1 Introducción

Stem cell PROGRAMA DE INMUNOLOGIA

2 Hematopoyesis, células y órganos inmunes
3 Respuesta inmune innata y adquirida
C1q
5 Anticuerpos y
6 Generación de Célula
la diversidad de
receptor de Linf. los Acs. y madu-
diana
B para el Ag. ración del linf. B

7 HLA y presentación de Ag.

Célula
TH TH T diana
4 Antígenos
TH T
H
Célula Fagocito
IFN-g
IFNg
H diana
GM-CSF
IL-4 IL-4
TNF-b IL-2 12
Respuesta C3b
Inmune
8 Humoral
IL-2
IL-2
CD4
7 IL-2 IL-2IL-2
IL-2

CPA TH IL-2 IL-2 IL-2IL-2

IL-2
IL-2

8 Receptor T, correceptores Célula Macrófago

y moléc. accesorias
diana o
célula NK
IL-1
IL-6 IL-2
TNF-a
Pre-Tc ADCC
10 Citocinas
11
Respuesta
Inmune
9 Generación de IL-2
Celular
la diversidad de
TCR y ,aduración !
del linfocito T CD8
7 Célula
Stem cell
Célula
8
diana ? NK IFNg
diana TC
 IL-2 R (a+b+g): - linf. T activados
- linfocitos B
CPA (constitutivo)

IL-2 R (b+g): - linfoc. T inactivos

- células NK

B7.1(CD80) / B7.2 (CD86)

B7.1(CD80) / B7.2 (CD86)

(constitutivo)
ICAM-1, -2, -3

IL-2. Es producida por linfoc. CD4

LFA-3 (CD58)
V-CAM - 1

y alguna por los CD8.

CD8
MHC
Clase I

TCR
(ab)
CD45 RO (en T memoria)
CD45 RA (en T "naive")

IL-2
CD - 2 (LFA - 2)
Adhesión

a b g
LFA - 1

CTLA-4
VLA - 4

CD3
CD28

g e p55
d e zz/zg Tac p70
CD25 p75

LA ACTIVACIÓN SEGUNDA TERCERA

PRIMERA SEÑAL SEÑAL
DEL LINFOCITO T SEÑAL
REQUIERE
TRES SEÑALES G1 S
Gen IL-2

Gen IL-2 Ra M G2
 CPA

Reagrupamiento
B7
HLA a b CD45

del TCR
CD4
clase II

(fosfatasa)
CD28
3ª g e
a b
CD3
d e x x
Segundos

1ª
TCR
LAT P P P P P P 2
PLCg1
DAG P
4
3
1
Auto-P
5
Fyn lck (Src)
Vía de la Calmodulina

ZAP-70
2ª
la PKC

Fyn
Prot. adaptadoras Zap-70 PTKs
P P lck
Tirosin LAT SLP-76 (lck=Fyn)
Vía de

Kinasa RE (m) (c)

++ P
Ca
Grb-2 P
Factores de
Calmodulina (m) P
intercambio
PKC
Sos P
(m)
sa

P
Calcineurina
osin-Kina

inactiva Ras-GDP Ras-GTP

Minutos

(m) (m)
IL-2
P Raf Vía de las
ir

kinasas
Vía de la T

Calcineurina P MEK-1
MAP
activada
IkB P ERK-1,2 Vav
NFkB P
RNAm IL-2

NFAT NFAT
(p&c) (p&c) P Elk Rac-GTP

NFkB JNK-1,2 (SAP)

P
Fos c-Jun Vía de
(AP-1) las kinasas
CD28RE
SAP

P G1 S
Horas

Gen IL-2
Linfocito T Gen IL-2Ra M G2
 El proceso de anidación ("homing")

LFA-1 L-selectina Vénula de endotelio alto

en gánglio linfático

GlyCAM-1

ICAM-1
 LAS CPA Y LOS LINFOCITOS
Areas
INTEACTUAN EN LOS GÁNGLIOS Y B
OTROS ÓRGANOS LINFOIDES
SECUNDARIOS PARA INICIAR LA
RESPUESTA INMUNE

Fagocitosis No fagocitosis
Pinocitosis No pinocitosis

Areas
T
Vía linfática

Célula de
B7
Langershans Célula
(piel) dendrítica

Macrófago
 Ejemplos de
PROCESAMIENTO Y Th2
TCR
PRESENTACIÓN DE “helper”
ANTÍGENOS CD8

CD4
T
TCR

Linfocito B

“helper”
Th2

CD8 CD4

T
CD4
TCR
Micob.

