RESULTADOS

 DETERMINACIÓN DEL RANGO DE LINEALIDAD Y ACTIVIDAD

ENZIMÁTICA

GRUPO A
Aplicación de la ecuación:

Y =0.5232 X −0.0158

R2=0.9968

Extracto crudo E: 1:1 DNS: 1:5

Tabla N° . Tabla de datos para el rango de linealidad

Tiempo ABSORBANCI Azucares

N° Tubo C (g/l) C(g/L)*dilución C*-(BS+BE)
(min) A R. (g/L)
0.0550458 0.1020642
0 1 0.013 0.275229358 0
7 2
0.4048165 1.8509174 1.7488532
5 2 0.196 2.024082569
1 3 1
0.7412079 3.5328746
10 3 0.372 3.706039755 3.4308104
5 2
1.0546636 5.1001529 4.9980886
15 4 0.536 5.273318043
1 1 9
1.4579510 7.1165902 7.0145259
20 5 0.747 7.289755352
7 1 9
0.1257645
10 BS 0.05
3
0.0474006
5 BE 0.009
1

Gráfico N° .
 Azucares R. (g/L)
8
7
Azúcares Reductores (g/L) f(x) = 0.35 x − 0.02
6 R² = 1
5
4
3
2
1
0
0 5 10 15 20 25
Tiempo(min)

Actividad enzimática (g/L.min): 0.3456 Actividad volumétrica (UI/ml) : 57.6

Actividad específica (UI/mg): 2269.84186

GRUPO A 2

Enzima concentrada E: 1:1 DNS: 1:15

Tabla N° . Tabla de datos para el rango de linealidad

Tiempo ABSORBANCI Azucares R.

N° Tubo C (g/l) C *dilución C*-(BS+BE)
(min) A (g/L)
0.36773700
0 1 0.004 0.037844037 0.56766055 0
3
5.32759938
5 2 0.177 0.368501529 5.527522936 4.959862385
8
7.76452599
10 3 0.262 0.530963303 7.964449541 7.396788991
4
13.6991590
15 4 0.469 0.926605505 13.89908257 13.33142202
2
16.0500764
20 5 0.551 1.083333333 16.25 15.68233945
5
10 BS 0.061 0.146788991
5 BE 0.012 0.053134557

Gráfico N° .
Actividad (g/L.min): 0.7947 Actividad volumétrica (UI/ml) : 132.45
18
16
f(x) = 0.79 x + 0.33
14 R² = 0.98
azucares reductores (g/l) 12
10
8
6
4
2
0
0 5 10 15 20 25
Tiempo (min)

Actividad específica (UI/mg): 1209.9004

 GRUPO A 3

Enzima concentrada E: 1:4 DNS: 1:5

Tabla N° . Tabla de datos para el rango de linealidad

Tiempo Azucares R.
N° Tubo ABSORBANCIA C (g/L) C(g/L)*dilución C*-(BS+BE)
(min) (g/L)
0 1 0.013 0.05504587 0.275229358 0.01605505 0
5 2 0.162 0.3398318 1.699159021 1.43998471 1.42392966
10 3 0.253 0.51376147 2.568807339 2.30963303 2.29357798
15 4 0.42 0.83295107 4.164755352 3.90558104 3.88952599
20 5 0.558 1.09671254 5.483562691 5.22438838 5.20833333
10 BS 0.076 0.17545872
5 BE 0.028 0.0837156

Gráfica N° .

Actividad (g/L.min): 0.2576 Actividad volumétrica (UI/ml) : 171.732

Azucares R. (g/L)
6

5
Azúcares Reductores (g/L)

f(x) = 0.26 x − 0.01

4 R² = 0.99

0
0 5 10 15 20 25
Tiempo (min)

Actividad específica (UI/mg): 1568.73247

 Rango de Linealidad – Grupo B

Gráfico N° . Rango de linealidad del grupo B

Rango de Linealidad (GRUPO A)

18

16

14
Azúcares Reductores (G/L)

12

10 Extracto crudo A1
Enzima concentrada A2
8 Enzima concentrada A3 (1:4)
6

0
0 5 10 15 20 25
Tiempo (Minutos)
 GRUPO B
Aplicación de la ecuación:
Y =0.5232 X −0.0158

R2=0.9968

GRUPO B 1

Caldo Crudo E: 1:2 DNS: 1:5

Tabla N° . Tabla de datos para el rango de linealidad

Tiempo ABSORBANCI C(g/L)*disolució

N° Tubo C (g/l) C*-(BS+BE) Azucares R. (g/L)
(min) A n
0 1 0.01 0.049311927 0.246559633 0.07148318 0
5 2 0.096 0.213685015 1.068425076 0.893348624 0.821865443
10 3 0.198 0.408639144 2.043195719 1.868119266 1.796636086
15 4 0.355 0.708715596 3.543577982 3.368501529 3.297018349
20 5 0.43 0.85206422 4.260321101 4.085244648 4.013761468
10 BS 0.041 0.108562691
5 BE 0.019 0.066513761

Grafica N° .

