Degradación en los lisosomas

(Pollard T., Earnshaw W., Lippincott-Schwartz J., Johnson G., 2017. Cell Biology, Third edition. Elsevier, Inc.)

Los lisosomas, los principales orgánulos digestivos, contienen por lo menos 60 enzimas hidrolíticas distintas,
incluyendo proteasas, peptidasas, fosfatasas, lipasas, fosfolipasas, glicosidasas, sulfatasas y nucleasas. Las
hidrolasas lisosómicas son marcadas en el aparato Golgi con grupos de manosa-6-fosfato en sus
oligosacáridos ligados al extremo N. Los receptores de manosa-6-fosfato de la red trans-Golgi desvían
entonces las hidrolasas marcadas a los endosomas y lisosomas. La mayoría de las hidrolasas lisosomales se
sintetizan como precursores inactivos y se activan mediante proteólisis al llegar a los lisosomas. El pH bajo
de los lisosomas, mantenido por la bomba de protones v-ATPase (ver Fig. 14.6), es esencial para una
degradación eficiente.

FIGURA 14.6 ESTRUCTURA DE LA TRIFOSFATASA DE ADENOSINA TIPO V DE LEVADURA

La mayoría de las enzimas lisosómicas tienen una actividad hidrolítica máxima con un pH de 4 a 5 en lugar
de un pH citoplasmático de 6,5 a 7,0. En estas condiciones, algunas de las hidrolasas llevan una carga
positiva y se adhieren a las bicapas lipídicas de las membranas lisosomales. Esto los hace más resistentes
que la mayoría de las macromoléculas no lisosomales al ambiente hostil. Las hidrolasas lisosómicas
degradan las proteínas, lípidos y ácidos nucleicos a aminoácidos, lípidos, azúcares y nucleótidos que son
transportados a través de la membrana lisosomal hasta el citoplasma, donde son reutilizados para sintetizar
nuevas macromoléculas.
Los lisosomas degradan los sustratos que se originan tanto en el exterior como en el interior de la célula. Los
sustratos extracelulares introducidos en la célula por endocitosis se trasladan a los lisosomas a través de la
vía endocítica. Los lisosomas también degradan los constituyentes celulares, lo que representa entre el 50%
y el 70% del volumen de recambio de proteínas celulares. Los sustratos citoplasmáticos se transportan a los
lisosomas mediante autofagosomas específicos y por captación directa del citoplasma en un proceso
denominado autofagia. En ciertas líneas celulares hematopoyéticas, los lisosomas también pueden actuar
como organelas secretoras.
El rol esencial de los lisosomas como sitio primario para la degradación constitutiva es evidenciado por las
más de 50 enfermedades humanas distintas de almacenamiento lisosómico (Apéndice 23.1). Los pacientes
con estas enfermedades carecen de la función de uno o más hidrolasas lisosómicas, proteínas de membrana
u otros factores involucrados en la función lisosómica. En consecuencia, el material no digerido se acumula
en los lisosomas (Fig. 23,4). Esto interrumpe la homeostasis y puede matar a la célula. Las manifestaciones
de las enfermedades de almacenamiento lisosomal son extremadamente complejas, y aunque
aproximadamente dos tercios de los pacientes sufren de una serie de síntomas neurológicos, cualquier
sistema orgánico puede verse afectado por estas enfermedades.
FIGURA 23.4 MICROGRAFÍA ELECTRÓNICA DE LOS LISOSOMAS ABNORMALES EN LAS NEURONAS DE UN PACIENTE CON
GANGLIOSIDOSIS GM1. Lisosomas similares, llamados cuerpos citoplasmáticos membranosos, se acumulan en las neuronas de los
pacientes con gangliosidosis GM2. (Enfermedad de Tay-Sachs).