Virus Th1
TCR
Replicantes

Macrófago “inflamatoria”
Bacterias

Parásitos

CD8
No replicantes

Proteínas T
TCR
Polisacáridos
etc. Otras
células
 CD8 CD4 El timo genera dos poblaciones
RESPUESTA T
CD8 TCR
T
CD4 TCR de linfocitos T.
INMUNE Naive CD28 Naive CD28 Cada población posee un repertorio
CELULAR de TCR que es tolerante sólo para
T CD8+ antígenos presentados en el timo.

Circulación
CD8 (con homing CD8
HLA HLA T T
Tc TCR I selectivo en Célula. I TCR CD8
Célula. gánglios) Anérgico
diana CD28 Naive

Toleranica periférica a antígenos propios

CD28 diana

"Beso de la muerte"
sin necesidad de
coestimulación CD8 Las células dendríticas
T HLA Cél. expresan coestimulación
CD8 TCR I de forma constitutiva
T-CD8 Naive CD28 B7
dendrit.

"armado"
CD8 CD8
Con T HLA HLA T T
CD8 TCR I I TCR CD8 Anérgico
artillería Naive CD28
preparada B7 CD28 Naive

Algunos gérmenes inducen la expresión de coestimulación en macrófagos

CD8 CD8
T HLA HLA T T
CD8 TCR I I TCR CD8 Anérgico
Naive CD28 B7 CD28 Naive

Algunos gérmenes inducen la expresión de coestimulación en linf. B.

CD8 CD8
T HLA Cél. HLA T
Cél. T
CD8 TCR I Langerhans Langerhans I TCRCD8
Naive CD28 Anérgico
B7 (gánglio) (piel) CD28 Naive
 El linfoc. Tc produce Timo TCD8
( y responde): Perforinas Naive
Actividad antiviral,
-IFNg: expres. HLA-I y TAP Circulación
Recluta macrófagos
Tc CD8 (con homing Célula. HLA CD8
(fagocit. y APC) HLA T
TCR I selectivo en diana I TCR CD8
Célula. gánglios) T
CD28 Naive
Su poder de ataque (Ag propio)
CD28 diana Anérgico
-TNFb: Induce apoptosis Fas
en cel diana Fas-L

Granzymas
"Beso de la muerte"
sin necesidad de
coestimulación
T
CD8 CD8 1ª y 2ª
HLA Cél.
La el Naive
dendrit., señales
a ca rte TCR I
"artillería" at ue macrof.
no e m CD28 B7
é ? o linf. B
Perforinas: Proteína formadora de qu o d Tc
P or ism pio
poros, Ca++ dependiente (~factor 9 ¿ n
ca pr
o
del C'). me al

Granzymas: Serin proteasas que

Expansión
activan la cascada de la caspasa e 3ª señal
inducen apoptosis clonal
(IL-2R)
Otros enzimas inductores de
apoptosis: Fosfatasa ácida, L-
Glicosidasa y Catepsina D. CD8
Ligando de Fas (CD95L). Una vez TCR
unido a Fas en la cél. diana, éste
CD28
libera una señal de muerte por
apoptosis.
T CD8 Fas-L
Granulosina, enzima con actividad Armado
antimicrobiana directa frente a
ciertas bacterias intracelulares.

