456 ELECTROFORESIS / Ácidos nucleicos

considerable potencial no solo en el bienestar animal y Cash P (2000) Proteómica en microbiología médica. Electroforesis 21 (6):
cuidado, pero también son de creciente importancia económica en 1187–1201.

manejo de ganado. Los proteomas de suero animal son Decker J y Reischl U (2004) Diagnóstico molecular de enfermedades

ahora se están estableciendo y se han establecido mapas de referencia de infecciosas. En: Walker J (ed.) Métodos en Medicina Molecular, 2ª ed. Nueva
Jersey: Humana Press. Desai MJ y Armstrong DW (2003) Separación, identi fi
proteínas séricas para vacas, perros, ratas y
cación y caracterización de microorganismos por electroforesis capilar. Reseñas
cerdos. Actualmente, los estudios se centran en gran medida en
de microbiología y biología molecular 67 (1): 38–51.
proceso inflamatorio y gammapatías, donde el análisis de suero puede
proporcionar información valiosa ( Figura 8).
Otros fluidos corporales (p. Ej., Orina) también están revelando nuevos Dwek MV y Rawlings SL (2002) Perspectivas actuales
hallazgos interesantes ( Figura 9) y la técnica también puede ser valiosa en en proteómica del cáncer. Biotecnología molecular 22 (2): 139-152.
el diagnóstico temprano de mastitis ( Figura 10).
Gromov PS, Ostergaard M, Gromova I y Celis JE (2002) Bases de datos
proteómicas humanas: un recurso poderoso para la genómica funcional en la
Aunque el análisis electroforético unidimensional de proteínas
salud y la enfermedad. Progreso en Biofísica y Biología Molecular 80 (1–2):
continúa produciendo información valiosa en el laboratorio clínico,
3–22. Hanash SM (2000) Aplicaciones biomédicas de la electroforesis
análisis 2D de proteínas, análisis informático de geles, procedimientos
bidimensional utilizando gradientes de pH inmovilizados: estado actual. Electroforesis
de identificación basados en espectrometría de masas, proteómica y
21 (6): 1202–1209.

formación de bases de datos internacionales, que son Jain KK (2002) Papel de la proteómica en el diagnóstico de cáncer.
fácilmente accesibles en los sitios web han abierto una nueva dimensión Tecnología en la investigación y el tratamiento del cáncer 1 (4): 1–6.
en los procedimientos de diagnóstico clínico.
Con la finalización de la humana y bacteriana Landers JP (2003) Diagnóstico molecular en microchips electroforéticos. Química

proyectos de genoma, aunque estudios basados en ácidos nucleicos, analítica 75 (12): 2919-2927. Marshall T y Williams KM (1998) Análisis clínico

seguirá teniendo un alto perfil en los estudios clínicos, de proteínas urinarias humanas utilizando métodos electroforéticos de alta
resolución. Electroforesis 19 (10): 1752-1770. Peterson JR, Okorodudu AO,
Es probable que los desarrollos futuros se centren cada vez más en los
Mohammad A y Payne DA (2003) Electroforesis capilar y sus aplicaciones en
productos genéticos y sus modificaciones postraduccionales, es decir, las
el laboratorio clínico. Clínica Chimica Acta 330 (1–2): 1–30.
proteínas.

Ver también: Electroforesis: Ácidos nucleicos. Masa

Espectrometría: Péptidos y Proteínas.
Rhighetti PG, Castagna A, Antonucci F, et al. ( 2002) El proteoma: anno Domini
2002. Medicina de laboratorio y química clínica 41 (4): 425–438. Westermeier
R (2001) Electroforesis en la práctica, 3ª ed. Weinheim: Wiley-VCH.
Otras lecturas

Al-Hashimi I, Haghighat N y Fox PC (1998) Electroforesis salival en el

diagnóstico del síndrome de Sjögren. Williams LR (2001) Tinción de ácidos nucleicos y proteínas en geles de
Cirugía Bucal, Medicina Bucal, Patología Bucal, Radiología Bucal y electroforesis. Biotecnología e histoquímica
Endodoncia 85 (5): 542–547. 76 (3): 127-132.

