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Práctica de Espectroscopia Con Apps PDF
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1. OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA
Estudiar el documento y los requisitos para realizar la prueba. Estudiar los principios teóricos
planteados en la práctica. Realizar las mediciones sin alterar los resultados.
Espectroscopia
Figura 1. Espectro del ácido cítrico al 1.5% por FTIR (López-Díaz, Ríos-Corripio, Ramírez-Corona, &
López-Malo, 2018).
Esta técnica de análisis es una de las más utilizadas en especial en la región visible del espectro
electromagnético. Su uso se da mucho en química clínica y en las determinaciones ambientales
porque existen muchas sustancias que pueden convertirse en derivados coloridos en forma
selectiva. También se puede extender el análisis a las regiones infrarroja y ultravioleta del espectro;
la selección de la longitud de onda dependerá de factores como disponibilidad de instrumentos, si
el analito tiene color o se puede convertir en un derivado colorido, si tiene grupos funcionales que
absorban en las regiones ultravioleta o infrarroja y si en la solución existen otras sustancias
absorbentes, etc (Christian, 2009).
Las técnicas de espectroscopia se pueden subdividir en muchas ramas, entre las cuales se encuentra
la espectroscopia de luminiscencia, que a su vez se puede dividir en fosforescencia y fluorescencia;
esta técnica analítica es de extrema sensibilidad.
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Guía de laboratorio
El espectro Electromagnético
Según Christian (2009) la radiación electromagnética es una forma de energía radiante que se
propaga en forma de ondas transversales. La vibración es perpendicular a la dirección de su
propagación, lo cual imparte un movimiento ondulatorio a la radiación, como la que se muestra en
la figura 2. Las diferentes longitudes de onda tienen un color absorbido y un color transmitido en
particular para cada rango que se muestra en el cuadro 1. Por ejemplo: Una solución que contenga
iones cobre (II) es azul porque absorbe el color complementario, el amarillo, de la luz blanca y
transmite la luz azul restante. Cuando la luz policromática, o luz blanca que contiene todo el
espectro de longitudes de onda en la región visible, atraviesa un objeto, el objeto absorberá ciertas
longitudes de onda y transmitirá las longitudes de onda que no absorba; estas longitudes de onda
residuales con las que percibimos como color.
𝑐
𝜆= (1)
𝑣
ℎ𝑐
𝐸 = ℎ𝑣 = (2)
𝜆
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Donde E es la energía del fotón, en ergios y h es la constante de Planck. Por lo que se puede notar
que cuanto más pequeña sea la longitud de onda o más corta, la energía de la radiación es mayor
(Skoog, Holler, & Nieman, 2008).
Espectroscopia de Luminiscencia
Esta técnica mide los niveles de energía de los centros lumínicos. El nivel de energía del centro o
núcleo lumínico es definido como su estado característico, que se relaciona a la naturaleza física del
núcleo y sus procesos energéticos y dinámicos que lo rigen. Ahora, el estado fundamental se define
como el estado con la energía más baja y los estados de mayor energía se conocen como estado
excitados. Los núcleos posen diversas fuentes de reserva de energía, que incluyen electrónicos,
vibracionales, rotacionales, transicionales y también los referentes a los espines de los electrones
(Gaft, Reisfeld, & Panczer, 2005).
Las emisiones de luminiscencia ocurren como resultado de una transición electrónica radiactiva en
donde los electrones pasan de un estado de energía mayor a uno menor, y la diferencia de energía
se libera como un fotón. Por supuesto, primero el electrón debe ser excitado a un nivel de energía
mayor por algún medio, como radiación UV o visible. Luego de la excitación el núcleo ajusta sus
posiciones al nuevo estado de energía, así las distancias interatómicas se vean ajustadas a este
nuevo estado de equilibrio.
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Entre la técnica de la luminiscencia se pueden tener tres tipos de métodos ópticos relacionados
entre sí, que son: la fluorescencia, fosforescencia y quimioluminiscencia. En todos estos el principio
se mantiene, donde se excita las moléculas y se obtiene información para su análisis cualitativo y
cuantitativo (Rubinson & Rubinson, 2001). Estos tres métodos se conocen como métodos
luminiscentes moleculares; sin embargo, en el presente documento se abordarán solamente la
fluorescencia y la fosforescencia.
