INFORME

LABORATORIO N° 2 DE MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL

“ANÁLISIS BACTERIOLÓGICO”

I. Descripción de las actividades en el laboratorio. (2 puntos)

PROCEDIMIENTO GENERAL A TENER EN CUENTA:

a. Preparación de medio de cultivo:
El agar nutritivo (23 g/L) es disuelto en agua destilada con ayuda de
calor hasta obtener una cloración transparente.
b. Esterilización del medio y material:
El medio será colocado en una autoclave a una temperatura de 121 °C y
15 Lb de presión por un espacio de 15 minutos. Al mismo tiempo se
colocará en la autoclave el material a ser utilizado en la siembra como
los hisopos, agua destilada y placas Petri en donde se realizará la
siembra. Todo este material será colocado en una bolsa de
polipropileno.
c. Plaqueo:
Se llevará a cabo en una cámara de flujo laminar previamente
desinfectado con luz UV y alcohol. Aquí se colocarán aproximadamente
10 ml de medio en cada placa Petri. Cuando el medio se haya enfriado,
se realizará su sellado con plástico Film.
d. Conservación de los medios de cultivo:
Los medios de cultivo ya en las placas serán colocadas en una
refrigeradora hasta el momento de utilizarlas.

e. Preparación de la cámara de siembra:

 Para desinfectar la cámara de siembra se utilizará alcohol al 70% y se
colocará un mechero por un espacio de 10 minutos y luego de ello se
utilizará el material a utilizar.
f. Hisopado de superficies:
Se tomará el hisopo el mismo que será humedecido con agua destilada
estéril y se pasará por la superficie sin lavar, se realizará la siembra en
una placa luego se realiza el rotulado. Realizar la comparación de
número de (UFC) de la superficie limpia y la superficie sucia.
g. Sellado de placa:
Terminada la siembra de toda la placa para evitar que se contamine, se
procede a realizar el sellado de la misma con plástico film.
h. Incubación:
Las placas serán colocadas en un sobre de papel con los datos (nombre
de superficie evaluada, fecha, nombre del responsable) e incubadas a
37 °C por 48 horas.

PROCEDIMIENTO DETALLADO Y REALIZADO EN EL LABORATORIO:

APLICAR LA SIEMBRA BACTERIANA POR AGOTAMIENTO

Se puede muestrear en diferentes superficies tanto inertes como vivas con un

isopo y luego se procede a sembrar en placa Petri, la cual contiene agar
nutritivo.
El agar gelificado contiene agar en polvo 23g/L, para lo cual se realizó una
operación simple: 4g/150mL de media. En cada plaquita hay 15mL de media ya
gelificada. Para la preparación previa se debió pesar 4g, luego echar en el
matraz y agregar agua 150mL, eso es lo que se tiene que preparar y disolver
en fuego con mechero bunsen o en cocina eléctrica también es válido, luego se
tapa el matraz con un papel aluminio(resistente al calor), se tapa la boca del
frasco se pone un pabilo para amarrar, luego se lleva al autoclave automático,
el cual regula el tiempo y funciona con agua y con parámetros de humedad,
presión y temperatura a 121°C con 15 Lb de presión en 20 a 25 minutos.
Para aperturar la autoclave, se saca la tapa de seguridad, las dos canastillas, al
fondo hay como un cilindro y allí se echa agua masomenos un dedo más sobre
la base del fondo. Después, se coloca la canastilla con el material esterilizado,
para luego cerrar con la tapa de seguridad, se ajusta y luego se programa la
presión, el tiempo y la temperatura ya mencionadas. Luego automáticamente
se para cuando está autoclavado. Finalmente, se saca el medio y el material
que ya está estéril.

