MECANISMOS DE RESISTENCIA: QUINOLONAS,

FLUOROQUINOLONAS, MACRÓLIDOS,
AMINOGLICÓSIDOS, TETRACICLINAS, TMP/SMX

Johanna M. Vanegas M. BSc, MSc, PhD (c)

Línea de Epidemiología Molecular Bacteriana

Escuela de Microbiología
Universidad de Antioquia
 CONTENIDO

1. Resistencia antibióticos que inhiben la síntesis de DNA:

quinolonas y fluoroquinolonas

2. Resistencia antibióticos que inhiben la síntesis de proteínas:

macrólidos, lincosamidas, estreptograminas, aminoglicósidos
tetracilinas, linezolid, y cloranfenicol

3. Resistencia antibióticos que inhiben la síntesis del ácido

fólico: TMP/SMX
2
ANTIBIÓTICOS QUE INHIBEN LA SÍNTESIS DE
DNA: QUINOLONAS Y FLUOROQUINOLONAS

3
 RESISTENCIA A QUINOLONAS

 Problemática casi desde la introducción del acido nalidíxico

 Debido a la mayor potencia de las fluoroquinolonas se

incrementó su uso, incluso en la práctica veterinaria

 Este alto nivel de empleo se tradujo en la selección y

diseminación de microorganismos resistentes a las quinolonas

 Variación de los porcentajes de resistencia: según bacteria y la

región geográfica

Biochemistry. 2014, 53: 1565-1574

 RESISTENCIA A QUINOLONAS

Mecanismos de resistencia: descritos inicialmente como

cromosómicos

Mecanismos de resistencia transferible  1998

Se han descrito una asociación entre la resistencia a

quinolonas y la resistencia a otros antibióticos

Oxacilina en S. aureus

Vancomicina en Enterococcus faecium

Betalactámicos mediada por BLEEs en Klebsiella pneumoniae

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 MECANISMOS DE RESISTENCIA

1. Modificación del blanco

Mutaciones en DNA
girasa/ Topoisomerasa IV Protección de la DNA
girasa/ Topoisomerasa IV

Mecanismos
de resistencia 2. Resistencia transferible Modificación enzimática
a quinolonas

Bombas de
expulsión

3. Disminución en la
Impermeabilidad por
concentración
reducción o
citoplasmática efectiva de
alteración de porinas
fármaco
Biochemistry. 2014, 53: 1565-1574
 1. MODIFICACIÓN DEL SITIO BLANCO

 Cortan ambas hebras de

un segmento de ADN

Antibiótico

DNA girasa y
Topoisomerasa IV
Clinical Infectious Diseases 2005; 41:S120–6
 MUTACIONES EN LA DNA GIRASA Y/O TOPOISOMERASA IV

• Algunas bacterias presentan una de las dos enzimas,

sin embargo, la mayoría presentan ambas

GyrA – GyrB  Mayor susceptibilidad de

inhibición por quinolonas en GN

ParC – ParE  Mayor susceptibilidad de

inhibición en GP

QUINOLONE RESISTANCE DETERMINING REGION

QRDR
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 MUTACIONES EN LA DNA GIRASA Y/O TOPOISOMERASA IV

Mutaciones Luego mutaciones Incremento en

iniciales: blancos adicionales en niveles de
primarios GyrA, GyrB y ParE resistencia

Una sola mutación Se requieren para R

 R de alto nivel a de alto nivel a
ácido nalidíxico fluoroquinolonas

E. coli :
Aminoácidos en los codones 67 y 106
Entre 83 y el 87 “puntos calientes”

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MUTACIONES EN E. COLI

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 MECANISMOS DE RESISTENCIA

1. Modificación del blanco

Mutaciones en DNA
girasa/ Topoisomerasa IV Protección de la DNA
girasa/ Topoisomerasa IV

Mecanismos
de resistencia 2. Resistencia transferible Modificación enzimática
a quinolonas

Bombas de
eflujo

3. Disminución en la
Impermeabilidad por
concentración
reducción o
citoplasmática efectiva de
alteración de porinas
fármaco
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2. RESISTENCIA TRANSFERIBLE A QUINOLONAS

(PMQR: Plasmid mediated

quinolone resistance)

1. Protección enzimática
2. Modificación enzimática
RESISTENCIA A QUINOLONAS MEDIADA POR PLÁSMIDOS

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 RESISTENCIA A QUINOLONAS MEDIADA POR PLÁSMIDOS

 Descrito en 1998, Alabama, E. U.

