Hernández Villa Norma Gabriela Microbiología General 4IM1

CUESTIONARIO TERCER PARCIAL

Laboratorio

1.- Defina qué es actividad de agua (aw).

Es la razón entre la presión de vapor del aire en equilibrio con una sustancia o solución
y la presión de vapor, a la misma temperatura del agua pura, es así como se expresa la
disponibilidad del agua que tenga un organismo a su disposición para crecer, y no solo
depende del contenido de agua en el ambiente, sino también de la concentración de solutos
en ella, ya que las sustancias disueltas tiene una gran afinidad por el agua, lo que hace
que ésta sea inutilizable por los organismos. “Es la cantidad de agua metabólicamente
disponible”

2.- ¿Qué es un organismo xerofílico? ¿Qué es un organismo xerotolerante? ¿En qué

condiciones crece cada uno? De un ejemplo.

Organismo Definición Ejemplo

xerofílico Organismos que crecen a altas concentraciones de Tetragenococcus shalophila
solutos (Bajas cantidades de Aw)
xerotolerante Los organismos que no requieren altas concentraciones Bacterias como
de solutos para crecer pero que pueden soportarlas. Staphylococcus aureus
Hongos
Se deberían sembrar en medios con baja actividad de agua. Si crecen, es necesario sembrar
en un medio a más alta actividad para comprobar si son xerofílico o xerotolerantes.

3.- ¿Qué es la presión osmótica? ¿Qué estructura compensa y soporta la presión osmótica en
una célula bacteriana?
La presión osmótica es la presión ejercida sobre una membrana semipermeable sometida a
diferentes concentraciones de soluto hasta llegar al equilibrio. La membrana citoplásmica
se ve afectada por cambios en la concentración osmótica fuera de la célula. Las células
por su alta concentración de componentes celulares tienen una presión osmótica mayor que
el medio de cultivo. Siempre hay una tendencia natural de entrada de agua a la célula y de
mantenerse en un “estado de turgencia” (fenómeno por el cual las células al absorber agua,
se hinchan, ejerciendo presión contra las membranas celulares, las cuales se ponen tensas)
La pared celular la protege del choque osmótico. Para adaptarse a los ambientes con altas
concentraciones de solutos o baja actividad de agua, los organismos tienen que controlar
la pérdida del agua citoplásmica debida a la elevada osmolaridad del ambiente
incrementando su concentración de solutos internos, ya sea bombeando iones hacia el
interior de la célula o a través de la acumulación de un soluto compatible en su
citoplasma, el cual no debe inhibir el metabolismo celular y puede ser sintetizado por el
microorganismo (azúcares, polialcoholes, etc.) o tomado del exterior y acumulados
activamente (K+, betaína). La pared celular compensa y soporta la presión osmótica. Los
micoplasmas son células bacterianas sin pared celular.

4.- Explique en qué consisten los fenómenos de plasmólisis y plasmóptisis.

plasmólisis Fenómeno en el cual el agua que se encuentra dentro de la célula sale al medio
hipertónico, por lo que la célula se deshidrata y muere.
plasmóptisis Fenómeno por el cual las células al absorber agua, se hinchan, ejerciendo presión
contra las membranas celulares, las cuales se ponen tensas, se rompen y la célula
muere.

5.- Definir:

Organismo Definición Ejemplo

Osmofílico Organismos que requieren de medios con gran osmolaridad. Se Vibrio fischeri
desarrollan en medios hipertónicos
Osmotolerante Crecen a Alta actividad de Agua (Aw). No requieren de Staphylococcus aureus
presiones altas para su crecimiento, pero las soportan.
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Halofílico Organismos que requieren altas concentraciones de sal para Halobacterium
vivir
Sacarofílico Organismo que requere altas concentraciones de azúcar para Saccharomyces cerevisiae
vivir.
6.- Discuta los resultados que observó en su práctica de laboratorio.

