MICRO

UNAM - EPIA
UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA

ESCUELA PROFESIONAL INGENIERIA AMBIENTAL
V CICLO
MICROBIOLOGIA
INFORME DE LABORATORIO II
PRESENTADO POR LOS ALUMNOS:
CARLOS HUAMAN, BRENDA MAILY

SARMIENTO CONDORI, MELANY NICOLE
VALDIVIA YAULLI, KAREN VERONICA
CARDENAS MAMANI, WILLIAN ABEL
FLORES MAMANI, JONATHAN FIDEL
PROFESOR:
ING. GUILMAR MEDINA
ILO-PERU
2018
PREPARACIÓN Y ESTERILIZACIÓN DE MATERILES Y MEDIOS DE CULTIVO

UNAM - EPIA
TABLA DE CONTENIDO
I. INTRODUCCIÓN …………………………………………………………….. 1
II. OBJETIVOS …………………………………………………………………… 2
III. REVISIÓN BIBLOGRAFICA ………………………………………………… 3
1. ESTETILIZACION ……………………………………………………………. 3
1.1. FISICOS …………………………………………………..
………………. 3
1.1.1. CALOR ………………………………………………………….…. 3
1.1.1.1. CALOR HUMEDO
……………………………………………. 3
1.1.1.2. CALOR SECO …………………………………...…...
……….. 4
1.1.2. RADIACIONES …………………………………...…………...….. 4
1.1.3. MECANICOS ………………………………...……………...…….. 5
1.2. QUIMICOS
………………………………………………………………... 5
2. MEDIOS DE CULTIVO ………………………………...…………………….. 6
2.1. CONSTITUYENES HABITUALES DE LOS MEDIOS DE
CULTIVO .... 7
2.2. TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO …………………………………...
….. 8
2.3. PREPARACIÓN …..………………………………….
…………………… 8
IV. MATERIALES Y METODOS ……………………………….………………. 10
1. MATERIALES …………………………………………………………….…. 10

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2. METODOS ………………………………………………………………..….. 14
V. RESULTADOS ……………………………………………………….……… 19
VI. CONCLUSIÓN ……………………………………………………….……… 20
VII. REFERENCIAS ……………………………………………………..……….. 21
LISTA DE IMÁGENES
Imagen 1. Ejemplo de tubo de ensayo. ………………………………………………………10
Imagen 2. Ejemplo de matraz. ………………………………………………………………..10
Imagen 3. Ejemplo de placa Petri ……………………………………………………………11
Imagen 4. Ejemplo de agua destilada. ………………………………………………………
11
Imagen 5. Ejemplo de Estufa digital ………………………………………………………...
12
Imagen 6. Ejemplo de Autoclave vertical ………………………………………………….. 12
Imagen 7. Ejemplo de papel kraft. ……………………………………….………………… 13
Imagen 8. Ejemplo de gasa y algodón. …………………………………………………….. 13
Imagen 9. Preparación de matraz para esterilización. ………………………….…….… 14
Imagen 10. Preparación de tobos de ensayo para esterilización. ……………………… 14
Imagen 11. Preparación de placa Petri para ser esterilizado…………………………… 15
Imagen 12. Preparación de placa Petri para ser esterilizado ………...……………….. 15

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Imagen 13. Ejemplo modelo de gorro ………………………………………….……………
16
Imagen 14. Colocación de gorro al matraz …………………………………………... 16
Imagen 15. Ejemplo de cómo acomodar los materiales en la estufa ……………….….. 17
Imagen 16. Material listo para la esterilización por calor seco …………………...…… 17
Imagen 17. Cesta de rejilla base para colocar los materiales a esterilizar ……..……. 18
Imagen 18. Material listo para la esterilización por calor húmedo ……………………. 18