En general, ambos métodos se basan en que la excitación se logra por medio de la absorción de
fotones, de ahí que muchos autores con frecuencia aludan ambos fenómenos bajo un término más
general de Fotoluminiscencia. Sin embargo, la fluorescencia y la fosforescencia si presentan
diferencias entre sí. Por ejemplo, en la fluorescencia las transiciones electrónicas responsables de
este fenómeno no conllevan un cambio de espín del electrón, por lo que esto provoca que tenga
una vida corta, de ahí que el tiempo en que se mantiene la luminiscencia es de aproximadamente
10-5 s. Por otra parte, la fosforescencia si está acompañada por un cambio del espín del electrón, lo
que hace que su duración con respecto a la anterior sea mayor y más fácilmente detectable, una
vez que la radiación ha terminado. Además, en este caso se tiene tiempos tan largos como de
segundos o más (Rubinson & Rubinson, 2001).
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A pesar de que estas técnicas son muy sensibles, capaces de detectar hasta tres órdenes de
magnitud mejores que técnicas de espectroscopia de absorción; estas detecciones son del orden de
partes por billón. Sin embargo, su gran sensibilidad viene acompañada con serios defectos de
interferencias que proceden de la matriz de las muestras analizadas, de ahí que normalmente esta
técnica se vea acompañada de cromatografía o alguna similar, para descartar posibles errores.
Fluorescencia
Cabe resaltar que los descubrimientos simultáneos realizados por Kirchhoff y Bunsen en el siglo
diecinueve, acerca de absorción y espectroscopia de emisión le dieron pie al desarrollo de estas
técnicas de caracterización de materiales. Ellos observaron emisiones atómicas y líneas de absorción
con longitudes de onda que coincidían exactamente. Este descubrimiento fue aplicado tiempo
después por Stokes y Kirchhoff para explicar el espectro de Fraunhofer. Además, Stokes explico la
conversión de luz ultravioleta absorbida a luz azul emitida e introdujo el término de Fluorescencia;
con este descubrimiento se marcó el inicio de la luminiscencia como una ciencia (Di Bartolo &
Collins, 2006).
De acuerdo con Beer y Lambert, se tiene la relación de la luz absorbida por unidad de longitud de
una muestra depende a cualquier longitud de onda solo de la intensidad de luz incidida:
𝑑𝑙(𝜆)
= −𝛼 𝐼(𝜆) (3)
𝑑𝑥
Donde se tiene que el α es una constante de proporcionalidad llamada constante de absorción, que
igual depende de la longitud de onda. La luminiscencia logra medir cualquier luz detectable contra
un fondo completamente oscuro, inclusive los detectores modernos son capaces de detectar
fotones por si solos, por lo que esta técnica puede llegar a ser muy sensible como se había
comentado anteriormente. Sin embargo, a pesar de su gran sensibilidad, los métodos de
fluorescencia no son tan aplicados como los métodos de absorción, ya que los sistemas químicos
que se pueden hacer fluóreser son limitados, además de ser un procedimiento mucho más costoso.
La fluorescencia se puede dar en cualquiera de las tres fases de la materia, y normalmente se tiene
que la radiación absorbida por la muestra es reemitida sin cambio de frecuencia, y a esta
fluorescencia en particular se conoce como fluorescencia de resonancia (Skoog, Holler, & Nieman,
2008).
Según Skoog, Holler y Nieman (2008) la fluorescencia molecular se cuantifica al excitar la muestra a
la longitud de onda de absorción, también llamada longitud de onda de excitación, y medir la
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emisión a una longitud de onda mayor, denominada longitud de onda de emisión o fluorescencia.
La emisión de fluorescencia se mide en ángulo recto al haz incidente, para no medir la radiación
incidente. Así mismo, las bandas de fluorescencia molecular se componen principalmente de líneas
de longitud de onda más larga, frecuencia más baja y, por tanto, menor energía si se comparan con
la banda de radiación absorbida que origina su excitación. Esta desviación se longitudes de onda se
conoce como desplazamiento de Stokes (como se muestra en la figura 3).
