 2) 35,17 (CO C H 2) 34,02 (2 C, C-2 ,
C-6 ), 30.40 (2 C, C-3 , C-5 ), 29,45 ( C H 2 CH 2 CH 3) 27.12 (COCH 2 CH 2 CH 2 C H 2) 26,89 (2
2- [3- (3-butil-1,1-dimetil-1,2-dihidro-3 H- benzo [ mi] indol-2-ilideno) 1-propenil]
C), 26,84 (2
-1,1-dimetil-3- {5- [ trans- 4- (diisopropilamino-2-cianoetoxifosfiniloxi)
C) (1-CH 3, 1 -CH 3) 25,63 (COCH 2 CH 2 C H 2) 24,99 (COCH 2 C H 2)
ciclohexilaminocarbonil] pentilo} -1 H- benzo [ mi] hexafluorofosfato de indolium
19,54 ( C H 2 CH 3) 13,85 (CH 2 C H 3) ppm. 31 P NMR ([D 6] DMSO): δ
(6b): Compuesto 6b fue preparado a partir de 5b. Rendimiento 9,98 g (96%), espuma
= –144.17 (sept, 1 J P, F = 710 Hz, PF 6–) ppm. EMAR (MALDI +): calculado. para C 49 H 60 60 norte 3 O
violeta oscura. TLC R f = 0.26 [20% de acetona en CH 2 Cl 2 + 1% Et 3 N (v / v / v)]. 1 H RMN ([D 6]
2+ [ M - PF 6] + 722.4680; encontrado 722,4683.
-

Procedimiento general para la preparación de fosforamiditas 6a – d: DMSO): δ = 8,59 (t, J a, b = J b, c = 13,6 Hz, 1 H, bH), 8,30 (m, 2
El alcohol correspondiente 5a - d ( 10.0 mmol) se resolvió en DCM seco y la solución H, 9-H, 9 -H), 8,11 (m, 4 H, 5-H, 5 -H, 6-H, 6 -H), 7,79 (m, 2 H, 4-H, 4 -H), 7,69 (m, 2 H,
se evaporó (2 150 ml); después, el residuo se disolvió nuevamente en DCM seco (150 8-H, 8 -H), 7,55 (m, 3 H, 7-H, 7 -H, NH), 6.58 (m, 2 H, aH, cH), 4.27 (m, 4 H, NCH 2) 3.70–3.41
ml). Diisopropilo (m,

EUR. J. Org. Chem 2008, 2107–2117 © 2008 Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim www.eurjoc.org 2113
 VV Shmanai, VA Korshun y col.
PAPEL COMPLETO

H, NCH 2 C H 2, 3-CH 3, 3 -CH 3) 1,52 (m, 2 H, COCH 2 C H 2) 1,32 (m, 4 H, 2 hacha- H, 3 hacha- H, 5 hacha-
H, 6 hacha- H), 1.10 (m, 14 H, NCH 2 CH 2 C H 2, CHC H 3) ppm. 13 RMN C ([D 6] DMSO): δ =

173,24, 172,69 (C-2, C-2 ), 171.04 (CO), 154.11, 153.99 (Cb, Cd),
142,82 (C-7a ), 142.07 (C-7a), 141.14 (C-3a), 141.03 (C-3a ),
128,43, 128,39 (C-6, C-6 ), 125,42 (Cc), 124,75, 124,67 (C-5, C5 ), 122.43, 122.31
(C-4, C-4 ), 119.05 (CN), 111.16, 111.04 (C-7, C-7 ), 103,24 (2 C, Ca, Ce), 71,73 (d, 2 J P,
C= 17,6 Hz, C-1 ),
57,93 (d, 2 J P, C = 17,6 Hz, POCH 2) 48,92, 48,88 (C-3, C-3 ), 46,44 (C-4 ), 43,34 (NCH 2) 42,50
(d, 2 J P, C = 12,6 Hz, PNCH), 35,14 (CO C H 2) 32,42 (m), 32,34 (m) (C-2 , C-6 ), 31,10 (NCH 3)
29,95,
29,91 (C-3 , C-5 ), 27.20 (2 C), 27.07 (2 C) (3-CH 3, 3 -CH 3) 26,79 (NCH 2 C H 2) 25,66 (NCH 2 CH
2 C H 2) 24.88 (COCH 2 C H 2) 24,40 (d, 3 J P, C = 7,4 Hz, 2 C), 24,28 (d, 3 J P, C = 6,9 Hz, 2 C, CH C H
3)