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I. INTRODUCCIÓN:
Para el estudio de los microorganismos es indispensable contar entre otras cosas
con material y medios de cultivo estériles. En Microbiología la esterilización se
define como “el proceso mediante el cual se eliminan todos los microorganismos
de un objeto, medio o superficie” y su aplicación garantiza la ausencia de
microorganismos en el material y medios de cultivo a ser empleados. Existen
diversos métodos de esterilización, entre ellos: calor (seco o húmedo), filtración,
radiaciones y aplicación de gas de óxido de etileno
Un medio de cultivo está constituido por una mezcla de agua y sustancias
orgánicas e inorgánicas, los que en conjunto proporcionan los requerimientos
nutricionales para el desarrollo de los microorganismos.
El crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Para que las bacterias
crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de
condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno
adecuado, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad.
El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparación de
medios de cultivo.
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II. OBJETIVOS:
- Explicar el concepto de esterilización y su aplicación en microbiología.
- Preparar correctamente el material que se someterá a esterilización.
- Adquirir conocimientos sobre el adecuado procedimiento para la
esterilización de materiales de laboratorio.
- Aprender a utilizar equipos dependiendo los casos en los que son
necesarios.
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III. REVISIÓN BIBLOGRAFICA:
1. ESTETILIZACION:
La esterilización es la muerte y/ o eliminación de todo microorganismo. No
existen grados de esterilidad, un objeto es estéril o no lo es.
La dinámica de la esterilización dice que la proporción de microorganismos
muertos en iguales periodos de tiempo es constante. A mayor temperatura,
mayor acción y menos tiempo necesario para esterilizar. Esto es válido para
cualquier procedimiento químico o físico excepto filtración. Los métodos de
esterilización se clasifican en:
1.1. FISICOS:
1.1.1. CALOR:
Actúa por desnaturalización de proteínas y contribuye a la fusión de
lípidos de membranas.
1.1.1.1. CALOR HUMEDO:
la desnaturalización y coagulación se facilita en presencia de
agua pues se rompen los puentes de hidrógeno entre los grupos C
= O----HN que constituye la estructura secundaria y se agrega
(también mediante puente de hidrógeno) una molécula de agua a
cada extremo de esas uniones rotas. Las proteínas en soluciones
más diluidas coagulan a menor temperatura que las concentradas.
Esterilizar exclusivamente en calor húmedo: medios de cultivos,
recipientes contaminados, material de goma, y todo elemento que
no resista las altas temperaturas del calor seco.
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La autoclave utiliza vapor a presión superior a la normal. Así, la
temperatura del vapor de agua asciende a 121ºC. El vapor
saturado penetra en los recipientes tomando contacto con los
microorganismos a destruir, allí se condensa liberando calor. El
calentamiento es rápido por la gran cantidad de calor latente del
vapor de agua, que libera al condensarse sobre la superficie del
objeto.
1.1.1.2. CALOR SECO:
Deshidrata las bacterias, virus, etc. y facilita la coagulación o
desnaturalización de las proteínas. Se requieren mayores
temperaturas para producir daño irreversible (muerte). Se acepta
que el calor seco actúe oxidando los constituyentes intracelulares.
En el proceso de esterilización son prioritarios los procesos
oxidativos y de fusión de membranas por sobre la
desnaturalización. Resulta lento por la menor eficacia del calor
seco y por la lentitud del transporte del calor (convección y
radiación).
Esterilizar exclusivamente a calor seco: Cera, vaselina, talco,
recipientes cerrados herméticos de vidrio o metálicos sin filo.
1.1.2. RADIACIONES:
Luz ultravioleta: solamente para aire o para superficie o capas muy
delgadas de líquidos pues no penetra. Se usa para consultorios, salas,
laboratorios, cámaras, quirófanos. No atraviesan el vidrio. Las ondas
UV tienen suficiente energía para causar roturas en el ADN,
produciendo la muerte del organismo expuesto. Las cámaras de
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siembra vienen equipadas con una lámpara de luz UV para mantener
el área estéril, la cual se debe apagar cuando se ingresa a la cabina
por la peligrosidad a la exposición de las radiaciones (quemaduras,
eritemas, cáncer de piel).
1.1.3. MECANISMOS:
FILTRACIÓN: para medios de cultivo, sueros y soluciones que se
alteren con el calor. En la mayoría de los filtros hay tres factores
principales que intervienen en la retención de partículas (bacterias,
virus, proteínas, etc.):
a) Efecto mecánico de filtro, según el tamaño del poro.
b) Repulsión o atracción eléctrica
c) Absorción y adsorción
Por b y c pueden resultar que el filtro retenga partículas menores que
el diámetro del poro. La mayoría de los filtros bacterianos tienen
cargas negativas igual que las bacterias y los virus. Se disminuye la
retención por esta causa, trabajando a pH entre 7 y 6.
ULTRAFILTRACIÓN: para separación y medición de virus.
Membranas de ésteres de celulosa biológicamente inertes que no
retienen partículas por adsorción por lo tanto la retención de
partículas depende principalmente del tamaño de los poros.
1.2. QUIMICOS:
Desinfectantes: son agentes antimicrobianos capaces de matar los
