ANÁLISIS DE BILIRRUBINAS UTILIZANDO PRUEBAS BIOQUÍMICAS

González Ortega, M1. Niño Hernández, A1. Suarez Cruces, Y1.

1. Estudiantes de bioquímica médica, Medicina, Facultad ciencias de la salud,

Universidad Pedagógica y Tecnológica de Colombia.

RESUMEN

El objetivo de esta práctica de laboratorio fue analizar los niveles de bilirrubinas de

un grupo pequeño de personas, haciendo uso de pruebas bioquímicas. Para la
realización de dichas pruebas se tomaron muestras de sangre a los pacientes, las
cuales se centrifugaron posteriormente, ya que para estas realizar dicho
procedimiento se utilizó el suero sanguíneo, para el análisis bioquímico se
utilizaron kits de BioSystems especiales para cada una de los procedimientos y
para la lectura de las absorbancias se utilizó un fotómetro. En cuanto a los
resultados se reportan valores dentro de los rangos normales, un poco bajos, para
algunos casos, pero en general están dentro de parámetros normales. Finalmente
se concluyo acerca de la importancia de las pruebas para el análisis de las
bilirrubinas, ya que desordenes en estos productos de degradación de la
hemoglobina pueden conllevar a la aparición de diferentes signos como la ictericia
que se asocia a patologías como la colestasis, que pueden comprometer de
manera significativa a salud del paciente o incluso llevarlo a la muerte en los casos
más graves, de ahí la importancia del diagnóstico temprano de estas alteraciones.
PALABRAS CLAVE: Bilirrubina, Colestasis, Hemoglobina, Ictericia.

ABSTRACT
The objective of this laboratory practice was to analyze the bilirubin levels of a
small group of people, making use of biochemical tests. To perform these tests
blood samples were taken from the patients, which were subsequently centrifuged,
since blood samples were used for these procedures, for the biochemical analysis
special BioSystems kits were used for each of the procedures and a photometer
was used to read the absorbances. Regarding the results, values are reported
within the normal ranges, a little low, for some cases, but in general they are within
normal parameters. Finally, we concluded about the importance of the tests for the
bilirubin analysis, since disorders in these degradation products of hemoglobin can
lead to the appearance of different signs such as jaundice that is associated with
pathologies such as cholestasis, which can Significantly compromise the patient's
health or even lead to death in the most serious cases, hence the importance of
early diagnosis of these alterations.