6 H, 1 -H, 4 -H, POCH 2, Yo 2 C H N), 2,72 (t, J = 5,8 Hz, 2 H, CH 2 CN), 2,02 (m, 14 H, 19,87 (d, 3 J P, C = 7,5 Hz, CH 2 C N) ppm. 31 P NMR ([D 6] DMSO): δ
COCH 2, 1-CH 3, 1 -CH 3) 1,80 (m, 4 H), = 144.90 (s, 1 P, fosforamidita), –144.18 (sept, 1 J P, F = 710 Hz, 1 P, PF 6–) ppm. EMAR (ESI
1.74 (m, 2 H), 1.60 (m, 4 H), 1.48 (m, 2 H), 1.40 (m, 2 H), 1.25 (m, 2 H, 2 eq- H, 3 eq- H, 5 eq- +): calculado. para C 47 H 67 norte 5 5 O 3 P + [M - PF 6] + 780.4976; encontrado 780,4991.
H, 6 eq- H, 2 hacha- H, 3 hacha- H, 5 hacha-
H, 6 hacha- H, COCH 2 C H 2 CH 2 C H 2, C H 2 C H 2 CH 3) 1,08 (m, 14 H, NCH 2 CH 2 C H 2, CHC H 3) 0,98
(t, J = 7,3 Hz, 3 H, CH 2 C H 3) ppm.
13 RMN C ([D 6] DMSO): δ = 175,24, 175,14 (C-2, C-2 ), 171.06 (CO), 148.54 (Cb),
139.66, 139.61 (C-3a, C-3a ), 133.19, 133.16 (C-9b, C-9b ), 131.56 (2 C, C-5a, C-5a ),
130.53, 130.48 (C-5, C5 ), 129.95 (2 C, C-6, C-6 ), 127,91 (2 C, C-8, C-8 ), 127.47,
127.44 (C-9a, C-9a ), 125.10 (2 C, C-7, C-7 ), 122.20 (2 C, C-9, C-9 ),

119.02 (CN), 111.84, 111.78 (C-4, C-4 ), 102.13, 102.06 (Ca, Cc),
71,64 (d, 2 J P, C = 18,4 Hz, C-1 ) 57.89 (d, 2 J P, C = 17,8 Hz, POCH 2) 50,65 (2 C, C-1, C-1 ),
46,41 (C-4 ), 43,91 (2 C, NCH 2)
42,48 (d, 2 J P, C = 12,6 Hz, PNCH), 35,15 (CO C H 2) 32,33 (m, 2 C, C-2 , C-6 ), 29.87 (2 C,
C-3 , C-5 ), 29,57 ( C H 2 CH 2 CH 3) 27,18 (2 C), 27,12 (2 C) (1-CH 3, 1 -CH 3) 25.60 (COCH 2 CH 2
C H 2) 24,93 (COCH 2 C H 2) 24,36 (COCH 2 C H 2) 24,40 (d, 3 J P, C = 6,9 Hz, 2 C),

24,23 (d, 3 J P, C = 6,9 Hz, 2 C, CH C H 3) 19,86 (d, 3 J P, C = 6,9 Hz, CH 2 C N), 19,60 ( C H 2 CH 3) 13,87
(CH 2 C H 3) ppm. 31 P NMR ([D 6] - 2- [5- (3-butil-1,1-dimetil-1,2-dihidrobenzo [ mi] indol-2-ilideno) -1,3pentadienil]

DMSO): δ = 144,90 (s, 1 P, fosforamidita), –144,17 (sept, 1 J P, F -1,1-dimetil-3- {5- [ trans- 4- (diisopropilamino-2-cianoetoxifosfiniloxi)

= 7 1 1 Hz, 1 P, PF 6 -) ppm. EMAR (ES I +): calculado. para r C 56 H 75 norte 5 5 O 3 P + [M - ciclohexilaminocarbonil] pentilo} -1 H- benzo [ mi] hexafluorofosfato de indio (6d): Compuesto
PF 6] + 896.5602; encontrado 896,5612. 6d fue preparado a partir de 5d. Rendimiento 10,21 g (95%), espuma verde oscuro. TLC R
f= 0.50 [20% de acetona en CH 2 Cl 2 + 1% Et 3 N (v / v / v)]. 1 H RMN ([D 6] -

DMSO): δ = 8,45 (t, J b, c = J c, d = 13,0 Hz, 2 H, bH, dH), 8,25 (d,

J 8,9 = J 8 , 9 = 8,6 Hz, 2 H, 9-H, 9 -H), 8.07 (m, 4 H, 5-H, 5 -H, 6-
H, 6 -H), 7,73 (m, 2 H, 4-H, 4 -H), 7,68 (m, 2 H, 8-H, 8 -H), 7,53 (m, 3 H, 7-H, 7 -H, NH),
6,66 (t, J b, c = J c, d = 13,0 Hz, 1 H, cH),
6,36 (m, 2 H, aH, eH), 4,23 (m, 4 H, NCH 2) 3,70-3,40 (m, 6 H, 1 -H, 4 -H, POCH 2, Yo 2 C H N),
2,72 (t, J = 6,0 Hz, 2 H, CH 2 CN), 2,02 (t, J = 7.0 Hz, 2 H, COCH 2) 1,97 (m, 12 H, 1-CH 3,

