RESOLUCIÓN No.

0047 TRABAJO DE GRADO

FORMATO No. 1
PRESENTACIÓN DEL ANTEPROYECTO DE TRABAJO DE GRADO
A. INFORMACIÓN GENERAL DEL PROYECTO
Título del Trabajo de Investigación:

REMOCIÓN DE NUTRIENTES DE AGUA RESIDUAL DOMÉSTICA USANDO

CEPAS DE Chlorella vulgaris EN EL MUNICIPIO POPAYÁN, CAUCA

Facultad: Ciencias Ambientales y Desarrollo Sostenible

Programa: Ingeniería Ambiental y Sanitaria
Tipo de Investigación: Experimental
Estudiantes:

B. INFORMACIÓN ESPECÍFICA DEL PROYECTO

Planteamiento del Problema

El resultado de vertimientos de aguas residuales domésticas a cuerpos de agua

se provoca, principalmente, por la ejecución de diferentes actividades en las
viviendas. Este tipo de residuos aporta gran parte de materia orgánica,
nutrientes y sólidos suspendidos a las fuentes hídricas que reciben estas
descargas, contribuyendo a su vez con la eutrofización y turbidez de la misma
[1]. Lo anterior incentiva el desarrollo de microorganismos patógenos que en
conjunto puede vulnerar la salud pública y la sostenibilidad de la sociedad [2].

A nivel nacional se generan más de 4.5 millones de m 3 mensuales de aguas

residuales provenientes de actividades domésticas, agropecuarias e
industriales, y aproximadamente el 90% de estas aguas son vertidas
directamente en aguas superficiales, convirtiendo éstos desechos en su
principal fuente de contaminación. Por esta razón, en la actualidad a nivel
mundial se han venido implementando técnicas para el tratamiento de las aguas
residuales aplicando procesos físicos, químicos y biológicos, según sea el caso,
con el propósito de reducir la carga contaminante presente y hacer posible su
reutilización. Esas técnicas se derivan de diversos estudios donde se hayan
obtenido resultados favorables en cuanto a la eficiencia de remoción o
transformación de los contaminantes y que además posean un valor agregado,
bien sea en innovación, en términos económicos, técnicos y/o sociales [2].

En ese sentido, una de las técnicas estudiadas e implementadas, es el uso de

ciertas microalgas por su componente biorremediador, su capacidad de utilizar
nitrógeno y fósforo para su crecimiento y facultad de eliminar metales pesado
[3]. Este es el caso de la microalga Chlorella vulgaris, la cual ha sido usada a
nivel internacional en diversos estudios investigativos para el tratamiento de
aguas residuales, donde se demuestra su eficiencia en la eliminación de
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nutrientes y su aplicación de bajo costo [4] [5] [6]. A nivel nacional, se han
encontrado muy pocos casos al respecto y a nivel local ninguno, pese a que la
microalga es nativa de nuestro país [7] [8].

Para el presente proyecto de investigación se trabajará con cepas de Chlorella

vulgaris para la remoción de nitrógeno y fósforo de las aguas residuales
domésticas que se generan en la zona urbana de la ciudad y que hasta la fecha
son vertidas en gran parte al Río Molino, el cual a su vez abastece la Planta de
Tratamiento Tulcán. Esto se desarrolla con el fin de demostrar y reiterar su
eficiencia en la eliminación de los nutrientes ya mencionados y determinar su
viabilidad para su implementación como técnica de tratamiento de éstas aguas.

Estado del Arte o Marco Referencial

El continuo deterioro del medio ambiente debido a la incorporación de

contaminantes de origen antropogénico, y más concretamente en los sistemas
acuáticos, tiene un impacto negativo directo en la calidad del agua. Una de las
principales fuentes de contaminación del agua son las aguas residuales
urbanas. En este sentido, el aumento de la urbanización y la expansión de la
población urbana han dado lugar a una mayor cantidad de aguas residuales
municipales [9].

