UNIVERSIDAD NACIONAL MICAELA BASTIDAS DE APURIMAC

UNAMBA
ESCUELA ACADEMICA PROFESIONAL DE INGENIERIA DE MINAS SUD SEDE HAQUIRA

UNIVERSIDAD NACIONAL MICAELA BASTIDAS DE APURIMAC

ESCUELA ACADEMICA PROFESIONAL:

INGENIERIA DE MINAS

TEMA: Diseño de un prototipo de biorreactor en miniatura para

un alto rendimiento. Bioprocesamiento automatizado.

CURSO: MINERIA Y MEDIO AMBIENTE

DOCENTE:

ESTUDIANTE:

 122362

Haquira - Cotabambas

2019
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DISEÑO DE UN PROTOTIPO DE BIORREACTOR EN MINIATURA PARA UN ALTO

RENDIMIENTO. BIOPROCESAMIENTO AUTOMATIZADO.

RESUMEN
Se describe un nuevo biorreactor en miniatura con un diámetro igual al de un pozo
único de una placa de 24 pocillos y su rendimiento de ingeniería como un fermentador
evaluado. La mezcla en el biorreactor en miniatura es proporcionada por un conjunto de
tres impulsores accionados mecánicamente a través de un microfabricado. El motor
eléctrico y la aireación se logran con un solo rociador de tubos. Los parámetros
fluoróforos sensibles se utilizan con sondas ópticas de fibra para El monitoreo continuo
de la tensión de oxígeno disuelto y un método óptico se emplean para monitorear la
concentración de biomasa celular durante fermentación. Se proporcionan mediciones
experimentales en el coeficiente de transferencia de masa volumétrica para la
fermentación de aire y agua y bacterias. Los datos se presentan para Escherichia coli.

La entrada de energía local y promedio, la tasa de disipación de energía y el tamaño de

burbuja se derivan de un análisis de la multifase fluir en el biorreactor en miniatura que
utiliza la dinámica de fluida computacional (CFD). Los coeficientes de transferencia de
masa volumétrica se pronostican utilizando el método de Higbie. Modelo de penetración
con el tiempo de contacto obtenido de las simulaciones de CFD de la turbulenta fluir en
el biorreactor. Los datos comparativos son a partir de experimentos paralelos realizados
en un fermentador convencional de 20 l (15 l de volumen de trabajo). Volumétrico
predicho y medido. Los coeficientes de transferencia de masa en el biorreactor en
miniatura están en el rango de 100 a 400 h - , típicos de los reportados para la
fermentación a gran escala. Corona de derechos de autor 2003 Publicado por Elsevier
Science Ltd. Todos los derechos reservados.
INTRODUCCIÓN.
La constatación de que hay aproximadamente 30.000 genes en el genoma humano ha
cambiado la investigación de descubrimiento de fármacos. Significativamente hacia la
proteómica y lejos de la genómica. Actualmente, los medicamentos disponibles en el
mercado apuntan a casi 500 de los cientos estimados de miles de proteínas humanas con
la expectativa de que este número aumentará por un factor de 10 a 100 en los próximos
años.
Por ejemplo, en el caso de Escherichia coli fermentación, mientras que una serie de
descubrimientos Las empresas ahora realizan rutinariamente la fermentación en una
placa de 24 pocillos. Producir pequeñas cantidades de proteínas para la cristalografía,
estudios, ampliación a fermentación de laboratorio, típicamente hasta 10 l, está
demostrando ser difícil de lograr. La capacidad de ampliar Dicha información y la
capacidad de generar datos de proceso. De las operaciones unitarias llevadas a cabo a
escala de micropocillos. Convertirse en temas importantes en la vía de desarrollo de una
nueva droga Esto ha proporcionado la motivación para algunos estudios recientes sobre
bioprocesamiento a escala de micropocillos, que incluyen La presente investigación
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tiene como objetivo describir el diseño de ingeniería de un biorreactor en miniatura y