KEYWORDS: Bilirubin, Cholestasis, Hemoglobin, Jaundice

INTRODUCCION
La bilirrubina es producto de la
degradación de la hemoglobina en el
sistema retículo endotelial, la cual es
transportada al hígado unida a
albúmina (1), esta se considera una
sustancia fundamental como
antioxidante y antiinflamatoria,
además gracias a su capacidad de
neutralizar radicales libres evita la
peroxidación de los lípidos y hay
evidencia de que posee efectos
protectores cardiovasculares,
neuronales, hepatobiliares,
pulmonares e inmunológicos (2).
El metabolismo normal de los
pigmentos biliares comprende varias
etapas como lo son: formación de la
bilirrubina, su transporte desde el
plasma a las células hepáticas, su
conjugación, su transporte desde las
células hepáticas a los canalículos
biliares y, finalmente, su excreción
(3).
Diariamente se producen
aproximadamente 4 mg de bilirrubina
por kilogramo de peso, a partir de
moléculas que contienen hem, el cual
está presente en la hemoglobina de
los glóbulos rojos y otras
hemoproteínas como citocromos,
catalasas, peroxidasa y triptófano
pirrolasa (2), esta puede formarse en
cualquier sitio del organismo en el
que haya liberación de hemoglobina
como el sistema reticuloendotelial de
la médula ósea, bazo, hígado (células
de Kupffer) y algunos ganglios
linfáticos sin embargo también se
puede formar en caso de hematomas,
infartos, derrames en la pleura,
peritoneo, líquido cefalorraquídeo (3).
En estados patológicos la cantidad de
bilirrubina no procedente del eritrocito
viejo es mayor al 40% , por ejemplo
en enfermedades como la anemia
perniciosa, anemia de células
falciformes, talasemia, anemia
aplástica, protopoporfiria
eritropoyética, incluso puede llegar a
un 80% en estados graves (3).
En el proceso metabólico de la
bilirrubina, en primer lugar se da la
descarboxilación oxidativa del puente
alfameteno de la hemoglobina, lo que
hace que se abra el anillo porfirínico y
se forma un complejo de proteína y
pigmento de color verde llamado
coleglobina, luego se eliminan el
hierro y la globina y queda una
cadena lineal de cuatro pirroles,
llamada biliverdina la cual se reduce
y se convierte en bilirrubina, la
bilirrubina, que es insoluble en el
agua, pasa al plasma, donde se une
a una proteína, este tipo de
bilirrubinas se conoce con los
nombres de bilirrubina indirecta,
bilirrubina libre o hemobilirrubina (3).
Esta bilirrubina, es insoluble en agua
y es conjugada en el hígado con
ácido glucurónico, siendo excretada
hacia el intestino por vía biliar, donde
es metabolizada por la flora
bacteriana (1). La concentración de la
bilirrubina en el plasma es de 0.5 a
1.0 mg por 100 mI (3). La bilirrubina
indirecta o libre, se encuentra elevada
por causas pre-hepáticas, tales como decoloración total (acolia) o parcial
enfermedades hemolíticas, o bien (hipocolia) de las heces (4).
problemas metabólicos intra-
Finalmente encontramos la bilirrubina
hepáticos que involucran el proceso
total, la cual corresponde a la suma
de conjugación (1). Al ser liposoluble,
de la bilirrubina indirecta o libre, y la
se deposita en la piel y en las
bilirrubina conjugada o directa, sus
mucosas, pero no puede filtrarse por
valores normales están en el rango
el riñón; por este motivo, cuando se
de 0,3 a 1,9 mg/dl. Un aumento en la
eleva su concentración plasmática no
bilirrubina total es producto de una
se observa coluria (4) En neonatos es
obstrucción en la vía biliar; hepatitis;
importante el control de la
cirrosis; enfermedad hemolítica y
bilirrubinemia, ya que la bilirrubina
algunas deficiencias enzimáticas
indirecta o libre es neurotóxica (1).
hereditarias (1).
Siguiendo con el metabolismo de la
La mayoría de los métodos utilizados
bilirrubina, ya en el interior de las
para la determinación de bilirrubina
células hepáticas, la bilirrubina, ya
utilizan ácido sulfanílico diazotizado,
separada de la albúmina, es
formándose azobilirrubina coloreada,
transformada mediante procesos de
sin embargo se debe tener en cuenta
conjugación en compuestos
que en medio acuoso sólo reacciona
hidrosolubles. Esta transformación es
la bilirrubina conjugada o directa. En
necesaria para que la bilirrubina
presencia de ácido sulfanílico
pueda ser excretada a través de la
diazotizado, los glucurónidos de
bilis, esta recibe el nombre de
bilirrubina reaccionan, formándose
bilirrubina directa o bilirrubina con·
azobilirrubina que en pH ácido
jugada, normalmente no existe en el
presenta un rango de absorción a 560
suero ni en la orina, ya que es
nm. La azobilirrubina formada es
excretada íntegramente a la bilis, sus
medida fotométricamente entre 540 y
valores normales se encuentran entre
600nm, siendo la intensidad del color
0 a 0,3 miligramos por decilitro
formado directamente proporcional a
(mg/dl).  (3).
la cantidad de bilirrubina directa
La bilirrubina conjugada es presente en la muestra (1).
hidrosoluble, y por lo general se
deposita en la piel, la esclerótica, el
velo del paladar y los vasos MARCO TEORICO
sanguíneos, y se filtra por el riñón.
La ictericia es una coloración
Por ello, en caso de
amarillenta de piel, escleras y
hiperbilirrubinemia conjugada
mucosas por aumento de la
aparece coluria. En caso de
bilirrubina y su acumulación en los
obstrucción biliar completa o
tejidos corporales. Se aprecia
incompleta se observa una
clínicamente cuando la bilirrubina
sérica es superior a 2 mg/dl, en niños
o mayor de 5 mg/dl en neonatos. Este
incremento puede producirse en base
al aumento de la fracción indirecta no
conjugada o a la fracción directa
conjugada de la bilirrubina (5).
La ictericia es un signo relevante en
la etapa neonatal, esta se debe a la
producción excesiva de bilirrubina lo
