SISTEMA CRISPR/Cas9

¿QUÉ ES?

Es una herramienta utilizada para editar o corregir el genoma, como hemos visto
anteriormente.

Las siglas CRISPR significan Repeticiones Palindrómicas Cortas Agrupadas y Regularmente

interespaciadas. Asociadas a Cas 9 que es una nucleasa de la familia cas.

¿CÓMO SURGIÓ?

Se encontró que una zona del genoma de muchos microorganismos estaba llena de
repeticiones palindrómicas separadas entre sí mediante unos espaciadores. Muy cerca de esta
zona se encontraban los genes que codificaban para la nucleasa cas.

Cuando se descubrió, no se sabía muy bien cuál era su funcionamiento hasta que se descubrió
que podía ser algo parecido a un sistema inmune para las bacterias en el que ante una
infección por un virus, al entrar el ADN vírico las nucleasas cas trabajarían para romper ese
ADN y, a continuación, se introducirían algunos de esos fragmentos de ADN en el genoma de la
bacteria.

Ante una segunda infección por ese mismo virus, estos fragmentos se transcribirían y guiarían
a las nucleasas cas9 hacia el ADN del virus, reconociéndolo más eficaz y rápidamente y
rompiéndolo para detener la infección, por esta razón decimos que actúa como si fuese un
sistema inmune.

¿CÓMO NOS “APROVECHAMOS” DE ESTE SISTEMA?

Se descubrió que insertando la nucleasa Cas9 junto con un ARN guía (que tiene que tener unas
características determinadas) podía ocurrir lo siguiente:

(Vídeo)

Insertamos la nucleasa junto con el ARN guía en una célula, la nucleasa viajará al nucleo donde
se unirá al ADN de la célula. Cuando reconozca que es complementario a su ARN guía, abrirá la
doble hélice del ADN y lo apareará su ARN, una vez ha ocurrido esto, realizará un corte de
doble hélice y si a esto le añadimos un ADN que queramos insertar en el genoma de la célula,
se insertará este ADN por recombinación homóloga en la zona donde ha cortado la nucleasa
Cas9.

VENTAJAS Y DESVENTAJAS

VENTAJAS

Se pueden insertar muchos ARN guía combinados cada uno con una nucleasa Cas9

Tiene mejor orientación, mayor expresión y menos toxicidad que los sitemas vistos
anteriormente.

Tiene mayor especificidad

Es mucho más barato que los otros sistemas y más fácil de diseñar

DESVENTAJAS

El tamaño de Cas9, que es muy grande.

Necesita un motivo NGG para unirse al ADN

Puede producir algún corte en una zona no deseada porque se puede unir con secuencias que
tengan hasta 6 bases distintas a su ARN guía.