Resultados de concentración de NaCl Resultados de concentración de sacarosa

Staphylococcus aureus Presenta una pared Sacharomyces cerevisiae y Pichia sp
celular que representa el 50% del peso La tolerancia que presentan las levaduras a
molecular de la bacteria y el la presión osmótica y por lo tanto
resistencia a las altas concentraciones de
peptidoglicano funciona como estabilizador
sacarosa se debe a que algunas de estas
osmótico y evita la lisis de la bacteria levaduras como S. cerevisiae posee una
por al gradiente en la concentración de familia multigenica de transportadores de
sal. Contiene Prolina como soluto azucares.
compatible.
Escherichia coli Es una bacteria Gram (-) En las cepas bacterianas se observa
la cual en su pared celular consta de una únicamente que algunos crecen a
determinadas concentraciones de azúcares.
capa muy delgada de peptidoglicana y una
membrana externa, a parte de que posee
Colina como soluto compatible que le ayuda
a resistir la presión osmótica
Bacillus megaterium y Bacillus subtilis
Posee una capa gruesa de peptidoglicana la
cual le proporciona rigidez y resistencia
osmótica. Contiene Betaína (glicínbetaína),
un derivado trimetilado de la glicocola
(contenida en cianobacterias y en algunas
Gram-positivas) como soluto compatible.
Micrococcus luteus tiene una gruesa pared
celular que puede abarcar tanto como el 50%
del materia celular. Contiene Betaína
(glicínbetaína), un derivado trimetilado de
la glicocola (contenida en cianobacterias y
en algunas Gram-positivas) como soluto
compatible.
Salmonella typhi. Posee una membrana
externa as como una pared delgada de
peptidoglicana
Sacharomyces cerevisiae y Pichia sp A las
levaduras les resultan tóxicos algunos
iones lo que inhibe su crecimiento en este
caso el ion Na+.

Microorganismo Clasificación
NaCl Sacarosa
Staphylococcus aureus Halofilico moderado Sacarotolerante
Escherichia coli Halotolerante Sacarotolerante
Bacillus megaterium Halotolerante Sacarotolerante
Bacillus subtilis Halotolerante Sacarofílico moderado
Micrococcus luteus Halotolerante Sacarofílico moderado
Salmonella typhi Halotolerante Sacarotolerante
Sacharomyces cerevisiae No soporta bajas a concentraciones Sacarofílico
Pichia sp No soporta bajas a concentraciones Sacarofílico
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7.- ¿Cuáles son las temperaturas cardinales?

Para cada microorganismo existe una temperatura mínima por debajo de la cual no existe
crecimiento, una temperatura óptima a la cual el crecimiento es el más rápido posible y
una temperatura máxima, rebasada la cual, no existe crecimiento. Estas tres temperaturas
son denominadas “temperaturas cardinales”.

8.- Mencione la clasificación de los organismos con base en su temperatura óptima.

Mencione un ejemplo en cada caso y dónde encontraría a cada uno.

Clasificación Características
Psicrófilos Organismos con temperaturas óptimas de crecimiento por debajo de los 15 ºC.
Ej: Polaromonas vacuolata, flavobacterium.
Mesófilos Organismos con temperaturas óptimas de crecimiento entre 15 y 45 ºC.
Ej: E. coli, Bacillus Megaterium
Termófilos Organismos con temperaturas óptimas de crecimiento por arriba de los 45ºC.
Ej. Pyrococcus furiosus, Thermus aquaticus
Hipertermófilos Organismos con temperaturas óptimas de crecimiento por arriba de los 80ºC.
Ej. Sulfolobus acidocaldarius

9.- ¿Qué es un organismo euritérmico? ¿Qué es un organismo estenotérmico?

Euritérmico Organismos que crecen en intervalos de temperatura amplios.

Ejemplo: Enterococcus faecalis 0 y 44°C
Estenotérmic Organismos que crecen en intervalos de temperatura estrechos.
o Ejemplo: Neisseria gonorrhoeae 30 y 38 °C

10.- ¿Cuáles son los mecanismos adaptativos a temperaturas bajas o elevadas extremas que
le permiten sobrevivir a los microorganismos?