1 -CH 3) 1.81 (m, 2 H), 1.74 (m, 4 H), 1.64 (m, 2 H) (NCH 2 C H 2,
2 eq- H, 3 eq- H, 5 eq- H, 6 eq- H), 1.54 (m, 2 H), 1.44 (m, 4 H),
1,35 (m, 2 H) (COCH 2 C H 2, C H 2 CH 3, 2 hacha- H, 3 hacha- H, 5 hacha- H, 6 hacha- H), 1,09 (m, 14 H,
NCH 2 CH 2 C H 2, CHC H 3) 0,96 (t, J =
2- [5- (1,3,3-trimetil-2,3-dihidro-1 H- indol-2-ilideno) -1,3-pentadienil] -3,3-dimetil-1- 7,3 Hz, 3 H, CH 2 C H 3) ppm. 13 RMN C ([D 6] DMSO): δ = 173,64 (2 C, C-2, C-2 ), 170.99
{5- [ trans- 4- (diisopropilamino-2-cianoetoxifosfiniloxi) ciclohexilaminocarbonil] (CO), 152.82 (2 C, Cb, Cd), 139.77 (2 C, C-3a, C-3a ), 133,19 (2 C, C-9b, C-9b ),
pentilo} -3 H- hexafluorofosfato de indio (6c): Compuesto 6c fue preparado a partir 131.34 (2 C, C-5a, C-5a ),
de 5c. 130,31 (2 C, C-5, C-5 ), 129,96 (2 C, C-6, C-6 ), 127,75 (2 C, C-8, C-8 ), 127,64 (2 C,
Rendimiento 8,58 g (93%), espuma azul oscuro. TLC R f = 0.30 [20% de acetona en CH 2 Cl 2 + 1%C-9a, C-9a ), 125.84 (Cc), 124.82 (2 C, C-7, C7 ), 122.15 (2 C, C-9, C-9 ), 119.02 (CN),
Et 3 N (v / v / v)]. 1 H RMN ([D 6] DMSO): δ = 8,32 (t, 111.62 (2 C, C-4, C-4 ),
J a, b = J b, c = J c, d = J d, e = 13,0 Hz, 2 H, bH, dH), 7,60 (m, 2 H, 4-H, 4 -H), 7,57 (d, J = 7,6 Hz, 102,91
1 (2 C, Ca, Ce), 71,72 (d, 2 J P, C = 18,6 Hz, C-1 ), 57,90 (d,
2 J P, C = 19,2 Hz, POCH 2) 50,74 (2 C, C-1, C-1 ), 46,40 (C-4 ),
H, NH), 7,39 (m, 4 H, 6-H, 7-
H, 6 -H, 7 -H), 7,24 (m, 2 H, 5-H, 5 -H), 6,56 (t, J b, c = J c, d = 43,50, 43,41 (NCH 2) 42,49 (d, 2 J P, C = 13,0 Hz, PNCH), 35,13 (CO C H 2) 32,47, 32,37 (C-2 ,
13,0 Hz, 1 H, cH), 6,31 (d, J d, e = 13,0 Hz, 1 H, eH), 6,23 (d, J a, b C-6 ), 29,92 (2 C, C-3 , C-5 ),
= 13.0 Hz, 1 H, aH), 4.09 (m, 2 H, NCH 2) 3,72–3,62 (m, 3 H, 1 -H, POCH 2) 3,61 (s, 3 H, 29,43 ( C H 2 CH 2 CH 3) 27.07 (COCH 2 CH 2 CH 2 C H 2) 26,87 (2 C),
NCH 3) 3,58–3,43 (m, 3 H, 4 -H, yo 2 C H N), 2,73 (t, J = 5,8 Hz, 2 H, CH 2 CN), 2,02 (t, J = 7.0
26,83 (2 C) (1-CH 3, 1 -CH 3) 25,61 (COCH 2 CH 2 C H 2) 24,98 (COCH 2 C H 2) 24,37 (d, 3 J P, C = 6,8
Hz, 2 H, COCH 2) 1,93–1,64 (m, 18 H, 2 eq- H, 3 eq- H, 5 eq- H, 6 eq- Hz, 2 C), 24,26 (d, 3 J P, C =
6.2 Hz, 2 C, CH C H 3) 19,86 (d, 3 J P, C = 6.2 Hz, CH 2 C N), 19,51

2114 www.eurjoc.org © 2008 Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim EUR. J. Org. Chem 2008, 2107–2117
Una síntesis conveniente de tintes de cianina