Una sola célula Tc puede dar sucesivamente "besos de la muerte" a muchas células diana.
MECANISMOS DE MUERTE LIGADOS A GRANULOS (IT Agosto 99)

crma, p35
Perforina Activación Vía nuclear

BHRF1(viral)
Vía 1 Granzyma B de caspasas de muerte La existencia

(Bcl-2 like)
( Fas ?) (cisteín proteasa) de
inhibidores
Perforina selectivos
Vía 2 Granzyma B ha permitido
Vía no
nuclear identificar
Perforina estas tres
Vía 3 Constituyentes de los granulos distintos de muerte
vías
a Granzyma B

El SI parece diversificar las vias de muerte a medida que los virus desarrollan sistemas para
inhibirlas. Lon linfocitos Tc y las células NK fabrican 5 granzymas.

PROTEINAS VIRALES QUE INHIBEN LA APOPTOSIS (IT Agosto 99)

Proteína Virus Vía Proteína Virus Vía

MT-2 Poxvirus 1 E6 Papilomavirus ?

Glicoprot. D a-herpesv. 1 EIB55K Adenovirus ?
E3-10.4K/14.5K Adenovirus 1 Large T Polioma ?
Prot del core VHC Hepatitis C 1 BHRFI, EIB19K EBV, Adenovirus 2
E3-14.7K Adenovirus 1 v-Akt Pioma, retrovirus ?
LMPI EBV 1 MEQ Herpesvirus ?
vFLIP g-herpesvirus 1 vIRF Herpesvirus ?
CrmA, p35 Posvirus, baculov. 1 MC066L Poxvirus ?
IAP Baculovirus 1 Vpr HIV-1 ?

MECANISMO DE MUERTE NO LIGADO A GRANULOS (Fas/Fas-L) (Abbas, Box 10-1)

Death Domains (dominios de muerte)
(Motivos de interacción proteína-proteína) Activación de
esfinfomielinasa
Célula
diana

Generación
Tc FADD Tc de ceramida
Fas-L Fas FLICE Fas-L Fas
Dominio de proteasa Proteasa
activada ?

Apoptosis Degradación enzimática Proteasas Proteasas

de la Célula de nucleoproteinas (Ced3/ICE-like) (Ced3/ICE-like)
diana (histonas, laminas) activas inactivas

FADD = Fas associated Death Domain (dominio de muerte asociado a Fas).

FLICE = FADD-Like IL-1b Converting Enzyme (proteasa convertidora de IL-1 parecida a FADD)
El receptor de TNF (TNF-RI) probablemente dispara un mecanismo de apoptosis similar ya que su dominio
citoplasmático se asocia a una proteína homóloga a FADD llamada TRADD (TNF-Receptor-Associarted
Death Domain).
 El timo genera un repertorio completo TH0 con homing selectivo en
órganos linfoides secundarios.
Cualquier célula del repertorio puede derivar a Th1 o Th2

T CD4
CD4 CD4
CD4 TCR HLA T CD4 HLA
(TH0) II TCR (TH0) II TCR
CD28 B7 CD28 B7 CD28
T CD4
Th1
(Th2 "armado")
Linfoc. B Linfoc. B “helper”

CD4
HLA
II TCR
B7 CD28
T 4 T CD4
Micob.
4 CD H0) (Th2 "armado")
D T Th1
B C
C R ( “helper”
T 8
T
L A C D2 Macrófago
H II
B7

HLA T CD4
Micob. CD
II 4 Th2 (Th1 "armado")
B7 TCR T
CD CD “Inflamatorio”
2 8 (T 4
H0) CD4
Ver transparencia
PROCESAMIENTO Y
Macrófago HLA
PRESENTACIÓN DE
ANTÍGENOS Th2

Micob.
TCR

TCR
“helper”

T
CD8

TCR
CD4
II
Linfocito B

CD8
Th2

CD4
“helper”

Micobacterias B7 CD28
T

TCR
Micob.
CD4 Lehismania
Salmonella
Virus Th1
Replicantes

TCR

Bacterias Macrófago “inflamatoria”

