INGIENERÍA AMBIENTAL

MATERIA
Análisis Instrumental

TRABAJO
Investigación (Métodos espectrofotométricos)

PRESENTA:
Marcelino Muñoz Trejo

DOCENTE:
Dra. Elizabeth del Carmen Varela Santos

Abril 21-2020
INTRODUCCIÓN

La espectrofotometría es una técnica que permite determinar la concentración de

un compuesto en solución. Se basa en que las moléculas absorben las radiaciones
electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luz absorbida depende de forma
lineal de la concentración. Para hacer este tipo de medidas se emplea un
espectrofotómetro, en el que se puede seleccionar la longitud de onda de la luz que
pasa por una solución y medir la cantidad de luz absorbida por la misma. El
fundamento de la espectrofotometría se basa en la capacidad de las moléculas
para absorber radiaciones, entre las radiaciones dentro del espectro UV-visible. Las
longitudes de onda de las radiaciones que una molécula puede absorber y la
eficiencia con la que absorben dependen de la estructura atómica y de las
condiciones del medio (PH, temperatura, fuerza iónica, constante dieléctrica) por lo
que dicha técnica constituye un valioso instrumento para la determinación y
caracterización de biomoléculas.

Los métodos espectrofotométricos basados en mediciones de absorción o emisión

de radiación de espectro electromagnético se clasifican en métodos en métodos de
espectrofotometría molecular y atómica y comprenden las regiones del espectro
electromagnético de ultravioleta, visible e infrarrojo.
Espectrofotometría

La espectrometría es una técnica analítica que permite determinar la concentración

de una sustancia en disolución, se basa en la absorción de las radiaciones por parte
de las moléculas y en esta cantidad de radiación absorbida, depende directamente
de la concentración de sustancia; por lo tanto, a ,mayor concentración del analito
mayor absorción de la radiación.

Fig. 1. espectrofotómetro

http://www.proveedordelaboratorios.com/espectrofotometro_uv_visible_profesional
_414.html

Los estudios espectrométricos dependen de la naturaleza de la muestra,

básicamente. Para ello existe lo basado en la luz visible, ultravioleta (UV) e
infrarroja.

Principios

Todas las sustancias pueden absorber energía radiante, aun el vidrio que parece
ser completamente transparente absorbe radiación de longitudes de ondas que no
pertenecen al espectro visible; el agua absorbe fuertemente en la región del
infrarrojo. La absorción de las radiaciones ultravioletas, visibles e infrarrojas
depende de la estructura de las moléculas, y es característica para cada sustancia
química. Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energía es absorbida;
la energía radiante no puede producir ningún efecto sin ser absorbida. El color de
las sustancias se debe a que éstas absorben ciertas longitudes de onda de la luz
blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes
de onda no absorbidas. La espectrofotometría ultravioleta-visible usa haces de
radiación del espectro electromagnético, en el rango UV de 80 a 400 nm,
principalmente de 200 a 400 nm y en el de la luz visible de 400 a 800 nm, por lo que
es de gran utilidad para caracterizar los materiales en la región ultravioleta y visible
del espectro. Al campo de luz uv de 200 a 400 nm se le conoce también como rango
de uv cercano, la espectrofotometría visible solamente usa el rango del campo
electromagnético de la luz visible, de 400 a 800 nm. Además, no está de menos
mencionar el hecho de que la absorción y trasmitancia de luz depende tanto de la
cantidad de la concentración y de la distancia recorrida.

Ley de Beer

La de Beer Ley de Beer declara que la cantidad de luz absorbida por un cuerpo
depende de la concentración en la solución. Por ejemplo, en un vaso de vidrio
tenemos agua con azúcar diluida y en otro tenemos un vaso con la misma cantidad
de agua pero con más azúcar diluida. El detector es una celda fotoeléctrica, y la
solución de azúcar es la que se mide en su concentración. Según la ley de Beer, si
hiciéramos que un rayo de luz atravesara el primer vaso, la cantidad de luz que
saldría del otro lado seria mayor que si repitiéramos esto en el segundo; ya que en
el segundo, las ondas electromagnéticas chocan contra un mayor número de
átomos y moléculas son absorbidos por estos.

Ley de Lambert

Se dice que la cantidad de luz absorbida por un objeto depende de la distancia

recorrida por la luz. Por ejemplo, retomando el ejemplo de los vasos, pero ahora,
pensemos que ambos tiene la misma cantidad de agua y la misma concentración
de azúcar, pero, el segundo tiene un diámetro mayor que el otro.

