Facultad de Ciencias Naturales y

Ambientales
AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE LA MICROALGA
Scenedesmus sp DE LA LAGUNA DE LIMONCOCHA PARA
APLICACIÓN EN LA INDUSTRIA ALIMENTARIA

Autora: Laura Fernández Almache

Director: Pablo Castillejo
Revisores: Emma Carrillo, Jefferson Rubio

Quito, abril 2018

INTRODUCCIÓN

• Autótrofos
• Macromoléculas • Unicelulares
• Aminoácidos esenciales
• Fotosíntesis
• SCP
oxigénica

PROTEINAS LAS
VEGETALES MICROAGAS

PROCESO Scenedesmus
PRODUCCION
MICROALGAS sp
• Cultivo de
microalgas • Chlorophyceae
• Parámetros físico- • Hileras d 4 ó 16
químicos células
• Producción • Obicuas,no
Laboratorio móviles
OBJETIVOS

Objetivo General:
Aislar de una cepa pura de la especie Scenedesmus sp de un consorcio procedente de
la Laguna de Limoncocha para su posterior cuantificación de contenido proteico y su
aplicación en la industria alimentaria

Objetivos específicos:
• Identificar por observación al microscopio óptico y el uso de claves dicotómicas la
especie de Scenedesmus sp.
• Cultivar en laboratorio Scenedesmus sp en medio de cultivo Bristol y BG11
• Determinar la cinética de crecimiento de Scenedesmus sp por conteo celular y
densidad óptica.
• Obtener biomasa y determinar la productividad de los medios de cultivos Bristol y
BG11
• Determinar contenido proteico de Scenedesmus sp
MATERIALES Y MÉTODOS
Área de estudio
El consorcio de microalgas provienen
de la laguna de Limoncocha, que se
encuentra ubicada en la Reserva
Biológica Limoncocha del cantón
Shushufindi de la provincia de
Sucumbíos, en la región amazónica
nortoriental del Ecuador, con
coordenadas geográficas:
Latitud: -0.466667
Longitud: -76.4667
Altitud: 220 msnm
Temperatura anual: 24.9 °C
AISLAMIENTO
ENRIQUECIMIENTO
1mL en 100mL, 20°C, 12:12, 10 días

DILUCIONES SERIADAS
1mL cultivo en 9mL agua estéril, siembra
en medio sólido, 10 días, 20°C, 12:12

CAPILARIDAD
Tomar una colonia y sembrar en medio
sólido.

ADHESION A VIDRIO CIBREOBJETOS

PROPAGACION
MEDIOS DE CULTIVO ACONDICIONAMIENTO CONTROL

• Bristol • Temperatura • Contaje celular,

• BG11 • Fotoperiodos cámara Neubauer
• Agitación • Densidad óptica,
• Inóculo inicial 150ooo espectrofotómetro
cel/mL 675nm

Diseño
Experimental
Ax1 Ax2 Ax3
A
Ay1 Ay2 Ay3
Bx1 Bx2 Bx3
B
By1 By2 By3
OBTENCIO DE BIOMASA

CENTRIFUGADO LISIS CELULAR SECADO

2000 rpm por 10 Ondas ultrasónicas, Estufa 3 horas,
minutos 60 seg 2 periodos 105°C
 CUANTIFICACION DEL CONTENIDO PROTEICO

MÉTODO
Absorbancia BSA mg/mL BIURET
0,3000
y = 0,1168x + 0,0062
0,2500 R² = 0,9965 ACONDICIONAMIENTO
25mg en 1mL buffer,
0,2000 centrifugar, reposar 60min

0,1500

0,1000 MEDICION
Amplitud de
0,0500 onda 540 nm

0,0000
0 0,5 1 1,5 2 2,5
RESULTADOS
IDENTIFICACION

Según las micrografías obtenidas de las

placas 105 ,106 y las claves dicotómicas
(Wehr, Sheath, & Kociolek, 2015), se
puede identificar que la especie
predominante es perteneciente al género 16 µm
Scenedesmus, de la división Chlorophyta.
En la Figura se observa colonias
formadas por grupos de 4 células, con
una organización en zigzag, cuerpo celular
alargado con pared celular lisa,
presentando las células externas una
curvatura hacia dentro, y células esféricas
de 4µm de diámetro, agrupas en cenobios
de 2 a 4 cenobios organizados en línea o
en forma alterna.
 PROPAGACION
Curvas de crecimiento de Scenedesmus sp en medio de cultivo Bristol y BG11
determinadas por contaje celular y densidad óptica
Contaje Medio Cultivo Bristol Absorbancia Medio Cultivo Bristol
5000000,00 0,4400
Fase adap: 170000cel/mL 0,4200
4000000,00 0,4000
Fase exponencial: 700000cel/mL

Absorbancia
células/mL

0,3800
3000000,00
0,3600
2000000,00 0,3400
0,3200
1000000,00 0,3000
0,2800
0,00
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Días de cultivo
Días cultivo