También se sabe que se tiene 10 placas Petri con el material agar nutritivo,
mechero para esterilizar, se usa el OH al 70%. Se esteriliza el área de siembra
(mesa) con el algodón y el alcohol 70°, se deja orear, luego (se puede usar la
cámara flujo laminar para la siembra, pero en este caso no se usó por falta de
esterilizador dieléctrico) de secar la mesa, se prende el mechero y se debe
tener la gradilla lista para usarla.

Para el hisopado, se agarró una hoja con 10cm 2, los hisopos estériles (con
agua de suero fisiológico de 0.9ClNa/1L de agua) forrados con papel aluminio
por fuera, luego se pasa el hisopo por todo el área contaminada, luego se
realiza la siembra por agotamiento (zig zag) sin lastimar el agar y la tapa, luego
se rotula en la parte baja de la placa (con el nombre del hisopado de mesa y la
fecha en la parte de atrás), luego se hisopa la baranda de la escalera, se toma
un frasco y se pasa el hisopo, luego se toma la muestra en 20cm lineales para
evaluar de la baranda, cuando hay mucha carga se debe disolver en agua
esterilizada con suero fisiológico(10ml), se lava en esa agua para que
descargue un poco la cantidad de bacterias, luego se hace la siembra en zig
zag. También se realiza otros hisopados para muestra del lavatorio (dos
caños), bomba de la tasa, con el mismo procedimiento.

Luego hisopar la manzana antes de echar la lejía, con el mismo procedimiento.

Después se echa 12.5 ml con pipeta o jeringa de lejía al vaso de precipitado,
luego lo junto con el agua potable y la manzana por 5minutos, a 500 ppm,
luego con un hisopo estéril se debe agarrar una placa se saca el plástico, abrir
a 30°, luego el hisopado en zic zac y rotular como manzana sin lejía.
Luego se usa una bolsa estéril, se echa suero fisiológico esterilizado, luego
con el lavado de manos del personal asistente dentro de la bolsa (la mano no
estaba esterilizada) por 1minuto, luego con un pipeta estéril sacar 1ml
aproximadamente, para sembrarlo en la placa, luego extender la siembra con
una placa asa de col (la cual se pasa por el mechero), pero antes se enfría en
un costado de la placa, luego se extiende el líquido del lavado de manos en
toda la placa, por último se rotula. Asimismo, se realiza el cultivo en una placa
Petri para coliformes con el mismo procedimiento.

Además, se tiene de muestra humus de conejo, para lo cual se echa 1gramo

aproximado de humus a un tubito, se agita, se introduce al tubo col esterilizado,
luego se siembra por agotamiento en la placa Petri, con el mismo
procedimiento y se rotula.

Todas las placas deben estar sellados con papel fill que cubra las tapas de las
placas para evitar la contaminación externa (polvo, etc).
Después se llevan a la zona de estufas, se coloca las placas dentro de la
estufa de cabeza, la placa más ancha abajo en un solo nivel todo, la estufa a
37°C para que el medio no se deshidrate de 48 horas a 72 horas, luego se
saca de la estufa para luego hacer el conteo y la evaluación.

Es importante tener una placa limpia sin siembra, la cual será la placa de
control, se coloca en la estufa y después de 48 a 72 horas se saca, y ésta debe
permanecer limpia, lo cual quiere decir que el autoclavado y el medio ha sido
correctamente elaborado.

MEDICIÓN DE PH:
Para la medición de PH, se empezó con jabón de lavar Bolívar, se raspa y se
disuelve en agua destilada en un vaso precipitado, se agita, luego se mueve o
agita con un peachímetro, para después con el mismo poder medir el PH.
Paso siguiente se debe lavar el peachímetro antes de medir otro PH en otra
muestra.
Las siguientes muestras fueron jabón de tocador Heno de Pravia, jabón de
hotel, Coca-Cola, vinagre natural, bicarbonato de sodio y cal.