Más de 2.000 millones de personas carecen de acceso al agua potable y más

del doble no cuentan con acceso a servicios de saneamiento seguro. Debido al
rápido crecimiento de la población mundial, se prevé que la demanda de agua
aumente en casi un tercio para el año 2050. Ante un patrón de consumo
acelerado, el creciente deterioro del medio ambiente y los impactos
multifacéticos del cambio climático, es evidente que precisamos nuevas formas
de gestión de la demanda de competencias para nuestros valiosos recursos de
agua dulce [10].

A nivel mundial, el desafío más frecuente al que se enfrenta la calidad del agua
es la carga de nutrientes, que según la región se asocia a menudo con la carga
de patógenos. Cientos de productos químicos afectan también a la calidad del
agua. Es evidente que los mayores aumentos en la exposición a contaminantes
se dan en los países de ingresos bajos y mediobajos, debido principalmente a
un mayor crecimiento demográfico y económico y a la falta de sistemas de
gestión de aguas residuales [10].

Frete a esta problemática que cada día va en aumento se hace necesaria la

implementación de nuevas alternativas que sean menos costosas y mucho más
eficientes para el tratamiento de estas aguas residuales haciendo uso de
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microorganismos, esto a su vez han jugado un papel importante en la

naturaleza y en la evolución de la misma, como lo son las microalgas.

Las microalgas son el primer eslabón de la cadena trófica, aunque generalmente

microscópicas algunas alcanzan tamaños que las pueden hacer visibles a
simple vista, la mayoría de las veces de forma agregada, otras incluso, generan
una turbiedad evidente en los cuerpos de agua. Las microalgas se han utilizado
para la eliminación de nutrientes de aguas residuales de tipo municipal o
industrial. Son una opción viable ya que los sistemas de tratamiento de aguas
residuales que emplean microalgas requieren poca energía ya que utilizan la luz
solar, producen biomasa que puede ser usada para diferentes fines, retiran CO2
de la atmósfera y pueden producir substancias con alto valor agregado como
pigmentos, fármacos y biocombustibles entre otros [11].

La utilización de microalgas para remoción de nutrientes ha sido estudiada por

más de 50 años, comprobando que la biomasa algal obtenida tiene un alto
contenido de proteínas, lípidos, carbohidratos, y otros productos de valor
agregado. Por lo tanto, los esfuerzos para cultivar este tipo de microorganismos
en aguas residuales han buscado conseguir un doble beneficio, la producción de
biomasa para diferentes usos y un efluente limpio con una tecnología
relativamente simple [11].

Los géneros Chlorella y Scenedesmus, así como algunas especies del grupo de
las cianobacterias, se han reportado para el tratamiento de diferentes tipos de
aguas residuales, destacando las provenientes de plantas de tratamiento
convencionales de origen industrial y urbano [11].

Los primeros estudios sobre la posibilidad de utilizar microalgas como

microorganismos depuradores de aguas residuales, debido al aprovechamiento
de los nutrientes inorgánicos, fueron reportados por Caldwell 1946.
Posteriormente Oswald en 1957, introduce un nuevo concepto al hablar de
producción masiva de microalgas. Luego en California se cultivan masivamente
microalgas en reactores con células en suspensión [12].

Por otra parte demostraron el incremento significativo de remoción de fósforo y

amonio al inmovilizar de forma conjunta Chlorella vulgarisy Azospirillum
brasiliene, esto comparativamente con el alga inmovilizada sola. Otros estudios
de biorremediación de aguas residuales domésticas utilizando microalgas
inmovilizadas y coinmovilizadas, demostraron porcentajes de eliminación
superiores al 90% de amonio, nitrato y fósforo en tiempos inferiores a 10 días.
La inmovilización es pues, un proceso que consiste en la localización de una
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enzima o un microorganismo completo en un espacio definido sin perder su

actividad catalítica o viabilidad en el caso de las células [12].

