UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA

FACULTAD DE CIENCIAS DEPARTAMENTO DE FARMACIA

PROGRAMA DE MICROBIOLOGÍA

Segundo informe: Técnicas Cultivo De Microorganismos

Autores: Lina Marieth Rodríguez Díaz 66682191

Jessika Fernanda Gómez Álvarez 1085323745

OBJETIVO ESPECÍFICO

OBJETIVOS

1. Aplicar la técnica adecuada para preparar el área de trabajo y evitar

contaminaciones.
2. Manipular adecuadamente los cultivos puros.
3. Seleccionar y aplicar las técnicas de siembra adecuadas para alcanzar propósitos
específicos.
4. Identificar y describir correctamente las características macroscópicas y
microscópicas de algunas bacterias.
5. Organizar e interpretar los resultados del estudio macroscópico y microscópico de
bacterias.

MARCO TEÓRICO

1. ¿Qué es la técnica aséptica y cuáles son sus principios? ¿Qué importancia tiene
en la transferencia de los microorganismos en cultivos microbianos?

El término “aséptico” significa “sin microorganismos”. La técnica aséptica tiene como

objetivos principales evitar que el operador se contamine con los microorganismos
procedentes de las muestras o cultivos y evitar la contaminación de las muestras con
microorganismos procedentes del ambiente o del propio operador.
Para ello se requiere crear un área aséptica donde se pueda manipular el material
estéril. Éste material lo conforman los instrumentos más utilizados en la transferencia
de cultivos microbianos. Los cuales deben estar estériles, es decir, libres de
microorganismos. Para empezar a trabajar se debe limpiar y desinfectar el área de
trabajo, organizar el material, y etiquetar los materiales necesarios y crear el área
aséptica; Para ello el mechero debe estar encendido, se ubica el área aséptica el cual
corresponde a un radio aproximado de 12 centímetros.

Principios básicos de la técnica aséptica

● limpio con limpio
● sucio con sucio
● estéril con estéril
● contaminado con contaminado
● seco con seco
● húmedo con húmedo
● De la cintura para arriba
● De lo más limpio a lo más sucio

Para hacer crecer un cultivo de microorganismos en un medio, se transfiere un

inóculo de células del medio de origen al medio de cultivo estéril, teniendo cuidado
de mantener la pureza del cultivo y no introducir microorganismos extraños. Este
procedimiento se conoce como técnica aséptica. En la técnica aséptica se deben
usar medios de cultivo estériles, para la transferencia de microorganismos se usa
una aguja de inoculación o un asa bacteriológica, estas se deben calentar al rojo,
antes y después de hacer la transferencia, para esto debe mantenerse el asa en el
fuego del mechero de forma que se caliente bien desde la base del mango hacia la
punta. Antes de realizar la transferencia debe enfriarse ligeramente de manera que
no vaya a quemar el inóculo. Durante la transferencia deben detenerse los tubos
con la mano izquierda (derecha si se es zurdo) y quitar los tampones con la otra
mano.
Transferir microorganismos a cultivos microbianos es un método en el que se
prepara un medio óptimo para favorecer un proceso de crecimiento microbiano. En
este procedimiento se dota a los microorganismos de la siembra de diferentes
nutrientes que van desde azúcares simples hasta sustancias complejas.

2. ¿Qué características deben tener los medios de cultivo utilizados para el

crecimiento de los microorganismos?
El crecimiento bacteriano necesita de una serie de sustancias de ambientes que
faciliten su desarrollo. Estas características pueden ser físicas y químicas.