Parásitos

T
CD8

Brucella ... Macrófago

No replicantes

Proteínas
TCR

Polisacáridos Otras
células
etc.
 ¿Cómo decide el S.I. que la respuesta sea tipo Th1 o tipo Th2?
Primercontacto
con el Ag: CD4+ IL-4
IL-4
CD1+ IL-5
IL-6 IL-6
(NK1.1) IL-10
1a IL-10
TGF-b
CD4 T CD4
HLA HLA Th2
II TCR CD4 II TCR "Armado"
(TH0)
B7 CD28
- Th1
B
B7 CD28

(Acción de los IL-4 “helper”

Linfoc. B adyuvantes) IL-10 Linfoc. B

1b
CD4+ IL-4 “helper”
CD1+ IL-6 CD4
HLA Th2
(NK1.1) IL-10
II TCR "Armado"
B7 CD28
2 Concentración de péptido
en APC y afinidad por TCR: T 4

Alta concentración y alta D4

CD H0)
T
- Th1
Micob.
IL-4
IL-5
IL-4
C R (
afinidad: respuesta Th1 T C
8 IL-10 IL-6
(¿Bacterias?) L A C D2 Macrófago IL-10
Baja concentración y baja H II TGF-b
afinidad: respuesta Th2 B7
(¿Alergenos?) HLA
CD Th2
Micob. 4
II IFN-g
3 La mayoría de las respuestas B7 TCR
CD C
T - “Inflamatoria”
son Th1 + Th2 2 8 (T D 4
H0) CD4
Macrófago HLA Th1
Micob. "Armado"
IL-12 II TCR
Las células Th1 (como las Tc)
IFN-g B7 CD28
cumplen su misión en la
periferia, las Th2 en los
Macrófago IL-2
órganos linfoides
secundarios IFN-g
(ver 2º contacto con Ag.) TNF-b
 CD40
Segundo contacto
de Th1 con el antígeno
CD4 IL-2
Encuentro de Th1 armado con macrógafo HLA Th1
Micob. IFN-g
infectado en cualquier lugar: II TCR "Armado"
El macrófago es activado por dos TNF-b
B7 CD28
señales:CD40 y R-IFNg

Algunos gérmenes han desarrollado mecanismos para Macrófago R-IFN-g

evitar su digestión:
- Impiden la acidificación de las vesiculas, por lo que las
proteasas no pueden actuar.
- Inhiben la fusión de lisosomas y fagosomas.
- Tampoco pueden ser alcanzados por Ac. ni linfocitos Tc.
CD40 (este estímulo lo hace sensible al
Al contrario de lo que ocurre con Tc, L-CD40 e IFN-g son que recibe por R-IFN-g)
sintetizados de novo, por lo que el linf. Th1 permanece
en contacto con el macrófago durante horas.
L-CD40

Los macrófagos activados son muy destructivos. CD4 IL-2

HLA Th1
Su activación está limitada por:
Micob. "Armado" IFN-g
- Vida media corta del RNAm de IFN-g II TCR
- Producción (por TH1) de una proteína que degrada TNF-b
su RNAm de IFN-g B7 CD28

Macrófago IFN-g
Encuentro en ganglio de Th2 armado con linfocito ACTIVADO
B específico:
Respuesta inmune humoral de anticuerpos
opsonizantes (IgG1 e IgG3)
Proteína de
En el proceso de activación el macrófago expresa el micobacteria
receptor para TNF y secreta TNF-a, que sinergiza con o de parásito
IFN-g.
IL-4
Además aumenta la expresión de moléculas HLA de CD4 IL-5
clase I y II, actuando mejor como APC. HLA Th2
IgG1 "Armado" IL-6
II TCR
B IL-10
El macrófago activado produce IL-12. que desvía las IgG3 B7 CD28 TGF-b
Th0 hacia Th1 (retroalimentación).
 T
Ig
B B
C
D
NK 5
CD CD4
16
a:b
LGL g:d
Linfocitos no T, no B CD8 CD4 / CD8 = 2
a:b
Población nula
Tercera población CD3

Antibody-Dpendent
Cell-mediated
Cytotoxicity
Funciones de las células NK en la inmunidad adaptativa
(Este fenómeno no es
exclusivo de las células
NK) Fenómeno ADCC Muerte modulada por HLA
Inhibición No inhibic.