Ácidos nucleicos

CM Roth, Universidad de Rutgers, Piscataway, Nueva Jersey, EE. UU. secuenciación. En esta aplicación, la velocidad y precisión del análisis de

Y 2005, Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados.

ácidos nucleicos son de vital interés científico y económico, y la práctica
de la electroforesis de ácidos nucleicos ha evolucionado para reflejar
estas necesidades. En este artículo, se describen los aspectos
Introducción fisicoquímicos de la electroforesis de ácidos nucleicos y se describen las
principales técnicas utilizadas para la electroforesis de ácidos nucleicos.
La electroforesis es una tecnología esencial para la separación y
análisis de ácidos nucleicos. La electroforesis de ácidos nucleicos se
utiliza de forma rutinaria en la mesa de laboratorio para el aislamiento y
manipulación de fragmentos de ADN clonados. Además, es un
componente crítico de muchos protocolos de biología molecular que
Estructura de ácidos nucleicos y
evalúan el papel y la interacción de los ácidos nucleicos en células y
movilidad electroforética
tejidos. La electroforesis de ácidos nucleicos ha adquirido especial
importancia en la era actual del genoma. Debido a sus grupos fosfato, los ácidos nucleicos están cargados
negativamente en todos los pH excepto en el más ácido.
 ELECTROFORESIS / Ácidos nucleicos 457

condiciones. De hecho, debido a que cada base lleva un resto fosfato, la
relación carga-masa de los ácidos nucleicos es esencialmente
independiente del tamaño y la forma (por ejemplo, monocatenario frente
a bicatenario, lineal frente a plásmido). Como resultado, los ácidos
nucleicos migran fácilmente en un campo eléctrico desde los extremos
catódico a anódico (con carga negativa o positiva) del aparato. Para la
separación y análisis de ácidos nucleicos, por lo tanto, se necesita un
parámetro discriminatorio adicional. Con mayor frecuencia, esto se logra
mediante electroforesis a través de un medio de tamizado, es decir, un
gel, a través del cual las moléculas pequeñas pasarán más fácilmente y
las más grandes pasarán más lentamente, debido a los efectos
Los ácidos se pueden ajustar mediante la selección de una matriz y
composición adecuadas ( Tabla 1). Otros parámetros electroforéticos, como
la intensidad del campo aplicada y la temperatura, tienen un efecto sobre la
movilidad de los ácidos nucleicos de diferentes longitudes de cadena y sobre
la eficacia de la separación.
Detección
Los ácidos nucleicos en solución se pueden detectar y cuantificar

combinados de muestrear una fracción mayor del espacio del gel y la fácilmente sobre la base de la absorbancia ultravioleta (UV). Los ácidos

efectos de transporte (exclusión de volumen). nucleicos exhiben una fuerte absorbancia con un pico a 260 nm de una
manera que es sensible a la química y la unión. Para una cuantificación
precisa de oligonucleótidos pequeños, se puede calcular un coeficiente de
extinción dependiente de la secuencia, pero para todos los demás análisis

Para partículas esféricas pequeñas, el equilibrio de fuerzas eléctricas de laboratorio de rutina, los valores aproximados se emplean casi

y viscosas da como resultado una movilidad electroforética ( u, definida universalmente ( Tabla 2).