Según Christian (2009), cualquier molécula que absorba radiación ultravioleta podría fluorescer. Sin
embargo, existen muchas razones para que esto no suceda como su estructura que permiten otros
mecanismos de relajación sin radiación que ocurren con mayor velocidad que la emisión
fluorescente. Cuanto mayor sea la absorción por una molécula, la intensidad de fluorescencia será
mayor. La naturaleza de otras sustancias puede alterar el grado de fluorescencia; inclusive el pH
puede afectar este fenómeno para una molécula, por ejemplo, el fenol es fluorescente pero su anión
no lo es.
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Ahora bien, si un compuesto no es fluorescente puede convertirse en un derivado que sí lo sea. Por
ejemplo, White y Argauer han desarrollado métodos fluorométricos para muchos metales,
formando quelatos con compuestos orgánicos. La lista de combinaciones o de tratamientos para
convertir un compuesto no fluorescente a uno que si lo sea es muy extensa y depende de la
aplicación que se requiera.
En términos más científicos, según Skoog (2009) se ha demostrado que la fluorescencia resulta
favorecida por la rigidez molecular. La influencia de la rigidez también explica el aumento de la
fluorescencia de ciertos agentes quelantes orgánicos cuando forman complejos con iones metálicos.
Además, si se parte de la ley de Beer mencionada anteriormente se puede deducir con facilidad que
la intensidad de fluorescencia está dada por:
Donde se tiene que el “φ” es el rendimiento cuántico, una constante de proporcionalidad que mide
la fracción de los fotones absorbidos que se convierten en fotones fluorescentes. Esto quiere decir
que el rendimiento cuántico es menor o igual a la unidad, inclusive desarrollando la ecuación de
acuerdo con que tan grande o chico sea el número “abc” se podrían tener las siguientes expresiones:
Instrumentación en Fluorescencia
Existen varios tipos de instrumentos para la medida de la fluorescencia, pero todos tiene en común
que se debe separar la radiación emitida de la radiación incidente. Esto se logra midiendo la
fluorescencia en ángulo recto con la radiación incidente; esto se logra ya que la radiación
fluorescente se emite en todas direcciones, pero la radiación incidente atraviesa en forma directa
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Ahora bien, si en lugar de usar filtros, el instrumento utiliza monocromadores para seleccionar las
longitudes de onda de excitación y el otro para seleccionar la longitud de onda de fluorescencia; a
este tipo de aparatos se les conoce como espectrofluorómetro.
Fosforescencia
La fosforescencia es la emisión espontánea de radiación cuando los estados inicial y final implicados
en el proceso tienen diferente número de electrones desapareados. Regularmente, la vida media
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de la fosforescencia, es decir el tiempo que perdura este fenómeno para desaparecer puede ser
desde segundos hasta minutos. En la figura 5 se nota la diferencia de duración entre la
fosforescencia y la fluorescencia. Este fenómeno ocurre por una absorción y almacenamiento de
energía, que luego es emitida en forma de radiación en el espectro de luz visible. Se debe dar energía
al material a una longitud de onda mayor para que luego este emita a una longitud de onda menor.
Este tipo de fenómeno se utiliza mucho en la industria para dar luminosidad a aparatos electrónicos
o juguetes que brillan en la oscuridad.
Como es claro de ver, la fosforescencia y la fluorescencia son fenómenos muy similares y para lograr
ver sus diferencias se es necesario comprender los espines de electrones y la diferencia entre los
estados singlete y triplete. Según Skoog, Holler y Nieman (2008) un estado singlete es el que se
tienen todos los espines electrónicos pareados, mientras que para un radical libre su estado
fundamental sería un doblete, ya que el electrón no apareado puede tomar dos orientaciones en
un campo magnético.
Cuando uno de los electrones de un par en una molécula se excita a un nivel de energía superior,
puede producirse un estado de singlete o triplete. Como se puede ver en la figura 6, en el estado
singlete se tiene los electrones con dirección opuesta, tanto para su estado fundamental como el
estado excitado. Ahora para el estado triplete, los espines de los dos electrones dejan de estar
emparejados y son paralelos, siguen la misma dirección. Cabe señalar que el estado triplete en
menos energético que el singlete correspondiente (Skoog, Holler, & Nieman, 2008).