FÍSICAS
Temperatura: Teniendo en cuenta la temperatura podemos clasificar a los
microorganismos en:
 ● Mesófilos: capaces de desarrollarse a temperaturas que pueden oscilar entre
los 20-45°C. Temperatura óptima = 35-37°C.
● Termófilos: Son capaces de desarrollarse a temperaturas superiores a los
45°C
● Sicrófilos: son capaces de desarrollarse a temperaturas superiores a los
45°C.
PH: La concentración de iones hidrógeno es muy importante para el crecimiento de
microorganismos. el pH óptimo en el que se desarrollan la mayoría de los
microorganismos es neutro, que oscila entre 6,5 - 7,5. Los microorganismos que se
desarrollan a pH: 4 se denominan “acidófilos”
Presión Osmótica: es la presión que se origina por difusión o intercambio de
soluciones de diferente concentración a través de una membrana. La mayoría de los
microorganismos habitan en medios hipotónicos. Su membrana debe ser
selectivamente semipermeable para que se pueda dar ese fenómeno.
QUÍMICAS
Oxígeno O2: Gran cantidad de bacteria pueden crecer en una atmósfera con
tensión de oxígeno normal. Algunas pueden obtener el oxígeno directamente de
variados sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos sólo se
desarrollarán adecuadamente en una atmósfera con oxígeno ambiental. En un
punto intermedio, los microorganismos microaerófilos crecen mejor en condiciones
atmosféricas parcialmente anaerobias (tensión de oxígeno muy reducido. Mientras
los anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera
de las citadas condiciones.
Carbono: es un elemento que forma parte de la estructura básica de la materia
viva. Las fuentes a partir de las cuales los microorganismos obtienen este elemento
son: Las proteínas (en forma de peptonas. Sirve para diferenciar microorganismos
por ejemplo, en un medio de cultivo con lactosa y peptonas). Los hidratos de
carbono (fundamentalmente la glucosa y la lactosa. Los lípidos.
Nitrógeno, Fósforo y Azufre
Nitrógeno: se necesitan fundamentalmente para la síntesis de proteínas, es decir,
para formar el grupo amino de los aminoácidos, también se utiliza para crear el DNA
y el RNA, Para sintetizar aminoácidos y vitaminas y para sintetizar ácidos nucleicos
y fosfolípidos de las membranas nucleares.
Potasio, Magnesio, Calcio: Su función principal es que son necesarios como
cofactores de las enzimas. Una enzima tiene una parte proteica (apoenzimas) y otra
no proteica (cofactor). Esta última puede ser un ion metálico o una molécula
orgánica compleja llamada coenzima. Los cofactores pueden dar o aceptar átomos
requeridos por el sustrato.
Oligoelementos: Hierro, Cobre, Zinc, Participan como cofactores de las enzimas.
Factores orgánicos de crecimiento: Compuestos orgánicos esenciales que el
organismo es incapaz de sintetizar.

3. ¿Cómo se pueden clasificar los medios de cultivo?

Según su origen:
a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen
animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composición
química no se conoce exactamente.
b) SINTÉTICOS: son los medios que contienen una composición química definida
cualitativamente y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados
reproducibles.
c) SEMISINTÉTICOS son los sintéticos a los que se les añaden factores de
crecimiento bajo una forma de un extracto orgánico complejo, como por ejemplo
extracto de levadura.

Según su consistencia:
a) LÍQUIDOS: se denominan caldos y contienen los nutrientes en solución acuosa.
b) SÓLIDOS: se preparan añadiendo un agar a un medio líquido (caldo) a razón de
15 g/litro. El agar es una sustancia inerte polisacárido (hidrato de carbono) que se
extrae de las algas. Como esta sustancia no es digerida por las bacterias no
constituye ningún elemento nutritivo. Este conjunto convenientemente esterilizado
puede ser vertido en placas de Petri o en tubos de ensayo y presentan la posibilidad
de aislar y diferenciar bacterias, "procesos que antes no eran posibles en medio
líquido".
c) SEMISÓLIDOS: contienen 7,5 g de agar /litro de caldo. Se utilizan para
determinar la motilidad de las especies en estudio. Actualmente se encuentran
disponibles comercialmente con el agregado de agar.