NK, ~LT

FcgRIII
KIR y otros

(CD16)

HLA-I

b2-M
Importancia funcional de las células NK
wCompás de espera antiviral hasta la generación de Tc específicos (las
células NK poseen actividad antiviral directa).
wMecanismo de seguridad para microorganismos que manipulan la Célula diana Célula diana
expresión de HLA de clase I.
wActividad antitumoral cuando disminuye expresión de HLA-I La ausencia de moléculas HLA-I es la
Sólo se ha descrito, hasta el momento, un paciente con disminución de la
señal que indica a la célula NK que debe
actividad de NK. atacar a la célula diana.
 NK-2
sobre NK

·Aumenta la capac. citolítica de NK Proliferación

Proliferación
·Aumenta expres. HLA I

·Aumenta expres. HLA-I y II (si

Transformación en LAK
expresa II) (Lymphokine-activated killer)
·Activa la capacidad lítica de los
sobre otras células

macrófagos
·Aumenta expres. FcgRI ­ Actividad
·Aumenta la difer. de linf. T a Th1 citolítica
·En linf. B provoca el cambio de clase en NK
a las Igs que se unen por Fc a activadas
fagocitos y NK.
·Activa a los neutrófilos
Activa el endotelio vascular ®
A

facilita la adh. y extravasación celular.

cc
io
ne
s
de
IF
N

ADCC baja afinidad

-g

para IL-2

NK
IL-15 R
Perforina IL-15 R
Granzimas FcgRIII (CD16)
IL-12 R

IL-2-Ra
IFNgRa

IL-15-Ra
IFNgRb

Ig-like
IL-15-Ra

Lectin-like
ILTs
KIR
IL-2 Receptor IL-2
p35
p40

en linf. T
IgG1
IL-15 14-17kD
IgG3 17kD
IFN-g
IL-12

ver 2 péptidos
IL-2 identicos
transparencias Cr. 4
siguientes TNF (18kD) T
con distinta
glicosilación
c. dendrit.
 Receptores que modulan la actividad de NK Inhibición

1) KIR (Killer Ig-like Receptors, Receptores asesinos parecidos a las Igs.) NK, ~LT

KIR
Antes la sigla KIR significaba Killer Inhibitory Recepetor,
pero se cambió al observar que no todos los KIR inducian HLA-I
inhibición. Familia KIR2D KIR3D
Subfamilia KIR2DL KIR2DS
Son codificados en el cromos. 19 por al menos 12 genes (p58) p50 (KAR) KIR3DL KIR3DS
b2-M
diferentes, que pueden no estar uniformemente
distribuidos en la población. Miembros KIR2DL1-4 KIR2DS1-5 KIR3DL1 KIR3DS1
(p70) Célula diana
KIR3DL2
Existen dos familias dependiendo de que tengan 2 o 3 (p140)
dominios de Ig y cada familia se puede subdividir en L y S ITAMs
dependiendo de la longitud de su dominio citoplasmático Ejemplo ITIMs NK ITAMs NK ITIMs NK NK
(L = Long, largo, S = Short, corto). Una sola célula NK de Dap12 Dap12
estructura
puede expresar varios KIR.

Cada receptor KIR parece reconocer un grupo de alelos que comparten características con el dominio a1 de HLA-I. La
región más importante de reconocimiento va de Aa77 a Aa83.

El Aa 44 es importante para la interacción de KIR2DL1 y KIR2DL2 con ciertos HLA-C.

Aunque aún no está confirmado los KIR p58, p70 y p140 pueden inter actuar también con moléculas HLA-Ib, como HLA-G.