4.5
4
f(x) = 0.21 x − 0.11
3.5 R² = 0.99
azucares reductores (g/l)

3
2.5
2
1.5
1
0.5
0
0 5 10 15 20 25
Tiempo (min)

Actividad enzimática (g/L.min): 0.2101 Actividad volumétrica (UI/ml) : 62.034

Actividad específica (UI/mg): 2444.5724

 GRUPO B 2

Enzima concentrada E: 1:2 DNS: 1:10

Tabla N° . Tabla de datos para el rango de linealidad

ABSORBANCI C(g/L)*disolució Azucares R.

Tiempo (min) N° Tubo C (g/l) C*-(BS+BE)
A n (g/L)
0 1 0.01 0.049311927 0.493119266 0.340978593 0
5 2 0.134 0.286314985 2.863149847 2.711009174 2.370030581
10 3 0.256 0.519495413 5.194954128 5.042813456 4.701834862
15 4 0.392 0.779434251 7.794342508 7.642201835 7.301223242
20 5 0.53 1.043195719 10.43195719 10.27981651 9.93883792
10 BS 0.038 0.102828746
5 BE 0.01 0.049311927

Gráfico N° .
12

10
f(x) = 0.5 x − 0.1
azucares reductores (g/l)

8 R² = 1

0
0 5 10 15 20 25
Tiempo (min)

Actividad enzimática (g/L.min): 0.4962 Actividad volumétrica (UI/ml) : 165.4

Actividad específica (UI/mg): 1510.89111

GRUPO B 3
 Enzima concentrada E: 1:3 DNS: 1:10

Tabla N° . Tabla de datos para el rango de linealidad

Tiempo Azucares R.
N° Tubo ABSORBANCIA C (g/l) C(g/L)*disolucion C*-(BS+BE)
(min) (g/L)
0.03593272
0 1 0.003 0.359327217 0.243929664 0
2
0.11419877
5 2 0.084 1.141987768 1.026590214 0.78266055
7
0.21819877
10 3 0.188 2.181987768 2.066590214 1.82266055
7
0.23719877
15 4 0.207 2.371987768 2.256590214 2.01266055
7
0.19319877
20 5 0.163 1.931987768 1.816590214 1.57266055
7
0.07619877
10 BS 0.046
7
0.03919877
5 BE 0.009
7

2.5 2 Gráfico N° .
1.8
Azucares Reductores (g/l)

21.6 f(x) f(x) = 0.18 x − 0.04

azucares reductores (g/l)

= 0.09 x + 0.36
1.4 R² =R² = 0.99
0.69
1.51.2
1
Actividad
10.8 enzimática (g/L.min): 0.1823 Actividad volumétrica (UI/ml) : 91.149
0.6
0.50.4
0.2
Actividad específica (UI/mg):
0 00 832.625232
0 52 41 0 61 5 8 20 10 2 5 12
Tiempo
Tiempo (min)
(min)

Rango de Linealidad – Grupo B

Gráfico N° . Rango de linealidad del grupo B

 Rango de Linealidad
12

10
Azucares Reductores (g/L)

Extracto crudo B1 (1:2)

6 Enzima concentrada B2 (1:2)
Enzima concentrada B3 (1:3)
4

0
0 5 10 15 20 25

Tiempo (min)
 GRUPO C
Aplicación de la ecuación:
Y =0.5232 X −0.0158

R2=0.9968

GRUPO C 1

Caldo Crudo E: 1:1 DNS: 1:10

Tabla N° . Tabla de datos para el rango de linealidad

ABSORBANCI
Tiempo (min) N° Tubo C (g/l) C(g/L)*dilución C*-(BS+BE) Azucares R. (g/L)
A
0.03019877
0 1 0 0.301987768 0.11353211 0
7
5 2 0.107 0.23470948 2.347094801 2.158639144 2.045107034
0.39525993
10 3 0.191 3.952599388 3.764143731 3.650611621
9
0.60741590
15 4 0.302 6.074159021 5.885703364 5.772171254
2
0.81192660
20 5 0.409 8.119266055 7.930810398 7.817278287
6
0.07224770
10 BS 0.022      
6
0.11620795
5 BE 0.045      
1

Gráfico N° .
7

6
f(x) = 0.38 x + 0.03
Azúcares Reductores (g/L)

5 R² = 1

0
0 2 4 6 8 10 12 14 16
Tiempo (minutos)
 Actividad enzimática (g/L.min): 0.3784 Actividad volumétrica (UI/ml) : 63.067

Actividad específica (UI/mg): 2485.26667

GRUPO C 2

Enzima concentrada E: 1:1 DNS: 1:15

Tabla N° . Tabla de datos para el rango de linealidad

Tiempo (min) N° Tubo ABSORBANCIA C (g/l) C(g/L)*dilución C*-(BS+BE) Azucares R. (g/L)