evaluar su utilizar como fermentador.
Se ha utilizado el sistema automatizado de micropocillos agitados. En algunas de las
publicaciones recientes para obtener información de proceso en materiales biológicos.
Estos incluyen estudios sobre bacterias fermentación (Weiss, John, Klimant, & Heinzle,
2001b; Duetz et al., 2000; Duetz & Witholt, 2001), cultivos de células animales.
(Girard, Jordan, Tsao, & Wurm, 2001) y la biotransformación (Doig, Pickering, Lye, &
Woodley, 2001; Weiss, John, Klimant, & Heinzle, 2001a). En cuanto a la transferencia
de oxígeno. Se refiere, los datos limitados disponibles indican que la coeficiente de
transferencia de masa volumétrica en un micropocillo agitado (Weiss, John, Klimant, &
Heinzle, 2001b) es probable que Ser más bajo, al menos en un factor de 10, en
comparación con un convencional fermentador a escala. Walther et al. (1994) han
descrito un biorreactor en miniatura con un volumen de trabajo de 3 ml para cultivo
celular en un laboratorio espacial y Kostov, Harms, Randers-Eichhorn y Rao (2001) han
publicado recientemente.
En el presente estudio, reportamos datos de ingeniería para demostrar el funcionamiento
de un nuevo biorreactor en miniatura que tiene un Diámetro igual al de un pozo único
de un pozo estándar de 24 pocillos plato.
De teoría basada en simulaciones CFD de multifase fluida en el biorreactor en miniatura
y la penetración de Higbie Modelo para transferencia de masa.

METODOS Y MATERIALES.
Se utilizó aire-agua para establecer El rendimiento de ingeniería del biorreactor en
miniatura para operaciones de transferencia de masa y E. coli DH5 fue elegido como un
sistema de fermentación por su robustez y tolerancia a la contaminación. Biorreactores
en miniatura posteriores en nuestro laboratorio (no descrito aquí) está construido en
acero inoxidable. Acero con piezas que pueden ser completamente esterilizadas para
cultivo celular experimentos. La mezcla de los contenidos del biorreactor fue logrado
por medio de tres, impulsores de turbina 3at abiertos de 6 palas, Cada uno tiene un
diámetro de 7: 0 mm y una anchura de 1: 5 mm. Los impulsores fueron expulsados
desde la parte superior de la biorreactor con motor eléctrico microfabricado (Smoovy,
Suiza) con un diámetro de eje de 1 mm y un Control de velocidad variable (velocidad
máxima y par de15; 000 rpm y 2: 2 m Nm respectivamente). El fondo El impulsor se
colocó a aproximadamente 6 mm de la base de la cámara, la distancia entre dos
impulsores era 7: 5 mm y la distancia entre el impulsor superior y el La superficie del
líquido libre fue de 7: 0 mm El biorreactor estaba equipado. Con cuatro baNes de ancho
1: 8 mm y grosor 0: 6 mm El aire de un suministro de aire comprimido se expulsó a
través de un tapón de plástico perforado colocado en la punta de descarga de un solo
tubo de diámetro interno 1: 0 mm El sparger fue colocado directamente debajo del cubo
del impulsor inferior (Fig. 1). Los la velocidad del aire fluida se midió utilizando un
rotámetro de laboratorio estándar con una velocidad de 3 vatios en el rango de 0,2 a 100
ml min ofair (Barnant Company, IL, EE. UU.). El suministro de gas tuvo una conexión
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separada a través de una válvula de dos vías a un comprimido cilindro de nitrógeno que
permite realizar experimentos de transferencia de masa llevado a cabo como se describe
más adelante en esta sección.