Según su composición:
A causa de los requerimientos químicos del mundo microbiano, a veces es
necesario agregar o eliminar componentes químicos del medio.
a) COMUNES O UNIVERSALES: su finalidad es el crecimiento de la mayor parte de
los microorganismos poco existentes. Es el medio más frecuentemente utilizado
para mantener colonias microbianas. Por ejemplo: agar común o caldo común.
b) ENRIQUECIDOS: están compuestos de un medio base como apoyo del
crecimiento al cual se le puede agregar un gran exceso de nutrientes como
suplementos nutritivos, por ejemplo: sangre, suero, líquido ascítico, etc. Se utiliza
para microorganismos que tienen grandes exigencias nutricionales.
c) SELECTIVOS: son sólidos en los que la selectividad se consigue alterando las
condiciones físicas del medio o añadiendo o suprimiendo componentes químicos
específicos con el fin de inhibir el crecimiento de especies químicas cuyo
crecimiento no interesa. Este tipo de medio sólo permite el crecimiento de un grupo
 de microorganismos e inhibiendo el de otros. Se utiliza para seleccionar y aislar
microorganismos a partir de poblaciones mixtas. Por ejemplo Agar salado-manitol o
Chapman (permite el crecimiento de ciertos estafilococos).
d) DIFERENCIALES: son medios de cultivos que nos permiten distinguir entre varios
géneros y especies de microorganismos. Por ejemplo si al medio se le ha añadido
un carbohidrato y un indicador y la bacteria que se cultiva es capaz de fermentar
dicho carbohidrato, se produce una acidificación del medio con el consiguiente viraje
de color del indicador por el cambio de pH. El citrato de Simmons es un medio cuya
única fuente de carbono es el citrato sódico, entonces en él solo crecerán las
bacterias capaces de desarrollarse utilizando como única fuente de carbono ese
componente. A menudo la separación se basa en la diferencia de color de las
colonias aisladas, como en el agar con azul de metileno - eosina que permite
diferenciar colonias oscuras y de brillo metálico de Entero bacterias Aerógenas
(colonias rosadas de centro azul sin brillo). Estos dos microorganismos en agar
nutritivo producen colonias de color gris blancuzco. Suelen ser a la vez selectivos,
por lo tanto solo crecerán determinadas bacterias, que al actuar sobre alguno de los
componentes específicos del medio, demuestran algunas de sus propiedades o
características y nos permite diferenciar entre ambos tipos.
e) DE ENRIQUECIMIENTO: son medios líquidos que contienen un agente que
inhibe las especies no deseadas pero que favorece el crecimiento irrestricto del
agente infeccioso. El medio de Muller - Kauffman, permite el crecimiento de
Salmonella inhibiendo a su vez el de numerosos coniformes. Esto es de gran
importancia ya que en ciertas muestras, por ejemplo fecales, el agente infeccioso
(Salmonella) es frágil y puede ser superado en número por otros agentes. Por lo
tanto, antes de realizar las pruebas de laboratorio es necesario aumentar su número
con respecto a ésta en un caldo de enriquecimiento. Ejemplo de este tipo son el
caldo de tetrationato y selenito. El enriquecimiento es una técnica que utiliza un
medio selectivo líquido para permitir el desarrollo de un microorganismo a partir de
una muestra que contiene una gran variedad de microorganismos. Así, aquellos
microorganismos para los que el ambiente sea más favorable crecerán más que los
otros y finalmente serán predominantes.
f) DE TRANSPORTE: son utilizados para asegurar la viabilidad de la bacteria sin
multiplicación significativa de los microorganismos desde el momento de su
extracción hasta su posterior estudio. Se utilizan generalmente cuando las muestras
deben ser enviadas de un laboratorio a otro.

4. ¿Qué características macroscópicas y microscópicas se describen en un cultivo

microbiano?

AGRUPACIONES MICROSCÓPICAS.
Si la forma de una bacteria aislada depende de la rigidez de su pared celular, la
agrupación depende de cómo se lleva a cabo la fisión binaria de la célula y que las
células descendientes queden unidas o no. Son visualizables por microscopía y
corresponde a lo que realmente se entiende por agrupación bacteriana, es decir, la
tendencia que presentan los distintos tipos bacterianos para asociar las células del
mismo tipo entre sí formando grupos de 2 o más bacterias. La agrupación
microscópica es frecuentemente característica de un mismo grupo taxonómico, por
ejemplo, de un género. Es importante destacar que no todas las formas bacterianas
forman agrupaciones microscópicas. Por ejemplo, los espirilos nunca se asocian
mientras existen otras especies bacterianas en las que su agrupación es muy
característica y útil a la hora de establecer clasificaciones taxonómicas, siendo las
formas cocoideas las más frecuentes en este sentido, y en menor proporción las
formas bacilares.
Las formas cocoideas se pueden agrupar de la siguiente forma:
Diplococos: cuando se divide la bacteria en un único plano permaneciendo las dos
células hijas formando parejas.
Tétradas: la bacteria se divide en dos planos perpendiculares entre sí formando
grupos característicos de 4 células situadas en un mismo plano.
Estafilococos: la división tiene lugar en tres planos diferentes sin tener
necesariamente ninguna relación geométrica entre ellos. Se forman racimos de
coco.
Sarcinas: esta agrupación se forma como consecuencia de la división de la bacteria
en tres planos perpendiculares originando agrupaciones cuboides en torno a 8
cocos o más.
Las agrupaciones bacilares son menos frecuentes pero en ocasiones pueden
aparecer como: Diplobacilos: corresponde a dos bacilos unidos como pareja y
originado por la división en un único plano perpendicular al eje longitudinal del
bacilo.
Estreptobacilos: agrupaciones de bacilos a modo de cadena.
Formas irregulares: en ocasiones los bacilos pueden agruparse en formas muy
irregulares parecidas a letras chinas.