El suministro de lisosomas a través de la vía endocítica

La degradación lisosomal de las proteínas de la membrana plasmática internalizadas por endocitosis
desempeña un papel importante en la remodelación de la membrana plasmática en respuesta a diversos
estímulos. Por ejemplo, la vida media del receptor para el factor de crecimiento epidérmico (EGF) es
normalmente de aproximadamente 10 horas. Sin embargo, cuando el EGF circulante se une, el receptor
activado es internalizado y degradado más eficientemente en lisosomas con un tiempo de vida media inferior
a 1 hora. Esto subregula la respuesta biológica (Fig. 23.5; véase también la Fig. 27,6).
La degradación de los lípidos y proteínas de membrana en los lisosomas plantea un problema topológico, ya
que la fusión de los lisosomas con otros compartimentos de membrana simplemente fusionaría las dos
membranas. Este problema se resuelve mediante la segregación de los componentes a degradar en
regiones de membrana que se convierten en endosomas, formando las vesículas o túbulos intraluminales de
los cuerpos multivesiculares (ver Fig. 22.13). La fusión de un cuerpo multivesicular con un lisosoma
suministra las vesículas intraluminales al lumen del lisosoma para su digestión (figura 23,5).
Los cuerpos multivesiculares se forman mediante un proceso de clasificación en endosomas. Las proteínas
destinadas a la degradación se marcan con moléculas de ubiquitina única, un proceso distinto de la reacción
de poliubiquitinación requerida para dirigir a los proteasomas. Estas proteínas no-ubiquitinadas se juntan en
endosomas mediante proteínas ubiquitinizantes, que se localizan mediante la interacción con fosfatidilinositol
3-fosfato (PI3-P) formado por PI3-quinasa (ver Fig. 26.7). Una secuencia de complejos ESCRT multiproteínas
(complejo endosómico requerido para el transporte [Fig. 22.13]) concentra aún más las proteínas
monoubiquitinadas en las regiones membranas que se adhieren al interior de la vesícula. Los complejos de
ESCRT se unen inicialmente a la monoubiquitina, pero posteriormente reclutan enzimas que eliminan y
reciclan la ubiquitina. La constricción de los cuellos de las yemas impulsadas por el ensamblaje de filamentos
helicoidales del complejo ESCRT-III libera las vesículas intraluminales en el interior del endosoma, creando
un cuerpo multivesicular. Curiosamente, el brote de un número de virus, incluyendo el Ébola y el VIH-1, el
virus que causa el SIDA, se asemeja al proceso de formación del cuerpo multivesicular. De hecho, el VIH
secuestra dos de los complejos de ESCRT para este propósito.
FIGURA 22.13 CLASIFICACIÓN DE PROTEÍNAS EN CUERPOS MULTIVESICULARES. A, los MVBs acumulan pequeñas vesículas y
túbulos dirigidos a la degradación lisosómica por invaginación de la membrana limitante. La formación y clasificación de MVB requiere
interacciones entre varias proteínas. Las interacciones con Vps/Hrs clasifican los receptores ubiquitinados que se clasifican en MVBs. A
continuación, el receptor ubiquitinizado es trasladado a ESCRT-I mediante una interacción entre Hrs y la subunidad Vps23 de ESCRT-I.
El receptor se reenvía entonces a ESCRT-II y luego a ESCRT-III. La invaginación de una vesícula intraluminal que contiene el receptor
es mediada a través de la polimerización de los complejos ESCRT-III, que son proteínas pequeñas y altamente cargadas en forma de
espiral. Un AAA ATPase, Vps4, desmonta las subunidades ESCRT multiméricas, permitiendo su reutilización.

FIGURA 23.5 REGULACIÓN DEL RECEPTOR. A, Para limitar el curso temporal de la estimulación del factor de crecimiento epidérmico
(EGF), los receptores EGF activados son internalizados y entregados a los endosomas y secuestrados con otras proteínas de la
membrana para ser destruidos dentro de vesículas intraluminales que se acumulan para formar cuerpos multivesiculares. Las proteínas
destinadas a la internalización y destrucción están marcadas con moléculas de ubiquitina única. La clasificación de las proteínas
ubiquitinizadas y la invaginación de la membrana endosómica tardía son impulsadas por los tres complejos ESCRT (complejos de
clasificación endosomal requeridos para el transporte). Las ubiquitinas son recicladas antes de su brotación en el interior del cuerpo
multivesicular después de su fusión con lisosomas, proteasas lisosómicas y lipasas aseguran que tanto los dominios extracelulares
como citoplasmáticos del receptor EGF se degraden junto con las vesículas intraluminales. Las proteínas citosólicas también se
incorporan en las vesículas internas de los endosomas tardíos multivesiculares y se degradan en un proceso constitutivo denominado
microautofagia. B. Micrografía electrónica del receptor EGF etiquetados con anticuerpos marcados con oro en endosomas multivesicular
fusionándose con un lisosoma.