S. R. Lamping et al. / Chemical Engineering Science 58 (2003) 747 – 758.

Fig. 1. Componentes principales del biorreactor en miniatura. Todas las medidas son en
mm.
En el presente estudio, la solución de pH se midió por un Sonda óptica utilizando el
método de Junker et al. (1988). El sensor de pH consistió en: una sonda óptica de
diámetro de fibra. 1: 5 mm (FCR-UV200F, Knight Optical Technologies Ltd., Surrey,
Reino Unido); Una fuente de luz pulsada de xenón (XE-2000) y una fuente de luz LED
azul (LED-475) acoplada a un Espectrómetro de múltiples canales (MC2000). El
3uorophor, Sal trisódica del ácido 1-hidroxipireno-3,6,8 -trisulfónico (HPTS, Sigma-
Aldrich, Dorset, Inglaterra) con un pK valor Se seleccionó of7.3 para los experimentos
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descritos aquí. Dos longitudes de onda de excitación diferentes de 405 y 460 nm fueron
usados. La intensidad de la fluorescencia se midió a longitud de onda de emisión única
de 520 nm. Una calibracion lineal La curva se obtuvo en 20 g l.−1 ofHPTS en agua
usando el Método de (Junker et al., 1988). Se utilizó el espectrómetro. Para monitorear
el cambio en la fluorescencia. La medición de la densidad de las células se logró
mediante la combinación de tres sondas ópticas de fibra, como se muestra en la Fig. 1.
Cada una fibra fue fabricado a partir de un único diámetro de núcleo activo de 600 m.
fibra. Se usó un fibra para entregar la luz producida por una fuente de luz de tungsteno
en miniatura para el biorreactor con- carpas Las otras dos sondas fueron utilizadas para
la recolección de luz del biorreactor, uno para luz transmitida (625 nm) y uno para luz
dispersa. Experimentos aire-agua: el rendimiento de la miniatura. El biorreactor se
evaluó inicialmente en 4 Condiciones a través de una serie de experimentos realizados
con aire agua. Los resultados de estos experimentos también permitieron Una base para
la comparación con biorreactores convencionales para Cuantas correlaciones están
disponibles (Smith, Van’t Riet, & Middleton, 1977; Van’t Riet, 1979; Ni, Gao,
Cumming,& Pritchard, 1995).
Fermentación: Todas las fermentaciones en el biorreactor en miniatura. Se realizaron
con E. coli, DH5 en modo batch a los 37C, una velocidad de flujo de aire de 1 vvm a
una velocidad del impulsor 1300, 1500 y 1850 rpm. No se hizo ningún intento en estos
experimentos. Para optimizar el proceso de fermentación, el objetivo era Demostrar que
la fermentación era alcanzable en miniatura. Biorreactor y obtención de ingeniería
básica y fermentación. Parámetros de comparación con la escala convencional
fermentación. Los datos para este último se obtuvieron en 20 l. (15 l de volumen de
trabajo) LH20L03 Biorreactor serie HI-CAT (Adaptive Biosystems Ltd., Progress
Business Park, Luton, REINO UNIDO). El pH se multiplicó por 4 al inicio de la oferta,
pero no se controló.
Las ecuaciones de momento de gas y líquido fueron acoplado por los términos de fuerza
interfacial debido a la fuerza de arrastre por la siguiente ecuación:

El tamaño de burbuja promedio se estimó a partir de la siguiente correlación (<biblio>):

RESULTADOS Y DISCUCIONES.
La potencia monofásica número, Np, se obtuvo integrando las simulaciones locales.
Tasas de disipación de energía en todo el volumen del recipiente y dividiéndolo por el
grupo. Pag. l norte N3D5. Así:
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Ec. (3) también se utilizó para predecir el promedio local y Entrada de energía para el
sistema de dos fases, gas-líquido, en el Biorreactor miniatura (simulaciones no
mostradas). Los resultados dio una relación entre el gas y el poder no gaseado, Pg/ P,
de0.8–0.9. La relación informada de Pg/ P varía entre 0.9 y 0.4 Dependiendo del tipo de
impulsor y número de gas fluir (Smith et al., 1977).
También se realizaron simulaciones de flujo para los 20 l. fermentador estándar
equipado con un conjunto de tres Rushton turbinas La curva de potencia monofásica de
CFD simulada predijo un número de potencia 6.0 para 3ow turbulento que Comparado
favorablemente con los valores publicados para el Rushton Impulsor de turbina (Uhl &
Gray, 1966).
Para que las condiciones de estado estable nunca se establezcan y cualquier. La
transferencia de masa que se produce se debe a la inestabilidad molecular discusion La
relación entre el coeficiente de transferencia de masa, KL, difusividad en fase líquida y
tiempo de exposición, t, es dado por L.

En un recipiente mecánicamente agitado, la teoría de KolmogoroL Se ha utilizado

turbulencia homogénea e isotrópica para obtener la siguiente ecuación para el tiempo de
renovación de la superficie, de la siguiente manera:

Donde la tasa de disipación de energía local, se obtiene de La simulación de CFD of3ow

en el recipiente. Combinando ecuaciones. (4) y (5) y su reorganización conduce a la
siguiente ecuación para la transferencia de masa en fase líquida local Coe5cient, KL.