que propicia una situación peligrosa
que puede conllevar a grandes
riesgos de afectar funciones
importantes (6).
Del 60% a 80% de los recién nacidos
desarrollan ictericia y entre 1:2500 a
1:5000 nacidos vivos desarrollan
colestasis, que es un proceso en el
que existe disminución del flujo biliar,
lo que se refleja en depósitos de
pigmentos biliares en los hepatocitos
y conductos biliares, y aumento de la
concentración sérica de los productos
excretados en la bilis. La causa de la
colestasis es una alteración de la
formación de bilis por el hepatocito o
la obstrucción del flujo en la vía biliar
intrahepática o extrahepática, lo que
siempre indica algún proceso
patológico (7).
Si el lugar donde radica esta
alteración es el hepatocito o las vías
biliares situadas en el interior del
parénquima hepático, la colestasis
recibe el nombre de intrahepática,
que se caracteriza por la reducción
del flujo biliar; por el contrario, si la
obstrucción es posterior a la salida de
las vías biliares del hígado recibe el
nombre de extrahepática, que
consiste en una obstrucción parcial o
total de las vías biliares
extrahepáticas que impiden el paso
de la bilis hasta el duodeno (4).
La hiperbilirrubinemia neonatal es un
fenómeno biológico que ocurre
comúnmente en los recién nacidos,
como resultado de un desequilibrio
entre la producción y la eliminación
de la bilirrubina, entre los factores de
riesgo se pueden producir la
hiperbilirrubinemia neonatal
agravada: hipoglucemia,
medicamentos suministrados a la
madre, extravasaciones sanguíneas,
ayunos prolongados, plétora
sanguínea, entre otras (8).
Otra patología a tener en cuenta en
neonatos es la del síndrome del bebe
bronceado que es una rara discromía
que se presenta como complicación
de la fototerapia en recién nacidos
con ictericia neonatal. El fenotipo
clásico del síndrome se presenta en
neonatos con hiperbilirrubinemia
directa secundaria a colestasis
sometidos a fototerapia, aunque
también se han reportado casos
durante el tratamiento de la
hiperbilirrubinemia indirecta por
inversión de su patrón, e incluso, en
casos secundarios a leves
elevaciones de la bilirrubina directa o
hiperbilirrubinemia indirecta aislada
(9)
Dependiendo del tipo de bilirrubina
(conjugada o no conjugada) que este
causando la ictericia, se pueden
presentar diferentes patologías (4),
Cuando hablamos de ictericias
provocada por el aumento de
bilirrubina no conjugada, podemos
encontrarnos con patologías como el
síndrome hemolítico, eritropoyesis
ineficaz, la enfermedad de Crigler-
Najjar la cual aparece como
consecuencia de un déficit muy
acusado de glucuroniltransferasa
(enzima responsable de la
conjugación de la bilirrubina) que
puede ser absoluto (enfermedad de
Crigler-Najjar tipo I) o parcial
(enfermedad de Crigler-Najjar tipo II)
y el síndrome de gilbert (4); también
se ha encontrado que el aumento en
este tipo de bilirrubinas está
relacionado con la esquizofrenia, las
evidencias de dicha hipótesis están
relacionadas con los hallazgos
encontrados en pacientes
esquizofrénicos los cuales presentan
una correlación positiva entre los
niveles de bilirrubinas no conjugadas,
y los síntomas positivos y negativos
(10).
Por otro lado encontramos los casos
en los cuales la alteración se
encuentra en las bilirrubinas
conjugadas, entre las patologías más
frecuentes en este caso está el
síndrome de Dubin Jhonson,
síndrome de rotor y colestasis (4).
Tambien se pueden presentar
ictericias mixtas, cuya causa es una
lesión hepatocelular en la que se
alteran de forma simultánea varios
pasos del metabolismo de la
bilirrubina en el interior de la célula
hepática. Así, se pueden alterar la
captación, conjugación y excreción de
la bilirrubina, por lo que se produce
un aumento de bilirrubina conjugada
y no conjugada, estos pacientes
suelen presentar un valor de las
transaminasas superior a diez veces
el valor normal y una moderada
elevación de las enzimas de
colestasis. Las causas más
frecuentes de lesión hepatocelular
aguda son las hepatitis víricas o
tóxicas (4).
La hepattis B por ejemplo, presenta
una alteración hepatocelular con
alteración de las funciones
metabólicas hepáticas; los pacientes
tienen compromiso en la homeostasis
de la glucosa, incrementando la
producción de lactato, también se
suele afectar en la síntesis de los
factores de coagulación y reducción
de la capacidad para eliminar
medicamentos, toxinas y bilirrubinas,
por consiguiente, los pacientes
desarrollan coagulopatía,
hipoglucemia y acidosis, lo cual
incrementa el riesgo de sangrado
gastrointestinal, crisis convulsivas y
disfunción del miocardio (11).
MATERIALES Y METODOS.
MATERIALES:
 Torundas con alcohol
 Tubos al vacío vacutainer tapa
amarilla
 Agujas de Venojet
  Camisa para el tubo vacutainer
 Tubos de ensayo
 Pipetas
 Centrifuga
 Espectrofotómetro
 Kit Byosistems para bilirrubina
total y directa.
METODOLOGIA BILIRRUBINA
 Procedimiento para la
extracción de la muestra.
Para la realización de esta
práctica se realiza en primer FIGURA 1. Muestras de
lugar la extracción de sangre sangre centrifugadas para la
con tubos vacutainer tapa obtención del suero.
amarilla, agujas Venojet y la
camisa para el tubo vacutainer. 2. Continuando con el proceso se
La muestra es obtenida por el preparan 4 tubos de ensayo
método de punción venosa. para cada muestra los cuales
Son extraídas y posteriormente son marcados respectivamente
procesadas cuatro muestras. como: blanco para bilirrubina
directa, bilirrubina directa,
 Prueba de bilirrubina blanco para bilirrubina total y
1. Las muestras obtenidas bilirrubina total. (Figura 2)
anteriormente son
centrifugadas a 3.500 rpm
durante 10 minutos, para
obtener del suero sanguíneo
(Figura 1).