( C H 2 CH 3) 13,81 (CH 2 C H 3) ppm. 31 P NMR ([D 6] DMSO): δ = = J d, e = 13,0 Hz, 2 H, bH, dH), 7,61 (m, 2 H, 4-H, 4 -H), 7,40 (m, 4 H, 6-H, 7-H, 6 -H, 7 -H),
144.89 (s, 1 P, fosforamidita), –144.18 (sept, 1 J P, F = 710 Hz, 1 7,24 (m, 2 H, 5-H, 5 -H), 6,57 (t,
P, PF 6–) ppm. EMAR (ESI +): calculado. para C 58 H 77 norte 5 5 O 3 P + [M - PF 6] J b, c = J c, d = 13,0 Hz, 1 H, cH), 6,30 (d, J a, b = 13,0 Hz, 1 H, aH),
+
922.5759; encontrado 922,5790. 6.26 (d, J d, e = 13,0 Hz, 1 H, eH), 4,09 (m, 2 H, NCH 2) 3,61 (s, 3
H, NCH 3) 2,82 (s, 4 H, COC H 2 C H 2 CO), 2,68 (t, J = 7.2 Hz, 2 H, COCH 2) 1.78–1.69 (m, 4
Procedimiento general para la preparación de ésteres de cianina oxisuccinimida
H, NCH 2 C H 2 CH 2 C H 2) 1,68 (s, 12 H, 3-CH 3, 3 -CH 3) 1,49 [m, 2 H, (NCH 2 CH 2 C H 2)] ppm. 13 RMN
7a – d: El ácido cianina correspondiente 4a - d ( 10,0 mmol) y DIEA (3,50 ml, 20 mmol)
C ([D 6] DMSO): δ = 173,34 (C-2 ), 172,75 (OCO), 172,53 (C-2),
se disolvieron en DCM seco (100 ml). Se añadió DSC (2,82 g, 11,0 mmol) en una
porción y la mezcla se agitó durante 2 ha temperatura ambiente, luego se diluyó con
170.25 (2 C, NCO), 154.03 (2 C, Cb, Cd), 142.80 (C-7a ), 142.04 (C-7a), 141.14
DCM (100 ml) y se lavó sucesivamente con agua (400 ml), 1 • HCl (400 ml) y salmuera
(C-3a), 141.07 (C-3a ), 128.44, 128.39 (C-6, C-6 ),
(400 ml). La solución se secó con Na. 2 ENTONCES 4, evaporado, y el residuo se trituró
125,45 (Cc), 124,78, 124,64 (C-5, C-5 ), 122.45, 122.34 (C-4, C4 ), 111.09, 111.04
en éter dietílico para dar ésteres puros 7a - re como sólidos amorfos.
(C-7, C-7 ), 103.38 (Ce), 103.05 (Ca), 48.91 (2
C, C-3, C-3 ), 43,24 (NCH 2) 31,17 (NCH 3) 30.05 (CO C H 2) 27,22 (2 C), 27,04 (2 C) (3-CH 3,
3 -CH 3) 26,43 (NCH 2 C H 2) 25.50 (3 C, CO C H 2 C H 2 CO, NCH 2 CH 2 C H 2) 23,96 (COCH 2 C H 2) ppm
2- [3- (1,3,3-trimetil-2,3-dihidroindol-2-ilideno) -1-propenil] -3,3-dimetil-1- [5- EMAR (MALDI +): calculado. para C 36 H 42 norte 3 O 4+ [ M - Cl] + 580.3170; encontrado
(succinimidooxicarbonil) pentil] -3 H- cloruro de indolium (7a): Compuesto 7a fue 580,3193.
preparado a partir de 4a. Rendimiento 5,64 g (96%), espuma de color púrpura oscuro. TLC R f = 0.61
[20% MeOH en CHCl 3 ( v / v)].
2- [5- (3-butil-1,1-dimetil-1,2-dihidrobenzo [ mi] indol-2-ilideno) -1,3pentadienil]
1 H RMN ([D 6] DMSO): δ = 8,35 (t, J a, b = J b, c = 13,4 Hz, 1 H, b-
-1,1-dimetil-3- [5- (succinimidooxicarbonil) pentil] -1 H-
H), 7,64 (m, 2 H, 4-H, 4 -H), 7,45 (m, 4 H, 6-H, 7-H, 6 -H, 7 -H)
benzo [ mi] cloruro de indolium (7d): Compuesto 7d fue preparado a partir de
7,30 (m, 2 H, 5-H, 5 -H), 6,52 (d, J a, b = 13,4 Hz, 1 H, aH), 6,50 (d, J b, c = 13,4 Hz, 1 H,
4d. Rendimiento 7,36 g (97%), espuma verde oscuro. TLC R f = 0,75 [EtOH al 20% en DCM
cH), 4,12 (t, J = 7,3 Hz, 2 H, NCH 2) 3,66 (s, 3 H, NCH 3) 2,81 (s, 4 H, COC H 2 C H 2 CO),
(v / v)]. 1 H RMN ([D 6] DMSO): δ = 8,46 (t, J b, c =
2,70 (t, J = 7.3 Hz, 2 H, COCH 2) 1,82–1,67 (m, 4 H, NCH 2 C H 2 CH 2 C H 2) 1,70 (s, 12
J c, d = 13,0 Hz, 2 H, bH, dH), 8,26 (d, J = 8,2 Hz, 2 H, 9-H, 9 -
H), 8.07 (m, 4 H, 5-H, 5 -H, 6-H, 6 -H), 7,74 (m, 2 H, 4-H, 4 -H)
H, 3-CH 3, 3 -CH 3) 1,57 (m, 2 H, NCH 2 CH 2 C H 2) ppm. 13 RMN C ([D 6] DMSO): δ = 174,56 (2
7,68 (m, 2 H, 8-H, 8 -H), 7,51 (m, 2 H, 7-H, 7 -H), 6,66 (t, J b, c =
C, C-2, C-2 ), 173,73 (OCO), 170,29 (2
J c, d = 13,0 Hz, 1 H, cH), 6,37 (d, J a, b = J d, e = 13,0 Hz, 2 H, aH, eH), 4,24 (m, 4 H, NCH 2) 2,80
C, NCO), 149.78 (Cb), 142.70 (C-7a ), 141,93 (C-7a), 140,64 (2 C, C-3a, C-3a ),
(s, 4 H, COC H 2 C H 2 CO), 2.20 (m, 2 H, OCOCH 2) 1,97 (s, 12 H, 1-CH 3, 1 -CH 3) 1,74 (m, 4
128.71, 128.64 (C-6, C-6 ), 125.32, 125.17 (C-5, C5 ), 122.57, 122.47 (C-4, C-4 ),
H, NCH 2 C H 2) 1,57 (m, 2 H, OCOCH 2 C H 2) 1,45 (m, 4 H, NCH 2 CH 2 C H 2) 0,95 (t, J = 7,3 Hz,
111.59, 111.51 (C-7, C-7 ) 103.05,
3 H, CH 2 C H 3) ppm. 13 RMN C ([D 6] DMSO): δ = 174,31, 173,70 (C-2, C-2 ), 168,94
102,42 (Ca, Cc), 48,93 (2 C, C-3, C-3 ), 43,71 (NCH 2) 31,53 (NCH 3) 30.04 (CO C H 2) 27,53
(OCO),
(2 C), 27,33 (2 C) (3-CH 3, 3 -CH 3)
26) 54 (NCH 2 C H 2) , 25) 51 (2 C, CO C H 2 C H 2 CO), 25. 49 (NCH 2 CH 2 C H 2) 24.04 (COCH 2 C H