Mecanismo Descripción
Agrupación Entre más agrupados estén las células del centro pueden protegerse mejor
que los microorganismos que se encuentran aislados
Enzimas Las enzimas de los organismos termorresistentes difieren en unos cuantos
aminoácidos que las de los organismos que no lo son, sin embargo, estos
cambios propician un plegamiento especial, plenamente homofóbico, en la
proteína que le confiere esa termorresistencia
Formación de Los puentes salinos interpeptídicos incrementan la capacidad calorífica
puentes de sal de la proteína y las hace más resistentes al calor.
Estructura de Los organismos psicrofílicos presentan cadenas de ácidos grasos
la membrana insaturados en su membrana, lo que la hace más fluída, en cambio los
citoplásmica termófilos e hipertermófilos poseen en su membrana ac. Grasos saturados
lo que le da mayor rigidez a la membrana impidiendo que se fluidice tan
fácilmente por acción de la temperatura.
En las arqueas Enlaces éter, monocapas lipídicas, y cadenas de isoprenos.

11.- ¿Cuál es la importancia biotecnológica de los productos de los organismos

extremófilos?
Las enzimas de estos microorganismos son más resistentes y que las enzimas de los
organismos mesófilos,lo que prolonga su vida útil. Esto nos permite utilizarlas en
procesos biotecnológicos, catalizando reacciones a temperaturas extremas, como lo es el
caso de la DNApol de Thermus acuaticus, que vive en aguas termales entre 55-88ºC. Esta
plimerasa, llamada Taq polismerasa, ha permitido que la PCR (Protein Chain Reaction) pueda
llevarse a cabo más eficientemente, utilizando actualmente lo que se conoce como
termocicladores, en donde ésta técnica para la amplificación de secuencias específicas de
DNA puede llevarse a cabo en ciclos repetitivos con una sola muestra de enzima. También en
procesos industriales se reduce la contaminación, al hacer más eficientes los procesos.

12.- ¿Qué es el tiempo térmico mortal y el punto térmico mortal?

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Tiempo térmico mortal Tiempo en el cual mueren todas las células a una temperatura dada
Punto térmico mortal Mínima temperatura para que todos los organismos de una población
mueran en 10 minutos de exposición.

13.- ¿Qué evaluó en la práctica de tiempo térmico mortal y punto térmico mortal?
¿Yo? Nada. Pero en esa práctica se evalúa el punto térmico mortal y el tiempo térmico
mortal de diferentes microorganismos en diferentes soportes o medios de suspensión: agua,
jugo de naranja, leche y sacarosa.

14.- ¿Qué soporte protegió más a las bacterias a temperatura elevada: leche, agua o jugo?
La protección de las bacterias depende del medio. En este caso, por las altas
concentraciones de proteínas y ácidos grasos, la leche resultó protegerlos más, el jugo
tiene un pH elevado, es el siguiente y por último el agua.

15.- ¿Qué es pasteurización? ¿Cuál es el fundamento? Descríbalo ampliamente.

Es un proceso que reduce las poblaciones microbianas en los alimentos que son sensibles al
calor, debe su nombre a su descubridor, Louis Pasteur. El procedimiento no es una forma de
esterilización puesto que existen numerosos microorganismos capaces de resistir a estos
tratamientos, denominados termodúricos, por ello, la pasteurización sólo es un tratamiento
térmico cuyo objetivo es la destrucción de la mayor parte de las células vegetativas de
los microorganismos patógenos que alteran los alimentos, conduciéndolos a procesos de
fermentación indeseables o al daño de las personas que los consumen. Actualmente se
consigue haciendo pasar el alimento por un intercambiador de calor, con una velocidad de
flujo y una temperatura determinadas (que no excede los 100 ºC), y luego se enfría
rápidamente (4ºC) para producir un choque térmico que evita que el DNA y las proteínas
desnaturalizadas por el calor se renaturalicen. Las bacterias gram (-) son más
susceptibles a este cambio brusco, porque su pared celular de peptidoglicana es más
delgada, sin embargo es en este grupo donde se encuentran la mayor parte de patógenos
entéricos.

16.- ¿Cómo se llaman los microorganismos que resisten la pasteurización? Mencione tres
ejemplos.
Termodúricos. Streptococcus, Micrococcus y Lactobacillus, Lysteria Monocitogenes.

17.- Explique ampliamente cómo realizó la pasteurización en el laboratorio, en qué medios

sembró y cómo interpretó los resultados; cómo obtuvo el porcentaje de sobrevivencia y cómo
evaluó que el procedimiento fue eficiente.