FIGURA 2. Tubos de ensayo

respectivamente marcados.
3. Se utiliza el kit de Byosistems
para bilirrubina directa y total
(Figura 3), el cual contiene:
 Reactivo AD y BD (para
bilirrubina directa). (Figura 3)
 Reactivo AT Y BT (para
bilirrubina total). (Figura 4)
FIGURA 3. Kit de Byosistems
para bilirrubina directa y total.
FIGURA 4. AT
bilirrubina (total) 40 ml y
BT bilirrubina (total) 10
ml.
Figura 5. AD bilirrubina
(directa) 40 ml y BD
bilirrubina (directa) 10
ml
4. Se pipetean los blancos y
reactivos (Figura 6) de tal
manera que:
 Blanco de la bilirrubina total:
800 micro litros de AT.
 Bilirrubina Total: 800 micro
litros de At y 200 micro litros
de BT.
 Blanco de la bilirrubina
directa: 800 micro litros de
AD.
 Bilirrubina directa: 800 micro
litros de AD y 200 micro litros
de BD.
 FIGURA 6. Proceso de Figura 8. Tubos de ensayo con el
pipeteado de los blancos y suero y los respectivos blancos y
reactivos para la realización de reactivos a temperatura ambiente.
la prueba.
7. Finalmente, se llevan las
muestras al espectrofotómetro
5. Adicionalmente a lo anterior
(Figura 9) para medir la
cada tubo tendrá 100µl de
absorbancia obtenida para
suero y dicha cantidad será
cada una de ellas. El blanco ya
aplicada tanto en los tubos que
está programado a la hora de
tienen reactivos como en los
realizar la medición.
blancos. (Figura 7)