Autofagia
La macroautofagia, la microautofagia y la autofagia mediada por chaperona son procesos que conducen a la
descomposición de los componentes citoplasmáticos dentro de los lisosomas.
La autofagia evolucionó primero como una defensa de los organismos unicelulares contra el hambre, pero
ahora tiene funciones clave en la homeostasis celular.
La macroautofagia (generalmente llamada autofagia) involucra el envolvimiento de grandes regiones de
citoplasma. Una señal de iniciación conduce a la formación de una membrana especializada en asociación
con una carga específica. Esta membrana se expande, se riza y se sella, encerrando la carga y formando un
autofagosoma de doble capa, que luego se fusiona con un lisosoma, dando lugar a la degradación y al
reciclaje final de todos los contenidos internos (Fig. 23.6). La carga puede incluir gránulos de glucógeno,
ribosomas e incluso organelas como mitocondrias y peroxisomas.

FIGURA 23.6 MICROGRAFÍA ELECTRÓNICA DE UN AUTÓFAGOSOMA.

Del hígado de rata desnutrida se desprende un autofagosoma que contiene una mitocondria en el proceso de fusión directa con un
lisosoma secundario.

Las pruebas genéticas en levaduras en brotación han identificado 36 genes llamados Atg requeridos para la
formación y desarrollo de autofagosomas. Aunque aún se están determinando los detalles, parece que el
proceso puede iniciarse en más de un sitio en el citoplasma, incluyendo los sitios de salida de ER, ER,
mitocondria o trans-golgi. Allí, numerosas vesículas pequeñas que contienen la proteína de membrana Atg9,
interactúan con el complejo de andamios multiproteínas Atg1/ULK para fusionarse, formando una lámina de
membrana aplanada. Esta membrana se riza para formar una estructura parecida a una copa, el fagóforo,
que crece y finalmente se sella para formar un autofagosoma de doble membrana (Fig. 23.7).
Dos sistemas similares a la ubiquitina reclutan componentes para el fagóforo en crecimiento. Uno conjuga
Atg8 con fosfatidiletanolamina,
anclándolo a la superficie de la membrana, donde recluta otras vesículas de membrana al fagóforo. El otro
forma un conjugado de dos proteínas Atg que reclutan otros componentes de la vía al fagóforo. Ambas
reacciones de conjugación utilizan una cadena de enzimas análogas a las que se asocian con la ubiquitina a
sus proteínas diana (vea más adelante).
La fusión de una vacuola autofágica naciente con endosomas y lisosomas tardíos involucra una proteína
SNARE (soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor [NSF] attachment protein receptor) (ver la Fig. 21.15) y
forma un autolisosoma con hidrolasas ácidas en el lumen. Estos degradan el contenido, incluyendo la
membrana internalizada, liberando aminoácidos, lípidos, azúcares y nucleótidos de nuevo al citoplasma (Fig.
23.7). La etapa final de un autolisosoma es un cuerpo residual con un núcleo denso de material no
degradado. El proceso de formación y degradación de vacuolas autofágicas en el hígado requiere menos de
15 minutos.