II. Presentación de resultados obtenidos. (5 puntos)

SIEMBRA BACTERIANA POR AGOTAMIENTO

Materiale Características Método de Resultados

s a de Área de siembra
muestrear muestreo
Mesa 10cm2 Por 14 unidades formadoras de
agotamiento colonia (desde hongos hasta
gran cantidad de bacterias).

Baranda 20 cm lineales Por 11 unidades formadoras de

Escalera agotamiento colonia en 20cm de baranda.

Lavatorio Dos caños Por 7 unidades formadoras de

agotamiento colonia en dos caños.

Manija de Manubrio de Por 8 unidades formadoras de

taza de taza agotamiento colonias en un manubrio de taza.
baño
Fruta Manzana sin Por 27 unidades formadoras de
lejía agotamiento bacterias por manzana.

Fruta Manzana con Por No se encontró unidades

lejía a 500 ppm. agotamiento formadoras de bacterias.
Lavado Bolsa con suero Extendido Una colonia Bacilos en la bolsa
de mano fisiológico (1ml) por un asa de suero de 1mL
 bacteriológic
a
Humus de 1gr de humus Por Son incontables las unidades
conejo agotamiento formadoras de colonias.
extendido por Se puede visualizar dos tipos de
un asa colonias de bacterias
bacteriológic
a

MEDICIÓN DE PH:

Materiales a Codo de muestreo Resultados observaciones

maestral de PH
Jabón para Raspado de PH 10 Realizar un movidos constante
lavar ropa muestra para mejores resultados
Bolívar Aguas destilada
Jabón de Raspado de PH 10 Realizar un movidos constante
tocador Heno muestra para mejores resultados,
de Pravia Aguas destilada
Jabón de Raspado de PH 10 Realizar un movidos constante
hotel muestra para mejores resultados, el
Aguas destilada resultado debido a que la
mayoría de jabones usan
hidróxido de sodio y grasa.
Gaseosa Aplicación directa PH 2.4 Se agitar la sustancia, es un PH
Cocacola demasiado ácido, a
comparación del PH del
estómago es 1.5

Vinagre Aplicación directa PH 2.7 Se agitar la sustancia

natural
Bicarbonato Aplicación directa PH7.4 (2gr en 40ml de agua) con 4gr
de sodio se mezcla con agua en 40ml tiene = 7.4 constante

Cal Aplicación directa PH11.7 CAL: 4gr de cal en agua

 se mezcla con agua

III. Análisis e interpretación de resultados. (10 puntos)

SIEMBRA BACTERIANA POR AGOTAMIENTO

 Para el muestreo de la mesa, después de 48 horas se obtuvo 14

unidades formadoras de colonia un poco desarrolladas, ya que uno de
los lugares en que hay más contacto con diferentes materiales
probablemente contaminados, asimismo se debe optar por esperar otras
24 horas más para que se puedan desarrollar más y así poder evaluar
con mayor detalle.
 En la baranda, después de 48 horas de refrigeración de las muestra, se
encontraron 11 unidades formadoras de colonia en una área de 20 cm
lineales, posiblemente si deja por más horas de refrigeración sean más
visibles.
 En el muestreo del caño, después de 48 horas de refrigeración, se
presentó 7 unidades formadoras de colonia en dos caños.

 En el muestreo de la taza de baño, después de 48 horas, se encontró

una gran cantidad de unidades formadoras de colonia, de dos tipos, una
de color rosado y otra de color blanco. Y esto a pesar de que no hay
cantidad de personas o estudiantes en estos lugares.
 Para el muestreo de la manzana sucia, se obtuvo 27 unidades
formadoras de bacterias por manzana, lo cual superó en unidades
formadoras de colonia a la de la taza del baño.
 Para el muestreo de la manzana lavada con lejía a 500 ppm, después de
la refrigeración, no se encontró unidades formadoras de bacterias. Cabe
resaltar que previamente al hisopado, se lavó la manzana con 12 ml de
lejía mezclado en agua
 Las bacterias que se lograron observar en la placa que se hizo la siembre
del lavado de manos, después de 48 horas es el bacilios, debido al color
se puede afirmar que probablemente hay bastante cantidad de bacilos.
 El muestreo del humus de conejo presentó un número incontable de
unidades formadoras de colonia. Pero se puede visualizar dos tipos de
bacteria una de color roja y otro de color blanca. Se tiene que pesar el
material a analizar. Esta muestra tiene más carga bacteriana por la alta
cantidad de materia orgánica en descomposición, y probablemente es
que nos sean patógenas, sino que degradan almidones y azúcares.