FIGURA 7. Proceso de FIGURA 9. Espectrofotómetro que

pipeteado del suero en los permite la obtención de la
respectivos tubos. absorbancia de las muestras y por
6. Luego, se mezclan las ende el resultado para cada prueba.
muestras y se dejan los tubos
durante 5 minutos a 8. Se leen los resultados
temperatura ambiente. (Figura obtenidos a partir del
8) espectrofotómetro para los
valores de bilirrubina directa y
bilirrubina total.
9. Se halla adicionalmente el
valor de la bilirrubina indirecta
que resulta de la siguiente
fórmula matemática (Figura
10):

Bilirrubina
B. total – B. directa
Indirecta (Bilirrubina directa) y BI (Bilirrubina
indirecta)
FIGURA 10. Fórmula
matemática que permite
DISCUSIÓN
determinar el valor de la
bilirrubina indirecta a partir de Para la elaboración del informe se
la total y directa. realizó la prueba de bilirrubina, a
partir de 4 muestras de sangre de
individuos menores de 25 años, se
RESULTADOS. empleó un kit de biosystems para
A continuación, se reportan los bilirrubina total y bilirrubina directa,
además con los datos de estas dos
resultados de la bilirrubina directa y
últimas se pudo obtener la bilirrubina
total obtenidos a partir de las lecturas
indirecta, teniendo en cuanta esto y
realizadas en el espectrofotómetro y
con base en los resultados se logró
del procedimiento respectivo para la determinar en cuanto a la bilirrubina
determinación del valor de la total que todos los valores muestran
bilirrubina indirecta (Tabla 1). resultados normales menores a 1,0
mg/dl, mientras en la bilirrubina
directa solo una de las cuatro
muestras se encuentra en el rango
Paciente BT BD BI normal de menos de 0,3 mg/dl, y por
último se calculó la bilirrubina
Camila indirecta la cual presenta valores
Cerón 0,29 0,07 0,22 normales a excepción de una de las
muestras que supero los 0.5 mg/dl,
Marcela este tipo de resultados en un adulto
González 0,25 0,03 0,22 puede relacionarse con una mala
alimentación o con hiperbilirrubinemia
Paula con ictericia, en este punto es
Rodríguez 0,45 0,04 0,41 necesario realizar otras pruebas para
determinar la causa, la cual está
Daniel relacionada con problemas en el
Orduz 0,76 0,09 0.67 hígado, el páncreas o en la vesícula
biliar (12), pero el factor que podría
ser el determinante en este caso es la
TABLA 1. Valores obtenidos de edad y el sexo, esto puede explicar el
bilirrubina total, directa e indirecta valor elevado de algunas de las
para las cuatro muestras de los muestras ya que los límites de
pacientes a analizar. Téngase en referencia aumentan durante la niñez
cuenta que: BT (Bilirrubina total), BD y alcanzan un pico aproximadamente
a los 20 años, después de esto los
valores disminuyen gradualmente con
la edad, además del factor del sexo
también varía levemente el límite
(13).
CONCLUSIONES
 De la práctica se puede
concluir que la prueba de
bilirrubinas permite medir que
tan bien el cuerpo degrada la
hemoglobina de los eritrocitos
dañados y si se está
eliminando correctamente en
forma de bilis, y a partir de
esto identificar enfermedades
ya sean heredadas o the Internet]. (2009, July),
adquiridas como la
hiperbilirrubinemia y otro tipo
de síndromes que afectan la
producción, captación,
metabolismo y excreción de
bilirrubina.
 Los procedimientos realizados
nos permitieron obtener datos
importantes que sirven de
apoyo diagnóstico y como
parte del seguimiento a
distintos trastornos y 4.
enfermedades, pero se debe
tener presente el buen estado
de las muestras en caso de
que estas no se utilicen de
inmediato luego de ser
extraídas, otro factor
determinante es el montaje de
las pruebas, el cual se tiene
que llevar acabo con precisión,
para evitar tener que descartar
muestras y realizar
nuevamente el procedimiento,
corriendo el riesgo obtener
valores erróneos.
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