La fosforescencia molecular implica un cambio en el espín del electrón, desde un triplete excitado
hasta al fundamental singlete. Este cambio es menos probable que el cambio para la fluorescencia,
lo que hace que la fosforescencia sea un fenómeno de mayor duración. Sin embargo, esta técnica
es menos aplicada debido a su débil intensidad en comparación con la fluorescencia.
Figura 6. Estados del espín electrónico de las moléculas. a) estado de energía más baja b) y c)
estados excitados. (Skoog, Holler, & Nieman, 2008)
Aplicaciones Industriales
Diamantes
Las rocas que contienen diamantes se hacen chocar y se presionan para separar los diamantes de
los minerales más ligeros por medios gravimétricos como equipos rotatorios por gravedad. Esto
produce un concentrado alto en minerales, esta solución se puede hacer pasar por una trampa de
grasa para atrapar los diamantes u otra opción sería pasar el concentrado por una banda con una
máquina de rayos X que puede identificar los diamantes por su fluorescencia inducida por esos
rayos, con mayores rendimientos de selección que el método usualmente usado (Gaft, Reisfeld, &
Panczer, 2015).
UV es muy poderosa y efectiva para su detección, por lo que en la actualidad es más recomendable
utilizar dos laser con diferentes longitud de onda y así tener equipado un sistema con una banda de
detección mayor (Gaft, Reisfeld, & Panczer, 2005).
Bauxita y Alúmina: AI
La industria del aluminio sigue en crecimiento y a su vez la cantidad de impurezas en las materias
primas ha incrementado de forma significativa a tal punto que ha llegado a afectar los
requerimientos comerciales esperados. Las impurezas más habituales son Cr, Ti, Ni, Fe, Si, Ga, Zn en
estos materiales. Estas impurezas deben ser removidas para obtener una buena calidad en el
aluminio, y evitar que sea quebradizo o propenso a la corrosión (Gorobets B, 1994). El aluminio
pertenece a los elementos que presentan una fuerte emisión molecular que puede ser
efectivamente utilizada para propósitos analíticos. Las técnicas de Luminiscencia pueden detectar
todos los elementos relevantes para el control de línea de las materias primas, en la figura 7 se
pueden ver los espectros de minerales que contienen aluminio.
5. EQUIPO Y MATERIALES
7. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
8. CÁLCULOS Y RESULTADOS
8.1. Realice los cálculos de su DBCA y DCA, y compare los resultados obtenidos.
8.2. Si se tomará otro bloque (de su elección), indique como plantearía el experimento y
justifique su elección (debe mostrar su diseño claramente).
9.1. Comente las diferentes fuentes de error que se pudieron dar en la práctica.
9.2. Discuta los resultados de los diferentes análisis estadísticos.
9.3. Discuta la pertinencia de los diferentes análisis estadísticos utilizados.
9.4. Discuta que otros factores deben ser tomados en cuenta en este experimento y como
podría afectar los resultados.
10. REFERENCIAS
Di Bartolo, B., & Collins, J. (2006). Luminescense spectroscopy. Handbook of applied solid state
spectroscopy. New York: Springer.
Gaft, M., Reisfeld, R., & Panczer, G. (2005). Modern Luminescene spectroscopy of mineral and
materials. Berlin/New York: Springer.
Gaft, M., Reisfeld, R., & Panczer, G. (2015). Modern Luminescence Spectroscopy of Minerals and
Materials. Switzerland: Springer International Publishing.
Hoogstins, C., Tummers, Q., Gaarenstroom, K., & de Kroon, C. (2016). A novel tumor-specific agent
for intraoperative near-infrared fluorescence imaging: A translational study in health
volunteers and patients with ovarian cancer. Clinical Cancer Research, 2929-2938.
López-Díaz, A., Ríos-Corripio, M., Ramírez-Corona, N., & López-Malo, E. (2018). Effect of Short
Wave Ultraviolet Radiation on Selected Properties of Edible Films Formulated With
Pomegranate Juice and Chitosan. Revista Mexicana de Ingeniería Química, 63-73.
Rubinson, K., & Rubinson, J. (2001). Análisis Instrumental. Madrid: Prentice Hall.
Skoog, G., Holler, R., & Nieman. (2008). Principio de Análisis Instrumental. México: Mc Graw Hill.