AGRUPACIONES MACROSCÓPICAS: COLONIAS.

Estas agrupaciones son visualizadas a simple vista y corresponden al crecimiento

en un punto de una única línea celular hasta formar una colonia (todas las células
que componen la colonia provienen de una única célula). El cultivo se realiza en un
medio de cultivo sólido para formar colonias que serán distintas y características
para cada tipo bacteriano; el medio sólido impide el posible movimiento de los
individuos de la colonia y favorece su agrupamiento. Para obtener colonias
bacterianas nunca se emplea directamente un medio de cultivo líquido. Estas
colonias presentan una morfología macroscópica fácilmente reconocible y variable
en función de:
Las características del medio de cultivo sólido donde se ha desarrollado la
bacteria constituyen un criterio de gran importancia a la hora de hacer una
valoración taxonómica de la misma.
El tipo de bacteria problema: Las bacterias de mayor movilidad presentan mayor
tendencia a dar colonias extendidas y planas frente a las que no presentan esta
característica. Es importante considerar que un mismo tipo de bacteria puede dar
lugar a distintos tipos de colonias dependiendo del medio de cultivo sólido
empleado, e igualmente, distintos tipos bacterianos pueden crecer formando
colonias similares. De cualquier forma la verificación de las diferentes formas,
tamaños y aspectos de las colonias va a servir como: Un dato más en la tipificación
de la bacteria problema. Una medida de control para una siembra correcta. Lo ideal
es que las colonias se encuentran más separadas que juntas y que en el proceso de
la siembra no haya habido contaminación. Y verificación de que el medio de cultivo
no está contaminado Los medios sólidos en los que se verifican las colonias pueden
ser en placa o en tubo con agar inclinado, y siempre, sembrando por el sistema de
estrías.

5. Defina cultivo, colonia, unidad formadora de colonia (UFC), cultivo puro, cultivo
mixto.

Cultivo: Un cultivo es la forma en la que se hacen crecer los microorganismos

(colonias) en una superficie sólida (agar) o en medio líquido (caldo) e incluso en
células (linea celular) y es utilizado como el método principal para poder estudiar a
los agentes causales de enfermedades.

Colonia: Grupo de seres vivos organizados bajo bases cooperativas. Estos

microorganismos son visibles macroscópicamente y se desarrollan a partir de un
progenitor común.

Unidad formadora de colonia (UFC): Es un valor que indica el grado de

contaminación microbiológica de un ambiente. Expresa el número relativo de
microorganismos determinado en un volumen de un metro cúbico de agua. UFC es
el número mínimo de células separables sobre la superficie o dentro de un medio de
agar semi-sólido que da lugar al desarrollo de una colonia visible del orden de
decenas de millones de células descendientes.

Cultivo mixto: Un cultivo más de una clase de microorganismo.

 BIBLIOGRAFÍA

● Manual de microscopia. Historia, descripción y uso del microscopio óptico. N.

Arraiza, P.M Viguria, J. Navarro, A. Ainciburu.
● ALEXANDR OPARIN. (1967). El Origen De La Vida. Rusia: Editorial Del
Estado De Literatura.
● REINHARD RENNEBERG. (2004). Biotecnología Para Principiantes.
Barcelona: Editorial Reverté.
● AQUIAHUATL RAMOS, TANIA VOLKE, KEIKO SHIRAI. (2012). Manual de
Prácticas De Laboratorio Microbiología General. México, D. F: Universidad
Autónoma Metropolitana.
● BROCK, T.D. et al (1997): Biología de los Microorganismos (8ª edición). Edit.
Prentice-Hall.