Según la ley de Lambert, si hiciéramos que un rayo de luz atravesara el primer vaso,
la cantidad de luz que saldría del otro lado seria mayor que si repitiéramos esto en
el segundo; ya que en el segundo, las ondas electromagnéticas chocan contra un
mayor número de átomos y moléculas son absorbidos por estos; de la misma forma
que se explicó en la ley de Beer.

Aplicaciones

Determinar la cantidad de concentración en una solución de algún compuesto

utilizando las fórmulas ya mencionadas.

Para la determinación de estructuras moleculares.

La identificación de unidades estructurales especificas ya que estas tienen distintos

tipos de absorbancia (grupos funcionales o isomerías).

Metodología

Espectrofotometría visible

El espectro visible es una pequeña sección del espectro que abarca desde los 380
a los 750 nm.

Fig. 2. Espectro de luz visible

http://e-ducativa.catedu.es/44700165/aula/archivos/repositorio/3000/3233/html/21
En estas longitudes de onda, existen un gran cantidad de sustancia coloridas
(cromóforas) que absorben la luz y por ello podemos determinar su concentración
en diversas muestras.

El color que percibimos en todos los objetos, resulta de la suma de todos los colores
que no absorbe el material. SI un objeto absorbe todo tipo de luz visible, será un
cuerpo negro. Si no absorbe la luz visible, lo percibimos como blanco o e incoloro
(Skoog D. A., 2008). En caso que absorba color rojo, se percibirá como verde.

Región Visible

En la región visible apreciamos el color visible de una solución y que corresponde a

las longitudes de onda de luz que transmite, no que absorbe. El color que absorbe
es el complementario del color que transmite. Por tanto, para realizar mediciones
de absorción es necesario utilizar la longitud de onda en la que absorbe luz la
solución coloreada. La fuente de radiación visible suele ser una lámpara de
tungsteno y no proporciona suficiente energía por debajo de 320 nm.

Trasmitancia y Absorbencia

Fig. 3. Lectura en presencia del cromoforo muestra

Cuando un rayo de luz de una determinada longitud de onda de intensidad incide

perpendicularmente sobre una disolución de un compuesto químico que absorbe
luz o cromóforo, el compuesto absorberá una parte de la radiación incidente (I a) y
dejará pasar el resto (It), de forma que se cumple: Io = Ia + It
La trasmitancia (T) de una sustancia en solución es la relación entre la cantidad de
luz transmitida que llega al detector una vez que ha atravesado la muestra, I t, y la
cantidad de luz que incidió sobre ella, Io, y se representa normalmente en tanto por
ciento: % T = lt/Io x 100 La trasmitancia nos da una medida física de la relación de
intensidad incidente y transmitida al pasar por la muestra. La relación entre %T y la
concentración no es lineal, pero asume una relación logarítmica inversa.

La absorbancia (A) es un concepto más relacionado con la muestra puesto que

nos indica la cantidad de luz absorbida por la misma, y se define como el logaritmo
de 1/T, en consecuencia: A = log 1/T = -log T = -log It/ Io. Cuando la intensidad
incidente y transmitida son iguales (Io = It), la trasmitancia es del 100% e indica que
la muestra no absorbe a una determinada longitud de onda, y entonces A vale log
1 = 0.

La cantidad de luz absorbida dependerá de la distancia que atraviesa la luz a través

de la solución del cromóforo y de la concentración de éste.

Espectrofotometría UV IR

La región del infrarrojo se localiza a frecuencia a 8x10-5 a 8x10-2 cm. Los fotones
fotones de la radiación infrarroja no tienen la energía suficiente para provocar
transiciones electrónicas pero pueden conseguir vibraciones de los enlaces de las
moléculas a analizar.

L energía requerida para lograr un transición depende del tipo de átomos y el tipo
de enlace que presenten.

Una molécula absorberá la luz infrarroja cuando la energía de los fotones es muy
cercana a la diferencia entre un estado de vibración y el siguiente. La absorción de
las energías requiere qué el enlace de la molécula presente un momento dipolar,
para que la absorción se amas intensa.

Las bandas de absorción de casi todos los grupos funcionales orgánicos se

localizan entre los 400 y los 800 cm-1. Los espectros infrarrojos se presentan como
como grafica de absorbancia frente a número de onda (Hernández y Gonzales,
2002.
El espectrómetro infrarrojo IR contiene una fuente de emisión, que regularmente es
una barra de material cerámico cuya radiación se divide en dos porciones: la primera
que atraviesa la celda que contiene la muestra; y la segunda una celda que contiene
solo el disolvente empleado. El haz de la muestra se dirige a la rejilla de dirección,
donde se separa la longitud de onda que la integran y dan lugar al espectro IR.