 Cepa de K. pneumoniae que podía transferir resistencia
de bajo nivel a quinolonas a una cepa de E. coli
Cepa portaba un plásmido que aumentaba las MIC a
todas las quinolonas

El plásmido no afectó las concentraciones intracelulares

de quinolonas, ni la expresión de porinas

Al secuenciar el plásmido  un gen nuevo, que llamaron

qnr, que codifica una proteína de 218 aminoácidos

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 Proteínas Qnr

Familia de los Presentes en muchos

pentapéptidos repetidos >90 miembros conocidos géneros bacterianos

 qnrA, qnrS, qnrB, qnrC, qnrD: asociados con integrones y

plásmidos
 pMG252  Amplio rango de hospedador transmisible por
conjugación a K. pneumoniae, E. coli, C. freundii, S.
typhimurium o P. aeruginosa
 Usualmente estos plásmidos también codifican BLEEs (CTX-
M-9 or SHV-7) y AmpC (FOX-5)

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 Modificación enzimática

Variante de una aminoglicósido

acetiltransferasa  Aac(6´)-lb- cr

Capacidad para acetilar la ciprofloxacina

Resistencia de alto nivel

Ampliamente diseminada entre

Enterobacterias en todo el mundo

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 MECANISMOS DE RESISTENCIA

1. Modificación del blanco

Mutaciones en DNA
girasa/ Topoisomerasa IV Protección de la DNA
girasa/ Topoisomerasa IV

Mecanismos
de resistencia 2. Resistencia transferible Modificación enzimática
a quinolonas

Bombas de
eflujo

3. Disminución en la
Impermeabilidad por
concentración
reducción o
citoplasmática efectiva de
alteración de porinas
fármaco
Biochemistry. 2014, 53: 1565-1574
 3. DISMINUCIÓN DE LA CONCENTRACIÓN
EFECTIVA DEL ANTIBIÓTICO

Antibiótico

Impermeabilidad

Expulsión activa

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 Alteración de porinas

Regulación negativa en la expresión

Alteraciones en la de porinas
membrana externa que
disminuyen la penetración
intracelular del fármaco Alteraciones en composición de
porinas o LPS

Se ha descrito una menor susceptibilidad a las

quinolonas en mutantes deficientes de LPS
Mecanismo generalmente acoplado a otros mecanismos
de resistencia E. coli  OmpF, OmpC
K. pneumoniae  OmpK35
P. aeruginosa  OmpD

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 Bombas de expulsión

Sistemas de expulsión que eliminan

activamente agentes antibacterianos
Evitan que las quinolonas alcancen
concentraciones eficaces en el citoplasma
Sistemas no específicos y dependientes de
energía
Descritas en numerosas especies

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Bombas de expulsión

Biochemistry. 2014, 53: 1565-1574

 Bombas de expulsión

AcrB de E. coli
 Acriflavina, cristal violeta,
Resistencia
bromuro de etidio, rodamina.
cruzada a una
Penicilinas, macrólidos,
Amplia variedad de
cefalosporinas, rifampicina,
especificidad sustancias
fluoroquinolonas, ácido
de sustrato estructural y
fusidico, cloranfenicol,
químicamente
tetraciclinas, novobiocina,,
distintas
oxazolidinonas
 Triton X-100, SDS
 Ácidos biliares solventes
El uso y la aparición de resistencia a las orgánicos simples
fluoroquinolonas

Incidencia de multirresistencia en patógenos importantes

como P. aeruginosa

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 Bombas de expulsión

NorA  S. aureus.