Contaje Medio Cultivo BG-11 Absorbancia Medio Cultivo BG-11

2000000,00 0,3800

Fase adap: 50000cel/mL 0,3600

1500000,00
Fase exponencial: 300000cel/mL
células/mL

Absorbancia
0,3400
1000000,00
0,3200
500000,00 0,3000

0,00 0,2800
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 0,2600
Días cultivo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Días cultivo
 Comparativo de crecimiento celular Bristol vs BG11

BRISTOL N= 𝑁𝑜 ∗ (2)𝑛 BG11

NO 108833 NO 113000
N 4202333 N 1813166
n 5,22 n 2,04

Medio Cultivo Bristol vs BG-11

5000000,00
4500000,00
Los porcentajes sales
4000000,00
de cloruro de sodio y
3500000,00
magnesio, y sulfatos
células/mL

3000000,00 son mayores en un

2500000,00
BRISTOL
25,26% en el medio
2000000,00
BG11
Bristol
1500000,00
1000000,00
500000,00
0,00
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
días cultivo

En ambos medios de cultivo las curvas de crecimiento presentan definidas las fases de crecimiento
celular con una fase exponencial de 3 días. En el medio de cultivo Bristol el crecimiento en la fase
exponencial fue 52.12% mayor que en medio de cultivo BG11.
Correlación de determinación de crecimiento celular por densidad óptica

Contaje vs Absorbancia (Bristol)

y = 3E+07x - 1E+07
4800000,00
R² = 0,9876
4200000,00
3600000,00
3000000,00
Conataje

2400000,00
1800000,00
1200000,00
600000,00
0,00
0,2800 0,3000 0,3200 0,3400 0,3600 0,3800 0,4000 0,4200 0,4400
Absorbancia

Contaje vs Absorbancia (BG11)

2000000,00
y = 2E+07x - 7E+06
1500000,00 R² = 0,9761
Contaje

1000000,00

500000,00

0,00
0,2800 0,2900 0,3000 0,3100 0,3200 0,3300 0,3400 0,3500 0,3600 0,3700
Absorbancia
PRODUCTIVIDAD DE BIOMASA SECA

Productividad de biomasa seca en Bristol Productividad de biomasa seca en BG11

Productividad de biomasa seca de

Productividad de biomasa seca de
Scenedesmus sp en medio de cultivo BG11
Scenedesmus sp en medio de cultivo BRISTOL
CULTIVO g L g/L
CULTIVO g L g/L
B1 0,0134 0,05 0,2680
A1 0,0225 0,05 0,450
B2 0,0129 0,05 0,2580
A2 0,0257 0,05 0,514
A3 0,0261 0,05 0,522 B3 0,0138 0,05 0,2760
TOTAL 0,0743 0,15 0,495 TOTAL 0,0401 0,15 0,2673

La productividad de biomasa seca de Scenedesmus sp en medio de cultivo

Bristol, fue mayor en un 46,02% en relación con la biomasa seca obtenida
en el medio de cultivo BG11
CONTENIDO PROTEICO
Contenido proteico de Scenedesmus sp en Contenido proteico de Scenedesmus sp en
medio Bristol medio BG11

Contenido de proteína (BRISTOL) Contenido de proteína (BG11)

CULTIVO Abs 540nm Proteina g/L %Proteina CULTIVO Abs 540nm Proteina g/L %Proteina

A1 0,0275 0,1824 40,53% B1 0,0171 0,0933 34,82%

A2 0,0282 0,1884 36,65% B2 0,0165 0,0882 34,18%

A3 0,0289 0,1943 37,23% B3 0,0174 0,0959 34,74%

PROMEDIO 0,1884 38,13% PROMEDIO 0,0925 34,58%

Los valores proteicos obtenidos difieren en un 3.58%, que se considera una variación no
significativa; el contenido proteico para Scenedesmus sp. El ratio de contenido proteico
en el medio de cultivo Bristol es de 2,89 y en el medio de cultivo BG11 es de 2,62.
CONCLUSIONES
- La combinación de técnicas de enriquecimiento con
diluciones seriadas resulta un método idóneo para
obtener un cultivo axénico de un consorcio no
saturado.

- Las condiciones de cultivo dispuestas a una

temperatura de 20°C, con fotoperiodos de 12:12
(luz-oscuridad) favorecen el crecimiento exponencial
de la cepa Scenedesmus sp.
- Tener un cultivo axénico favorece la aplicación
de un método indirecto para la determinación
del crecimiento celular mediante densidad
óptica al tener correlaciones altas.

- En relación a la productividad de biomasa

microalgal, para Scenedesmus sp, un medio de
cultivo rico en sales favorece su rendimiento a
escala laboratorio.
- El método de ruptura celular por ondas ultrasónicas
como pretratamiento para determinación de
proteínas por el método de Biuret resulta una opción
aceptable ya que los valores obtenidos son
comparables a los resultados obtenido por González
& Cañizares (1998) en su estudio sobre la incidencia
del N2 en la producción de proteína algal .
- La aplicación a gran escala de la microalga
Scenedesmus sp. como una fuente efectiva de
proteína, no está limitada por acondicionamientos
de producción y técnico, con lo que concluimos que
estos resultados la hacen una especie recomendada
para la producción industrial orientada al uso
alimentario.
¡MUCHAS GRACIAS!