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Fase plasmática
Fase vascular y Efecto de
Grupo sanguíneo
Formación de fibrina
plaquetaria la temperatura
Acción del calcio
En un portaobjetos limpio, marcado
en uno de sus extremos, coloque dos
Preparar una cámara
Limpiar con alcohol la parte Se toma el En un tubo de gotas de sangre
húmeda, colocando un
interna del dedo, perforar la piel tiempo, a partir
en que a 3 tubos
ensaye coloque triangulo de vidrio en el
con una lanceta. una gota de la fondo de una caja Petri
de ensaye se
coloca 1 mL de solución de Las gotas deben colocarse por
sangra extraída Na3C6H5O7 separado, una en cada
Un alumno obtendrá las extremo
muestras y otro será el Tubo 3 Agregar H2O de la llave sin cubrir del portaobjetos.
Tubo 1
Tubo 2 Agregar 1 mL completamente el triángulo.
donador.
de la sangre
Colocar Se deja en extraída
a baño Colocar contacto En otro portaobjetos colocar dos
Presionar ligeramente el dedo maría en hielo externo con gotas de sangre de la misma
hasta que aparezca una gota de con H2O caliente Luego de 30 minutos sacar el como
tempera a Agitar
tamaño mediano. temperatur suavemente
portaobjetos de la caja escurrir en el primer portaobjetos.
tura de
37 °C a de 60 °C y dejar unas gotas de H2O destilada
reposar 15 sobre el borde
Depositar la gota minutos en del cubreobjetos para aflojarlo y A cada gota de sangre se le
haciendo contacto con algún Verificar cada 30 s la presencia el baño poderlo retirar. debe agregar una gota de
punto de la periferia del papel maría a
de coagulación suero
filtro 37 °C.
Hacer
observacion Observe en el Determine el tipo sanguíneo del
Esperar hasta que ya no aparezca ninguna
mancha de sangre sobre el papel filtro, es cada 30 microscopio con el individuo.
detener el cronometro segundos objetivo de 10 aumentos Se debe hacer para todos los
hasta la y dibuje las fibras de miembros del equipo
coagulación.
fibrina.
Análisis de la metodología
Para el inicio obtendremos una muestra de sangre de la parte interna del dedo medio, se perforará la piel con una lanceta esterilizada, una por cada donador, también
es recomendable el uso de guantes pues trabajaremos con sangre y usarlos previene la propagación de microbios. De igual manera es recomendable que otro alumno
obtenga la muestra de sangre, para lograr perforar adecuadamente la piel.
Para la obtención de la sangre presionaremos ligeramente hasta tener una gota de tamaño mediano, depositamos en una alguna zona del papel filtro. Inmediatamente
se tomará el tiempo con el cronometro. Repetir esta maniobra cada 10 segundos, con la única diferencia de no ejercer presión sobre el dedo, las gotas que se obtengan
deberán estar a la derecha de la primera mancha, la distancia entre las muestras será de 0.5 cm para evitar el contacto. El procedimiento experimental finaliza una vez
que cese la aparición de manchas de sangre sobre el papel filtro, detener el cronometro cuando eso ocurra.
En la segunda parte revisaremos la fase plasmática. Primero determinaremos el efecto de la temperatura con relación al tiempo que tardará en presentarse la
coagulación. Se empieza a cronometrar el tiempo desde el momento que se coloca a cada uno de los tres tubos de ensaye un mililitro de sangre recién extraída. Uno de
los tubos se coloca en baño maría a una temperatura constante de 37 °C, el segundo tubo se coloca en hielo y finalmente el tercer tubo se deja en contacto con agua
caliente a una temperatura de 60 °C. Es necesario verificar cada 30 segundos si se presenta la coagulación en algún tubo, anotar cuanto tiempo antes de observar la
coagulación.
Se espera que la sangre coagule en el tubo que se encuentra a 37 °C ya que la temperatura puede acelerar o retraer el tiempo de coagulación porque está
asociada a la desnaturalización de las proteínas presentes en el plasma. Después de un tiempo (tres veces el tiempo que tardo en observarse la coagulación en el tubo
a 37°C), colocar los tubos en donde no hubo coagulación en el baño maría y tomar el tiempo en que se presenta la coagulación.
La acción del calcio, en un tubo de ensaye se añade una gota de la solución de citrato de sodio, agregamos un mililitro de la sangre extraída homogenizamos y
mantenemos en reposo por 15 minutos en el baño maría a 37°C.
Concluido el tiempo se observa que no hay coagulación, añadimos 3 gotas de la solución de cloruro de calcio, homogenizamos y devolvemos el tubo al baño maría.
Es necesario hacer observaciones cada 30 segundos.
En la tercera parte del segundo procedimiento experimental se prepara una cámara húmeda, colocando un triángulo de vidrio en el fondo de una caja de Petri, y
agregando agua de la llave sin cubrir completamente el triángulo; la caja se cierra para permitir la saturación de vapor de agua durante 15 minutos.
Posteriormente se deposita una gota de sangre fresca en un portaobjetos luego colocamos el cubreobjetos, el portaobjetos se ubicará sobre el triángulo dentro de la
caja de Petri.
Pasados 30 minutos retiramos el portaobjetos y añadimos unas gotas de agua destilada bordeando el cubreobjetos para aflojarlo y poderlo retirar.
Lavamos con gotas de agua destilada y drenamos el exceso de agua con un papel absorbente. Se hará una tinción de la preparación colocando unas gotas de una
solución acuosa de Azul de metileno al 1% sobre el portaobjetos. Esperar durante 3 minutos, pasado el tiempo lavamos y secamos. Anotar y dibujar lo que se observe
en el microscopio (fibrinas).
Para finalizar en un portaobjetos limpio, colocar dos gotas de sangre producto de la punción de un dedo. Las gotas deben colocarse por separado, una en cada extremo
del portaobjetos.
En otro portaobjetos colocar dos gotas de sangre siguiendo el procedimiento anterior. A cada gota de sangre agregar una gota de suero, tratar que ambas gotas sean
similares en tamaño. Una gota de sangre debe mezclarse con el suero anti-A, otra con el suero anti-B otra con el suero anti-AB y la última con el anti-D. Para mezclar
se hará uso de un palillo el cual debe ser diferente para cada muestra.
Luego de un minuto observar si en las muestras hay o no hay aglutinación, posteriormente determinar el tipo sanguíneo del donador. Este procedimiento se repite con
todos los miembros del equipo para determinar el tipo sanguíneo, utilizar una lanceta estéril para cada persona y palillos nuevos.
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Imágenes
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