El área de superficie local disponible para la transferencia de masa es dada por:

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Donde r Es la fracción del volumen de gas local. Utilizamos ecuaciones. (5) y (6) para
predecir la KA distribuciones en la miniatura. biorreactor. La figura 3 muestra la
distribución del volumen de gas. Fracción y KLL A en el recipiente para aire-agua. Los
pro4les mostrados en la Fig. 3 son para una velocidad de 2500 rpm y un aire 3ow tasa
de 1 vvm. Comparar estas predicciones con los experimentales datos, la transferencia de
masa volumétrica general (promedio) Coe5cient se calculó integrando los valores
locales sobre todo el volumen de trabajo del biorreactor en miniatura.
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Fig. 2. Simulaciones de CFD de distribuciones de velocidad líquida y tasa de disipación

de energía en el biorreactor en miniatura para una velocidad del impulsor de 2500 r:
p:m. Se asume que las propiedades del líquido son las del agua.
Así.
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La general K La, se predijeron para una gama de impulsor Las velocidades y la

velocidad operativa de air3ow de 1 vvm utilizada en nuestro experimentos Los
resultados se presentan y discuten a continuación. Aire-agua K L a, resultados: la
experimental k unos valores fueron Basado en el modelo bien mezclado tanto para el
gas como para el líquido. Fases, según lo sugerido por Dunn y Einsele (1975). Los El
modelo bien mezclado se considera apropiado para este caso porque de pequeño tamaño
del biorreactor en miniatura. Conforme a este modelo, K La, se obtiene de la sonda de
oxigeno Datos de respuesta por la siguiente expresión:

Donde C L Es una concentración de oxígeno normalizada por:

C L =(C∗−C)/C

El optrodo utilizado en la presente investigación tuvo una tiempo de respuesta, % (El

tiempo necesario para registrar el 63% de un paso a paso. cambio), de 42 s a 20 pag C,
medido utilizando un procedimiento estándar.
. Utilizamos un modelo de respuesta de primer orden recomendado por Badino,
Facciotti, & Schmidell (2001) en nuestro cálculo L Para tener en cuenta el tiempo de
respuesta de la sonda óptica de 4bre
Asi.

Donde C P Es la concentración normalizada de oxígeno disuelto. Medido por la sonda.

Sustituyendo a C L utilizando la ec. (7) Integración y reorganización da la siguiente
expresión. Tenedor K La:
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Donde t m=1/ K L a. Ec. (11) se resolvió para K L a un uso de Microsoft Excel en cada
medida de tiempo y los resultados. Promediado K L a se obtuvieron datos de aire-agua
en la presen- Ence cloruro de sodio para un rango de velocidades de impulsor. La Fig. 4
muestra los resultados representados en función de la energía media Tasa de disipación
en el biorreactor en miniatura. Para comparacion, CFD seleccionados valores simulados
de K L a También se muestran una. La línea continua en la Fig. 4 muestra la K L a
predicha L una base sobre la correlación de Van’t Riet (1979).
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Fig. 3. Simulaciones de CFD de distribuciones de velocidad de gas, fracción de

volumen de gas y K L a a en el biorreactor en miniatura para una velocidad del
impulsor de 2500 r: p: m y aire 3ow tasa de 1 v: v: m. Se asume que las propiedades del
líquido son aquellas agua salada.
Realizamos experimentos adicionales utilizando la norma. Biorreactor de 20 l (volumen
de trabajo, 15 l) en el que medimos K L a para aire-agua en función de la velocidad del
impulsor. Los La velocidad del flujo de aire en el biorreactor de 20 l se estableció en 1
vvm, equivalente a 0: 007 ms−1 (comparado con 0: 0005 ms−1 en la miniatura
biorreactor). Para comparar los resultados de los dos biorreactores. Por lo tanto, el
coeficiente de transferencia de masa volumétrica global los datos para cada reactor se
ajustaron asumiendo K L a una v 0: 2s, según lo recomendado por Van’t Riet (1979).
Los resultados se muestran en la Fig. 5 donde la línea continua se obtuvo de La
ecuación de Van’t Riet y las líneas discontinuas representan ± 40% desviaciones de ella.
La K L a Un valor para el biorreactor en miniatura caen consistentemente por debajo de
las del fermentador de 20 l, pero Las mejores líneas de 4t a través de los puntos de datos
para las dos escalas tienen la misma pendiente que muy cerca del exponente de (P /V)
en la ecuación de Van’t Riet. También es notable que mientras la K L a los datos para el
biorreactor en miniatura son más bajos que los La escala de 20 l de la diferencia está
dentro de la desviación esperada del 40%.
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Fig.
4. Coeficiente de transferencia de masa volumétrica global en función de la entrada de
potencia del impulsor por unidad de volumen. Las parcelas son para el biorreactor en
miniatura y refiérase al sistema aire-agua: () son datos experimentales y (•) son los
valores obtenidos de las simulaciones de CFD. La línea continua es la relación
informado por Van’t Riet (1979) basado en una revisión exhaustiva de K L a Un dato
para los impulsores de turbina Rushton. Las líneas discontinuas son la desviación de ±
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40%. de la ecuación de Van’t Riet debido a incertidumbres experimentales y diferentes