como la velocidad de partícula por fuerza de campo eléctrica aplicada)

dada por Para el análisis en gel de ADN de doble hebra, el bromuro de etidio
(EtBr) sigue siendo el tinte más utilizado. EtBr se intercala entre pares
tu ¼ q ½1 de bases del ADN, lo que da como resultado la producción de
6 pags R Z
fluorescencia, que puede observarse mediante una amplia iluminación

dónde q es la carga en una partícula de radio R y Z UV (máxima de excitación a 254, 302 y 366 nm) o mediante excitación

es la viscosidad del disolvente. La formación de estructuras de orden láser a 514 nm y detección a 590 nm. Los geles de agarosa pueden

superior por los ácidos nucleicos provocará una desviación considerable de verterse en presencia de EtBr o teñirse posteriormente con la solución

este comportamiento y, de hecho, se utiliza la electroforesis para determinar de tinte; Los geles de acrilamida deben teñirse después de la

la forma física del ADN. El ADN condensado (p. Ej., Superenrollado) se electroforesis ya que el etidio inhibe la polimerización de la acrilamida.

comporta más de cerca a una partícula esférica, mientras que el ADN lineal El límite de detección con EtBr es del orden de 10 ng. Debido a que

muestra una movilidad que refleja su naturaleza polimérica. Es decir, se cree EtBr cambia las propiedades físicas del ADN, más notablemente su

que el ADN se repta a través de los poros del gel de una manera retorcida rigidez, la pretinción no es apropiada para el ADN en

como una serpiente. Sin embargo, la formación de doble hebra y la

condensación de contraiones sirven para disminuir la flexibilidad del ácido
nucleico y, como resultado, el ácido nucleico que se repite se comporta más
como una varilla unida rígidamente en su transporte a través de un gel de
tamizado. Una consecuencia de este comportamiento es que para pesos
tabla 1 Rangos de separación para geles de agarosa y acrilamida
moleculares altos, la 'cola' de la cadena de ADN ya no muestrea una
distribución del espacio poroso, y la movilidad se vuelve independiente de la % Agarosex Rango % Acrilamida Rango
(KB) monómero (pb)
longitud de la cadena. Por lo tanto, la separación de muy alto ( 4 El ADN de
peso molecular de 60 kpb) requiere otras técnicas, como la electroforesis en 0,3 5-60 3,5 100–1000
gradiente de campo pulsado. 0,6 1–20 5,0 80–500
0,7 0,8-10 8.0 60–400
0,9 0,5–7 12,0 40-200
1.2 0,4–6 15.0 25-150
1,5 0,2–4 20,0 6–100
Así, bajo un campo eléctrico de aplicación constante, la movilidad 2.0 0,1-3
está determinada principalmente por el tamaño de los poros de la
matriz de gel. En este caso, el llamado gráfico de Ferguson da la
relación entre la concentración de gel y la movilidad electroforética
(efecto de tamizado). En este método, el logaritmo de la movilidad Tabla 2 Concentración de ácidos nucleicos que da una unidad de absorbancia (es decir,
electroforética se representa en función de la concentración de gel. La absorbancia ¼ 1.0)

intersección de esta gráfica se puede interpretar como relacionada con

Ácido nucleico Concentración para A 260 ¼ 1.0
la carga del soluto y la intersección con su tamaño o forma. Por el
contrario, la separación y análisis de nucleicos dsDNA 50 metro gml 1