170.30 (2 C, NCO), 152.87 (2 C, Cb, Cd), 139.76 (2 C, C-3a, C3a ), 133.20 (2 C, C-9b,
ppm. EMAR (MALDI +): calculado. para C 34 H 40 norte 3 O 4+ [ M - Cl] + 554.3013;
2)
C-9b ), 131.33 (2 C, C-5a, C-5a ), 130,34 (2 C, C-5, C-5 ), 129.95 (2 C, C-6, C-6 ),
encontrado 554,3027.
127,77 (2 C, C-8, C-8 ),
2- [3- (3-butil-1,1-dimetil-1,2-dihidrobenzo [ mi] indol-2-ilideno) -1-propenil] 127,64 (2 C, C-9a, C-9a ), 126.16 (Cc), 124.82 (2 C, C-7, C-7 ),
-1,1-dimetil-3- [5- (succinimidooxicarbonil) pentil] -1 H- benzo [ mi] cloruro de indolium 122.09 (2 C, C-9, C-9 ), 111,65 (2 C, C-4, C-4 ), 103.01 (2 C, Ca, Ce), 50.75 (2 C, C-1,
(7b): Compuesto 7b fue preparado a partir de 4b. C-1 ) 43.44 (2 C, NCH 2) 33,54 (CO C H 2)
Rendimiento 7,14 g (98%), espuma violeta oscura. TLC R f = 0,74 [20% de MeOH en CHCl 3 ( v 29,43 ( C H 2 CH 2 CH 3) 27.01 (COCH 2 CH 2 CH 2 C H 2) 26.86 (4 C, 1CH 3, 1 -CH 3) 25,68 (COCH 2 CH
/ v)]. 1 H RMN ([D 6] DMSO): δ = 8,60 (t, J a, b = J b, c = 2 C H 2) 24.27 (COCH 2 C H 2)
13,4 Hz, 1 H, bH), 8,30 (m, 2 H, 9-H, 9 -H), 8.10 (m, 4 H, 5-H, 5 -H, 6-H, 6 -H), 7,80 (m, 22,47 (2 C, NCOCH 2) 19,51 ( C H 2 CH 3) 13,82 (CH 2 C H 3) ppm. EMAR (MALDI +):
2 H, 4-H, 4 -H), 7,69 (m, 2 H, 8-H, 8 - calculado. para C 47 H 52 norte 3 O 4+ [ M - Cl] + 722.3952; encontrado 722,3955.
H), 7,54 (m, 3 H, 7-H, 7 -H, NH), 6.61 (m, 2 H, aH, cH), 4.44 (d, J = 4,6 Hz, 1 H, OH),
4,29 (m, 4 H, NCH 2) 2,79 (s, 4 H, COC H 2 C H 2 CO), 2,71 (t, J = 7.2 Hz, 2 H, COCH 2) 2.02Síntesis de oligodesoxinucleótidos marcados con cianina utilizando reactivos
(s, 12 H, 1-CH 3, 1 -CH 3) 1,88 (m, 4 H, NCH 2 C H 2) 1,67 (m, 2 H, COCH 2 C H 2) 1,48 (m, 4 modificadores
H, de fosforamidita: Fosforamiditas modificadas 6a - re
NCH 2 CH 2 C H 2, C H 2 CH 3) 0,97 (t, J (0.1 • Se usaron soluciones en MeCN) en el último paso de la síntesis de
oligodesoxirribonucleótidos en fase sólida con un tiempo de acoplamiento aumentado a
= 7,3 Hz, 3 H, CH 2 C H 3) ppm. 13 RMN C ([D 6] DMSO): δ = 175,20 (2 C, C-2, C-2 ), 172.767,5 min. Después del ensamblaje, los oligonucleótidos unidos a CPG se trataron con
(OCO), 170.23 (2 C, NCO), 148.59 (Cb), conc. hidróxido de amonio a 4 ° C durante 72 h, evaporado y precipitado de 1 • LiClO 4 ( 100
139,62 (2 C, C-3a, C-3a ), 133,21 (2 C, C-9b, C-9b ), 131.55 (2 C, C-5a, C-5a ), 130,51 µ L) por dilución con acetona (1,5 ml). Los oligonucleótidos se aislaron por HPLC de
(2 C, C-5, C-5 ), 129,98 (2 C, C-6, C-6 ), fase inversa (columna C18) o por electroforesis en desnaturalización al 20% (7 • urea)
127,93 (2 C, C-8, C-8 ), 127,45 (2 C, C-9a, C-9a ), 125,10 (2 C, C- gel de poliacrilamida en tampón Tris-borato (pH 8.3), y desalado usando una columna
7, C-7 ), 122,22 (2 C, C-9, C-9 ), 111.82 (2 C, C-4, C-4 ), 102,12 (2 NAP-10 y un procedimiento de purificación estándar.
C, Ca, Cc), 50,66 (2 C, C-1, C-1 ), 43,92 (2 C, NCH 2) 30.06 (CO C H 2) , 2 9. 5 7 ( C H 2 CH 2 CH
3) , 2 8. 42 (COCH 2 CH 2 -
CH 2 C H 2) , 2 7. 1 7 (4 C, 1 - CH 3, 1 - CH 3) , 2 5. 4 8 (3 C, COCH 2 CH 2 C H 2, CO C H 2 C H 2 CO),
Síntesis de oligodesoxinucleótidos marcados con cianina utilizando la modificación
24.08 (COCH 2 C H 2) 19.60 ( C H 2 CH 3) 13,88 (CH 2 C H 3) ppm. EMAR (MALDI +): calculado.
postsintética con ésteres activados por cianina: Crudo desprotegido 5 -aminoalquil-oligonucleótidos
para C 45 H 50 norte 3 O 4+ [ M - Cl] + 696.3796; encontrado 696,3781.
(de síntesis a escala de 200 nmol) se evaporaron y se disolvieron en 0.1 • tampón de
hidrogenocarbonato de sodio (pH 8,5, 420 µ L) Ésteres activados 7a - d ( 25 m • soluciones en
2- [5- (1,3,3-trimetil-2,3-dihidro-1 H- indol-2-ilideno) -1,3-pentadienil] -3,3-dimetil-1- [5- DMF, 80 µ L, 2 µ mol) se añadieron, las mezclas se agitaron en vórtex y se mantuvieron a
(succinimidooxicarbonil) pentil] -3 H- cloruro de indolium (7c): Compuesto 7c fue 0ºC durante 12 h, y los disolventes se evaporaron. Los conjugados de oligonucleótidos se
preparado a partir de 4c. rendimiento aislaron por precipitación de 1 •
5,93 g (96%), espuma azul oscuro. TLC R f = 0.39 [20% MeOH en CHCl 3 ( v / v)]. 1 H RMN
([D 6] DMSO): δ = 8,33 (t, J a, b = J b, c = J discos compactos LiClO 4 4 seguido de PÁGINA y desalinización como se describe anteriormente.