De un tubo de ensaye que contenía leche a la que se le adicionaron las cepas Escherichia
coli y Bacillus subtillis se hicieron dos series de diluciones decimales. La primera, se
realizó con la leche sin someterse a un proceso de calentamiento a 63ªc, 30 minutos y
rápido enfriamiento en un baño de hielo, la segunda se realizó con la leche que ya había
sido sometida a este proceso de pasteurización.

Para determinar el % de sobreviviencia, se sembró 0.1 mL de muestra en cajas de gelosa

simple de cada una de las diluciones y se extendió con varilla acodada, para después
incubarse a 37ºC. Se realizó la cuenta de colonias en las placas que tuvieran entre 25 y
250 colonias, tanto para la serie de placas sembradas con leche antes de la pasteurización
como después de la pasteurización y se determinó el número de UFC/mL de muestra,
reportándose como UFC/mL antes de pasteurizar y UFC/mL después de pasteurizar. De aquí se
dijo que las UFC/mL antes de pasteurizar son equivalentes al 100% de sobrevivencia, y por
lo tanto, por una relación se obtiene el % de sobrevivencia para UFC/mL después de
pasteurizar.
La eficiencia se considera como la unidad menos el % de sobrevivencia.
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También se realizó una prueba cualitativa, sembrando en placas de gelosa simple y medio
EMB por estría cruzada a partir de las muestras de leche antes y después de la
pasteurización, en ambas placas pudo identificarse la presencia de ambos microorganismos
para la siembra de la muestra antes de la pasteurización: E. coli era identificable en el
medio EMB como colonias oscuras con brillo metálico, ya que E. coli es una bacteria gram
(-) y Bacillus subtillis se observaba en medio EMB como una colonia opaca, blanca y de
bordes irregulares y sabemos que es una gram (+), en el medio gelosa simple no era tan
apreciable la diferencia salvo que E. coli presentaba aspecto húmedo a diferencia de B.
subtillis y bordes definidos. Sin embargo en las placas sembradas después de la
pasteurización solo el gram (+) creció, E. coli había sido eliminada, por lo cual sabemos
que la pasteurización se llevó a cabo de manera eficiente.

18.- ¿Cómo evaluó el efecto del pH sobre el crecimiento microbiano? Mencione la

clasificación de los organismos con base en su pH óptimo. ¿Qué mecanismos tienen los
organismos para poder resistir los bajos y altos de pH?

El efecto del pH se evaluó sembrando cada cepa en tubos de ensaye con caldo nutritivo y
extracto de levadura al 0.25% con el pH ajustado a 3, 5, 7, 9 y 11; posteriormente se
realizó la lectura de crecimiento después de incubar a 37 ºC. El crecimiento se evaluó por
el método de las cruces, al realizar las gráficas correspondientes (Crecimiento-pH) se
obtuvieron las curvas de crecimiento para cada microorganismo, con las cuales fue posible
clasificarlos con base en su pH óptimo de crecimiento:

Clasificación pH óptimo
Acidófilos* Aquellos que crecen en pH 0-5.5
Neutrófilos Aquellos que crecen en pH 5.5-7
Alcalófilos* Aquellos que crecen en pH 8.5-11.5
*** Obligados: cuando son incapaces de crecer o mueren en pHs cercanos a la
neutralidad

Los organismos pueden resistir a los altos y bajos de pH gracias a que sus enzimas se han
adaptado a los pH extremos. El pH intracelular debe ser neutro, para ello algunas
bacterias como Helicobater pylori tienen enzimas ureasas que degradan la urea hasta
amoniaco, que es un compuesto que alcaliniza el medio, así puede neutralizar el medio
ácido del estómago.

19.- Defina microbicida y Microbiostático.

Microbicida Agente químico capaz de eliminar a un microorganismo

Microbiostático Agente químico que inhibe a un microorganismo pero que si deja de estar
presente,el microorganismo puede crecer.

20.- ¿Qué es un colorante? ¿Cuáles son sus usos en microbiología? ¿Qué colorantes usó en
la práctica de colorantes y a qué familia pertenecen? ¿Qué colorantes son más efectivos
contra los organismos?

Los colorantes son compuestos orgánicos que tienen varios usos en la microbiología:
Tinción, agentes selectivos (MaC, cristal violeta), indicadores de pH [rojo neutro, vire:
6.4 (rosa) a 8.0 (amarillo)] y óxido-reducción.