ssDNA 33 metro gml 1

ARN 40 metro gml 1

458 ELECTROFORESIS / Ácidos nucleicos
ensayos diseñados para evaluar la forma física (por ejemplo,
superenrollamiento). Por otro lado, el desplazamiento de EtBr puede usarse
como un medio para monitorear la complejación del ADN con polímeros
catiónicos usados para la liberación de genes no virales.
La detección más sensible de ácidos nucleicos se logra mediante
radiomarcaje. El ADN monocatenario es fácilmente 5 0- final marcado con
polinucleótido quinasa T4. Especies de ARN transcritas in vitro o el ADN
generado por PCR puede marcarse radiactivamente mediante la inclusión
de una fracción de dNTP isotópicos en las reacciones de la polimerasa. Las
sondas que se van a utilizar para la transferencia Northern o Southern
pueden marcarse utilizando una variedad de métodos; los más comunes
incluyen cebado aleatorio a partir de una plantilla de ADN, extensión de
cebador y marcaje final utilizando el fragmento de Klenow Escherichia coli ADN enfrían en condiciones ambientales a temperatura ambiente. La agarosa
polimerasa I.
Con las mejoras en los tintes químicos y la instrumentación de
escaneo de fluorescencia, la electroforesis de ADN se realiza cada vez
más utilizando tintes fluorescentes como medio de detección. Los
oligonucleótidos monocatenarios se sintetizan fácilmente con tintes fl
uorescentes en el 5 0- o 3 0- finales, aunque este último reduce
significativamente el rendimiento de la síntesis. Más comúnmente, se
utilizan derivados de fl uoresceína como FAM (carboxifluoresceína),
pero también se han incorporado muchos otros tintes. El ADN
plasmídico se puede marcar usando reactivos comerciales que colocan
grupos amina o carboxilo en residuos de guanina, que luego se usan
para unir Cy3, rodamina u otros colorantes. Como alternativa a EtBr,
SYBR Gold y SYBR Green se unen eficazmente al ADN bicatenario y,
en menor medida, al ADN monocatenario. También existen colorantes
específicos para oligonucleótidos monocatenarios (p. Ej., OliGreen),
pero se han probado de forma menos exhaustiva para la detección de
gel.
Electroforesis en gel de losa
La electroforesis se realiza más comúnmente en un formato de gel de
placa, que se puede utilizar en la configuración vertical u horizontal.
Los geles en placa son relativamente fáciles de formar y proporcionan
un medio mecánicamente estable con un área de superficie extendida
para reducir la convección térmica (aunque son muy inferiores a los
capilares en este aspecto; consulte la siguiente sección). Es posible
escindir bandas separadas de un gel y, por lo tanto, realizar
separaciones por lotes mediante electroforesis.
Materiales
Los dos materiales que se utilizan con mayor frecuencia para la electroforesis
en gel de placa de ADN son la poliacrilamida y la agarosa. Los geles de
poliacrilamida se forman con poros
Tamaños que dependen del porcentaje de acrilamida utilizado, así
como de la proporción de reticulante, N, N 0-
metilen bisacrilamida. Las concentraciones de monómero de acrilamida
oscilan entre el 3,5% y el 20%. La reacción de polimerización se lleva a
cabo generalmente directamente para formar una losa en un molde.
Sambrook proporciona detalles y protocolos específicos en el volumen. Se
logra una resolución excelente (hasta una base única) de los ácidos
nucleicos utilizando geles de poliacrilamida y, como resultado, se utilizan
para la secuenciación del ADN.
La agarosa es un polímero de RE- galactosa y 3,6-anhidrogalactosa y se
utiliza en concentraciones que oscilan entre el 0,3% y el 2,0% ( Tabla 1). El
gel de agarosa se forma cuando los constituyentes se calientan y luego se
se usa para separaciones de peso molecular más alto debido a los
tamaños de poro más grandes y la capacidad de mantener la estabilidad
mecánica en porcentajes de peso bajos. Una ventaja adicional de la
agarosa es que se puede secar fácilmente hasta obtener una película fina
y transparente, lo que la hace muy adecuada para la autorradiografía.
Operaciones y aplicaciones
Los tampones utilizados para la electroforesis se pueden clasificar como no
desnaturalizantes y desnaturalizantes. Debido a que el ADN de doble hebra
está dominado por una estructura secundaria más que por una estructura
de orden superior en muchas condiciones, la electroforesis no
desnaturalizante es suficiente para muchas aplicaciones. A veces, se
introduce un desnaturalizante como la urea cuando es fundamental para
minimizar los efectos de orden superior. Esto es particularmente común en
el análisis de oligonucleótidos por electroforesis en gel de poliacrilamida
(PAGE) para aplicaciones tales como secuenciación. La resolución de base
única se obtiene para secuenciar geles, que se ejecutan verticalmente.
Para la separación de moléculas de ADN muy grandes ( 4 20 kb), se emplea
electroforesis en gel de campo pulsado (PFGE). En PFGE, se utilizan dos
juegos de electrodos para generar corriente alternativamente en direcciones
transversales. Cuando el campo eléctrico cambia de dirección, las moléculas
de ADN deben reorientarse en el gel para comenzar a moverse en una nueva
dirección. La capacidad del ADN para reorientarse depende de la longitud, lo
que constituye la base de la separación de PFGE. Como moléculas de ADN
de hasta 10 Mb pueden resolverse mediante PFGE, esta técnica está
encontrando aplicabilidad para el mapeo genético-cromosómico en eucariotas
inferiores y para el mapeo de restricción de largo alcance en eucariotas
superiores, cuyos cromosomas completos son demasiado grandes para una
separación uniforme de PFGE.
La separación de ácidos nucleicos se utiliza de forma rutinaria en la mesa
de laboratorio, por ejemplo, para aislar el ADN clonado, para purificar in vitro ARN
transcrito y para recuperar transcripciones expresadas diferencialmente en
enfermedades u otras condiciones de interés. La identi fi cación de nucleic