0 1 0.016 0.060779817 0.911697248 0.771024465 0
5 2 0.043 0.112385321 1.685779817 1.545107034 0.774082569
10 3 0.041 0.108562691 1.628440367 1.487767584 0.716743119
15 4 0.143 0.30351682 4.552752294 4.412079511 3.641055046
20 5 0.241 0.490825688 7.362385321 7.221712538 6.450688073
10 BS 0.004 0.037844037      
5 BE 0.038 0.102828746      

Gráfica N° .
4

3.5
f(x) = 0.25 x − 0.19
R² = 0.98
Azúcares reductores (g/L)

2.5

1.5

0.5

0
0 2 4 6 8 10 12 14 16
Tiempo (min)

Actividad enzimática (g/L.min): 0.249 Actividad volumétrica (UI/ml) : 41.5

 Actividad específica (UI/mg): 379.092992

GRUPO C 3

Enzima concentrada E: 1:2 DNS: 1:10

Tabla N° . Tabla de datos para el rango de linealidad

ABSORBANCI C(g/L)*dilució Azucares R.

Tiempo (min) N° Tubo C (g/l) C*-(BS+BE)
A n (g/L)
0 1 0 0.030198777 0.301987768 0.188073394 0
5 2 0.096 0.213685015 2.136850153 2.02293578 1.834862385
10 3 0.166 0.347477064 3.474770642 3.360856269 3.172782875
15 4 0.254 0.515672783 5.156727829 5.042813456 4.854740061
20 5 0.385 0.766055046 7.660550459 7.546636086 7.358562691
10 BS 0 0.030198777      
5 BE 0.028 0.083715596      

Gráfica N°.
6

5
f(x) = 0.32 x + 0.08
Azúcares Reductores (g/L)

4 R² = 1

0
0 2 4 6 8 10 12 14 16
Tiempo (min)

Actividad enzimática (g/L.min): 0.318 Actividad volumétrica (UI/ml) : 106

 Actividad específica (UI/mg): 968.285714

Rango de Linealidad – Grupo C

Gráfico N° . Rango de linealidad del grupo C

Rango de Linealidad
7

6
Azúcares Reductores (g/L)

4 Extracto crudo C1
Enzima concentrada C2
3 Enzima concentrada C3 (1:2)

0
0 2 4 6 8 10 12 14 16

Tiempo (min)
 ANEXOS

 Curva de calibrado de DNS:

Tabla N° .

sol. Sacarosa
N° tubos Agua destilada (µl) concentración absorbancia
(µl)
de glucosa (g/L)
1 500 0 2 1.018
2 400 100 1.6 0.823
3 300 200 1.2 0.617
4 200 300 0.8 0.44
5 100 400 0.4 0.173
6 50 450 0.2 0.062
Blanco 0 500 0 0

Gráfico N° .

1.2

1
f(x) = 0.52 x − 0.02
R² = 1
0.8
Absorbancia

0.6

0.4

0.2

0
0 0.5 1 1.5 2 2.5
Concentracion (g/l)
  Curva de calibrado de Proteínas (MÉTODO BRADFORD)

Tabla N° .

Sol.
Reactivo de
Estándar Tampon Concentración Absorbancia
Tubo Bradford
Albumina Citrato (ul) (g/L) (595 nm)
(ml)
(ul)
1 100 0 5 0.5 0.17
2 80 20 5 0.4 0.137
3 60 40 5 0.3 0.1
4 50 50 5 0.25 0.08
5 40 60 5 0.2 0.071
6 20 80 5 0.1 0.033
7 10 90 5 0.05 0.018
8 0 100 5 0 0

Gráfico N° .
0.18

0.16 f(x) = 0.34 x − 0

R² = 1
0.14
ABSORBANCIA (595nm)

0.12

0.1

0.08

0.06

0.04

0.02

0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
CC de Proteina (g/L)

Concentració
Enzimas tubos ABS Conc. Promedio
n
0.1035703
1 0.035
CONCENTRAD 7 0.1094718
0.010947182 g/L
O 0.1153732 2
2 0.039
7
CRUDO 1 0.009 0.0268515 0.0253762 0.002537622 g/L
 8
0.0239008 2
2 0.008
6

 Técnica experimental

(A) : Buffer citrato-fosfato 0.05 M, Ph 5.0

(B) : Concentrada enzimático inulinasa.
(C) : Solución sustrato sacarosa 20 g/L

Tabla N° . Detalle de técnica experimental para determinación de parámetros

cinéticos

Conc.
N° Solución Solución Solución
Grupo Sacarosa
muestra (A) mL (B) mL (C) mL
(g/L)
A1 2 23 1 6 4
B1 3 20 1 9 6
C1 4 18 1 11 7.33
A2 5 15 1 14 9.33
B2 6 12 1 17 11.33
C2 7 9 1 20 13.33
C3 8 6 1 23 15.33
A3 9 3 1 26 17.33
B3 10 0 1 29 19.33