microorganismos patógenos (infecciosos) de un material. Pueden (y en
muchos casos suelen) presentar efectos tóxicos sobre tejidos vivos, por lo
que se suelen emplear sólo sobre materiales inertes.
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Esterilización por gas plasma: Es una de las tecnologías posibles para
esterilizar material termo sensible.
Consiste en crear un plasma (estado entre líquido y gas), aplicando una
radiofrecuencia a Peróxido de Hidrógeno que ejerce la acción biácida. El
plasma es considerado como el cuarto estado de la materia consistente en un
conjunto de iones, electrones y partículas atómicas neutras.
Tiene la ventaja de no dejar ningún residuo tóxico ya que se convierte en
agua y oxígeno al final del proceso.
El material no precisa aireación. El ciclo de esterilización es corto, dura entre
54 y 75 minutos.
Esterilización con óxido de etileno: este método se aplica a materiales termo
sensibles, sondas, instrumental vario. Este gas se administra mediante una
autoclave especial. Para ejercer su efecto necesita humedad y una
temperatura moderada (60ºC). La desventaja es que genera residuos
contaminantes que deben recibir tratamiento antes de ser desechados. El
material tratado debe ser sometido a aireación forzada para eliminar los
residuos tóxicos. El personal debe protegerse adecuadamente.
2. MEDIOS DE CULTIVO:
Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y
otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los
microorganismos. La diversidad metabólica de estos es tan grande que la
variedad de medios de cultivo es enorme, no existiendo un medio de cultivo
universal adecuado para todos ellos, ni siquiera refiriéndonos a las bacterias con
exclusividad.
2.1. CONSTITUYENES HABITUALES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO:
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- AGAR:
Se utiliza como agente gelifican te para dar solidez a los medios de
cultivo. En el agar bacteriológico el componente dominante es un
polisacárido que se obtiene de ciertas algas marinas y que presenta la
indudable ventaja de que, a excepción de algunos microorganismos
marinos, no es utilizado como nutriente. Un gel de agar al 1-2% se
licua alrededor de los 100ºC y se gelifica alrededor de los 40ºC,
dependiendo de su grado de pureza.
- PEPTONES:
Son mezclas complejas de compuestos orgánicos, nitrogenados y
sales minerales, que se obtienen por digestión enzimática o química
de proteínas animales o vegetales (soja caseína carne, etc.). Las
peptonas son muy ricas en pépticos y aminoácidos, pero pueden ser
deficientes en determinadas vitaminas y sales minerales.
- EXTRACTOS
Su preparación consiste en que ciertos órganos o tejidos animales o
vegetales (carne, hígado, cerebro, semillas, etc.) son extraídos con
agua y calor y posteriormente concentrados hasta la forma final de
pasta o polvo. Estos preparados deshidratados son a menudo
empleados en la elaboración de los medios de cultivo. Los más
utilizados son el extracto de carne, de levadura y el de malta.
- FLUIDOS CORPORALES:
Con frecuencia es necesario añadir a los medios de cultivo de algunas
patógenas sustancias como sangre completa, sangre desfibrinada,
plasma o suero sanguíneo, sobre todo para conseguir el primer
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aislamiento a partir del hospedador. La sangre no puede ser
esterilizada, y por tanto debe de ser obtenida en condiciones asépticas
directamente de un animal sano, y adicionada al medio de cultivo
después de que este haya sido auto clavado. Los fluidos corporales
no solo aportan factores de crecimiento, sino que también aportan
sustancias que neutralizan a inhibidores del crecimiento de algunas
bacterias. Un ejemplo podría ser la catalasa presente en las células
sanguíneas destruye el peróxido de hidrógeno que algunas bacterias
que no poseen este enzima acumulan como producto del
metabolismo del oxígeno.
2.2. TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO:
MEDIOS GENERALES
Son aquellos que permiten el crecimiento de una gran variedad de
microorganismos.
MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO
Son aquellos que favorecen el crecimiento de u determinado tipo de
microorganismo sin llegar a inhibir totalmente el crecimiento de los demás.
MEDIOS SELECTIVOS
Son aquellos que permiten el crecimiento de un tipo de microorganismos
determinado, inhibiendo el desarrollo de los demás.
MEDIOS DIFERENCIALES
Son aquellos en los que se pone de manifiesto propiedades que un
determinado tipo de microorganismos posee.
2.3. PREPARACIÓN:
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En la actualidad, la mayoría de los medios de cultivo se encuentran
comercializados; normalmente bajo la forma de liofilizados a los que es
preciso rehidratar. En estos casos la preparación del medio de cultivo se
reduce sencillamente a pesar la cantidad deseada del mismo y disolverla en
agua destilada siguiendo las instrucciones del fabricante. Las sustancias
termolábiles, se esterilizan por filtración y se añaden al resto de los
componentes después de que estos hayan sido previamente esterilizados en
la autoclave y enfriados a temperatura ambiente o a 40-50ºC si se trata de
medios con agar. Antes de su esterilización los medios líquidos se reparten
en los recipientes adecuados (tubos, matraces, etc.). Si es un medio sólido y
se ha de distribuir en tubos o en matraces será necesario fundir el agar en
baño María u horno microondas, una vez fundido y homogenizado, se