EUR. J. Org. Chem 2008, 2107–2117 © 2008 Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim www.eurjoc.org 2115

PAPEL COMPLETO
Procedimiento para el etiquetado de proteínas con Cy3 y Cy5: Ésteres activados
7a, c ( 20 µ L de 1.50, 3.75, 7.50 o 15.0 m • Se agregaron soluciones en DMF) (relación
de éster activado de Cy / BSA 0.2, 0.5, 1.0 y 2.0, respectivamente) a 0.15 m • solución
de BSA (1.0 mL, 150 nmol) en 0.2 •
tampón de hidrogenocarbonato de sodio (pH 8,5). Las mezclas se agitaron en vórtex y se
mantuvieron a 0ºC durante 12 h. La proteína marcada se eluyó como una banda coloreada en el
volumen vacío tras la filtración a través de una columna Sephadex G-25. 17]
Información de soporte ( vea también la nota al pie de página en la primera página de este artículo):
Ejemplos de perfiles de HPLC de conjugados crudos ON1b
y ON1c, aislamiento de conjugados ON3a - re utilizando 20% PAGE (escaneo en gel), datos
espectroscópicos MALDI-TOF MS para conjugados de oligonucleótidos, aislamiento de
conjugados de cianina-BSA Cy3-BSA y
Cy5-BSA utilizando cromatografía de exclusión por tamaño (fotos en color).
Expresiones de gratitud
Esta investigación fue apoyada por una subvención de la Fundación Rusa para la
Investigación Básica (RFBR), proyecto 06-04-81019, y la Fundación Bielorrusa para la
Investigación Básica (BFBR), proyecto B06R-
004. Agradecemos a Igor Prokhorenko por sus útiles debates, Stanislav Bondarev por
su ayuda en las mediciones espectrales, Larisa Grusintseva por su asistencia técnica,
Yury Habrus y Maryna Zhilinskaya por la síntesis de oligonucleótidos modificados, y la
Instalación de Espectrometría de RMN del Instituto Shemyakin-Ovchinnikov (registro
no 98-03-08) para registrar espectros de RMN.
[1] BA Armitage, Parte superior. Curr. Chem 2005 253, 55-76. [2] a) S. Weiss, Ciencias 1999, 283,
1676-1683; b) M. Ueda, Y. Sako,
T. Tanaka, P. Devreotes, T. Yanagida, Ciencias 2001, 294, 864–867; c) Y. Sako, T.
Yanagida, Nature Rev. Mol. Célula. Biol. 2003,
4 (Supl.), SS1 – SS5; d) Y. Sako, Mol. Biologia de sistemas 2006,
(56), DOI: 10.1038 / msb4100100. [3] a) JR Lakowicz, Temas en espectroscopía de
fluorescencia, vol. 7:
Tecnología de ADN, Kluwer Academic / Plenum Publishers, Nueva York, 2003; b) I.
Braslavsky, B. Hebert, E. Kartalov, SR Quake, Proc. Natl. Acad. Sci. Estados
Unidos 2003, 100, 3960–3964; C)
EK Lewis, WC Haaland, F. Nguyen, DA Heller, MJ Allen, RR MacGregor, CS
Berger, B. Willingham, LA Burns, GBI Scott, C. Kittrell, BR Johnson, RF Curl,
ML Metzker, Proc. Natl. Acad. Sci. Estados Unidos 2005 102, 5346– 5351; d) N.
Griesang, K. Gießler, T. Lommel, C. Richert, De nuevo. Chem En t. Ed. 2006, 45, 6144–6148.
AG Lugade, N. Narayanan, DR Draney, Patente de EE. UU. Appl. 2006/0063247, 2006
[4] a) D. Gerion, F. Chen, B. Kannan, A. Fu, WJ Parack, DJ
Chen, A. Majumdar, AP Alivisatos, Anal. Chem 2003, 75,
4766–4772; b) MJ Hessner, VK Singh, X. Wang, S. Khan,
MR Tschannen, TC Zahrt, BMC Genomics 2004, 5, 12; C)
YCM Staal, MHM van Herwijnen, FJ van Schooten,
JHM van Delft, BMC Genomics 2005 6, 101; d) PK Wolber, PJ Collins, AB Lucas,
A. De Witte, KW Shannon,
Métodos Enzymol. 2006, 410, 28–57; e) J.-B. Fan, KL Gunderson, M. Bibikova,
JM Yeakley, J. Chen, E. Wichkam García, LL Lebruska, M. Laurent, R. Shen, D.
Barker, Métodos Enzymol. 2006, 410, 57-73; f) J. Hager, Métodos Enzymol.
2006, 410, 135-168; g) T.-F. Chan, C. Ha, A. Phong, D. Cai,
E. Wan, L. Leung, P.-Y. Kwok, M. Xiao, Acidos Nucleicos Res.
2006, e113; h) C. Consoladi, M. Severgnini, B. Castiglioni, R. Bordoni, A. Frosini,
C. Battaglia, LR Bernardi, G. De Bellis,
Bioconjugate Chem. 2006, 17, 371–377; i) CR Sabanayagam,
JR Lakowicz, Acidos Nucleicos Res. 2007, e13; j) P. Jaluria, K. Konstantopoulos,
M. Betenbaugh, J. Shiloach, Microb. Célula Fábricas 2007, 6, 4)
[5] a) AK Tong, Z. Li, D. Dick, GS Jones, JJ Russo, J. Ju,
Nature Biotechnol. 2001, 19, 756–759; b) MK Johansson, H. Fidder, D. Dick, RM
Cook, Mermelada. Chem Soc. 2002, 124,
6950-6956.
