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FACULTAD DE INGENIERÍA
DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA QUÍMICA
TESIS
TESIS
Por:
INGENIERO QUÍMICO
LICENCIADO
A DIOS
Por haberme permitido llegar hasta estos instantes de mi vida y poder cumplir una de mis
metas personales
A MIS PADRES
Adolfo Rodas y Maritza Ceballos de Rodas por su apoyo incondicional, por sus consejos,
por sus enseñanzas durante toda mi vida, porque con su ejemplo me supieron educar de la
mejor manera, enseñándome que con sacrificio y perseverancia se pueden lograr las metas
propuestas.
A MIS HERMANOS
Rita y Gustavo, por el apoyo incondicional y ser un ejemplo a seguir.
A MI BEBITO LINDO
Jaime Manolo Samayoa González por su amor, su apoyo incondicional y llenar mi vida de
alegría.
A MI SOBRINOS
Juan Diego, Santiago, Isabella por llenar mi vida de alegría.
A MI ASESORA
Isis López de Gálvez por su apoyo, tiempo, esfuerzo, paciencia y consejos para lograr
alcanzar este objetivo.
RESUMEN EJECUTIVO
El método utilizado para la extracción del aceite esencial fue la destilación por arrastre de
vapor, para lo cual se realizaron varias destilaciones variando el tamaño de batch de materia
prima 40, 50 y 60 gramos. Para los tamaños de batch de 40 y 60 gramos se realizaron dos
repeticiones y cinco repeticiones para el tamaño de batch de 50 gramos.
Descriptores
Romero
Aceite esencial de romero
Destilación por arrastre de vapor
ÍNDICE
MARCO I
I. INTRODUCCIÓN ............................................................................................................ 1
1.1. Lo Escrito sobre el Tema ......................................................................................... 2
1.2. Resumen Crítico del Marco Teórico ........................................................................ 5
1.2.1. Aceite esencial ....................................................................................................... 5
1.2.2. Romero ................................................................................................................. 13
1.2.3. Preparación preliminar de la materia prima ......................................................... 17
1.2.4. Control de Calidad de la Materia Prima .............................................................. 20
1.2.5. Aceite Esencial de Romero .................................................................................. 26
1.2.6. Control de Calidad de los Aceites Esenciales ...................................................... 28
1.2.7. Obtención de Aceite Esencial por medio de Destilación por Arrastre de Vapor a
Nivel Industrial .................................................................................................... 34
MARCO II
II. PLANTEAMIENTO DEL P ROBLEMA ............................................................................ 40
2.1. Objetivos ................................................................................................................ 42
2.1.1. Objetivo General .................................................................................................. 42
2.1.2. Objetivos Específicos ........................................................................................... 42
2.2. Variables ................................................................................................................ 43
2.2.1. Variables Independientes ..................................................................................... 43
2.2.2. Variables Dependientes........................................................................................ 43
2.3. Definición de las Variables .................................................................................... 43
2.3.1. Variables Independientes ..................................................................................... 43
2.3.2. Variables Dependientes........................................................................................ 45
2.4. Alcances y Límites ................................................................................................. 47
2.4.1. Alcances ............................................................................................................... 47
2.4.2. Límites ................................................................................................................. 47
2.5. Aportes ................................................................................................................... 48
MARCO III
III. MÉTODO ..................................................................................................................... 50
MARCO VII
VII. RECOMENDACIONES .................................................................................................. 87
MARCO VIII
VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ................................................................................ 89
8.1. Referencia Bibliográfica ........................................................................................ 89
MARCO IX
IX. ANEXOS ..................................................................................................................... 95
9.1. Anexo I (Glosario) ................................................................................................. 95
9.2. Anexo II (Datos Originales).................................................................................. 97