FIGURA 23.7 LAS CUATRO ETAPAS DE LA AUTOFAGIA. A, Se forma una membrana fagofórica que envuelve una región de
citoplasma que contiene proteínas diana y orgánulos. B, la fusión de membrana resulta en la formación de un autofagosoma naciente. C,
El autofagosoma naciente se fusiona con un lisosoma primario o secundario, el cual suministra enzimas hidrolíticas que degradan el
contenido del autofagosoma. D. Materiales no digeridos que permanecen en los cuerpos residuales

La macroautofagia está regulada por mTor, que fosforila tanto el regulador transcripcional maestro, TFEB,
como los componentes clave de Atg. Las señales intracelulares que desencadenan la macroautofagia están
ligadas a los niveles intracelulares de determinados aminoácidos. Los aminoácidos y algunas hormonas
peptídicas circulantes son potentes inhibidores de la autofagia, promoviendo tanto el secuestro citoplasmático
de TFEB como la fosforilación (y la inactivación) de Atg1. La inanición aumenta los niveles circulantes de la
hormona glucagón, que libera TFEB y también conduce a la defosforilación de Atg1 y estimula la autofagia en
las células hepáticas. La alimentación produce la reacción opuesta debido a la acción de la insulina (ver Fig.
27.7), y en última instancia reduce la autofagia.
La levadura en ciernes utiliza la autofagia como vía de supervivencia celular durante el hambre, pero la
autofagia puede matar algunas células. Por ejemplo, la autofagia puede llevar a la muerte cuando una célula
recibe un insulto letal en condiciones en las que las vías apoptóticas (ver Capítulo 46) no son funcionales.
La autofagia también ha estado implicada en los programas de desarrollo de una serie de organismos
superiores y en la destrucción de agregados proteicos intracelulares. Los agregados proteínicos y los
orgánulos dañados, como las mitocondrias, son marcados con ubiquitina y reconocidos por uno de los dos
receptores de la autofagia que unen las vesículas que contienen ubiquitina y Atg8. Esto produce una
envoltura por crecimiento membranas fagóforas, y la liberación hacia los autolisosomas a través de la
autofagia.
La microautofagia es un subproducto de la formación del cuerpo multivesicular (Fig. 23.5; véase también la
Fig. 22.13). Se capturan pequeños volúmenes de citoplasma en las vesículas y túbulos intraluminales que
invaginan dentro de las membranas endosomales o lisosómicas. Los componentes citoplasmáticos son
degradados a medida que las vesículas que los rodean son consumidas.
No todas las proteínas de las vesículas intraluminales se eligen al azar; algunas proteínas citosólicas se
seleccionan, empaquetan y suministran a los lisosomas por esta vía.
Cuando está hambriento de glucosa, Saccharomyces cerevisiae expresa varias enzimas citoplasmáticas y
transportadores de membranas que se requieren para procesar azúcares más complejos.
Cuando la glucosa está disponible, la levadura cambia las vías metabólicas y degrada las enzimas que ya no
necesita. Los transportadores en la membrana plasmática son internalizados y entregados a la vacuola (el
equivalente de lisosoma de levadura) a través de la formación de cuerpos multivesiculares y microautofagia.
Las enzimas citoplasmáticas innecesarias son empaquetadas selectivamente en pequeñas vesículas que
entregan su contenido a la vacuola por fusión.
La autofagia mediada por chaperonas (CMA) es un mecanismo de control de calidad para eliminar las
proteínas citoplasmáticas solubles que se doblan o ensamblan incorrectamente. El proceso selecciona para
su degradación el 20% a 30% de las proteínas citoplasmáticas con la secuencia lineal objetivo KFERQ.
El acompañante molecular Hsc70 reconoce KFERQ cuando la proteína se despliega o -si la proteína es parte
de un complejo- no está asociada con sus socios normales.
Hsc70 une y escolta la proteína a los lisosomas donde una proteína de membrana integral la transfiere a
través de la membrana ayudada por un segundo chaperón que funciona dentro del lisosoma. La inanición
prolongada también activa el CMA, aparentemente para suministrar a las células aminoácidos para la síntesis
de proteínas esenciales. Tanto en la enfermedad de Parkinson como en la de Alzheimer, las neuronas
acumulan proteínas con secuencias KFERQ, por lo que los defectos en la AMC pueden contribuir a estas
enfermedades neurodegenerativas. La CMA es incapaz de combatir esas enfermedades una vez que
comienzan, ya que el proceso funciona sólo con proteínas solubles y no con proteínas en complejos o
agregados citoplasmáticos.