Región UV

Se define como el rango de longitudes de onda de 195 a 400 nm. Es una región de
energía muy alta. Provoca daño al ojo humano así como quemadura común. Los
compuestos con dobles enlaces aislados, triples enlaces, enlaces peptídicos,
sistemas aromáticos, grupos carbonilos y otros heteroátomos tienen su máxima
absorbancia en la región UV, por lo que ésta es muy importante para la
determinación cualitativa y cuantitativa de compuestos orgánicos. Diversos factores
-como pH, concentración de sal y el disolvente que alteran la carga de las
moléculas, provocan desplazamientos de los espectros UV.

Espectrofotometría de absorción atómica

La espectrofotometría de absorción atómica es útil para los espectros de emisión,

al contrario a los de absorción. El método se fundamenta en que al hacer incidir
energía en forma de calor o de manera eléctrica, mediante una llama o una
descarga una muestra problema, provocara un cambio del estado basal al estado
excitado del analito. De tal manera que los electrones más externos a un átomo,
pasara aun estado excitado. Sin embargo, después de unos nanosegundos, se
relajan hacia un estado fundamental, cediendo la energía absorbida. Esta energía
en forma de fotones corresponde al espectro visible o ultravioleta y es medida por
medio de un detector.
 Fig. 4. Excitación de electrones e ionización de átomos

https://es.khanacademy.org/science/ bohrs-model-of-hydrogen

El equipo para espectrofotometría de absorción atómica consta de manera general

de una fuente de luz, el tomador de muestra, el atomizador, la fuente d excitación,
el selector de longitud de onda (mono cromador) y el dispositivo de la lectura

Fig. 5. Componentes de un espectrofotómetro de absorción atómica

https://www.google.com/url?sa=i&url=https%3A%2F%2Fdocplayer

Para realizar la medición es importante qué el analito se encuentre en forma

atomizada, esto es, los átomos o iones deben estar en fase de gaseosa. Lo
dispositivos de atomización pueden ser de dos tipos: atomizadores continuos y
atomizadores directos. Los primeros introducen la muestra de forma continua,
mientras que el segundo lo hace en porciones, es decir, para fragmentar la muestra
puede utilizar una jeringa, o un automuestrador. La nebulización es la técnica más
emplead para introducir la muestra (Skoog D. A. 2005).

El método por excelencia para el análisis de espectroscopia de absorción atómica

es el del estándar externo, el cual consiste en emplear al menos tres estándares
para construir la gráfica o curva de calibración. Las disoluciones estándar se
preparan a concentraciones cercanas a la muestra problema, con ello se evitan
errores en la medición.

Aplicaciones

Las ventajas de la espectrofotometría sobre otros métodos analíticos del laboratorio

son: es rápida, precisa, versátil y fácil de usar y eficiente en costos. Los
espectrofotómetros se han mejorado en precisión y versatilidad en los últimos años,
se consideran indispensables en los laboratorios de química analítica.

La espectrofotometría tiene diversas aplicaciones:

Análisis cuantitativo y cualitativo de soluciones desconocidas en un laboratorio de

investigación, estandarización de colores de diversos materiales, como plásticos y
pinturas, detención de niveles de contaminación en aire y agua y determinación de
trazas de impurezas en alimentos y en reactivos.
Conclusión

Los métodos espectrofotométricos preceden a técnicas analíticas que sirven para

analizar pequeñas cantidades de muestras que han absorbido la luz que han
recibido, en función de la longitud de onda. Si bien los distintos métodos ofrecen
diferentes formas para la determinación de una muestra problema con la finalidad
de obtener un resultado cuantitativo o cualitativo. Las diferentes aplicaciones de los
métodos espectrofotométricos llegan a ser tan versátiles que llegan a ser de gran
utilidad en diferentes ámbitos.
Referencias

28 de feb. De 2017. Jazina Ruiz Hernández. Métodos espectrofotométricos

https://issuu.com/jazinaruizhernandez/docs/unidad_4._metodos_espectrofotometri

Espectrofotometría https://www.ecured.cu/Espectrofotometr%C3%ADa

Nieves Abril Díaz, J. Antonio Bárcena Ruiz. Espectrofotometría: Espectros de

absorción y cuantificación colorimétrica de biomoléculas.

https://www.uco.es/dptos/bioquimica-bimol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETRIA.pdf

http://www.frlp.utn.edu.ar/materias/qcasis/mostracion2.html