2116 www.eurjoc.org © 2008 Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim
VV Shmanai, VA Korshun y col.
[6] a) YB Yurov, IV Soloviev, SG Vorsanova, B. Marcais, G.
Roizes, R. Lewis, Tararear. Gineta. 1996, 97, 390-398; b) E. Schrök,
S. du Manoir, T. Veldman, B. Schoell, J. Wienberg, MA Ferguson-Smith, Y. Ning,
DH Ledbetter, I. Bar-Am, D. Soenksen, Y. Garini, T. Ried , Ciencias 1996, 273, 494-497;
c) HJ Tanke, J. Wiegant, RP van Gijlswijk, V. Bezrookove, H. Pattenier, RH
Heetebrij, EG Talman, AK Raap, J. Vrolijk,
EUR. J. Hum. Gineta. 1999, 7, 2–12. [7] a) X. Zhuang, LE Bartley, HP Babcock, R.
Russell, T. Ha,
D. Herschlag, S. Chu; Ciencias 2000, 288, 2048-2051; b) X. Zhuang, H. Kim, MJB
Pereira, HP Babcock, NG Walter,
S. Chu, Ciencias 2002, 296, 1473-1477; c) G. Bokinsky, D. Rueda, VK Misra, MM
Rhodes, A. Gordus, HP Babcock,
NG Walter, X. Zhuang, Proc. Natl. Acad. Sci. Estados Unidos 2003,
100, 9302–9307; d) E. Tan, TJ Wilson, MK Nahas, RM Clegg, DMJ Lilley, T. Ha, Proc.
Natl. Acad. Sci. Estados Unidos 2003,
100, 9308–9313; e) MC Murphy, I. Rasnik, W. Cheng, TM Lohman, T. Ha, Biophys
J. 2004, 86, 2530-2537; f) LS Churchman, Z. Ökten, RS Rock, JF Dawson, JA
Spudich,
Proc. Natl. Acad. Sci. Estados Unidos 2005 102, 1419–1423; g) SA Mc- Kinney, ADJ
Freeman, DMJ Lilley, T. Ha, Proc. Natl. Acad. Sci. Estados Unidos 2005 102, 5715–5729;
h) M. Gruber, B. Wetzl,
B. Oswald, J. Enderlein, OS Wolfbeis, J. Fluoresc. 2005 15,
207–214. [8] a) J. Liu, Y. Lu, Mermelada. Chem Soc. 2002, 124, 15208-15216; si)
E. Haustein, M. Jahnz, P. Schwille, ChemPhysChem 2003, 4,
745–748; c) S. Hohng, C. Joo, T. Ha, Biophys J. 2004, 87,
1328-1337; d) J.-P. Clamme, AA Deniz, ChemPhysChem
2005 6, 74-77; e) P. Tinnefeld, M. Heilemann, M. Sauer,
ChemPhysChem 2005 6, 217–222. [9] a) Cepillo CK, ED Anderson, patente de
EE.UU. 5556959, 1996; si)
GM Little, R. Raghavachari, N. Narayanan, HL Osterman, Patente de EE. UU. 6027709, 2000;
c) AS Waggoner, patente de EE.UU. 6048982,
2000; d) AL Hamilton, RM West, WJ Cummins, MSJ Briggs, IE Bruce, patente de
EE.UU. 6140494, 2000; e) AS Waggoner, patente de EE.UU. 6225050, 2001; f) MP
Reedy, F. Farooqui, MA Michael, Pat. 6331632, 2001; g) G. Caputo, LD Ciana,
patente de EE.UU. 6448008, 2002; h) N. Narayanan, patente de EE.UU. 6593148,
2003; i) SM Menchen, SC Benson, BB Rosenblum, SH Khan, Patente de EE. UU.
6716994, 2004; j) G. Caputo, LD Ciana, patente de EE.UU. 6740755, 2004; k) AS
Waggoner, patente de EE.UU. 6956032, 2005;
l) AS Waggoner, patente de EE.UU. 6989275, 2006; m) AG Lugade,
N. Narayanan, DR Draney, Patente de EE. UU. 6995274, 2006; n) AS Waggoner, patente
de EE.UU. 7008798, 2006; o) AG Lugade, N. Narayanan, DR Draney, patente de EE.UU.
Appl. 2004/0014981, 2004; p) T. Carter, M. Reddington, patente de EE.UU. Appl.
2005/0124833, 2005; q)
[10] MV Kvach, SV Gontarev, IA Prokhorenko, IA Ste-
panova, VV Shmanai, VA Korshun, Russ Chem Toro. En t. Ed. 2006, 55, 159-163.
[11] AM Morocho, VN Karamyshev, NN Polushin, Bioconjug-
comió Chem. 2004, 15, 569-575.
[12] MV Kvach, DA Tsybulsky, AV Ustinov, IA Stepanova,
SL Bondarev, SV Gontarev, VA Korshun, VV Shmanai,
Bioconjugate Chem. 2007, 18, 1691-1696. [13] a) BH Meyer, KL Martínez, J.-M.
Segura, P. Pascoal, R.
Hovis, N. George, K. Johnsson, H. Vogel, FEBS Lett. 2006,
580, 1654-1658; b) RK Gawalapu, DD Root, Arco. Bioquímica. Biophys 2006, 456, 102-111;
c) C. Bouteiller, G. Clavé,
A. Bernardin, B. Chipon, M. Massonneau, P.-Y. Renard, A. Romieu, Bioconjugate
Chem. 2007, 18, 1303-1317. [14] a) R. Marouga, S. David, E. Hawkins, Anal. Bioanal
Chem
2005 382, 669–678; b) M. Ünlü, ME Morgan, JS Minden,
Electroforesis 1997, 18, 2071-2077; c) R. Tonge, J. Shaw, B. Middleton, R.
Rowlinson, S. Rayner, J. Young, F. Pognan, E. Hawkins, I. Currie, M. Davison, Proteómica
2001, 1, 377–396. [15] a) LA Ernst, RK Gupta, RB Mujumdar, AS Waggoner,
Citometría 1989, 10, 3–10; b) RB Mujumdar, LA Ernst,
SR Mujumdar, AS Waggoner, Citometría 1989, 10, 11-19;
EUR. J. Org. Chem 2008, 2107–2117
Una síntesis conveniente de tintes de cianina

