Identicación de Clorola-a y Clorola-b en muestras

de pino, moro y encino rojo por espectroscopia UV-Vis

Kevin Isaac Olivas Miramontes, David Luévano Alvarado, Mario Alan Soto Delgado,
Mario Alberto Martínez Herrera

Resumen
Se obtuvieron los espectros de absorción de luz visible en muestras de pino, moro y encino rojo usando acetona, etanol y cloroformo como solventes,
analizando mediante la técnica de espectroscopía por UV-Vis la presencia de clorola-a y clorola-b. A su vez se compararon los espectros para determinar el
mejor solvente.

Introducción Resultados y discusiones

Espectroscopia UV-Vis
Un espectro de absorción UV-Vis es esencialmente un gráco de absorbancia de luz frente a una longitud de
onda en el rango del ultravioleta a la luz visible (radiación con longitud de onda comprendida entre los 380 y
780 nm). La absorción de una determinada longitud de onda depende de la composición química de la
muestra y puede ser indicativo de moléculas especicas en una mezcla. [1]
En las guras 3, 4 y 5 se muestran las grácas de los espectros de absorción de encino, moro y pino
empleando acetona, cloroformo y etanol como solventes, mostrando los espectros de absorción de la
clorola-a y clorola-b [5].

El principio físico está determinado por la ley de Lambert-Beer [3] y se simplica a:

Figura 3. Gráca de espectros de absorción de las muestras de encino, moro

Figura 4. Gráca de espectros de absorción de las muestras de encino, moro
y pino en acetona como solvente. “Pino 1” y “Pino 2” hacen referencia a las
y pino en cloroformo como solvente.
Clorola concentraciones 1:1 y 1:5 respectivamente.
En las plantas, la clorola-a y clorola-b son los principales pigmentos fotosintéticos. Las moléculas de clorola
absorben longitudes de onda azules y rojas. [4]
Aunque ambas absorben luz, la clorola-a tiene una función única y crucial al convertir la energía de la luz solar
en energía química. Todas las plantas fotosintéticas, algas y cianobacterias contienen clorola-a, mientras que
solo las plantas y algas verdes contienen clorola b, junto con algunos tipos de cianobacterias. [4]

Materiales
• Hojas de moro, pino y encino rojo.
• Mortero con pistilo.
• 120 ml de Etanol. Figura 5. Gráca de espectros de absorción de las muestras de encino, moro Figura 6. Gráca de espectros de absorción de las muestras de pino en
• 120 ml de Cloroformo. y pino en etanol como solvente. acetona como solvente. “Acetona 1” y “Acetona 2” hacen referencia a las
concentraciones 1:1 y 1:5 respectivamente.
• 120 ml de Acetona.
• Agua destilada. Comparando las guras 5 con las guras 3 y 4, podemos notar que con el solvente de etanol hay más
• Vasos de precipitado graduados. presencia de clorola-a para el rango de 400-550 nm aproximadamente. Esto se puede deber a que el
• Celdas de cuarzo. etanol reduce la cantidad de clorola-b haciendo más notoria la presencia de clorola-a. Por otro lado
• UV-Vis Hach DR 5000 4. los picos de absorción de las muestras en acetona y cloroformo concuerdan con los de las clorola-a y
Figura 1. Preparación de la muestra de moro en
• Papel ltro. cloroformo como solvente. Figura 2. Muestras preparadas en acetona como
clorola-b.
• Embudo de vidrio.
solvente. De izquierda a derecha: acetona pura como Así mismo, en la gura 5 se puede apreciar que el nivel de absorbancia diere signicativamente entre
blanco, pino a concentración 1:1, pino a concentración
• Termómetro. 1:5, moro y encino. los espectros de absorción, en el rango de 550-700 nm, aún después de normalizar los datos. Mientras
que en las guras 3 y 4, no hay diferencia signicativa entre los nivel de absorbancia de los espectro de
absorción.

