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SEM-2

2
020
Cr
omat
ogr
afí
aLí
qui
da(
HPLC)

Enlac romat ografíalíquida,lafas emó vilesu nlíquidoquefl uyeat ravésdeu nac olumnaqu e
conti
e neal afas efi j
a. Las eparaciónc romat ográficaenHPLCe selresul
t adodel asinteraccio
nes
específicase ntrelasmo l
é cul
asdel amu estrae nambasfas es,mó vi
lye s
tac io
nar i
aadi ferenciadela
cromat ogr a
fíadegas e s,l
ac romat ografíadel í
quidosdealt orendimiento( HPLC, dehigh-
perfor manc eliqui
dc hr omat o
grap hy)noe stálimitadap o
rlav o l
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li
dadol ae stabili
dadt érmicadela
mu es
t ra.LaHPLCe scap azdes e p
ar armac r
omo léculasyesp eci
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ónicas
, productosnat u
raleslábi
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,
mat e
r ial
e spoliméricosyu nagranv ar i
edaddeo trosgruposp o
lifunci
onalesdeal top esomo l
ecular
.
Conu nafas emó vill
íqu i
dai nteracti
v a,otrop aráme troseenc uentradisponibl
ep aralas el
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ivi
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enadic ió
nau nafas ee s
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onariaac tiv
a.LaHPLCo freceu namayo rv ar
iedaddefas ese staci
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as,
l
oqu ep e
r miteu namayo rgamadee st
asi nteraccionessel
ec ti
vasymásp os i
bil
idadesp arala
separac i
ón.

HPLC pr
epar
ati
va

Eslatécni
caesco
gidaparaaisl
amientoypuri
ficacióndeproducto
sdev al
orenlasindu st
rias
quí
micasyfarmacéuti
casasícomoe nl
abiot
ecnologíaylabi
o quí
mica.Lacro
mat o
gr afíaprepar
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e ndeunampli
orangodeap l
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sl
amientodeu ncomp u
estopurodeuname z cl
ade1 00g.
FUNDAMENTO

Lacromat ografíalí
qu i
da(HPLC) ,esu nat é
cnic
au t
ili
zadap arase
p ararlo
sc omponentesdeu na
mezcl
a. Consis
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acionarianop o
lar(col
u mna)yunafas emó vi
l.Lafasee s
t ac
ionar
ia
essí
li
c aqu esehat ratadoc o
nRMe 2
Si Cl.Lafasemó vilactúadepo r
tadordel amue s
tra.
Lamu es
tra
ensoluci
óne sinyectadae nlafasemó vi
l.Loscomponentesdelasolució
ne migrandeac uerdoalas
i
nteraccionesno-covalentesdelosco mpue s
tosconlaco l
umna.Estasinterac
c i
onesquímicas,
det
er minanlas epar
ac ió
ndel osconten i
dose nl
amu estra.Lauti
li
zacióndelosdiferentesdetectore
s
dep
ende rádel anatu ral
ezadel oscomp uestosadeterminar.

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5ºC.

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i.
CROMATOGRAFI
ADEGASES

Apes
ardequ e, co
moyas ehai ndicado,lacromatografíae sbásic
ame nteu nat écni
cades eparaci
ón,
s
ugrancapacidadp arareso
lvermu e s
trascomplejashac onducidoau ti
li
zar l
ac adav e
zmasc o
mo
t
écni
caanalí
tica.Estautil
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ación,hac onduci
doalde sarrol
lodeu nainstrume ntació
n, queu ti
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zando
s
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ónp o
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uci
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p uedeo p
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are ncont i
nuo,conmayo reficac i
ae nlas e
p araci
óny
co
nunmayo rcontroldelascondicionescromatográficasparaincreme ntarlar eproducibil
idaddelos
r
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tado
s.