•Perteneciente a la familia MFS

•Dependiente de ATP
•Expulsa quinolonas hidrofóbicas, cloranfenicol y
otras moléculas como colorantes básicos
•Confiere resistencia de bajo nivel a flouroquinolonas

Otras: homólogas a NorA

Bmr/ Blt  Bacillus subtilis

pmrA,  S. pneumoniae

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 En resumen…

Mutaciones

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 En resumen…

Transferible:Qnr Transferible: Acetilasas

Biochemistry. 2014, 53: 1565-1574

 En resumen…

Bombas de
eflujo

Porinas

Biochemistry. 2014, 53: 1565-1574

En resumen…

Biochemistry. 2014, 53: 1565-1574

 ANTIMICROBIANOS QUE INHIBEN LA
SÍNTESIS DE PROTEÍNAS: MACRÓLIDOS,
LINCOSAMIDAS, ESTREPTOGRAMINAS,
AMINOGLICÓSIDOS, TETRACICLINAS,
CLORANFENICOL, LINEZOLID

29
 Generalidades

Transcripción Traducción
Replicación

Ribosoma

Chem. Rev. 2005. 105: 529−542

 Generalidades

50S

30S

Iniciación, elongación y terminación

Chem. Rev. 2005. 105: 529−542
 Generalidades

Chem. Rev. 2005. 105: 529−542

Panorama de la resistencia: ¿Reportada
en bacterias de baja frecuencia?
 Panorama de la resistencia: veterinaria

J. Vet. Med. B 52, 119–124 (2005)

 Panorama de la resistencia: alimentos

J. Antimicrob. Chemother, Nov. 2011, p. 5262–5266

MACRÓLIDOS, LINCOSAMIDAS Y
ESTREPTOGRAMINAS
 Mecanismos de resistencia

Modified target
drug
 Mecanismos de resistencia

1. Modificación del sitio blanco por metilación o mutaciones

que evitan la unión antibiótico-ribosoma
2. Bombas de expulsión
3. Inactivación antibiótico: enzimas

Clin Infect Dis. 2002 Feb 15;34(4):482-92

 1. Modificación del blanco:
Metilación ribosomal

• Resistencia cruzada macrólidos, linsosamidas y

estreptograminas B: fenotipo MLSB
• Metilación 23S rRNA (inducible por eritromicina o constitutiva)

- 1959: Reino Unido

Genes erm (erythromycin - 1967: USA
ribosome methylase)

Gram positivos,
espiroquetas y anaerobios

Clin Infect Dis. 2002 Feb 15;34(4):482-92

 1. Modificación del blanco:
Metilación ribosomal

• Genes erm: Cerca 40 reportados

• Plásmidos y transposones
• Cuatro tipos en bacterias patógenas

ermA Staphylococcus
ermB Streptococcus, Enterococcus
ermC Staphylococcus
ermF Bacterioides y otros anaerobios

Clin Infect Dis. 2002 Feb 15;34(4):482-92

1. Modificación del blanco:
Metilación ribosomal

Prueba D
 1. Modificación del blanco:
Metilación ribosomal

Prueba D

Eritromicina Clindamicina Prueba D Mecanismo Fenotipo

inducible
S S No aplica - No
R R No aplica erm No, ya es R
R S Positiva erm Sí
R S Negativa msrA ---
 1. Modificación del blanco: Mutaciones

• Mutaciones A2058 o A2059 rRNA: MLSB y ML,

respectivamente
• Resistencia claritromicina: M. avium y H. pylori
• Resistencia eritromicina: S. pneumoniae

A C

Clin Infect Dis. 2002 Feb 15;34(4):482-92

 2. Bombas de expulsión

• En enterobacterias: Bombas codificadas cromosoma,

resistencia intrínseca compuestos hidrofóbicos como
macrólidos
• En gram positivos: msrA, S. aureus.
• Fenotipo MSB: Macrólidos y estreptograminas
• Macrólidos: Inductores
• Clindamicina: Inductor, no sustrato
• En Streptococcus:
mefA: S. pneumoniae, S.pyogenes
Conjugación

Clin Infect Dis. 2002 Feb 15;34(4):482-92

 3. Inactivación antibiótico

• En enterobacterias: Esterasas y fosfotransferasas

(eritromicina), no importancia clínica

• En gram positivos: Nucleotidiltransferasas (lnuA y lnuB) S.

aureus y E. faecium

Resistencia lincosamidas

Clin Infect Dis. 2002 Feb 15;34(4):482-92

Resumen
AMINOGLICÓSIDOS
 Mecanismos de resistencia

• Inactivación por modificación enzimática del antibiótico:

Más frecuente

AAC ANT APH

• Acetiltransferasas • Nucleotidiltranferasas • Fosfotransferasas

Antimicrob Agents Chemother. 2000 Dec;44(12):3249-56.Dec;44(12):3249-56.