Trifenilmetano: Moderadamente bactericidas, no tienen efecto sobre las esporas, mejor

acción contra Gram positivas. Posiblemente actúan interfiriendo la oxidación celular o en
la biosintesis de la pared celular. Dentro de esta Cristal violeta y verde de malaquita.

Acridina: Semejante a los compuesto con anilina, efecto mayor en Gram positivo pero no
tiene efecto contra Psudomonas aeruginosa, Mycobacterium y las esporas bacterianas.
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Algunos compuesto actúan sobre el DNA alterando su estructura y modificando sus
propiedades biológicas al ser moléculas planas. Dentro de ésta Bromuro de etidio y
acriflavina.

Colorantes se adhieren a la pared celular y impiden su íntesis, o intervienen en las

reacciones redox de la célula fungiendo como último aceptor de electrones de la cadena
respiratoria.

21.- Mencione la clasificación de los detergentes según su carga y de un ejemplo de cada

uno. Mencione su mecanismo de acción. ¿Cuáles fueron sus observaciones experimentales?

Clasificación Mecanismo de acción Ejemplo

Disuelven moléculas hidrofóbicas,

disminuyen la tensión superficial y
desestabilizan la membrana.
Catiónicos En solución se ionizan, pero considerando Cetil trimetil amonio.
el comportamiento de sus grupos en Cloruro de benzalconio.
solución, el grupo hidrófobo queda cargado
negativamente. Están constituidos por una
cadena alquílica lineal o ramificada que va
de 10 a 14 átomos de carbono, y en su
extremo polar de la molécula se encuentra
un anión.
Aniónicos En solución forman iones, resultando SDS
cargado positivamente el grupo hidrófobo de
la molécula. Son compuestos cuaternarios de
amonio o una amina grasa en medio ácido.
No-iónicos Al ionizarse, se solubilizan mediante un Brij36T
efecto combinado de un cierto número de
grupos solubilizantes débiles (hidrófilos)
tales como enlace tipo éter ó grupos
hidroxilos en su molécula.

22.- ¿Cuál es el mecanismo de acción de los metales? De tres ejemplos de metales y sus
usos en microbiología.
Por su alta electropositividad, los metales pesados pueden reaccionar con grupos cargados
negativamente de las proteína (carboxilo libres o sulfhidrilo) causando la inactivación,
mediante una coagulación o precipitación, y pueden causar el efecto microbicida o
Microbiostático.

Ejemplos: Ag, Cu, Hg, en forma de sales y disueltos en agua.

23.- Mencione cinco géneros microbianos productores de antibióticos.

Antibiótico Organismo productor Organismos blanco Sitio o modo de acción

Penicilina Penicillium chrysogenum(H) BacteriasGram + Síntesis de la pared
Cefalosporina Cephalosporium acremonium  (H) Bacterias Gram + y - Síntesis de la pared
Bacitracina Bacillus  subtilis(B) BacteriasGram + Síntesis de la pared
Polimixina B Bacillus polymyxa (B) BacteriasGram + Membrana celular
Anfotericina B Streptomyces nodosus  (B) Hongos Membrana celular
Eritromicina Streptomyces erythreus (B) BacteriasGram + Síntesis proteica
Neomicina Streptomyces fradiae  (B) Bacterias Gram + y - Síntesis proteica
Streptomycin Streptomyces griseus  (B) BacteriasGram - Síntesis proteica
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Tetraciclina Streptomyces rimosus  (B) Bacterias Gram + y - Síntesis proteica
Vancomicina Streptomyces orientalis  (B) BacteriasGram + Síntesis proteica
Gentamicina Micromonospora purpurea  (B) Bacterias Gram + y - Síntesis proteica
Rifampicina Streptomyces mediterranei(B) M. tuberculosis Síntesis proteica
Griseofulvina Penicillium griseofulvum(H) Hongos dermatófitos Microtúbulos

24.- ¿Qué es un antibiótico?

Sustancia química (metabolito secundario) producida por ciertos organismos que a bajas
concentraciones tiene la capacidad de inhibir el crecimiento o producir la muerte de
microorganismos. Cabe mencionar que aquellos compuestos que se sintetizan en un
laboratorio no pueden ser llamados antibióticos, por la definición, éstos se llaman
quimioterapéuticos.