 Las bacterias E.Coli es una bacteria que normalmente está en la flora

intestinal, pero cuando se encuentra en una superficie o utensilio no debe
sobrepasar el límite permisible sobre todo en alimentos , que es de 3 o 4
unidades máximo , si sobrepasa por límites del Minsa o de la OMS , eso
quiere decir que el alimento está contaminado por heces y se debe tener
sumo cuidado.

MEDICIÓN PH

 El realizar el control de ph de Jabón de tocador heno de previa, se pudo

evidenciar que presentó un PH de 10. Este siendo un riesgo para la salud
puesto que lo recomendado para nuestra piel es de 7.5.
 El realizar el control de ph de Jabón de tocador que reparten en los
hospedajes, se pudo evidenciar que presento un ph de 10.
 La coca cola presento un ph de 2.4 siendo dañino para nuestra salud, ya
que supera al PH del estómago que tiene un ph de 1.5.
 El vinagre, a pesar de ser natural presentó un PH de 2.7.
 El bicarbonato de sodio, se usó (2gr en 40ml de agua) con 4gr en 40ml
tiene = 7.4 , lo cual es constante.
 Para la cal se aplicó 4 gr de cal en agua, obteniendo 11,7 de PH, lo cual
hace ver que algunos gestores municipales hacen mal en poner cal a los
árboles solo por que se vean estéticamente bien.

IV. Conclusiones

 Medios de cultivo son indispensables para poder determinar la carga

bacteriana que tenemos en cualquier superficie inerte o viva,
 Alcohol al 70° es importante para desinfectar superficies y manos, ya que
lo cual tiene más agua y puede penetrar la pared de la bacteria para que
mate al virus.
 El uso de la lejía a diferentes concentraciones dependiendo de lo que
necesitemos o,01 por ciento para superficies y 500ppm para alimentos es
útil para poder desinfectarlos, (cerraduras, barandas baños)
 El proceso que se realizó solo se pueden obtener bacterias, más ni virus
por que los virus no se pueden sembrar.
 Los medios de cultivo son muy importantes para poder determinar la
carga bacteriana en la superficie que uno está en contacto.
 El uso de la lejía es útil para desinfectar los alimento y superficie
 El alcohol 70c° es ideal para desinfectarse las mano a comparación del
alcohol de 96c° que se volatiliza con más rapidez.

V. recomendaciones. (3 puntos)

 Ubicarse en la zona de seguridad.

 Seguir las normas de seguridad del laboratorio.
 Tener cuidado con el manejo de autoclave porque funciona con una
presión de 15 libras de presión como mínimo.
 Tener cuidado al inducir los materiales que ingresan al autoclave por que
no soportan la color que se ejerce el interior.
 Cuando se introduce botellas en el autoclave es recomendable dejar
medio abierto la tapa para que el vapor recircule y así evitar que la
acumulación de presión dentro de la botella provoque una explosión.
 El alcohol que se utiliza para esterilizar es de 70°
 Se recomienda humedecer los hisopos con Suero fisiológico para estilizar
los hisopos.
 Cuando existe una sobre cargar de bacterias en el hisopo se recomienda
hacer un lavo con el agua esterilizada (suero fisiológico). Para poder
visualizar las bacterias con facilidad en el microscopio.
 Se recomienda sellas las placas donde se hizo el sembrado.