La cinética de crecimiento lineal bajo condiciones autótrofas ha sido observada

en presencia de aire en experiencias realizadas durante doce días con cultivos
de Chlorella vulgaris. Otros estudios se han orientado a la determinación de la
influencia de la deficiencia de nitrógeno y fósforo sobre el peso seco, el
porcentaje de lípidos y proteínas de esta microalga, obteniendo variaciones
mínimas en el peso seco pero bastante significativo en el contenido proteico y
lipídico [13].

La descripción de la remoción de nutrientes en la literatura es variada. A

Chlorella vulgaris se le ha asignado una eficiencia de remoción de 86% para N
inorgánico y 70% para P inorgánico. En otros estudios al trabajar con Chlorella
sp., obtuvieron remociones de 100% para amonio, 75,7-82,5% para nitrito y
62,5-74,7% para fósforo [14].

Justificación

A nivel mundial, las aguas residuales son un serio problema para la salud
humana y el ecosistema. El alto contenido en nutrientes como nitrógeno, fosfato
y materia orgánica ponen en peligro los cuerpos de aguas receptores al romper
el equilibrio ecológico y llevarlas a un estado de eutrofización. Sin embargo, esta
amenaza puede ser convertida en una oportunidad en lo que se refiere al cultivo
de microalgas, como un sistema biológico alternativo para el tratamiento de
aguas residuales domésticas. Lo anterior incentiva el uso de estos
microorganismos puesto que ha sido objeto de numerosas investigaciones a
nivel internacional debido a su capacidad de remover cantidades significativas
de nutrientes a la par que oxigenan las aguas, capturan el CO₂ atmosférico y
aumentan su biomasa [3] [15] [12].

El cultivo de microalgas ofrece un paso interesante para los tratamientos de

aguas residuales, ya que proporcionan un tratamiento biológico terciario junto
con la producción de biomasa potencialmente valiosa, que se puede utilizar para
varios propósitos. Además, es una buena alternativa para los tratamientos
terciarios debido a la capacidad de las microalgas para utilizar nitrógeno
inorgánico y fósforo para su crecimiento. Y también, por su capacidad para
eliminar metales pesados, así como algunos compuestos orgánicos tóxicos, por
lo tanto, no conduce a una contaminación secundaria [3] [16] [17].
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Sin embargo, son pocos los estudios realizados a nivel nacional en el uso de
microalgas para el tratamiento de aguas residuales domésticas, especialmente
no se encuentra ningún tipo de información relacionada con el proyecto de
investigación “remoción de nutrientes en agua residual domestica usando cepas
de Chlorella vulgaris en el municipio de Popayán cauca”. Además de que los
estudios encontrados se enfocan más en otro tipo de aguas residuales como lo
son las industriales, debido a esto es necesario conocer más afondo la eficiencia
de este tipo de microalgas en especial la Chlorella vulgaris que es una de las
más utilizadas en la biorremediación para el tratamiento de aguas residuales [7]
[8].

La ejecución del presente proyecto se realiza teniendo en cuenta lo mencionado

con anterioridad y con el propósito de determinar la eficiencia de este tipo de
microalga en particular, en la remoción de nutrientes de las aguas residuales de
la ciudad. Cabe mencionar que estas aguas residuales, en su gran mayoría son
vertidas directamente en el rio Molino, del cual se alimenta la planta de
tratamiento de Tulcán y pese a que el tratamiento realizado es primario, se
considera de gran importancia la implementación de tratamientos secundarios
como el sugerido en éste documento, para evitar problemas como la
eutrofización por el exceso de nutrientes en fuentes hídricas.

Objetivos

Objetivo General

Determinar la eficiencia de la microalga Chlorella vulgaris en la remoción de los

nutrientes del agua residual doméstica de Popayán.

Objetivos Específicos

1. Determinar las características físico-químicas del agua residual doméstica de

la zona urbana de Popayán.
2. Identificar las condiciones óptimas para el crecimiento de las microalga
Chlorella vulgaris in vitro.
3. Establecer la efectividad de la microalga para la remoción de nitrógeno y
fósforo.