técnicas de medición.
Fig. 5. Coeficientes globales de transferencia de masa volumétrica (♦) para el
biorreactor en miniatura, se comparan bien con los obtenidos en un volumen de trabajo
de 20 l (15 l) (▄) fermentador. Los datos se refieren a aire-agua. Las dos escalas fueron
operadas a diferentes velocidades de gas superficial y los datos para las dos escalas
fueron traídos juntos asumiendo K L a α (v s )0.2 según lo recomendado por Van’t Riet
(1979). La línea continua y las líneas discontinuas se explican en el título de la Fig. 4.
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Fig. 6. Las curvas de respuesta óptica de 4bre para el oxígeno disuelto (6a) y
concentración de biomasa (6b) obtenida en el biorreactor en miniatura Se comparan con
los perfiles obtenidos en 20 l (15 l de volumen de trabajo) fermentador Los datos fueron
obtenidos durante la fermentación de E. coli.No. Se intentó ejecutar la fermentación en
el biorreactor en miniatura en las condiciones óptimas. La diferencia en el perfil de las
dos escalas. Se cree que se deben a diferencias en la configuración geométrica de Los
dos sistemas.
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Hemos desafiado a la miniatura biorreactor ejecutando un experimento en el que

medimos La tasa de transferencia volumétrica de oxígeno, K L a, en agua con el El
suministro de aire al rociador se desvió para que cualquier oxígeno. La transferencia se
produjo completamente a través de la aireación de la superficie. Los resultados se
muestran en la Fig. 8 para tres valores de entrada de potencia por unidad volumen. La
línea continua muestra la mejor línea de 4t para oxígeno transferencia por aireación a
través del rociador de un solo tubo (ver Fig. 4). Los valores relativamente bajos de K L a
un observado bajo La condición de la aireación superficial sugiere que la más actual es
probable que funcionen sistemas de micropocillos agitados para la fermentación L Bajo
condiciones de severa limitación de oxígeno. También desafiamos el biorreactor en
miniatura ejecutándolo en una "burbuja"modo "columna", es decir, bajo condiciones
donde la única forma la ofagitación fue provista por fluir ofair (cero impulsor
velocidad) en el recipiente. Medimos la trans- Para obtener una tasa de aire de 3 vvm
correspondiente.

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Fig. 7. Coeficientes generales de transferencia de masa medidos durante la fermentación

de E. coli en el biorreactor en miniatura (▲). Los datos se comparan muy bien con el
K L a Obtenido para aire-agua (♦).
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Fig. 8. Los coeficientes generales de transferencia de masa se midieron (×) solo en

condiciones de aireación superficial. Significativamente menor K L a un dato
comparado con los valores obtenidos bajo la aireación a través del rociador (línea
continua) indica que en la fermentación a escala de micropocillos en sistemas agitados
que requieren oxígeno Los microorganismos pueden ser un problema potencial.
CONCLUSIONES
En este artículo describimos un nuevo gas-líquido en miniatura. Biorreactor y uso de
análisis experimental y teórico para Establecer su desempeño como fermentador. El
biorreactor era Diseñado para tener el mismo diámetro que el de un solo pozo de una
placa de 24 pocillos, pero fue agitado mecánicamente y aireada de tal manera que su
funcionamiento imitaba las condiciones fluir en Un reactor convencional
mecánicamente agitado. La miniatura El biorreactor estaba equipado con
microprocesadores para la medición. Parámetros de oferta incluyendo oxígeno disuelto,
pH, temperatura y densidad óptica. La masa total el coeficiente de transferencia se
predijo teóricamente a partir de la teoría y medido en el biorreactor en miniatura usando
aire-agua y E. coli fermentación. Los resultados se compararon bien con datos
obtenidos a partir de un volumen de trabajo de 20 l (15 l. El biorreactor en miniatura fue
desafiado ejecutándolo bajo condiciones similares a las de un sistema de micropocillos
agitados. Se observaron tasas de transferencia de masa significativamente más bajas,
destacando El potencial de hambre de oxígeno durante la fermentación. En la mayoría
de los sistemas de micropocillos actuales.