distribuye en caliente a los tubos o matraces (no en placas Petri) se tapa y se
esteriliza en la autoclave. Una vez finalizada la esterilización los medios se
dejarán enfriar a temperatura ambiente y en el caso de medios sólidos
contenidos en tubos deberán, en su caso, inclinarse para que al solidificarse
adopten la forma de agar inclinado o pico de flauta(slant) si tal es su
finalidad. 5 Las placas de Petri se preparan vertiendo el medio fundido y
estéril dentro de ellas y en un ambiente aséptico (por ejemplo, en la
proximidad de la llama de un mechero Bunsen) es conveniente homogenizar
el medio en el transcurso de la operación para evitar que el agar sedimente
en el fondo del recipiente y no se distribuya por igual en todas las placas.
También es posible conservar el medio destinado a preparar placas Petri
solidificado y estéril en tubos que se fundirán al baño María en el momento
de la preparación de las mismas. Los caldos y medios sólidos pueden
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conservarse, una vez esterilizados, a temperatura ambiente, pero para reducir
su deshidratación y el consiguiente cambio en las concentraciones de sus
componentes es preferible conservarlos a 4ºC.
IV. MATERIALES
Y METODOS:
1. MATERIALES
 Tubo de ensayo
Imagen 1. Ejemplo de tubo de ensayo.
 Matraz
Imagen 2. Ejemplo de matraz.
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 Placa Petri
Imagen 3. Ejemplo de placa Petri.
 Agua destilada
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Imagen 4. Ejemplo de agua
destilada.
 Estufa digital
Imagen 5. Ejemplo de Estufa
digital.
 Autoclave
vertical
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Imagen 6. Ejemplo de Autoclave
vertical.
 Papel kraft
Imagen 7. Ejemplo de papel kraft.
 Gasa y Algodón
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Imagen 8. Ejemplo de
gasa y algodón.
2. METODOS
PRIMERO:
Tapar los tubos de ensayo y los dos matraces con torundas (algodón y gasa),
siguiendo las indicaciones del profesor.
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Imagen 9. Preparación de matraz para esterilización.
Imagen 10. Preparación de tobos de ensayo para esterilización.
SEGUNDO:
Envolver las placas Petri
y los tubos de ensayo con
papel kraft siguiendo las
indicaciones
del profesor.
Anotar en el papel, la
cantidad, fecha, etc.
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Imagen 11. Preparación de placa Petri para ser esterilizado.
Imagen 12. Preparación
de placa Petri para ser esterilizado.
TERCERO
Con papel kraft, elaborar
un gorro ligeramente
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más grande que el tapón de algodón para luego cubrir la parte superior siguiendo
las instrucciones del profesor.
Imagen 13. Ejemplo modelo de gorro.
Imagen 14. Colocación de
gorro al matraz.
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CUARTO
Finalmente los materiales son llevados a la estufa digital para ser esterilizados
por calor seco siguiendo las instrucciones del profesor.
Imagen 15. Ejemplo de cómo acomodar los materiales en la estufa.
Imagen 16. Material listo para la esterilización por calor seco.
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QUINTO:
colocar los materiales al Autoclave para seguir con el procedimiento de
esterilización por calor húmedo siguiendo las instrucciones del profesor.
Imagen 17. Cesta de
rejilla base para colocar los
materiales a esterilizar.
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Imagen 18. Material listo para la esterilización por calor húmedo.
V. RESULTADOS:
- Lavado y empacado de material
El lavado realizado fue eficiente ya que no se observaron restos de algún residuo
en el material ni abundancia de partículas de polvo. El empacado es una parte
importante ya que protege el material y en el caso de aquellos que contengan
torunda evita que ésta se moje, el empacado fue eficiente ya que el material no
se rompió y las torundas se conservaron secas.
- Esterilización de los Medios
La esterilización de los materiales y manejo de ellos juega un papel importante,
ya que de ello depende el buen desarrollo de los microorganismos.
Al elevar la temperatura del inoculo preparado se hace con la finalidad de
reducir la sobrecarga de microorganismos, para verificar que en realidad la
esterilización había sido correcta se hubieran dejado los materiales con medios
de cultivo en reposo durante unos días, para verificar que no existirían indicios
de crecimiento microbiano.
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VI. CONCLUSIÓN:
Mediante el desarrollo de esta práctica definimos, estudiamos y aplicamos los
procedimientos que se deben realizara previamente para la elaboración de un
medio de cultivo, es claro que esto es referido para con la unidad que estamos
estudiando, microbiología, por otro lado nos dimos cuenta cuán importante es la
asepsia tanto con los materiales como con el espacio se realizara para que así
tener los resultados verídicos sin error alguno, por lo tanto creemos que en la
práctica se logró los objetivos trazados al inicio de la misma.
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VII. REFERENCIAS:
http://aline-m-e-p.blogspot.com/2012/04/practica-2-preparacion-y-esterilizacion.html?
m=1
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Protocolo2_3_19088.pdf
https://www.ebah.com.br/content/ABAAAfPTkAL/practica-no-1
http://realisaciondeanalisis.blogspot.com/2012/06/esterilizacion-del-material-de.html
22
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CARLOS HUAMAN, BRENDA MAILY