Entrel astécnicasc ro matográfi casu ti

lizadasc onfine sanalíti
cos,l
ac romat ografíadegas e ses
pro
babl ement elat é cnic
ademásamp li
au t
ili
zación;ningu nat é
cnicaanalíti
cap uedeo frecers u
capacidaddes e
p ar aciónos use nsibil
idadal ahoradeanal i
zarcomp uestosvoláti
les.
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e ,
el
hechodequ econe stat écni
c alasme zclass eansep arada senfas egas eo
s a,
estableceloslí
mi tesdes u
uti
li
zac ió
n,quee s taránmar cado sfu nda me ntal
me ntep o rlaestabil
idadt érmicadel oscomp uestosa
sep
ar ar .
Porloge ne r
al,lautili
zac ióndel ac romat ografí adegas ese s
tár estr
ingidaal ase paraci
ón
dec o
mp ues
tosc onu np esomo l
e cularme norde1 000au nat emperaturamáx imadet r
abaj ode
aproxi
madame nt e4 00EC;de ntr odee stosl í
mites,comoyas ehame ncionado,laú ni
cal i
mitac i
ón
exi
stent eserálae stabil
idadt ér micadel amu e
stra.

Parareali
zarunas e
paració
nme diant ecromat o
gr afí
adegas es,
s einyectaunap equeñac anti
dadde
lamuestraas e
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r ri
e ntedeu ngasi ne r
teae l
evadat emp e
ratura;estac o
r r
ientedegas
,
atr
aviesaunac ol
umnac r
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sc omponentesdel ame zcl
ap orme diodeun
mecani
smodep arti
ci
ón(cromat ogr afíagaslíqui
do ),deads or
ción(c
r omatografíagassó l
ido)o,e
n
muchoscasos,pormediodeu name zcladeambo s
. Losco mponentesseparados,eme r
ge rándela
col
umnaai nterval
osdi
s c
retosyp asar ánatravésdeal gúnsis
temadede t
ecciónadecuado ,obi
en
ser
ándirigido
shac i
aundi s
positi
voder ec
ogidademu estr
as.
Pr
inc
ipi
osdel
atéc
nic
a

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gr afíadegaseslamuestr
asev o
lat
il
izayseinyect
ae nlacabezadeunacolu
mna
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omatográfica.Laelu
ció
ns epr
oduceporelfl
ujodeu nafas
emó vi
lquee sungasine
rte,ya
di
fere
nciadel amayo r
íadelosti
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a,l
afasemó v
ilnointer
acci
onaconlas
mol
écul
asde lanali
to;s
uú ni
cafunci
ónesladetransport
arelanal
it
oat ravésdelacol
umna.

Re s
pectoal ac romatogr
afíalíqui
da, l
acromatografíadegas est ienelaventajadedi sponerde
detectoresmu chomásuniv
e rsal
es(pore j
emplo,eldeionizacióndel l
ama).Ade más,paranu mer o
sas
apli
caciones,losmé to
dossonmáss imples,másrápidosymáss e nsiblesqueloscorre
s pondientesala
cromat o
gr afíalíqui
dadealtar e
soluci
ón.Lainstrumentac i
ónr e quer i
daparacr o
mat ografíadegas e
s
tambiéne smu c homássencil
laye c
onó mic
aqu elae mpl
e adae nHPLC. Si
ne mbargo,enc romatografí
a
degas es,lainfluenci
adelat emperaturasobreladistri
bu ció
nde le qui
li
bri
oe sconsi
de rable,
a
diferenciadel ac r
omatografíalí
quida.Porel
lo,l
ac romat ografí adegas espresentalimitaci
onesen
trescasos:

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mp ues
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covol
áti
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,ge
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sdep e
s omol
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0u.m.
a.
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squ esee ncuentr
ane nfo rmaióni
ca( pue
stoquesonenge neralpocovolátil
es)Po
re s
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azón,l
ac romatografíadegas ess ee mple
ac u andolosco
mp onentesdel ame z
clap ro
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v
oláti
le
sos emivol
átilesyt é
r micame nteestablesat emperat
u rasdehas ta350-400 º
C. Encambio,
c
uandolosc o
mp uestosaana l
izarso np o
cov o
lát i
lesy/otermolábi
les,l
at écni
casep arat
ivaadecuada
s
ueleserlacromatogr afíal
íquidadeal tar es
o luci
ón(HPLC).
Ame nudolac ro
mat ografíadegasesse
e
mp l
eap araconfir
mardel ap resenciaoau s
e nciadeu nco
mp uestoenu namu estr
ade t
e r
minada.

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  Deri
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