ácidos de células y tejidos, utilizando técnicas como Northern y
Southern blot y la reacción en cadena de la polimerasa con
transcriptasa inversa (RT-PCR), es críticamente dependiente de la
electroforesis. En las técnicas de transferencia Northern y Southern,
que se utilizan para el análisis de ARN y ADN, respectivamente, los
ácidos nucleicos se someten a electroforesis dos veces. Primero, se
separan mediante electroforesis en gel de agarosa. Luego, se
transfieren a membranas de nitrocelulosa o nailon por electroforesis en
la dirección perpendicular al gel. La detección de moléculas de ADN o
ARN específicas en la transferencia se realiza usando una sonda de
ADN complementaria que se marca radiactivamente o con
fluorescencia como se describió anteriormente. El tamaño relativo,
determinado por la posición en el gel en relación con los marcadores
de peso molecular,
Los ensayos de cambio de movilidad electroforética se utilizan para
caracterizar la unión de ácidos nucleicos a otras moléculas. La
aplicación tradicional es para las interacciones proteína-ADN, en las
que las proteínas se separan en un gel PAGE y se sondean con un
oligonucleótido de doble hebra marcado con una secuencia que
corresponde al consenso para el sitio de unión del ADN de interés.
Esta metodología se puede aplicar en áreas adicionales, sobre todo en
la caracterización de interacciones polímero-ADN en entregas de
oligonucleótidos y genes no virales. Dependiendo de las características
(p. Ej., Química, peso molecular, grado de ramificación) de un polímero
de administración particular, la relación de carga (polímero
catiónico-ADN aniónico) a la que se produce la formación del complejo
puede variar ampliamente.
Electroforesis capilar y capilar en gel
El advenimiento de la electroforesis capilar de alto rendimiento (HPCE)
que funciona con intensidades de campo eléctrico de hasta 1000-1500
Vcm. 1 ha permitido que la técnica se utilice para el análisis rápido
multicomponente de oligonucleótidos monocatenarios y fragmentos de
ADN bicatenarios. El uso de capilares permite disipar el calor generado
por tales intensidades de campo y permite el uso de volúmenes de
muestra inferiores a un microlitro. El método es lo suficientemente
sensible como para detectar diferencias en la estructura secundaria de
moléculas de ácido nucleico que son del mismo tamaño, tiene
capacidades de micropreparación y ofrece la capacidad de detectar
muestras en línea. La alta eficiencia y velocidad de este enfoque lo
hace útil como medio para evaluar la pureza del ácido nucleico.
ELECTROFORESIS / Ácidos nucleicos 459
moléculas producidas por un sintetizador de ADN y para productos de PCR. El
método también está experimentando una amplia aplicación en la secuenciación
de ADN.
Materiales y equipamiento
En HPCE, las muestras se pueden detectar en columna (en línea). La eliminación
de la capa de poliimida del capilar de sílice fundida en una pequeña sección
permite la detección de rayos UV o fluorescentes. Se utiliza una fuente de
alimentación para aplicar una intensidad de campo de 0 a 30 kV. Las inyecciones
se pueden realizar mediante modos de presión o electrocinéticos que permiten la
aplicación de sistemas de inyección automatizados.
En la electroforesis en gel capilar de poliacrilamida, el gel
generalmente se polimeriza en el lugar en el tubo capilar. La