Metodología

MEDIO DE CULTIVO
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La cepa de C. vulgaris será adquirida de los cultivos de la colección de algas de

la Universidad de Austin Texas, teniendo en cuenta que ahí fue debidamente
aislada y clasificada. Es relevante en este trabajo que esta alga es originaria de
Colombia, el trabajo pretende utilizar nuestra diversidad en el aprovechamiento
de esta tecnología (UTEX, 2017). Para el medio de cultivo se partirá de lo
establecido para la C. vulgaris UTEX 2714, para todas las preparaciones se
recomienda usar agua destilada des ionizada, en la que se adicionan los
siguientes componentes: KH2PO4 solución madre 8,75 g/500 mL (10mL/L),
CaCl2.2H2O solución stock 125g/500 mL (1mL/L), MgSO4.7H2O solución
madre 37,5 g/500 mL (1mL/L), NaNO3 solución madre 125 g/500 mL (1mL/L),
K2HPO4 solución madre 37,5 g/500 mL (1mL/L), NaCl solución madre 12,5
g/500 mL (1mL/L), Na2EDTA.2H2O solución stock 10g/L (1mL/L) FeSO4.7H2O
solución stock 498 g/L (1mL/L), H3BO3 5,75 solución madre g/500mL (0,75
mL/L) y micronutrientes de Cu, Mn, Mo, etc [18].

ACONDICIONAMIENTO DE LAS MICROALGAS

Se toman muestras de las aguas residuales domésticas sometidas a

pretratamiento de la planta de Tulcán. Se trasladan las muestras en frascos de
vidrio transparentes y posteriormente se mezclan con cepas de Chlorella
vulgaris, ya inmovilizadas, obtenidas de un laboratorio confiable, creando
cultivos sometidos a condiciones específicas, como intensidad lumínica no
superior a los 3200 Lux, una agitación de 600 rpm aproximadamente,
manteniendo un pH básico y una temperatura media. Lo anterior con el fin de
que las microalgas se adapten a su nuevo ambiente.

UBICACIÓN Y DESCRIPCIÓN DE LOS PUNTOS DE MUESTREO

Los principales puntos de muestreo de las aguas residuales  se realizan a la
salida de la planta de tratamiento de “TULCAN” con el fin de realizar las
respectivas pruebas caracterización de sus componentes físico-químicos y por
supuesto la evaluación de nitratos y fosfatos de la misma.
CARACTERÍSTICAS FÍSICO QUÍMICAS DEL AGUA RESIDUAL
La caracterización de las aguas  residuales es una tarea muy importante, ya que
a partir de los resultados de la misma, podemos diseñar los tratamientos
necesarios para el efluente residual. Cabe aclarar que también esta
caracterización nos sirve  para verificar si los efluentes, se encuentran dentro de
la normatividad vigente. Los efluentes contienen una gran variedad de
componentes en función de la actividad que los genere, pero podemos indicar
que debemos determinar para los mismos los siguientes parámetros:
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Características Físicas: Color, turbiedad,  Olor, Temperatura, Solidos y

Conductividad
Características químicas: Acidez, alcalinidad, agentes espumantes, dureza,
materia orgánica, PH, DBO Y DQO.
En la etapa experimental, se evalúa la capacidad de crecimiento y eficiencia de
eliminación de nutrientes de Chlorella vulgaris en condiciones de laboratorio.
La primera etapa consiste en la caracterización del agua con el fin de obtener el
nivel de nutrientes, posteriormente se lleva a cabo el cultivo y adaptación de las
microalgas a las condiciones óptimas para finalmente realizar el montaje del
diseño experimental con las cepas adaptadas; así, se podrá evaluar la eficacia
de la microalga como biorremediadora.
DETERMINACIÓN DE NITRÓGENOS Y FÓSFORO TOTAL
La concentración de nitrógeno en forma de nitratos (N-NO3 ), amonio (N-NH4 ) y
nitritos (N-NO2 ) se mide al inicio y al final del ensayo colorimétricamente de
acuerdo con los métodos de Müller y Weidemann (1955), APHA 4500- NH3 D y
APHA 4500-NO2 B [19], respectivamente. La concentración de fósforo en forma
de fosfatos (P-PO4 ) se mide al inicio y al final del ensayo colorimétricamente de
acuerdo con el método normalizado APHA 4500-P-E [19]. Por último, la
concentración de fósforo y nitrógeno total se mide diariamente por oxidación
previa de la muestra filtrada con Oxysolve® [20], y posterior análisis de fosfatos
y nitratos, respectivamente.

