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Departamento de ingeniería bioquímica, Universidad ICESI, Cali, Colombia
RESUMEN
Las grandes cantidades de colorantes usados en las industrias textiles, las industrias de
colorantes y los laboratorios son un problema para el medio ambiente, por esto, es
necesario degradar estos contaminantes lo más pronto posible, evitando que tengan un
impacto ambiental; además, las técnicas conocidas suelen generar subproductos que
también pueden ser potenciales contaminantes, de aquí la necesidad de usar tratamientos
biológicos y especialmente microorganismos.
En esta práctica se realizó siembra en superficie de un co-cultivo (Penicillum sp,
Pleourotus sp, Pseudomonas sp y Bacillus subtilis), caracterización morfológica de los
diferentes microorganismos, medición de pH del medio de cultivo y cuantificación de
unidades de color.
El objetivo fue evaluar el porcentaje de degradación de un co-cultivo microbiano sobre un
colorante industrial, además, conocer los diversos procesos físicos y enzimáticos que llevan
a cabo estos microorganismos para la remoción de colorantes. Obteniendo que el mayor
porcentaje de remoción fue del 61,29% y se encontró en una muestra del medio de cultivo
correspondiente al día 5.
PALABRAS CLAVE: Colorantes, consorcio, unidades de color, porcentaje de remoción,
descontaminación.
INTRODUCCIÓN
Los consorcios microbianos son asociaciones de más de dos poblaciones microbianas, en la
mayoría de los casos, de diferentes especies. Estas actúan conjuntamente como una
comunidad en la que todos se benefician de las actividades y/o secreciones de los demás.
En los consorcios se da un flujo de nutrientes de manera más efectiva y eficaz que en
poblaciones individuales. El hecho de que estos microorganismos convivan juntos, les
confiere una mayor resistencia a las condiciones adversas que se pueda presentar en el
ambiente, además de que promueve la estabilidad de los miembros, en el tiempo. Estos
consorcios pueden cumplir funciones que los microorganismos individuales no podrían o
no desarrollarían con la misma eficiencia (Restrepo., 2010). En la actualidad estos
consorcios son de gran interés industrial pues se perfilan como una óptima alternativa para
la biodegradación de colorantes presentes en aguas residuales principalmente de la industria
textil
Estas industrias prefieren el uso de colorantes artificiales pues son más fáciles de sintetizar
y con mayor estabilidad antes factores como la luz, la temperatura y sustancias como los
detergentes en comparación a los colorantes naturales (Juan, 2013). y es por esta misma
razón que se generan impactos ambientales que hoy en día se han convertido en un aspecto
que preocupa a la comunidad científica al punto de incentivar el desarrollo de
investigaciones a partir de las cuales se puedan plantear soluciones a esta problemática. Los
colorantes causan graves problemas en la microbiota del ecosistema ambiental, gracias a
que son compuestos tóxicos y/o mutagénicos que pueden ser perjudiciales para los
organismos vivos presentes en dicho ambiente (Nedher Sánchez, 2010).
A pesar de que existen métodos físicos y químicos que a lo largo de la historia se han usado
para el tratamiento de estos colorantes, se ha probado que la mejor opción, teniendo en
cuenta la eficiencia de remoción, el daño ambiental y la relación costo-producto, es la
utilización de consorcios microbianos. Estos consorcios, permiten, a través de las relaciones
que se conjugan por la presencia de varios microorganismos, la decoloración de las aguas
contaminadas y una consecuente desintoxicación, lo cual puede traer consigo muchos
beneficios ambientales, tanto para la flora como la fauna presente en el ecosistema en
cuestión.
Teniendo en cuenta lo anterior el objetivo de este estudio fue evaluar el porcentaje de
degradación de un co – cultivo microbiano a base de bacterias y hongos sobre una solución
de colorantes de laboratorio, asimismo, Conocer los diferentes procesos físicos y
enzimáticos que llevan a cabo los microorganismos para realizar la remoción de colorantes.
MATERIALES Y MÉTODOS:
Recuento de Bacterias Totales
Caracterización de Morfologías.
Medición de pH
En primer lugar se verifico la calibración del pHmetro para asegurar un buen uso de este y
buenos resultados. Luego se tomó un volumen significativo de la muestra madre y se midió
el pH con el pHmetro.
Cuantificación de Unidades de Color (UC)
Resultados y discusión
UC iniciales−UC finales
%Remoción= (1)
UC iniciales
Ecuación 1: % Remoción
En esta práctica se trabajó con un consorcio compuesto por bacterias y hongos presentes en
una solución de residuos de colorantes de laboratorio la cual es un medio tóxico por la
presencia de colorantes como cristal violeta y fucsina. Se trabajó con bacterias Gram
negativas (Pseudomonas sp) y Gram positivas (Bacillus subtilis) y con hongos como
Pleurotus sp, y Penicillium sp. Estos organismos tienen mecanismos específicos que les
permiten asimilar estos colorantes del medio para producir moléculas que entren a sus rutas
metabólicas. Penicillium sp. por ser un hongo filamentoso utiliza el método físico de
adsorción, mediante el cual adhiere el colorante en su micelio, lo cual puede de cierta
manera intuir que estaba sucediendo en la muestra gracias a la presencia de sedimentos que
pueden ser micelio coloreado. (Zuoxing, Z. et al, 1999).
El crecimiento microbiano es un aspecto importante debido a que Gran parte del colorante presente
en la superficie es aprovechado por el microorganismo como fuente de carbono y energía, dando
como resultado su degradación y mineralización, es decir, conversión a agua, dióxido de carbono y
crecimiento de biomasa. Las células vivas se consideran como un reactor de decoloración en
miniatura. Esta decoloración puede ser resultado de la retención física del colorante en la biomasa o
de la transformación bioquímica del colorante a través del metabolismo celular, a mayores
cantidades de biomasa, mayor es la capacidad de los microorganismos para degradad u adsorber
estos compuestos. Estudios realizados muestran que se presentara una mayor tasa de decoloración si
los organismos han sido cultivados por 5 o 7 días, esto se debe a que durante este tiempo el
crecimiento es suficiente para producir una mayor cantidad de enzimas necesarias para la
degradación. (Moeller & Garzón, 2013)
Los resultados obtenidos durante la práctica no son congruentes con lo especificado en la literatura
pues en el día 5 donde se obtuvo el mayor porcentaje de degradación de colorantes coincide
justamente con el menor índice de concentración de biomasa, sin embargo si se observa la gráfica 1
en general se puede evidenciar que en la mayoría de los días si se cumple la relación directa de
incremento de biomasa y porcentaje de decoloración, es posible que durante la práctica se hayan
cometido errores humanos o de técnica los cuales no permitieron observar este patrón de manera
eficiente.
Ahora bien, las estructuras químicas de los colorantes resultan a menudo demasiado
complejas para utilizar un tratamiento simple, por lo que generalmente se utilizan
consorcios microbianos con la capacidad de degradar colorantes obteniendo altas
eficiencias de depuración. (Cortázar et al, 2012). Algunos de estos colorantes son estables a
la luz, a la temperatura y al ataque microbiano, haciéndolos compuestos recalcitrantes y
tóxicos. El violeta cristal (hexametil-p-rosanilina) tiene múltiples aplicaciones en la
industria farmacéutica, es utilizado como reactivo para análisis y en microscopia para la
tinción de bacterias. Debido a esto, se encuentra en los efluentes de numerosos centros de
producción de medicamentos, institutos de investigación, y zonas industriales. Su compleja
estructura hace difícil su degradación. (Massién et al, 2008).
Hay diversas técnicas físicas y químicas para la remoción de colorantes, sin embargo, se
han desarrollado esquemas mejores a partir de la combinación de algunas de estas técnicas
con tratamientos biológicos para que la efectividad de la remoción sea aún mayor y genera
menos desechos o desechos con un nivel de toxicidad menor. No obstante, para algunos
tratamientos biológicos se utiliza el fundamento de la adsorción, a pesar de que esta técnica
está catalogada como física, este es el mismo mecanismo que utilizan la mayoría de las
células que hacen parte de las técnicas biológicas, tal como lo fueron las que se usó en la
práctica realizada. (Garzón, 2009)
La adsorción puede verse influenciada por factores ambientales como el pH, la temperatura,
la fuerza iónica, la concentración inicial del colorante, y la realización de tratamientos
previos a la biomasa. A pH ácido se favorece la adsorción de colorantes ácidos y a pH
alcalino la de colorantes básicos. En cuanto al efecto de la temperatura se sabe que a mayor
temperatura se presenta mayor adsorción; Sin embargo cuando se sobrepasan los 50-55°C
ésta capacidad o bien se mantiene estable o comienza a disminuir. La fuerza iónica afecta la
adsorción en la medida en que el agua contenga gran cantidad de iones de carga similar a la
del colorante; caso en el cual se presenta una competencia por los sitios de unión en el
bioadsorbente. Otro de los factores que inciden en la capacidad de adsorción del colorante
es la concentración inicial del mismo en el agua residual, cuanto más alta sea dicha
concentración más rápido se saturan los sitios de unión. Por otra parte, se han realizado
estudios en donde se demuestra que tratar la biomasa fúngica previamente con ciertos
reactivos químicos (ácidos o bases) o someterla a un tratamiento térmico repercute
directamente en las propiedades físicas de la superficie de la biomasa cambiando su carga o
volviéndola más hidrofílica. (Núñez, 2013).
A partir de esto se pudo evidenciar que al utilizar Penicillium sp, este es un hongo
filamentoso y su mecanismo de remoción de colorantes es a partir de la adsorción, ya que
los colorantes se adhieren al micelio del hongo removiendo así los colorantes del agua. Sin
embargo, este sigue siendo una técnica netamente biológica a pesar de que su mecanismo
de remoción sea absorbiendo los colorantes. A este tipo de tratamientos se le han
denominado como combinados, estos tratamientos sugieren como ya se mencionó, utilizar
al menos alguna técnica física o química acompañada de un tratamiento biológico. Por
medio de diversas pruebas se logró optimizar desde las cinéticas de remoción de color,
tanto como el DQO y el COT, también se mejoró el tiempo de operación. (Universidad
Nacional de Colombia, 2015).