c) PL Southwick, LA Ernst, EW Tauriello, SR Parker, [22] EA Borisevich, VN Knyukshto, AN Kozyrev, KN.

RB Mujumdar, SR Mujumdar, HA Clever, AS Waggoner, Citometría 1990, 11, 418-430; lov'ev Optar. Spectrosc. 1993, 74, 129-135. [23] RL Hinman, J. Lang. Tetrahedron
d) RB Mujumdar, LA Ernst, SR Mujumdar, CJ Lewis, AS Waggoner, Bioconjugato Lett. 1960 42, 12-15. [24] Q.-C. Wang, D. Qu, J. Ren, L. Xu, M. Liu, H. Tian, Tintes
Chem. 1993, 4, 105-111. [16] http://www.glenres.com

Pigmentos 2003, 59, 163-172. En este informe compuesto 2b se preparó en butanol,

luego se lavó con etanol y se secó. Por lo tanto, el producto puede contener butanol
[17] Para obtener detalles adicionales, consulte la Información de soporte. [18] La síntesis de
o etanol residual como solvato o humedad.
un NORTE-( 6-aminohexanoil) hidroxiprolinol-
fosforamidita basada en la preparación de oligonucleótidos modificados con
[25] a) T. Hirata, H. Kogiso, K. Morimoto, S. Miyamoto, H. Taue,
amino se describirá en otra parte. [19] P. Jing, T. Kaneta, T. Imasaka, Electroforesis
S. Sano, N. Muguruma, S. Ito, Y. Nagao, Bioorg. Medicina. Chem
2002, 23, 2465–
1998, 6, 2179–2184; b) B. Chipon, G. Clave, C. Bouteiller, M. Massonneau, P.-Y.
2470.
Renard, A. Romieu, Tetrahedron Lett. 2006,
[20] W. Bannwarth, A. Trzeciak, Helv. Chim Acta 1987, 70, 175–
47, 8279–8284.
186
Recibido: 17 de diciembre de 2007
[21] MH Caruthers, AD Barone, SL Beaucage, DR Dodds,
Publicado en línea: 28 de febrero de 2008
EF Fisher, LJ McBride, M. Matteucci, Z. Stabinsky, J.-Y. Espiga, Métodos
Enzymol. 1987, 154, 287-313.

EUR. J. Org. Chem 2008, 2107–2117 © 2008 Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim www.eurjoc.org 2117

Ver estadísticas
estadísticas de publicación
de publicación Ver