Productos Esperados

1. Se cuantificará los nitritos y fosfatos antes y después del tratamiento con las
microalgas.
2. Con base al resultado anterior se medirá la efectividad del tratamiento y se
evaluará su posible implementación a gran escala como tratamiento
secundario para una PTAR (Planta de Tratamiento de Aguas Residuales).

Referencias Bibliográficas

[1] G. H. P. Prado y S. M. Velasco, «Fitodepuración de aguas residuales domesticas

con poaceas: brachiaria mutica, pennisetum purpureum y panicum maximun en el
municipio de Popayán, Cauca», INGRESAR Rev., vol. 11, n.o 2, pp. 57-65, may
2015.
[2] J. C. B. Pérez, A. N. A. Arias, y J. R. Calle, «Evaluación De Un Humedal Artificial
De Flujo Subsuperficial En El Tratamiento De Las Aguas Residuales Generadas En
La Institución Universitaria Colegio Mayor De Antioquia, Colombia», Rev. Int.
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Contam. Ambient., vol. 30, n.o 3, pp. 275-283, 2014.

[3] N. Abdel-Raouf, A. A. Al-Homaidan, y I. B. M. Ibraheem, «Microalgae and
wastewater treatment», Saudi J. Biol. Sci., vol. 19, n.o 3, pp. 257-275, jul. 2012.
[4] J. Ruiz, P. Álvarez, Z. Arbib, C. Garrido, J. Barragán, y J. A. Perales, «Effect of
Nitrogen and Phosphorus Concentration on Their Removal Kinetic in Treated Urban
Wastewater by Chlorella Vulgaris», Int. J. Phytoremediation, vol. 13, n.o 9, pp. 884-
896, oct. 2011.
[5] G. Mujtaba, M. Rizwan, y K. Lee, «Removal of nutrients and COD from wastewater
using symbiotic co-culture of bacterium Pseudomonas putida and immobilized
microalga Chlorella vulgaris», J. Ind. Eng. Chem., vol. 49, pp. 145-151, may 2017.
[6] «Effect of organic carbon enrichment on the treatment efficiency of primary settled
wastewater by Chlorella vulgaris - ScienceDirect». [En línea]. Disponible en:
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2211926416305057. [Accedido:
14-abr-2019].
[7] L. E. González, R. O. Cañizares, y S. Baena, «Efficiency of ammonia and
phosphorus removal from a colombian agroindustrial wastewater by the microalgae
Chlorella vulgaris and Scenedesmus dimorphus», Bioresour. Technol., vol. 60, n.o 3,
pp. 259-262, jun. 1997.
[8] V. A. Vacca-Jimeno, E. R. Angulo-Mercado, D. M. Puentes-Ballesteros, J. G.
Torres-Yépez, y M. E. Plaza-Vega, «Uso de la microalga Chlorella sp. viva en
suspensión en la decoloración del agua residual de una empresa textil»,
Prospectiva, vol. 15, n.o 1, pp. 93-99, jun. 2017.
[9] C. C. García-Gozalbes, Z. Arbib, y J. A. Perales-Vargas-Machuca, «Cinéticas de
crecimiento y consumo de nutrientes de microalgas en aguas residuales urbanas
con diferentes niveles de tratamiento», Tecnol. Cienc. Agua, vol. 6, n.o 1, pp. 49-68,
feb. 2015.
[10]«Informe mundial de las Naciones Unidas sobre el desarrollo de los recursos
hídricos 2018: soluciones basadas en la naturaleza para la gestión del agua -
