Resultados:

Teniendo en cuenta la practica realizada anteriormente, y sabiendo que la mejor fase móvil fue la
de Hexano-Acetato de etilo en proporciones 2/1 demostrado en la práctica de cromatografía en
capa fina, se utilizó 10 mL en primer lugar para realizar la trituración de los vegetales junto con 1
gramo de los mismos. Dando como resultado después del empaquetamiento húmedo de la
columna con ayuda del gel de sílice y de la fase móvil en la misma proporción, 8 tubos de ensayo
con las fracciones recogidos en intervalos dejando eluir gota a gota la columna. Aunque para
realizar el análisis mediante cromatografía en capa fina de los pigmentos vegetales separados se
utilizaron únicamente los mejores tubos son sus fracciones, siendo escogidas las fracciones que se
evidencian en la imagen número 1.

Al analizarlo en cromatografía de capa fina, se utilizó nuevamente como fase móvil la mezcla
realizada de hexano-acetato de etilo por su adecuada polaridad. Se ubicaron con ayuda de un tubo
capilar, una gota de cada uno de las 6 fracciones de pigmentos vegetales en la parte basal de la
placa cromatografía en su fase absorbente y se sumergió en la mezcla por unos pocos minutos
mientras la fase móvil se distribuía por la placa. Obteniendo como resultado una placa cuya fase
móvil no se distribuyó de forma adecuada y por ende se observó ningún componente de la mezcla
con hojas de espinaca cuando se sometió a luz ultravioleta.

Discusión y análisis de resultados:

Es importante resaltar el hecho de haber escogido la mezcla de Hexano-acetato de etilo como la

fase móvil para la realización de la práctica. En la práctica anterior se llegó a la conclusión de que
dicha mezcla posee una polaridad adecuada teniendo en cuenta que las manchas expuestas en las
placas cromatograficas A y B se ubicaron en la parte media de la fase absorbente, y no en la parte
basal (cuando la fase móvil es apolar) o apical (cuando la fase móvil es muy polar) como cuando se
utilizaron el hexano(apolar) y el acetato de etilo(polar) como fases móviles. Por esto, es
importante encontrar una mezcla cuyas proporciones sean aptas para la separación de la mezcla y
así obtener una apta visualización de sus componentes.

Se puede afirmar según la imagen número 1, la separación de varios compuestos de los pigmentos
vegetales, como algunos tipos de clorofila o carotenoides, teniendo en cuenta los diferentes tonos
de verde y amarillo expuestos en los tubos de ensayo y así mismo si se encuentran en una alta
concentración o baja ya que en algunos tubos de ensayo las fracciones presentaron tonos
translucidos. Debido a que no se añadió KOH no fue posible la separación de las clorofilas, aunque
se puede conocer la polaridad de cada fracción teniendo en cuenta que en la cromatografía de
columna primero van a eluir los componentes menos polares que son por lo general las que se
retienen poco o nada en el absorbente y posteriormente los más polares. De igual manera se
puede determinar la posible presencia de carotenos y xantofilas en las primeras eluciones
extraídas, teniendo en cuenta que estas presentan una menor polaridad, así mismo, en las ultimas
eluciones posiblemente se encuentren las clorofilas a y b por ser polares.

Teniendo en cuenta que en la placa cromatografica no se pudo observar ningún cambio luego de
realizar todo el procedimiento adecuado con la fase móvil (mezcla de espinaca con hexano-
acetato de etilo) y fase estacionario gel de sílice, podemos afirmar que la cromatografía de
columna es un proceso más cualitativo que cuantitativo.

Conclusiones:

 En la cromatografía de columna se pudo observar que esta se basa en la diferencia de

velocidad con que se desplazan los componentes de una mezcla de compuestos que se
encuentran entre dos fases en íntimo contacto.
 La cromatografía de columna que permite analizar los datos obtenidos de una manera más
cualitativa que cuantitativa.
 Conocer términos como polar y apolar son indispensables a la hora de analizar los resultados
de la cromatografía de columna.
 Algunos pigmentos fotosintéticos son más afines con disolventes orgánicos polares y otros con
disolventes orgánicos apolares.