Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
Facultad de bioanálisis
Facultad de bioanálisis
Facultad de bioanálisis
Facultad de bioanálisis
Cromatografía Plana
EE: Instrumentación avanzada
Fundamentos.
La separación de mezclas de moléculas mediante la cromatografía de capa fina se basa en
el principio del reparto entre dos fases. En general, una cromatografía se realiza
permitiendo que la mezcla de moléculas que se desea separar (muestra) interaccione con un
medio o matriz de soporte que se denomina fase estacionaria. Un segundo medio (la fase
móvil) que es inmicible con la fase estacionaria se hace fluir a través de ésta para "lavar"
(eluír) a las moléculas en la muestra. Debido a que las distintas moléculas en la muestra
presentan diferente coeficiente de reparto, la fase móvil "lavará" a los distintos
componentes con diferente eficiencia, de modo que aquellos que "prefieren disolverse" en
la fase móvil serán eluídos más rápido que los que sean preferencialmente solubles en la
fase estacionaria. 2
Cromatografía ascendente en capa fina: colocación de una muestra (con 3 componentes),
desarrollo de la cromatografía y revelado del cromatograma.
Rf es el factor de retardo o retraso, que mide la movilidad relativa de cada componente
con respecto al máximo posible, la distancia recorrida por el frente de fase móvil.
Componente 1: Rf = a / D
Componente 2: Rf = b / D
Componente 3: Rf = c / D
Metodología:
Procedimiento
Una placa de CCF es una lámina de vidrio, metal o plástico recubierta con una capa
delgada de un sólido adsorbente (gel de sílice o alúmina). Se deposita una pequeña cantidad
de la muestra problema en disolución en un punto en la parte inferior de la placa. Entonces
la placa se introduce en una cubeta cromatográfica, de forma que sólo la parte inferior de la
placa queda sumergida en el líquido. Este líquido o eluyente es la fase móvil y asciende por
la placa de CCF por capilaridad.
A medida que el eluyente pasa por el lugar donde está la mancha de la mezcla problema se
establece un equilibrio entre las moléculas de cada uno de los componentes en la mezcla
que son adsorbidas y las que se encuentran en disolución.
Bibliografia: