SESIÓN N° 3

Crecimiento, fisiología, metabolismo,

nutrición y respiración microbiana
 TEMARIO
1. Crecimiento, fisiología microbiana: catabolismo, anabolismo.
✓ Requerimientos del crecimiento
✓ Obtención de cepas puras
✓ Preservación de cultivos
✓ Crecimiento de cultivos

2. Metabolismo microbiano
✓ Obtención de energía: Fermentación: Principales rutas fermentativas.
✓ Respiración Bacteriana: Ciclo de Krebs, sistemas transportadores de
electrones.

3. Actividad Virtual

2
LOGRO DE LA SESIÓN

Al finalizar la sesión el estudiante conoce el metabolismo

microbiano, nutrición bacteriana y crecimiento bacteriano,
mostrando solvencia y capacidad de análisis para la
resolución de casos.
 Crecimiento Microbiano

Requerimientos del Obtención de cepas

crecimiento puras

Preservación de Crecimiento de
cultivos bacterianos cultivos bacterianos

4
 Requerimientos del crecimiento

Requerimientos Requerimientos
Físicos Químicos

Temperatura C, N, O, P, S

pH Elementos Traza

Presión osmótica Factores orgánicos

5
 Requerimientos Físicos
Temperatura

• Microorganismos se clasifican
de acuerdo a sus preferencias
de rango de temperatura.
• Psicrófilos
• Psicrótrofos
• Mesófilos
• Termófilos
• Hipertermófilos
• Cada especie bacteriana crece
a determinados mínimos,
óptimos, y máximos de
temperatura.

6
 Requerimientos Físicos

pH Presión Osmótica
Plasmólisis

• Mayoría de bacterias crecen muy

bien en pH 6.5 – 7.5.

• Bacterias acidófilas:
tolerantes a pH ácido.

• Hongos y levaduras pueden crecer

a pH mayores a los de bacterias,
pero crecimiento óptimo se da ¿Bacterias halófilas?
entre 5 – 6.

7
 Requerimientos Químicos
C, O, N, P, S

• Fosfatos: ADN,
ARN, ATP
• Proteínas: N, S
• Estructuras: C, P.

8
 Requerimientos Químicos

Elementos traza

• Esenciales pero en pocas cantidades

• Algunos son: Cu, Co, Mn, Fe, Zn, Mo.
• Algunas bacteria necesitan mas que
otras.

9
 Requerimientos Químicos
Neisseria
Factores de crecimiento orgánicos

• Son compuestos orgánicos que son esenciales para

organismos pero que no pueden sintetizar por ellos
mismos.
• Ejemplos:
• Vitaminas
• Aminoácidos
• Purinas
• Pirimidinas
• Ejemplo: Neisseria spp. requiere para su crecimiento
al menos 40 ingredientes adicionales, incluyendo 7
vitaminas y todos los 20 aminoácidos.

1
0
 Crecimiento de cultivos bacterianos

División bacteriana Tiempo generacional

Fases de crecimiento Medición de crecimiento

Estimación de número de bacterias por métodos indirectos

División bacteriana Fisión binaria, gemación (pocas), conidiosporas
(Streptomyces sp.)

Crecimiento Microbiano 12
 Tiempo generacional
Tiempo requerido para que la
célula se divida en dos
(población se duplique)

• Varía de acuerdo a cada organismo y

variables ambientales.
• Mayoría de bacterias: entre 1 a 3
horas.
• E. coli: cada 20 minutos en
condiciones favorables.
 Fases de crecimiento
• Periodo de crecimiento, escala
logarítmica.
• Reproducción celular activa.
• Sin división o poca división. • Preferido para procesos industriales.
• Duración: 1 hora a varios días.
• Células están activas, con intensa
actividad metabólica: producción de
enzimas, y otras moléculas. • Gran número de bacterias, el
crecimiento se ralentiza.
• Estabilidad poblacional: Nuevas células
se balancean con células muertas.
• Número de células muertas excede al
número de células nuevas (por división).
• Población reducida a pequeña fracción.
Crecimiento Microbiano 14
 Fases de crecimiento

15
 I. Directa
Medición crecimiento bacteriano
II. Indirecta

• Usualmente medidos como Medición directa de crecimiento

“número de células por bacteriano
mililitro” de medio líquido, o
“número de gramos” en
material sólido.
• Se cuenta una muestra, no 1. Conteo en Placas
toda la población. 2. Filtración
3. Número mas probable (NMP)
4. Conteo directo al microscopio

Crecimiento Microbiano 16
I. Medición directa de crecimiento bacteriano

1. Conteo en Placas

• Ventaja: mide número de células viables

• Desventaja: toma tiempo
• Se asume: una colonia formada proviene de una sola célula (¿es
verdad?)
• UFC: unidad formadora de colonia
• Conteo de colonias en placas: entre 25 a 250 (recomendado).

Diluciones seriadas Método de vertimiento

Método de propagación
 Diluciones seriadas

• Inóculo original es
diluido en una serie
Inóculo de diluciones por
original tubo.

• Cada tubo tiene una

décima parte del
número de células
del tubo anterior.

• Muestras de los
tubos son
inoculadas en
placas Petri, y
colonias son
contadas
 3
Método de vertimiento

1
Homogenizado
2 y mezcla

4
Se coloca de
0.1 a 1ml del
Colonias crecen
inóculo original
Adición del encima y dentro
medio nutritivo del medio
en agar sólido
 3 Tiempo
Método de propagación prudente para
crecimiento

4
Se coloca de
0.1 a 1ml del Colonias crecen
inóculo original encima de la
en medio sólido Esparcir el superficie del
inóculo sobre la medio
superficie.
 I. Medición directa de crecimiento bacteriano

2. Filtración
• Cuando cantidades de
bacterias son
pequeñas.
• Al menos 100ml de
agua pasados a través
de membranas filtro.
• Filtro es transferido a
medio nutritivo.
• Usualmente usado en
detección y numeración
de bacterias coliformes
(indicador de
contaminación fecal)
 Medición directa de crecimiento bacteriano
“Mayor número de bacterias en una muestra, mayor
dilución es necesaria para reducir la densidad al punto
3. Número mas probable (NMP) en el cual ninguna bacteria crece en diluciones”
• Cuando cantidades de bacterias son
pequeñas.
• Técnica de estimación estadística.
• Cuando bacterias no crecen en medio
sólido.
 I. Medición directa de crecimiento bacteriano

4. Conteo directo al microscopio Conteo: todas las células en

25 cuadrantes con 3 cuadrantes son contadas.
áreas conocidas
1

Muestra se coloca en
cámara de lectura
Neubauer por acción
de capilaridad.

Sección transversal de la
cámara. Profundidad
2 debajo de cubierta es 4 Volumen del liquido dentro de un
conocida, áreas de cuadrado largo es: 1/1,250,000
cuadrantes son de un mililitro.
conocidas.
 II.Medición indirecta del crecimiento bacteriano

• No siempre es necesario contar directamente el número de bacterias.

• Se puede estimar el número de bacterias por métodos indirectos

Turbidez Actividad Metabólica Peso seco

Bacterias crecen en Asume que la cantidad de un

medio líquido, el medio producto metabólico (CO2, Para bacterias filamentosas y
se vuelve mas turbio o ATP, DNA) es proporcional al mohos. Son removidos del
“nuboso”. número de bacterias medio de cultivo, filtrados
Medición de turbidez con presentes. para remover materiales
Espectofómetro o extraños, secados, y pesados.
colorímetro.
TURBIDEZ
 ANABOLISMO CATABOLISMO
Síntesis de compuestos Degradación de compuestos
complejos formando otros
complejos a partir de más
sencillos. Requiere de METABOLISMO más simples. Libera energía.
energía.

ATP
Energía
= (Adenosin
Trifosfato)
 ✓ ¿Qué compuestos serían degradados?
✓ ¿Qué compuestos serían sintetizados
o formados?
✓ ¿De donde saldría esa energía para
realizar las actividades metabólicas?
✓ ¿Cuántas rutas metabólicas existirían
para formar o degradar compuestos?

2
7
Metabolismo Microbiano
Rutas Metabólicas
 Moléculas que aceleran la velocidad de una reacción
Enzimas química, y por lo general son de naturaleza proteica.

Sustrato
Productos

Sitio activo

1 Enzima 2 Complejo 3 4 Enzima

Enzima-Sustrato

Nota: Todos los nombres de las enzimas terminan en –asa. Ejemplos: catalasa, carboxilasa,
ATPasa, oxidasa, etc.
Cofactor

Algunos cofactores de enzimas:

• Vitamina B1: parte de coenzima carboxilasa

• Vitamina B2: coenzima de flavoproteinas
• Biotina: en fijación de dióxido de Carbono
• Ácido fólico: Usada en síntesis de purinas y pirimidinas

Inhibidor
Algunos inhibidores de enzimas:

• Arsénico
• Mercurio
• Cianuro
• Productos de la reacción enzimática
• Otros
 Catabolismo de Carbohidratos

• Mayoría de microorganismos oxidan a

los carbohidratos para obtener energía
• Carbohidratos: primer recurso de
obtención de energía
• Glucosa: carbohidrato más común
usado por células.
• Dos procesos de obtención de energía
de Glucosa:
• Respiración celular
• Fermentación.
• Paso previo a obtención de energía:
Glucólisis.
 Etapas de la respiración celular
Durante la respiración celular, el combustible (como la glucosa) es oxidado
y el oxígeno es reducido.

2. Ciclo de Krebs: Completa la degradación

de la glucosa. Produce NADH y FADH2

1. Glucólisis: 3. Fosforilación
Rompe la oxidativa:
glucosa en dos Sintetiza la
moléculas de mayor parte del
piruvato ATP a partir de
reacciones
redox
Figure 2-86 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
 Glucólisis
Cada uno de los 10 pasos que se
muestran es catalizado por una
enzima diferente. La glucosa de 6
carbonos, se rompe en dos azúcares
de 3 carbonos. A partir del paso 6,
se sintetizan moléculas de ATP y
NADH.

Figura 2-70 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)

 Glucólisis
4
1

3 6
7
Piruvato

Glucosa
Piruvato

9
36
 Proceso generador de ATP en el cual las moléculas son oxidadas y el
Respiración celular aceptor final del electrón proviene del exterior de la célula y es, por lo
general, una molécula inorgánica.

Respiración aeróbica

• El aceptor final de
electrones es el Oxígeno

Respiración anaeróbica
• El aceptor final de
electrones es una molécula
inorgánica diferente al
Oxígeno, rara vez una
molécula orgánica.
 • Piruvato es
convertido en
Acetil-CoA

• Acetil-CoA entra al
Ciclo de Krebs
• Los NADH y FADH2
provenientes del Ciclo de
Krebs van hacia la
cadena transportadora
de electrones.

• Último receptor de
electrones: Oxígeno

• Se genera moléculas de
ATP

Por Respiración Aeróbia:

1 molécula de glucosa genera 36 - 38 ATPs

39
 Respiración anaeróbica

• El aceptor final de electrones es una sustancia inorgánica diferente al Oxígeno.

• Pseudomonas, Bacillus: aceptor es el ion nitrato

(𝑁𝑂3−), y es reducido a nitrito (𝑁𝑂2−), óxido
nitroso (𝑁2𝑂), o nitrógeno gaseoso (𝑁2)

• Desulfovibrio: usa sulfato (𝑆𝑂42−), y forma

hidrógeno de sulfuro (𝐻2𝑆)

• Algunas arqueas usan dióxido de carbono (𝐶𝑂2), Pseudomonas

para formar metano (𝐶𝐻4)
 Fermentación

• No requiere oxígeno (pero puede ocurrir en su

presencia)

• No requiere el Ciclo de Krebs ni tampoco la

cadena transportadora de electrones

• Usa una molécula orgánica sintetizada en la

célula como aceptor final del electrón

• Produce pocas cantidades de ATP

• Ventaja: Producción muy rápida de ATP

• Dos productos finales: Ácido láctico o Alcohol

Fermentación Láctica

Fermentación Alcohólica
 Ácido
Fermentación Pirúvico

Streptococcus,
Escherichia,
Organismos Lactobacillus, Saccharomyces Clostridium
Salmonella
Enterobacter
Bacillus

Etanol, ácido
Ácido butírico, Etanol, ácido
láctico, ácido
butanol, acetona, láctico, ácido
Productos de fórmico,
Etanol y dióxido alcohol succínico, ácido
la Ácido láctico butanoediol,
de carbono isopropílico, acético, dióxido
fermentación acetona, dióxido
dióxido de de carbono,
de carbono,
carbono hidrógeno
hidrógeno

18
 Catabolismo de Lípidos y Proteínas
Lípidos
• Triglicéridos: ácidos grasos + glicerol
• Lipasas: descomponen ácidos grasos y glicerol.
• Cada uno es metabolizado por separado.
• Entran en la glucólisis (Glicerol), y producción de
Acetil-CoA (Ácidos grasos).