Metodología
Se prepararon tres muestras por solvente, cada una con un tipo de hoja diferente (pino, encino rojo y moro).
A cada muestra se le añadieron 20 ml de cloroformo al 90.98% y la mezcla se trituró en un mortero con
pistilo, como se muestra en la gura 1, hasta obtener una consistencia pastosa y que el solvente se hubiera
impregnado completamente del pigmento verde. Posteriormente, la muestra se ltró en un vaso de
precipitado para eliminar los residuos sólidos con ayuda de un papel ltro y un embudo de vidrio. Sobre el
ltro, se añadieron 20 ml extra de cloroformo para extraer el pigmento remanente y, nalmente, verter
aproximadamente 6 ml en un tubo de ensaye y obtener su espectro de absorción con el equipo UV-Vis Hach
DR 5000 4 en un rango de operación de 200-900 nm, usando una muestra de cloroformo puro como
blanco de calibración.[6]
Enseguida, se repitió el procedimiento, usando acetona al 99.7% como solvente y obteniendo su respectivo
espectro de absorción. Se separaron dos muestras de pino a concentraciones 1:1 y 1:5
([Muestra]:[Acetona]), como se muestra en la gura 2.
Por último, para obtener el espectro de absorción con etanol al 99.91% como solvente se cortaron trozos
de cada muestra de árbol diferente, se le añadieron 20 ml de etanol y la mezcla se colocó en baño maría a
65°C por 20 minutos, después a cada mezcla, dentro del baño maría se le añadieron 20 ml extras de etanol y
se dejó reposar nuevamente por 20 minutos. Una vez concluido el tiempo las muestras se dejaron enfriar
por 10 minutos y posteriormente el procedimiento de ltrado y medición de las muestras fue el mismo que
el mencionado anteriormente usando etanol puro como blanco de calibración.[6]
Los resultados de los espectros obtenidos con los diferentes solventes se compararon con el de la Clorola-a
y Clorola-b analizando los datos normalizados y acotados a un rango de 400-700 nm en Mathematica.
En la gura 6 se muestran los espectros de absorción para la muestra de pino con acetona como
solvente a distintas concentraciones, donde se puede apreciar que a menores concentraciones los
picos de la clorola-a predominan mientras que a mayor concentración se puede ver una aportación
signicativa por parte de la clorola-b. Esto se puede deber a que en la muestras siempre predomina la
clorola-a.
Conclusiones
Se determinó que el uso de acetona y cloroformo como solventes para muestras orgánicas, como lo
son las hojas de árboles, es conveniente para obtener el espectro de absorción completo por medio de
la técnica de UV-Vis, tanto para clorola-a como para clorola-b, mientras que el uso del etanol como
solvente puede ser útil para obtener un espectro donde la clorola-a sea predominante.
Así mismo, se observó que al disminuir la concentración de la muestra con el etanol como solvente se
puede obtener un espectro de absorción con una correspondencia más apegada a la de la clorola-a y
clorola-b, es decir, los picos de absorción de la muestra concuerdan con mayor precisión con los picos
de la clorola-a y clorola-b. Por otro lado, no obtuvimos la información suciente para armar lo mismo
para el resto de los solventes.
Para todas las muestras, el moro siempre predominó como el mejor para obtener su pigmento por la
rápida coloración en el solvente y la fuerte concentración que se podía obtener.
Agradecimientos
A I.Q. Jacobo Chávez González, Ing. Irma Peralta Segovia, M.C. Mario Alberto Martínez Herrera, Karla
Guadalupe Acosta Peralta y al Laboratorio de Ingeniería Sanitaria.

Bibliografía
[1] Alicante, U. d. (s.f.). Servicios Técnicos de Investigación. Obtenido de ESPECTROSCOPÍA ULTRAVIOLETA VISIBLE: https://sstti.ua.es/es/instrumentacion-cientica/unidad-de-rayos-x-de-monocristal-y-espectroscopias-vibracional-y-optica/espectroscopia-
ultravioleta-visible.html
[2] Espectrometría.com. (s.f.). Obtenido de Espectrometría ultravioleta-visible: https://www.espectrometria.com/espectrometra_ultravioleta-visible
[3] Royal Society of Chemistry. (2019). Spectroscopy in a Suitcase students' resource: UV / Visible spectroscopy. Obtenido de Learn Chemistry: http://www.rsc.org/learn-chemistry/resource/res00000282/spectroscopy-in-a-suitcase-uv-vis-student-resources
[4] Chlorophyll-a, b. a. (30 de 06 de 2014). Analysis of chlorophyll-a using UV-vis spectrophotometry. . EnAlgae.
[5] Johan, F. a. (03 de 2015). Laboratory measurement: Chlorophyll-a concentration measurement with acetone method using spectrophotometer. IEEE International Conference on Industrial Engineering and Engineering Management, 744-748.
doi:10.1109/IEEM.2014.7058737
[6] Vegetal, D. d. (s.f.). Fisiología Vegetal . Obtenido de Prácticas de Fisiología Vegetal: https://drive.google.com/drive/u/0/folders/1ZPI5b1lPP1OwnD444oiyj9vzCpX2G1g8