UNESCO Biblioteca Digital». [En línea]. Disponible en:
https://unesdoc.unesco.org/ark:/48223/pf0000261494. [Accedido: 25-may-2019].
[11]B. Pernia, J. Demey, Y. Inojosa, y L. Naranjo, «Biodiversidad y potencial
hidrocarbonoclástico de hongos aislados de crudo y sus derivados : Un meta-
análisis Biodiversity and hydrocarbonoclastic potencial of fungi isolated from crude
and petroleum derivates : a meta-analysis Abstract», Rev Latinoam Biotecnol Amb
Algal, vol. 3, pp. 1-39, ene. 2012.
[12]A. L. R. Parra y R. O. C. Villanueva, «Bioremediacion de aguas con fosfatos y
nitratos utilizando Scenedesmus incrasssatulus inmovilizado», BISTUA Rev. Fac.
Cienc. BASICAS, vol. 10, n.o 1, may 2013.
[13]C. Infante, E. Angulo, A. Zárate, J. Florez, F. Barrios, y C. Zapata, «Propagación de
la microalga Chlorella sp. en cultivo por lote: Cinética del crecimiento celular.», Av.
En Cienc. E Ing., vol. 3, ene. 2012.
[14]A. Hernández-Pérez y J. I. Labbé, «Microalgas, cultivo y beneficios», Rev. Biol.
Mar. Oceanogr., vol. 49, n.o 2, pp. 157-173, ago. 2014.
[15]Á. Peltroche y J. G. Jesús, «Evaluación de la remoción de nitratos y fosfatos a nivel
laboratorio por microalgas libres e inmovilizadas para el Tratamiento Terciario de
Aguas Residuales Municipales», Univ. Ricardo Palma, 2015.
[16]L. Wang et al., «Cultivation of Green Algae Chlorella sp. in Different Wastewaters
from Municipal Wastewater Treatment Plant», Appl. Biochem. Biotechnol., vol. 162,
n.o 4, pp. 1174-1186, oct. 2010.
[17]M. T. Ortiz-Villota, M. A. Romero-Morales, L. D. Meza-Rodríguez, M. T. Ortiz-Villota,
M. A. Romero-Morales, y L. D. Meza-Rodríguez, «La biorremediación con
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microalgas (Spirulina máxima, Spirulina platensis y Chlorella vulgaris) como

alternativa para tratar la eutrofización de la laguna de Ubaque, Colombia», Rev.
Investig. Desarro. E Innov., vol. 9, n.o 1, pp. 163-176, dic. 2018.
[18]«UTEX 2714 Chlorella vulgaris | UTEX Culture Collection of Algae». [En línea].
Disponible en: https://utex.org/products/utex-2714. [Accedido: 25-may-2019].
[19]«APHA Method 9221: Standard Methods for the Examination of Water and
Wastewater». [En línea]. Disponible en:
https://webcache.googleusercontent.com/search?
q=cache:hDiqQPg9770J:https://law.resource.org/pub/us/cfr/ibr/002/apha.method.92
21.1992.pdf+&cd=2&hl=es-419&ct=clnk&gl=co. [Accedido: 26-may-2019].
[20]«Oxisolv® plus microwave — a new way for sample pretreatment and sample
preparation | SpringerLink». [En línea]. Disponible en:
https://link.springer.com/article/10.1007/BF00633549. [Accedido: 26-may-2019].

Cronograma de Actividades

Presupuesto

VALOR VALOR
ITEM CANTIDAD
UNITARIO TOTAL
Cepa de
Chlorella 1 $308.000 $308.000
vulgaris
Balón
2 $123.000 $246.000
volumétrico
Agitador
magnético
con 2 $385.000 $770.000
regulador de
temperatura