Marco teórico

Un medio de cultivo es una técnica de laboratorio que consta de un gel o una

solución que contiene los nutrientes necesarios para permitir, en condiciones
favorables de pH y temperatura, el crecimiento
de virus, microorganismos, células, tejidos vegetales o incluso
pequeñas plantas. Según lo que se quiera hacer crecer, el medio requerirá
unas u otras condiciones. Generalmente se presentan desecados en forma de
polvo fino o granular antes de ser preparados; ya preparados pueden
encontrarse en estado sólido, semisólido o líquido.
Un medio de cultivo es un sustrato o solución de nutrientes en los que crece y
se multiplican los microorganismos en el laboratorio, con el objeto de aislar
diferentes especies bacterianas, con el fin de identificarlas y realizar estudios
complementarios.
Clasificación

Pueden clasificarse según su:

 Consistencia
 Origen
 Composición
 Utilización

Consistencia

 Líquidos: contienen nutrientes a los cuales se les adicionan sustancias

con la capacidad de mantener estables un pH, entre ellos podemos
encontrar el caldo nutritivo y caldo peptona.
 Solidos: se obtienen agregando agar (sustancia de tipo polisacárido que
se obtiene de algas marinas) a un medio liquido determinado. Al tener
un medio sólido, nos facilita obtener colonias bacterianas aisladas.
 Semisólidos: similares a los medios sólidos, la única diferencia es que a
estos se les disminuye la cantidad de agar, lo que permite conservar
cepas bacterianas y la observación y registro de bacterias móviles.

Origen

Según su origen los medios de cultivo se dividen en medios sintéticos y medios

naturales.

 Los medios sintéticos o químicamente definidos son medios compuestos

por productos químicos conocidos y se utilizan para realizar estudios
metabólicos, por ejemplo: agar blando, caldo nutritivo, agar eosina azul
de metileno, etc.
 Los medios naturales o químicamente no definidos son aquellos medios
que se preparan a partir de sustancias naturales animales o vegetales,
por ejemplo: suero, leche, papa, etc.

Composición y utilización

Según su utilización y su composición los medios de cultivo se pueden

clasificar en:

 Simples
 Enriquecidos
 Selectivos
 Diferenciales
  Enriquecimiento

1. Medios Simples

 Poseen los requisitos nutricionales para permitir el desarrollo bacteriano

general, ejemplos: agar nutritivo, caldo nutritivo, entre otros.

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2. Medios enriquecidos

 Son medios simples o comunes, a los que se le añaden ciertos

elementos como sangre, suero, líquido ascítico, huevo, glucosa,
vitaminas, etc. lo que permite el aporte de factores de crecimiento o
sustancias que neutralizan agentes inhibidores del crecimiento en
bacterias exigentes nutricionalmente, entre algunos ejemplos: agar
sangre, medio de Löwenstein-Jensen, enriquecido con huevo para
facilitar el crecimiento de Mycobacterium; agar desoxicolato-lactosa
(DLA), enriquecido con lactosa y desoxicolato.
3. Medios selectivos

 Se consiguen añadiendo al agar nutritivo compuestos químicos nocivos

para algunas bacterias cuyo crecimiento no es de interés o también
mediante una alteración de las condiciones físicas del medio, entre
algunos ejemplos tenemos
 El agar Mac Conkey que contiene cristal violeta.
 Thayer-Martin medio selectivo para Neissar, ya que este posee
antibióticos como la vancomicina colistina y nistatina.
 Caldo lactosado bilis verde brillante en donde la bilis inhibe el
crecimiento de bacterias gran positivas.
 Löwenstein-Jensen con verde de malaquita es selectivo para
Mycobacterium.

4. Medios diferenciales

 A estos medios se le adiciona sustancias para que solo crezcan ciertas

bacterias y estas, al actuar sobre alguna de las sustancias adicionadas,
permiten observar macroscópicamente ciertas propiedades de
crecimiento que ayudan a diferenciar sus colonas de otras especies
diferentes, entre algunos ejemplos encontramos:
 Agar eosina azul de metileno (EMB), diferencia E. coli (color verde
metálico brillante) de colonias de Enterobacter aerogenes (color rosado,
consistencia mucosa y crecimiento abundante).
 Agar sangre, diferencia variedades de Streptococcus pyogenes en
Streptococcus betahemolíticos de Streptococcus alfa hemolítico y gama
hemolítica.
 Agar Salmonella-Shigella tiene lactosa y un indicador de pH que permite
diferenciar las colonias de bacterias fermentadoras de este disacárido.
5. Medios de enriquecimiento