Entre estas tecnologías combinadas se encuentra la coagulación seguido por procesos
biológicos en condiciones batch, en esta técnica se alcanzaron valores de remoción de color
del 100% para concentraciones para colorantes alrededor de 600 mg/L. Para el proceso de
coagulación la principal falencia, además de los elevados costos, los productos generados a
partir de este proceso siguen siendo tóxicos, ya que en algunos casos se generan aminas
aromáticas y estas son cancerígenas, por lo que hasta ese punto todavía no se considera una
remoción efectiva. Para esto se ha visto la necesidad de continuar este proceso a partir del
uso de consorcios bacterianos capaces de degradar por completo estos grupos azos
presentes en los colorantes, aumentando así la efectividad como se mencionó al inicio.
Otra técnica que se utiliza como tecnologías combinadas, es el proceso una oxidación
química mediante ozono, los cuales después también se utilizan filtros biológicos para
alcanzar la eficiencia de remoción de color y de DQO del 97% y 90% respectivamente. La
eficacia de estos procesos combinados ha sido mayor de las que se usan una técnica en
específico, además de o utilizar tantos insumos como agua y energía que es uno de los
impedimentos más comunes, además de ser mucho mejor para el medio ambiente.
Por otro lado, en la gráfica 1, se observa que el porcentaje de degradación de la solución de
colorantes había mejorado con el cambio de pH en el medio. La mayor degradación
(61,29%) se observó a un pH de 6.50, mientras que la más baja (10.75%) a un pH de 5,1.
De acuerdo con la gráfica de biomasa, se observó que la tasa de crecimiento del consorcio
microbiano era mayor a pH 6.5, lo que probablemente desempeñó un papel vital para una
mayor degradación en este nivel de pH. Estas observaciones indicaron que el organismo
podría tratar eficientemente los desechos de teñido de neutros a ácidos. (Roy et al, 2018).
Varias investigaciones demostraron que los procesos de biosorción que utilizan microbios
dependían mucho del pH (Aksu y Tezer, 2005). En otra investigación realizada por Wang
et al. (2009), Citrobacter sp. CK3 había logrado la mejor decoloración del rojo reactivo 180
(96%) a pH 6.0–7.0.
Ahora bien, según Hardin (2001), cuando se incrementa la concentración de glucosa se
favorece la decoloración y que como los colorantes no son utilizados como fuente de
carbono para el crecimiento, es necesario utilizar una fuente de carbono primaria que
garantice la actividad metabólica del microorganismo. También se ha planteado que en
presencia de colorantes, el consumo de glucosa ocurre a una velocidad mucho mayor, que
cuando éstos no se adicionan al medio de cultivo. Es probable que esto se deba a que la
glucosa también juega un papel en la decoloración, ya sea en la generación del H 2O2
requerido para la actividad de la enzima manganeso peroxidasa (MnP) y lignina peroxidasa
(LiP). Además los tratamientos con suplementación de glucosa el micelio fue abundante y
aéreo lo que demuestra la necesidad de un co-sustrato en el proceso de decoloración índigo
por medio de Pleurotus sp. (Ruiz, 2011).
Caracterización microscópica.
Origen de la muestra Microscopia Descripción
Muestra del día 2 para la Se pueden observan
evaluación de la actividad hifas y fíbulas.
de microorganismos en la También se alcanza a
contaminación causada por observar bacilos gram
colorantes de gram. negativos
(pseudomonas sp). No
se alcanza a observar
bacilos gram positivos
(Bacillus sp.). Esto no
significa ausencia de
estos, simplemente en
la muestra analizada no
se encontraban.
CONCLUSIONES
[14] Phugare, S., Kalyani, D., Surwase, S. y Jadhav, J. (2011) Ecofriendly degradation,
decolorization and detoxification of textile effluent by a developed bacterial
consortium. ELSEVIER. 74(2011) 1288-1296.
[15] Restrepo., D. C. (2010). Consorcios microbianos: Una metáfora biológica aplicada a
la asociatividad empresarial en cadenas productivas agropecuarias. 55-74
[16] Roy D.; Biswas S.; Saha A. Sikdar B.Rahman M.; Roy A.; Prodhan Z.; Tang S.
(2018). Biodegradation of Crystal Violet dye by bacteria isolated from textile industry
effluents. Peer J. pp 6-7.
[19]Wang H, Su JQ, Zheng XW, Tian Y, Xiong XJ, Zheng TL. 2009. Bacterial
decolorization and degradation of the reactive red 180 by citrobacter sp. CK3.
International biodeterioration biodegradation 63:395-399.
orization and degradation of the reactive dye Reactive Red 180 by Citrobac-
ter sp. CK3. International Biodeterioration & Biodegradation 63:395–399
[20] Zuoxing Z., Levin R., Pinkham J., Kalidas S. (1999) Decolorization of polymeric dyes
by a novel Penicillium isolate. ELSEVIER. 34 (1999) 31–37