AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS EN ALIMENTOS

INTRODUCCIÓN.

En la naturaleza, los microorganismos se encuentran formando poblaciones

mixtas con otros tipos de microorganismos. Los cultivos de estas mezclas se
llaman por ello cultivos mixtos.

Sin embargo, el conocimiento de los microorganismos se consigue mediante el

estudio de cepas aisladas, cultivadas en el laboratorio en cultivos puros (o
axénicos). En ocasiones el estudio molecular conduce a la caracterización de
los microorganismos, aún en poblaciones mixtas. Sin embargo la identificación
bacteriana y la caracterización completa solo son posible tras el aislamiento de
la bacteria y la obtención de cultivos puros.

Por ello el primer problema al estudiar una bacteria es su aislamiento del resto
de los microorganismos presentes (en una muestra patológica, de agua, de
suelo, de alimentos, etc.). Una vez que se ha logrado el aislamiento es posible
obtener la bacteria de interés en cultivo puro.

Para ello se toma una pequeña cantidad de muestra con un asa de platino y se
reparte sobre la superficie del medio de cultivo. Sobre el medio quedan
separadas e inmovilizadas las células bacterianas.

Tras la incubación en condiciones adecuadas, cada célula viable origina una

colonia visible resultado de sucesivas divisiones celulares. Cada colonia
bacteriana tiene unas características determinadas en cuanto a su forma,
borde, elevación, tamaño, consistencia, etc.

Por lo tanto el objetivo de la práctica es reconocer las técnicas de aislamiento

para obtener cultivos puros, ya sea por estría simple o compuesta
OBJETIVOS:

 Explicar el fundamento de diferentes medios de cultivo y condiciones de

incubación para el aislamiento de microorganismos con características
específicas.
 Aplicar diferentes técnicas para el aislamiento de microorganismos.

 Comparar con cepas de referencia la eficiencia de las técnicas de siembra,

medios de cultivo y condiciones de incubación empleadas para el
aislamiento de microorganismos.

 Obtener y comprobar la pureza de los cultivos aislados.

 Aplicar una técnica de conservación de corto o mediano plazo a los cultivos

puros obtenidos.
FUNDAMENTOS TEÓRICOS:

AISLAMIENTO.- Es la separación de un determinado microorganismo del resto

de microorganismos que le acompañan. El método más usual es la siembra por
estría sobre un medio de cultivo sólido adecuado dispuesto en una placa de
Petri.

CULTIVO.- En biología, y específicamente en microbiología, un cultivo es un

método para la multiplicación de microorganismos, tales como bacterias,
hongos y parásitos, en el que se prepara un medio óptimo para favorecer el
proceso deseado.

CULTIVO PURO.- La mayor parte de los estudios que se realizan sobre

bacterias requieren que cada cepa bacteriana esté aislada de los restantes
microorganismos que puedan acompañarla.

Este aislamiento es un paso básico antes de emprender algún estudio serio

con bacterias en el laboratorio. Se logra mediante técnicas sencillas de siembra
en medios sólidos a partir de una mezcla bacteriana.
El objetivo es, que tras la incubación de dicho medio así inoculado, aparezcan
colonias separadas, cada una de las cuales procede de una sola bacteria
correspondiente a una determinada cepa de las presentes en la mezcla
original.
A partir de cada colonia de cada tipo presente en ese medio sólido se puede
aislar la cepa correspondiente, obteniéndose un cultivo puro.

CRITERIOS PARA LA DIFERENCIACIÓN DE COLONIAS.- El aspecto de las

colonias, su coloración, tamaño, etc. permiten diferenciar diferentes bacterias,
aunque son propiedades generales muy influenciadas por las condiciones de
cultivo, por lo que a continuación se realiza una descripción muy general.
Las colonias pueden ser opacas, translucidas o transparentes.

Algunas producen pigmentos fluorescentes cuando se iluminan con luz

ultravioleta. Otras aparecen con superficie pulverulenta, otras son lisas, o
rugosas, o poseen anillos concéntricos. En ocasiones el olor es también
característico.