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II. OBJETIVOS …………………………………………………………………… 2

III. REVISIÓN BIBLOGRAFICA ………………………………………………… 3

1.1. FISICOS …………………………………………………..

1.1.1. CALOR ………………………………………………………….…. 3

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1.1.1.2. CALOR SECO …………………………………...…...

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2. MEDIOS DE CULTIVO ………………………………...…………………….. 6

2.1. CONSTITUYENES HABITUALES DE LOS MEDIOS DE

2.2. TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO …………………………………...

2.3. PREPARACIÓN …..………………………………….

IV. MATERIALES Y METODOS ……………………………….………………. 10

PREPARACIÓN Y ESTERILIZACIÓN DE MATERILES Y MEDIOS DE CULTIVO

VI. CONCLUSIÓN ……………………………………………………….……… 20

VII. REFERENCIAS ……………………………………………………..……….. 21

Imagen 1. Ejemplo de tubo de ensayo. ………………………………………………………10

Imagen 2. Ejemplo de matraz. ………………………………………………………………..10

Imagen 3. Ejemplo de placa Petri ……………………………………………………………11

Imagen 4. Ejemplo de agua destilada. ………………………………………………………

Imagen 5. Ejemplo de Estufa digital ………………………………………………………...

Imagen 6. Ejemplo de Autoclave vertical ………………………………………………….. 12

Imagen 7. Ejemplo de papel kraft. ……………………………………….………………… 13

Imagen 8. Ejemplo de gasa y algodón. …………………………………………………….. 13

Imagen 9. Preparación de matraz para esterilización. ………………………….…….… 14

Imagen 10. Preparación de tobos de ensayo para esterilización. ……………………… 14

Imagen 11. Preparación de placa Petri para ser esterilizado…………………………… 15

Imagen 12. Preparación de placa Petri para ser esterilizado ………...……………….. 15

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Imagen 13. Ejemplo modelo de gorro ………………………………………….……………

Imagen 14. Colocación de gorro al matraz …………………………………………... 16

Imagen 15. Ejemplo de cómo acomodar los materiales en la estufa ……………….….. 17

PREPARACIÓN Y ESTERILIZACIÓN DE MATERILES Y MEDIOS DE CULTIVO

Para el estudio de los microorganismos es indispensable contar entre otras cosas

con material y medios de cultivo estériles. En Microbiología la esterilización se

de un objeto, medio o superficie” y su aplicación garantiza la ausencia de

microorganismos en el material y medios de cultivo a ser empleados. Existen

diversos métodos de esterilización, entre ellos: calor (seco o húmedo), filtración,

radiaciones y aplicación de gas de óxido de etileno

Un medio de cultivo está constituido por una mezcla de agua y sustancias

orgánicas e inorgánicas, los que en conjunto proporcionan los requerimientos

nutricionales para el desarrollo de los microorganismos.

El crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Para que las bacterias

crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de

condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno

adecuado, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad.

El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparación de

- Explicar el concepto de esterilización y su aplicación en microbiología.

- Preparar correctamente el material que se someterá a esterilización.

- Adquirir conocimientos sobre el adecuado procedimiento para la

esterilización de materiales de laboratorio.

- Aprender a utilizar equipos dependiendo los casos en los que son

III. REVISIÓN BIBLOGRAFICA:

La esterilización es la muerte y/ o eliminación de todo microorganismo. No

existen grados de esterilidad, un objeto es estéril o no lo es.

La dinámica de la esterilización dice que la proporción de microorganismos

muertos en iguales periodos de tiempo es constante. A mayor temperatura,