Proteínas
• Proteasas y Peptidasas: enzimas extracelulares que
degradan proteínas y polipéptidos a aminoácidos.
• Aminoácidos cruzan membrana celular
• Aminoácidos pierden grupo amino, que es
convertido en ión amonio (𝑁𝐻4)
• Además aminoácidos se descarboxilan y
desulfurizan, entrando al Ciclo de Krebs.
MetabolismoMicrobiano 19
 Fotosíntesis

• Conversión de la energía lumínica en energía química.

• Reacciones dependientes de luz, y reacciones independientes de luz.
• Reacciones dependientes de luz: Fotofosforilación.
• Reacciones independientes de luz: Ciclo de Calvin-Benson

Fotosíntesis Oxigénica Fotosíntesis Anoxigénica

6𝐶𝑂2 + 12𝐻2𝑂 + 𝐿𝑢𝑧 → 𝐶6𝐻12𝑂6 + 6𝐻2𝑂 + 𝟔𝑶𝟐 6𝐶𝑂2 + 12𝐻2𝑆 + 𝐿𝑢𝑧 → 𝐶6𝐻12𝑂6 + 6𝐻2𝑂 +12S

Plantas Algas Cianobacterias Bacterias sulfurosas púrpura Bacterias sulfurosas verde

 Ciclo de Calvin - Benson

• A partir de Dióxido de
Carbono se llega a
formar G3P, el cual forma
a la Glucosa

• Esta reacción usa los

productos de la fase
lumínica

2 moléculas de
Gliceraldehído-3-
fosfato forman 1
molécula de Glucosa
 Fotosíntesis Anoxigénica

 Chlorobium – bacterias verdes del azufre

 Usan el pigmento verde clorofila
 Usan H2S (sulfuro de hidrógeno), S (azufre), Na2S2O3
(tiosulfato de sodio) and H2 como donadores de e-.
 Chromatium – bacterias púrpura del azufre
 Usan un pigmento carotenoide púrpura, con los mismos Chlorobium
donadores de e-
 Rhodospirillum – bacterias púrpura no del azufre
 Usan H2 y otros compuestos orgánicos como isopropanol,
etc. como donadores de e-.
 Reacción: CO2 + 2H2A -----> CH2O + H2O +2A
 …donde A no es el oxígeno
Rhodospirillum
Diversidad metabólica de organismos

Metabolismo Microbiano 27
Rutas metabólicas de uso de energía
Biosíntesis de
polisacáridos

MetabolismoMicrobiano 48
 Biosíntesis de lípidos

MetabolismoMicrobiano 49
 Biosíntesis de
aminoácidos

Metabolismo Microbiano 50
 Biosíntesis de
nucleótidos

MetabolismoMicrobiano 51
 La integración
del metabolismo

MetabolismoMicrobiano 52
¿Preguntas?
¿qué aprendimos hoy?
APLIQUEMOS lo
aprendido
 ACTIVIDAD VIRTUAL
❖ Luego de terminar esta sesión, continúa afianzando tus conocimientos en la plataforma virtual.
❖ El trabajo es grupal.

Responde las siguientes preguntas:

1. ¿Qué factores pueden afectar directamente el crecimiento de las coliformes (como Escherichia coli) en
medios de cultivo? Fundamente sus respuestas.
2. ¿Cuál de los métodos de medición de crecimiento microbiano explicados en clases considerarías que es el
mejor? ¿Por qué?
3. ¿Qué microorganismos fermentadores son usados en las industrias farmacéuticas o alimenticias? Cite al
menos 10 de ellos.
4. Definición 5 diferencias bioquímicas y/o morfológicas entre los géneros Staphylococcus y Streptococcus.
5. Mencione 3 pruebas bioquímicas que nos llevan a identificar Staphylococcus aureus.
6. Mencione 2 pruebas bioquímicas que nos llevan a identificar Streptococcus pneumoniae.
7. Explique por qué se utiliza el agar Thayer Martin para aislamiento del género Neisseria
8. Completar ANEXO 1 (lo encontrará en la última diapositiva de la presentación).
 ANEXO 1:
Completar la siguiente tabla con respecto al género Staphylococcus
¡Muchas gracias!