poliacrilamida se sintetiza completamente a partir de monómeros, con
o sin reticulación, según la aplicación. Estas columnas de gel se
emplean en la separación por tamaños de polímeros biológicamente
importantes como ADN o ARN. La alta eficiencia y velocidad de este
enfoque lo hace útil como medio para evaluar la pureza de las
moléculas de ácido nucleico producidas por un sintetizador de ADN,
para productos de PCR y para secuenciación de ADN.
Operaciones y aplicaciones
En las separaciones de tamaño de oligodesoxirribonucleótidos y
oligoribonucleótidos por electroforesis en gel capilar para la
determinación de la longitud de la cadena, se deben usar agentes
desnaturalizantes en el sistema tampón para evitar interacciones intra e
intercadena y por lo tanto la formación de estructuras secundarias. En
PÁGINA, 7-9mol l 1 se utiliza urea o formamida al 30-70% como agente
desnaturalizante. La secuencia primaria de los oligómeros puede tener
un efecto significativo sobre la movilidad electroforética. Al cambiar el
pH del tampón de gel, se puede alterar el poder de separación del
sistema.
Los agentes complejantes, cargados o descargados, se pueden
agregar simplemente al sistema de gel-tampón. La complejación puede
acelerar o ralentizar la velocidad de migración del soluto. En la
separación de fragmentos de ADN de doble hebra, se puede usar un
aditivo intercalador como EtBr como agente complejante para mejorar
el poder de separación del método. EtBr se carga positivamente al pH
del tampón de funcionamiento; por tanto, disminuye la carga efectiva
de la molécula de ADN. Como resultado, el complejo ADN-EtBr migra
más lentamente bajo el mismo campo eléctrico aplicado, aumentando
de esta manera la ventana de tiempo de separación y mejorando la
eficiencia de la separación.
La electroforesis capilar (CE) es ahora la técnica de elección para el
análisis de ácidos nucleicos cuando el volumen de muestra pequeño y la
alta resolución son consideraciones importantes. Actualmente se realizan
esfuerzos de secuenciación a gran escala utilizando electroforesis en
matrices
460 ELECTROFORESIS / Proteínas
de capilares. Además, la CE se está aplicando a Otras lecturas
detección de mutaciones genéticas a través de didesoxi
huellas dactilares y formación de aductos de ADN. por
Se utilizan separaciones eficientes de ADN en CE, soluciones lineales de
poliacrilamida de baja viscosidad y superficies capilares revestidas. Sin
embargo, estos no son ideales y
la adaptación de las soluciones de polímeros a las necesidades de raciones electrocinéticas de Grodzinsky AJ y Yarmush ML (1993) es un área activa
de investigación. En el futuro,
las notables mejoras en la microtecnología prometen dar lugar a
matrices de secuenciación microfabricadas, la
prueba de principio para el cual ya se ha establecido- Hu S y Dovichi NJ (2002) Electroforesis capilar para
Lished. Este enfoque se puede integrar fácilmente con micro fl uidos para
desarrollar dispositivos de "laboratorio en un chip". En-
Los instrumentos como el Agilent Bioanalyzer ya son Righetti PG, Gel fi C y D'Acunto MR (2002) Recientes capaces de realizar análisis rápidos
de control de calidad.
en chip con 1 metro lo menos de muestra.
Ver también: Electroforesis capilar: Visión de conjunto. Electroforesis: Aplicaciones
clínicas.
Proteinas
V Kašička, Academia Checa de Ciencias, Praga, República Checa