9.3. Anexo III (Cromatografía de Gases) .................................................................. 102
9.3.1. Cromatografía de gases del aceite esencial de romero Obtenido con un tamaño de
batch de 40 gramos. ........................................................................................... 102
9.3.2. Cromatografía de gases del aceite esencial de romero Obtenido con un tamaño de
batch de 50 gramos. ........................................................................................... 106
9.3.3. Cromatografía de gases del aceite esencial de romero Obtenido con un tamaño de
batch de 60 gramos. ........................................................................................... 110
9.4. Anexo IV (Densidad del Aceite Esencial de Romero) ....................................... 115
9.5. Anexo V (Cálculo de Muestra) ........................................................................... 116
9.6. Anexo VI (Especificaciones Reglamento Técnico Centroamericano RTCA
71.03.45:07) .................................................................................................................... 120
9.7. Anexo VII (Fotos) ............................................................................................... 121
ÍNDICE DE TABLAS
Tabla No. 1: Composición aproximada de las hojas secas de romero, 100 g. porción
comestible ............................................................................................................................ 14
Tabla No. 3: Parámetros más frecuentes utilizados en el control de calidad de las especies
vegetales aromáticas ............................................................................................................ 21
Tabla No. 8: Características organolépticas del romero, según el control de calidad que se
debe llevar a la materia prima posterior a ser utilizada para la extracción del
aceite esencial ...................................................................................................................... 59
Tabla No. 9: Porcentaje de Humedad Promedio. Según el control de calidad de las especies
aromáticas, con su respectiva desviación respecto al valor teórico ..................................... 60
Tabla No. 10: Análisis microbiológico del romero seco, según el método de recuento en
placa. Crecimiento de mohos y levaduras en el medio agar papa dextrosa, a las 72 horas de
incubación a 32ºC ................................................................................................................ 60
Tabla No. 11: Análisis microbiológico del romero seco, según el método de recuento en
placa. Crecimiento de Escherichia Coli en el medio agar chromocult, a las 72 horas de
incubación a 32ºC ................................................................................................................ 62
Tabla No. 12: Análisis microbiológico del romero seco, según el método de recuento en
placa. Crecimiento de aerobios mesófilos en el medio agar recuento total, a las 72 horas de
incubación a 32ºC ................................................................................................................ 63
Tabla No. 13: Características organolépticas del aceite esencial de romero, según los
parámetros analíticos en el control de calidad de un aceite esencial ................................... 64
Tabla No. 14: Índice de refracción promedio del aceite esencial de romero en los 3
diferentes tamaños de batch a 20ºC y su desviación estándar respectiva. Utilizando las hojas
de romero secadas al ambiente ............................................................................................ 65
Tabla No. 15: Densidad del aceite esencial de romero. Utilizando las hojas de romero
secadas por medio de un horno de convección .................................................................... 65
Tabla No. 16: compuestos obtenidos en la cromatografía de gases del aceite esencial de
romero, con un tamaño de batch de 40 gramos. Utilizando las hojas de romero secadas al
ambiente .............................................................................................................................. 66
Tabla No. 17: compuestos obtenidos en la cromatografía de gases del aceite esencial de
romero, con un tamaño de batch de 50 gramos. Utilizando las hojas de romero secadas al
ambiente ............................................................................................................................... 67
Tabla No. 18: compuestos obtenidos en la cromatografía de gases del aceite esencial de
romero, con un tamaño de batch de 60 gramos. Utilizando las hojas de romero secadas al
ambiente .............................................................................................................................. 68
Tabla No. 19: Comparación de los compuestos obtenidos en la cromatografía de gases del
aceite esencial de romero, en los 3 diferentes tamaños de batch .......................................... 69
Tabla No. 20: Porcentaje de Rendimiento de la destilación del aceite esencial por arrastre
de vapor del aceite esencial de romero obtenido en la destilación por arrastre de vapor en
los 3 diferentes tamaños de batch ........................................................................................ 74
Tabla No. 21: Porcentaje de humedad presente en la planta de romero y el tiempo que