 Son medios líquidos que favorecen o permiten la multiplicación de las

bacterias cuando la muestra obtenida es muy pobre, por ejemplo:
 Caldo tioglicolate, favorece el crecimiento de las bacterias anaeróbicas.
 Caldo tetrationato favorece crecimiento de bacterias microaerófilas.
 Los caldos bilis y de Muller-Kauffman, favorecen el crecimiento del
género Salmonella.
 Caldo o agua peptonada se utiliza para el crecimenot de Vibrio
Cholerade.
AGAR PARA MEDIO ESTÁNDAR (PCA)
De acuerdo a la clasificación mencionada anteriormente, el agar cuenta
estándar es un medio de cultivo sólido, no selectivo, diseñado para la
cuantificación de la carga microbiana aerobia presente en muestras de aguas
de consumo, aguas residuales, bebidas lácteas, entre otros alimentos. A este
medio también se le conoce como agar PCA, por sus siglas en inglés Plate
Count Agar. Fue creado en 1953 por Buchbinder, Baris y Goldstein.
El medio agar cuenta estándar está compuesto por extracto de levadura,
tripteína, glucosa, agar y agua destilada. Esta formulación contiene elementos
básicos nutricionales que permite el desarrollo de la carga microbiana aerobia
presente, no exigente.

Diluciones decimales para el contaje de las UFC en agar cuenta estándar. Fuente: Quentin
Geissmann [CC BY-SA 3.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0)]

Como el medio no contiene inhibidores, las bacterias pueden desarrollarse sin

ningún tipo de restricciones, por ello es ideal para el recuento general de
colonias. Sin embargo, la técnica de cuantificación en placa no detectará todas
las bacterias presentes, sino solo aquellas que sean capaces de crecer bajo las
condiciones ambientales a la que sea sometido el agar cuenta estándar
sembrado.

En este sentido, la técnica de cuantificación en placa busca determinar por lo

general la cantidad de bacterias del tipo mesófilas aerobias, es decir, aquellas
que se desarrollan en temperaturas entre 25 y 40°C, con una temperatura
óptima de crecimiento a 37°C.

Este grupo bacteriano es muy importante, porque allí se encuentran la mayoría

de las bacterias patógenas para el hombre.

Cabe destacar que en ocasiones puede interesar cuantificar la cantidad de

bacterias psicrófilas presentes en los alimentos. Estas bacterias son aquellas
que se desarrollan a bajas temperaturas (< 20°C) y son las responsables de
que los alimentos se descompongan más rápido, aun estando en nevera.

Así mismo, las bacterias termófilas, que se desarrollan en un rango entre 50°C
a 80°C o más, pueden ser importantes en ciertos tipos de alimentos como los
enlatados.

La cuantificación microbiana se expresa en unidades formadoras de colonias

(UFC) por gramo o mililitro de muestra.

FUNDAMENTO

El medio cuenta estándar está diseñado para permitir el desarrollo satisfactorio

de las bacterias aerobias no exigentes, ya que el extracto de levadura, la
tripteína y la glucosa proporcionan los nutrientes necesarios para el buen
desarrollo microbiano.

Por otra parte, el medio posee un color claro y un aspecto transparente, por ello
es ideal para la visualización de las colonias desarrolladas por el método de
sembrado en profundidad (vertido en placa).

También es posible el contaje de colonias por el método de sembrado en

superficie con espátula de Drigalski.

Cuando la carga microbiana es alta, se deben hacer diluciones decimales de la

muestra en estudio para poder realizar el contaje de las UFC.

Cabe destacar que este medio es recomendado por la American Public Health
Association (APHA) para el recuento de mesófilos aerobios.

COMPOSICIÓN:

 Triptona                        5,00 g
 Extracto de levadura     2,50 g
 Glucosa                         1,00 g
 Agar-agar                      15,00 g

(Fórmula por litro)

 pH final:     7.0 ± 0,2

USO

El agar cuenta estándar se usa en la técnica de recuento de mesófilos aerobios

durante el análisis microbiológico de agua y alimentos. El contaje de los
mesófilos aerobios es necesario, ya que determina la calidad sanitaria de la
muestra en estudio.

La aplicación de esta técnica (utilizando este medio) permite la visualización

macroscópica de colonias aisladas para su cuantificación.

AGAR DEXTROSA PAPA (PDA)

El agar papa dextrosa es un medio de cultivo nutritivo sólido, no selectivo.