25.- ¿Qué antibiótico usó en la práctica de laboratorio? ¿Cuál es su mecanismo de acción?

Discuta si sus resultados experimentales fueron congruentes con lo esperado.

Ampicilina. Actúa sobre la síntesis de la pared celular. Es un -lactámico al igual que la

penicilina, y actúa en última fase de la síntesis de la peptidoglicana de la pared
celular, uniéndose a una enzima transpeptidasa llamada proteína fijadora de penicilina,
responsable de producir una serie de enlaces cruzados entre las cadenas de péptidos
(aminoácido D-alanina). La formación de estos enlaces o puentes es la que confiere,
precisamente, la mayor rigidez a la pared bacteriana. Por lo tanto, las bacterias sin su
pared celular estallan o son más fácilmente fagocitadas por los granulocitos.

Los resultados coinciden con lo esperado, pues resultaron ser mayormente inhibidos los
microorganismos geam (+) aunque la presencia de la cápsula de Klebsiella Pneumoniae es un
factor que le confiere a ésta cierta resistencia, a pesar de ser un gram (-).

26.- ¿Qué método usó para la determinación de la sensibilidad de antibióticos en su

práctica? Discuta las ventajas y desventajas de ellos.

Método de Kirby-Bauer (multidiscos), el método de diluciñon en tubos y el método de

dilución en agar o vaciado en placa.

Método Ventajas Desventajas

Kirby-Bauer Se pueden evaluar distintos
(multidiscos) antibióticos a la vez, y a
distintas concentraciones
Vaciado en Se puede determinar la CMI.
placa Pueden evaluarse varios
microorganismos distintos en una
sola placa.
Dilución en Puede determinarse la CMI y la
tubo actividad bactericida o
bacteriostática del antibiótico.
El antibiótico se encuentra de
manera más homogénea.
Traslape de los halos
Solo se puede trabajar con un
microorganismo a la vez
Sólo se puede evaluar un
antibiótico a la vez.
Es un método laborioso y requiere
tiempo.
El antibiótico no se encuentra lo
suficientemente homogéneo.
Sólo se puede evaluar una bacteria
por vez.
Utiliza mucho material.

27.- ¿Cómo se determina la Concentración Mínima Inhibitoria? ¿Qué significa? ¿Cómo se

reporta?
Es la más baja concentración de antibiótico capaz de inhibir la multiplicación de una
cantidad determinada de bacterias, puede determinarse haciendo diluciones en tubo del
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antibiótico, y sembrando determinada cantidad de microorganismo en ellos. Incubar y
verificar hasta qué dilución se encuentra que ya no crece microorganismo, la concentración
de antibiótico presente en esa dilución es la CMI. Y se reporta en g/mL de antibiótico.

28.- ¿Cuál es la importancia de evaluar la sensibilidad antimicrobiana?

Como medio para encontrar un tratamiento para un individuo que presenta una patología
causada por una bacteria, para seleccionar el antibiótico más adecuado. En investigación
para hacer análisis rutinarios de verificación de generación de resistencia en especies
bacterianas.

29.- Problema: Usted aisló un actinomiceto en su práctica de laboratorio, los químicos

orgánicos extrajeron lo que parece ser un nuevo antibiótico. Usted tiene qué evaluar su
sensibilidad con bacterias, así que preparó la solución de su antibiótico a 1.5 g/mL e
hizo diluciones seriadas de la siguiente manera: 1:4, 2(1:10), 3(1:13), 2(1:5). Una vez
que hizo la dilución en tubo, transfirió 2.5 mL a cajas de petri estériles y adicionó 230
mL de agar fundido. En las cajas sembró Escherichia coli, Staphylococcus aureus,
Klebsiella pneumoniae. E. coli creció hasta el tubo 5, S. aureus creció en todas las
diluciones y K. pneumoniae creció hasta el tubo 2. Calcule la dilución acumulada, la
concentración en g/mL de los tubos y las cajas. Indique cuál fue la C.M.I. para cada
bacteria. Con los resultados obtenidos ¿cree que su nueva molécula es buen candidato para
ser usado como un antibiótico? ¿Qué otras pruebas deberá hacer para evaluar su
antibiótico?