RESUMEN

En esta práctica se reconocerá y aprenderá las técnicas de inoculación de

microorganismos, en las que se aislara hasta conseguir un cultivo puro, por
medio de inoculación por estría simple y compuesta, siguiendo el
procedimiento aprendido en el laboratorio de microbiología

MATERIAL Y MÉTODOS

Para realizar esta práctica se utilizaron elementos como:

 Agar nutritivo
 Cajas Petri
 Una autoclave
 Incubadora
 Cámara de flujo laminar
 Asa bacteriológica
 Mechero
 Cinta masking
 Marcador para CD.
Se elabora el medio de cultivo, en este caso es agar nutritivo, que después de
prepararlo, se llevan los envases al autoclave, en donde serán esterilizados, a
una temperatura de 115°C a 15 minutos.
Una vez realizado el proceso de esterilización, se retiran los frascos de la
autoclave, y se los lleva a la cámara de flujo laminar, en donde se realiza el
traspaso del medio de cultivo a las diferentes cajas Petri, lo cual se lo realiza
colocándose alcohol en las manos para eliminar las bacterias de nuestras
manos y de esta manera no contaminar nuestro medio.

Realizado este procedimiento, utilizamos el asa bacteriológica, la cual primero

esterilizamos, ya que la colocamos en la llama del mechero hasta que esta
tome un color rojo, y sin soltar el asa la agitamos dentro de la cámara para
enfriarla y para que esta no derrita el agar solidificado.

Cogemos con el asa un microorganismo presente en una muestra y la

sembramos en forma de zigzag en nuestra caja Petri que tiene una división por
la mitad, realizado esto, volvemos a esterilizar el asa, cogemos nuevamente el
microorganismo, y lo sembramos de la misma manera en la otra mitad de la
caja Petri, siendo esta una inoculación por estría simple.

Para realizar la inoculación por estría compuesta, se utiliza el procedimiento

anterior, solo que para esta, no utilizamos una caja Petri con división o bi-Petri
sino un mono-Petri, en el que igualmente, esterilizamos el asa, cogemos el
microorganismo y lo sembramos en un extremo de la caja haciendo estrías
rectas, pero el asa no debe romper el agar; esterilizamos nuevamente, pero
esta vez no cogemos al microorganismo, sino que volvemos a realizar el
estriado en el extremo adyacente de la caja, haciendo que estas formen un
ángulo recto.

Este procedimiento lo realizamos tres veces en la misma caja y se termina con

una estríaen zigzag. Terminado el proceso de inoculación en las cajas Petri,
rotulamos y diferenciamos en cuál de ellas se realizó una inoculación
compuesta y una simple, seguido de nuestro nombre y la fecha.
Finalizado el proceso de rotulación llevamos las cajas Petri, en filas con la tapa
hacia abajo, formando paquetes, los cuales serán sujetados con cinta masking,
y llevados hacia la incubadora (BLUE M), para que estos microorganismos
sembrados por estas dos técnicas de aislamiento puedan desarrollarse, ya que
pasada una semana podamos observar si la inoculación que se realizo fue
hecha correctamente.

Resultados

La inoculación por estría simple

(Fig.N°1) es una técnica de siembra de
microorganismo que consiste en realizar
con el asa esterilizada y con muestra
del microorganismos unos líneas en
forma de zigzag de forma decreciente,
mediante esta técnica se observa la
formación de colonias de la muestra, se
puede diferenciar los colores y hasta
forma de las colonias.