Y 2005, Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados.
Introducción
Las proteínas son, junto con los ácidos nucleicos, las biomoléculas más
importantes. Actuando como enzimas, sustratos e inhibidores
enzimáticos, hormonas, receptores, unidades estructurales, antígenos,
anticuerpos, fármacos y toxinas, desempeñan un papel de vital
importancia en todos los organismos vivos. En la era actual de la
proteómica, el análisis integral del proteoma, es decir, el análisis del
conjunto de todas las proteínas codificadas por el genoma de un
organismo determinado y expresadas en células, tejidos u órganos en un
momento y condiciones particulares, que hoy en día representa el
enfoque principal para una comprensión completa de los sistemas
biológicos y el descubrimiento de nuevos fármacos, la importancia de las
proteínas es cada vez mayor.
La gran cantidad de variaciones de secuencias de aminoácidos en
moléculas de proteínas y la variedad de grupos protésicos adheridos
dan como resultado una extraordinaria diversidad de proteínas que
difieren en carga eléctrica, tamaño, forma, capacidades de unión
específicas y, en consecuencia, en movilidades electroforéticas, lo que
permite su separación utilizando diferentes electroforesis
Blackburn GM y Gait MJ (1996) Ácidos nucleicos en química y biología. Oxford:
Prensa de la Universidad de Oxford. Cantor CR y Schimmel PR (1980) Química
biofísica. El comportamiento de las macromoléculas biológicas. San Francisco:
WH Freeman and Company.
separaciones. En: G. Stephanopoulos (ed.) Biotecnología. Volumen 3:
Bioprocesamiento, págs. 680–692. Weinheim: VCH Verlagsgesellschaft.
el análisis de biopolímeros. Química analítica
74 (12): 2833–2850.
Avances en el análisis de ADN por electroforesis capilar.
Electroforesis 23 (10): 1361-1374.
Sambrook J y Russell DW (2001) Clonación molecular: un manual de
laboratorio. Cold Spring Harbor, Nueva York: Cold Spring Harbor Laboratory
Press.
métodos:
1. electroforesis de zona (ZE) e isotacoforesis (ITP) en medios de
solución libre, basados en diferentes proporciones de proteínas de
carga a tamaño;
2. ZE en medios de tamizado (geles y redes de polímeros entrelazados):
basado en el retardo de la electromigración de proteínas por la matriz
del medio, dependiente del tamaño;
3. Enfoque isoeléctrico (IEF): basado en diferentes puntos isoeléctricos
de proteínas; y
4. Electroforesis de (bio) afinidad (BAE) - basada en in fl uir en la
electromigración de proteínas a través de interacciones específicas
con otras (bio) moléculas en los medios de separación.
Todos estos modos de separación se pueden realizar en
diferentes formatos instrumentales. Tiselius realizó las primeras
separaciones electroforéticas de proteínas en una solución libre en una
macrocubeta de tubo en U, lo que permitió la detección del índice de
refracción de los límites de las zonas de proteínas. Pronto se descubrió
que la separación sería más eficaz si se realizara en un medio
estabilizador anticonvectivo; así se empezó a realizar la electroforesis
en diferentes soportes (papel, membrana de acetilcelulosa) o en medio
gel (almidón, agar, agarosa, poliacrilamida (PAA)). En las últimas dos
décadas la electroforesis ha vuelto a la solución libre, estabilizada por
el efecto capilar anticonvectivo del microbore (diámetro interno (id) o 100
metro metro)