Los KIR2DL y KIR3DL poseen dos dominios ITIM* citoplasmáticos que tras la fosforilación de la tirosina reclutan a
protein-tirosin-fosfatasas (SPH1 y SPH2) que están involucradas en la inhibición de las NK.
* ITIM = Immunereceptor Tyrosine-based Inhibition Motif
(Motivo de inhibición del inmunroceptor basado en tirosina)

Los KIR con fragmentos citoplasmáticos cortos, aunque tienen regiones extracelulares idénticas a los ya vistos, carecen
de ITIMs y pueden activar a las NK. El motivo de activación (homólogo de ITIM en la inhibición) no lo proporciona esta
molécula sino otra con la que se ha visto está asociada. Por ejemplo, KIR2DS se asocia a dímeros de DAP12 unidos por
puentes s-s. DAP12 es una proteína de 12kD similar a la cadena theta del TCR (z) y contiene ITAMs, que son motivos de
activación. Por este motivo DAP12 se llamó antes KARAP (Killer Activating Receptor Associated Protein).

La DAP12 fosforilada recluta a tirosin quinasas como ZAP 70 y Syk, lo que pone en marcha la cascada de activación.

Al menos algunos de los receptores activadores también reconocen a moléculas HLA en la célula diana, aunque con una
afinidad menor que los inhibidores.
 Receptores que modulan la actividad de NK

2) ILTs (Ig-Like Transcripts) = LIRs (Leucocyte Ig-like Receptors)

Son glicoproteínas codificadas por varios genes del cromosoma 19, que forman un cluster con los genes de KIR.

Los ILTs contienen 2 o 3 dominios Ig-like y algunos son polimórficos.

Varios ILTs contienen ITMs citoplasmáticos:

PILT2 (LIR-1) e ILT4 (LIR-2) interactúan con un amplio espectro de moléculas HLA-I, incluida HLA-G.
PILT2 se expresa en subpoblaciones de NK, T, B y macrófagos.
PILT4 se expresa en monocitos y macrófagos.
PILT2 cuando se acopla al HLA apropiado inhibe a NK y Tc y en B y macrófagos impide la movilización del Ca++

3) Otras moléculas Ig-like (ligandos desconocidos)

LAIR-1 (p40) se encuentra en varios tipos de leucocitos en los que induce inhibición.

P46 solo se encuentra en NK e induce activaión.

Log genes codificadores de estas moléculas se encuentran en el crom-19

4) Receptores Lectin-like (CD94-NKG2)
CD94 y NKG2 son glicoproteínas de membrana, codoficadas en el cromosma 12, que poseen un dominio extracelular tipo CRD (carbohydrate
recognition domain). Se expresan en KN y ciertas subpoblaciones T.

CD94 se ensambla covalentemente con distintos miembros de la familia NKG2 (NKG2A y NKG2B a NKG2F). Existen hodímeros CD94-CD94 de
papel fisiológico incierto.

CD94-NKG2A es un receptor inhibidor acoplado a tirosin fosfatasas a través de los ITIMs de la subunidad NKG2A.

CD94-NKG2C carece de ITIMs y es un receptor estimulador unido a DAP12 vía un residuo transmembrana cargado.

Unas NK expresan CD94-NKG2A, otras CD94-NKG2C y otras ambos.

Existe poca información de NKG2D y NKG2F. NKG2E puede ser activador.

CD94-NKG2A se creyó al principio que podría reconocer a un amplio espectro de moléculas HLA, incluida HLA-G1. Hoy se sabe que su ligando es
HLA-E

La molécula HLA es estabilizada en la superficie celular por un mecanismo dependiente de TAP, mediante péptidos procedentes de la secuencia
señal de otras moléculas HLA.

El reconocimiento de HLA-E por CD94-NKG2A puede estar influenciado por los nonámeros que presente HLA-E. De esta forma CD94-NKG2A
puede monitorizar la biosíntesis de otras moléculas HLA de clase I, un proceso que puede alterarse en infecciones virales y ciertos tumores. KIR
puede jugar un papel suplementario al de CD94-NKG2 en esta monitorización.

Existe un posible papel importante en decidua para explicar la aceptación del feto.