UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA

Cromatografía en columna
María Alejandra Plazas & Ángela Cuellar F.
Laboratorio de química orgánica I*
Programa de Química, Facultad de Ciencias Básicas,
Universidad de la Amazonia

Florencia- Caquetá, octubre de 2016

OBJETIVOS

 Separar los compuestos colorantes de una mezcla con componentes visibles.

 Demostrar el principio de la cromatografía en columna.
 Comprender el efecto que provocan algunos factores en la efectiva realización
del experimento.

INTRODUCCION
La cromatografía es un método de separación actualmente muy
utilizado dado su gran eficiencia. Este término se le otorgado a
varios procesos, en otras palabras, se encuentran diferentes
técnicas de trabajo cuyo producto difieren unos de otros. Pero,
poseen un principio el cual cumplen, tratándose de la
distribución de un compuesto entre dos fases, una móvil y otra
estacionaria.
Uno de las técnicas cromatografías frecuentemente utilizadas
en el laboratorio de química orgánica es la cromatografía en
columna (CC), el proceso es capaz de separar tanto grandes
cantidades como pequeñas de líquidos (imagen 1). El gel de
Imagen 1
sílice es fase estacionaria que usualmente es implementada,
provocando un orden de elución en donde las muestras
polares sean retenidas en la columna por un mayor tiempo de elución que los
componentes menos polares, realizando la separación de esto líquidos (partición).
Esta técnica posee similitudes con la cromatografía en paca fina (TLC) aunque su
factor de elución sea contrario y la CC utilice en gran medida en componentes de
gran tamaño, el principio de su funcionamiento es el mismo.
El proceso de cromatografía en columna
puede ser variado (en especial la
velocidad de elución) por algunos
factores como lo son el eluyente (en su
mayoría es debido a su polaridad) que es
la fase estacionaria, el tamaño de la
columna, la presión y el
empaquetamiento (están presente todos
las partes del proceso). Además de
encontrarse afectada, según se dice en la Imagen 2
teoría clásica, por la constante de
equilibrio (imagen 2).
En este experimento se utilizó como muestra
una mezcla de azul de metileno
(C16H18N3ClS) y naranja de metilo
(C14H14N3NaO3S), ver imagen 3. Ambas
soluciones se utilizan generalmente como
indicadores en reacciones donde es un
impedimento el conocer el momento en que
el fenómeno se lleva a cabo, el azul
característico del primer componente se
vuelve incoloro al exponerse con un agente
reductor, mientras que el color rojo del
segundo se verá afectado a pH entre 3.1 y 4.4,
pasando a un tono naranja.

Imagen 3

RESULTADOS Y DISCUSION DE RESULTADOS

La cromatografía en columna debe cumplir con una serie de requisitos para una
óptima eficiencia; dado que el gel de sílice es uno de las opciones favoritas en la
fase estacionaria debido a su polaridad y el etanol (96 % de alcohol) es un eluyente
polar como se esperaría que fuese para un buen tiempo de elución, al desplazar
rápidamente las sustancias polares en la columna; teniendo en cuenta que si el
diluyente resulta muy polar no se realizara una separación adecuada en la mezcla,
mientras que al encontrarse como su sustancia apolar no se realizara la elución .
A media que los compuestos son añadidos a la columna se construye el
empaquetamiento, el realizar este proceso de una forma uniforme es importante
dado que este la aparición de posibles grietas, burbujas de aire e incluso canales,
provocaran rendimientos ineficientes. Debido a este factor se implementaron
precauciones como el golpear suavemente la columna con una goma mientras se
está empacando.
Al realizar la separación se observó como el eyudente bajaba suavemente por la
columna debido a la gravedad provocando en un principio la separación de los
componentes sin llegar a la recolección de los componentes. A medida que el
tiempo de elucion aumento se decidió implementar media presión en el
procedimiento, provocando la elución con mayor velocidad, pero sin ser una
presión constante debido a que se priorizo la partición.
Como se había dicho el eluyente favorecerá la elución del componente más polar,
esto se pudo demostrar al separar y recolectar la muestra de naranja de metileno,
aunque su implementación no provocó el mismo efecto en el azul de metilo, al ser
este componente de menor polaridad que el primer colorante. Es debido a esto que
se intercambió el eluyente polar por una mezcla de agua con ácido, el cual posee
una polaridad mayor, observando este factor al encontrar que el azul de metilo se
trasladaba con mayor velicad.

CONSLUSIONES

 Este tipo de cromatografía es muy lenta debido a que la poca velocidad de

elución.
 si la velocidad de flujo es demasiado rápida no se logran los equilibrios
adsorción-desorción y el frente de las bandas aparece deformado.
 Se observó la separación de los dos compuestos.
 Los principios de este tipo de cromatografía son muy similares a los de TLC
 La polaridad sigue siendo el factor primordial para la separación de los dos
compuestos

BIBLIOGRAFIA
Galagovsky, L.; Química orgánica, fundamentos teóricos-prácticos para el
laboratorio. Editorial universitaria de Buenos Aires. Argentina. 5ta Edición. 225
pag.
Gómez, S.; Sierra, M.; Pérez, D. 2009. Análisis instrumental, Volumen 1. Editorial
Netbiblo, S.L. España. 256 pag.