 Perfil de sensibilidad

Enferm Infecc Microbiol Clin. 2010;28(8):541–553

 ¡Importante!

Los genes que codifican para enzimas modificadoras de

aminoglucósidos pueden estar en elementos genéticos que
portan mecanismos de resistencia a otros grupos de
antibióticos como los betalactámicos
 Otros mecanismos…

• Modificación del sitio blanco:

- Mutaciones en los genes de proteínas ribosomales o de 16S ARN
(importancia clínica, estreptomicina)
- Metilación 16S rRNA: armA (enterobacterias)

• Bombas de expulsión (AdeABC, MexXY-OprM) e

impermeabilidad: Reducción intracelular de diferentes
antibióticos

Antimicrob Agents Chemother. 2000 Dec;44(12):3249-56.Dec;44(12):3249-56.

 Algo sobre diagnóstico microbiológico…

Resistencia de bajo nivel vs resistencia de alto nivel en

Enterococcus

Bajo nivel Alto nivel

Resistencia Resistencia
intrínseca adquirida

Transporte
Enzimas
deficiente del
antibiótico modificadoras

Tratamiento con
No útil el uso de
ATB de acción sobre
la pared aminoglicósidos
TETRACICLINAS
 Mecanismos de resistencia

• Bombas de expulsión:

• tetK • MexXY- • AdeABC

• tetL OprM

S. aureus P.aeruginosa A. baumannii

• Solo tetraciclina
• Integración en SCCmec (S. aureus)

Antimicrob Agents Chemother. , Dec. 2003, p. 3675–3681

 Mecanismos de resistencia

Alteración sitio blanco: Protección ribosomal. Resistencia

tetraciclina, doxiciclina, minociclina

tetM Streptococcus
tetO Campylobacter jejuni

Antimicrob Agents Chemother. , Dec. 2003, p. 3675–3681

Alta transmisión en elementos genéticos
CLORANFENICOL
 Mecanismos de resistencia

• Inactivación antibiótico: Cloranfenicol acetiltransferasa

(CAT)
• Principalmente S. aureus
• Plásmidos
• Resistencia florfenicol: aislamientos veterinario
• Otros: Bombas de expulsión (CraA en A. baumannii)

Antimicrob Agents Chemother. 2009 Sep;53(9):4013-4

OXAZOLIDINONAS: LINEZOLID
 Mecanismos de resistencia

• Resistencia rara: 1998-2000, 40000 Gram positivas, solo 8

resistentes. Resistencia por uso prolongado
• Modificación sitio blanco: Mutación 23S rRNA (G U) y
metilación ermC
• En Staphylococcus aureus:

cfr: Cfr metiltransferasa

Int J Antimicrob Agents. 2004 Feb;23(2):113-9

 Resistencia linezolid en Colombia:

Molecular Microbiology (2007) 64(6), 1506–1514

 EN RESUMEN…

ANTIBIÓTICO TIPO DE RESISTENCIA MECANISMO

Macrólidos, Modificación blanco Metilación: erm

lincosamidas y Bombas de expulsión msrA, mefA
estreptograminas Inactivación antibiótico Enzimas: Nucleotidiltrasnferasas
Aminoglicósidos Inactivación antibiótico Enzimas modificadoras: AAC, ANT,
Bombas de expulsión APH
MexXY-OprM
Tetraciclinas Bombas de expulsión tetK, tetL, MexXY-OprM
Protección ribosomal tetM, tetO
Cloranfenicol Inactivación antibiótico Cloranfenicol acetiltranferasa (CAT)
Linezolid Modificación sitio Metilación: erm(C)
blanco Mutación:23 rRNA
ANTIMICROBIANOS QUE INHIBEN LA
SÍNTESIS DE ÁCIDO FÓLICO: TMP/SMX
 Mecanismos de resistencia

Mutación

Hiperproducción

Incorporación exógena

Enzimas alternativas

65
Mecanismos mediado por plásmidos

66
Genes implicados en la resistencia

67