FIGURA N°1: Inoculación por estría

simple

Otro de los métodos más utilizados es

la inoculación por estría compuesta
(Fig. N°2) que consiste en inocular
sobre un extremo de la placa con el asa
y se extiende formando estrías sobre la
superficie en varios sentidos, cada
célula asilada se multiplicará formando
una colonia independiente, cada colonia
representa un cultivo puro

FIGURA N°2: Inoculación por estría

compuesta
CULTIVOS:

 Cultivo axenico.- Un cultivo axénico o puro es aquel que contieneun sólo

tipo de microorganismo y que procedegeneralmente de una sola célula; el
crecimientode ésta origina, en medio sólido, una masa decélulas fácilmente
visible que recibe el nombre de colonia.

 Cultivo tipo.- Es el conjunto de cultivos de microorganismos, desarrollados

y almacenados en laboratorios para su comercialización.

 Cepa.- Es el conjunto de virus, bacterias u hongos que tienen el mismo

patrimonio genético.

¿Cómo se forma una colonia bacteriana?

En microbiología, las colonias son amontonamientos de un mismo tipo de

microorganismo. Los microorganismos se dividen y crean nuevas versiones de
ellos mismos. Estos organismos permanecen juntos, si bien algunas fuerzas
pueden transportarlos a otros lugares donde pueden formar colonias. Los que
forman colinas son las bacterias, los hongos y los protozoos.

Las culturas bacterianas abarcan varios tipos de bacterias, y las colonias puras
son poco comunes. Usualmente, se forman solo bajo condiciones artificiales.

Las nuevas colonias comienzan cuando una parte de la colonia se separa y el

viento la traslada a una nueva superficie. Cuando la superficie conduce al
crecimiento, el organismo crece y se reproduce.

Algunos organismos, como los hongos, producen estructuras diseñadas para

enviar esporas al aire. Si bien los microorganismos son invisibles al ojo, las
colonias podrías verse.
Cuando se producen pigmentos, la superficie colonizada por estos
microorganismos se tiñe.
Las colonias se pueden ver suaves y brillantes o secas y rugosas. Los bordes
pueden ser irregulares o suaves, dependiendo de la especie. El crecimiento de
bacterias depende de la disponibilidad de nutrientes. Las superficies
semisólidas tendrán más nutrientes que las sólidas. Por lo tanto, los
microorganismos crecen en patrones ondeantes en las semisólidas.

A veces, los microorganismos segregan químicos que comunican con otros

microorganismos, lo que les hace saber que tienen que migrar en una dirección
en particular porque hay alimento. Las colonias bacterianas se mueven usando
flagelo, una extensión de su membrana. Las bacterias helicoidales rotan como
espiral. Algunas tienen una baba que las ayuda a desplazarse.

En ambientes líquidos, las bacterias tienen más movilidad. Las bacterias solo
se mueven con otras bacterias y a veces se mueven en forma organizada para
expandir más su colonia.
Conclusiones

En esta práctica se reconoció las técnicas de aislamiento para obtener cultivo

puros, mediante estriado simple y compuesto, puesto que las bacterias, hongos
y levaduras han sido microorganismos muy estudiados en las últimas décadas
por lo que se ha hecho necesario cultivarlos.

Resulta de forma indispensable conocer como cultivarlos para de esta forma

realizar un posterior análisis de acuerdo a las necesidades del investigador, por
lo que en la presente práctica se aprendió los diferentes métodos de cultivo
analizando la estría simple que es una inoculación en zigzag tomada de la
muestra patrón y que después de ser incubada permitió su posterior análisis.

Observando la formación de colonias de la misma forma en la que se sembró,

mientras que en la inoculación por estría compuesta se diferencia una muestra
con líneas perpendiculares que va disminuyendo su concentración en cuanto
se fueron realizando las estrías ya que los organismos fueron tomados de la
estría anterior y se siguieron realizando las demás estrías terminando con una
estría simple.

Esta que permitió obtener la menor concentración de los microorganismos, una

de las observaciones más importantes que se analizó al momento de sembrar
fueron los cuidados y manejo de materiales de siembra puesto que el asa debió
ser enfriada correctamente y se desinfectó el asa a cada momento para evitar
errores como contaminación e incluso causar un rompimiento en el agar
BIBLIOGRAFÍA:

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