requirió la planta para obtener el porcentaje de humedad deseado ..................................... 97
Tabla No. 22: Datos generales del proceso de destilación por arrastre de vapor, con 40
gramos de muestra (hojas de romero). Utilizando la planta secada al ambiente sobre papel
blanco de cocina .................................................................................................................. 97
Tabla No. 23: Datos generales del proceso de destilación por arrastre de vapor, con 50
gramos de muestra (hojas de romero). Utilizando la planta secada al ambiente sobre papel
blanco de cocina .................................................................................................................. 98
Tabla No. 24: Datos generales del proceso de destilación por arrastre de vapor, con 60
gramos de muestra (hojas de romero). Utilizando la planta secada al ambiente sobre papel
blanco de cocina ................................................................................................................. 99
Tabla No. 25: Datos generales del proceso de destilación por arrastre de vapor, con 50
gramos de muestra (hojas de romero). Utilizando la planta secada por medio del horno de
convección ........................................................................................................................... 99
Tabla No. 26: Índice de refracción del aceite esencial de romero para los 3 diferentes
tamaños de batch, leídos a temperatura de 19ºC. Utilizando la planta secada al ambiente
sobre papel blanco de cocina ............................................................................................. 100
Tabla No. 27: Índice de refracción del aceite esencial de romero para los 3 diferentes
tamaños de batch, a 20ºC. Utilizando la planta secada al ambiente sobre papel blanco de
cocina ................................................................................................................................. 101
Tabla No. 28: Densidad del aceite esencial de romero para 50 gramos de batch a 20.5ºC.
Utilizando la planta de secada por medio del horno de convección ................................... 101
Tabla No. 29: Porcentaje de Rendimiento del aceite esencial de romero obtenido en la
destilación por arrastre de vapor en los 3 diferentes tamaños de batch. Utilizando la planta
secada al ambiente sobre papel blanco de cocina .............................................................. 101
ÍNDICE DE FIGURAS
Figura No. 4: Método para el recuento por dilución para una solución que contenga 100
bacterias por mililitro ........................................................................................................... 55
Figura No. 6: Secado de la planta de Romero sobre papel de envolver ............................ 121
Figura No. 8: Determinación del porcentaje de humedad de la planta de romero por medio
de la balanza de humedad .................................................................................................. 122
Figura No. 9: Preparación del extracto de romero para su análisis microbiológico ......... 122
Figura No. 10: Realización del método de recuento por dilución para su posterior sembrado
en un medio de cultivo ...................................................................................................... 122
Figura No. 11: Siembra del extracto de romero en el medio agar papa dextrosa, chromocult
y agar recuento total .......................................................................................................... 123
Figura No. 12: Lectura del número de colonias que crecieron en el medio agar papa
dextrosa .............................................................................................................................. 123
Figura No. 13: Lectura del número de colonias que crecieron en el medio chromocult ... 123
Figura No. 14: Lectura del número de colonias que crecieron en el medio recuento
total .................................................................................................................................... 124
Figura No. 15: Equipo de laboratorio utilizado para la destilación por arrastre de vapor para
la obtención del aceite esencial de romero ........................................................................ 124
Figura No. 17: Filtración de la mezcla de aceite y agua con sulfato de sodio anhidro ..... 125
Figura No. 19: Determinación de la densidad del aceite esencial de romero .................... 125
Figura No. 20: Refractómetro, utilizado para la determinación del índice de refracción del
aceite esencial de romero ................................................................................................... 126
Gráfica No. 1: Cromatograma del aceite esencial de romero obtenido con un batch de
40 gramos ............................................................................................................................ 70
Gráfica No. 2: Cromatograma del aceite esencial de romero, obtenido con un batch de
50 gramos ............................................................................................................................ 71
Gráfica No. 3: Cromatograma del aceite esencial de romero, obtenido con un batch de
60 gramos ............................................................................................................................ 72
I. INTRODUCCIÓN
Guatemala, es un país donde existen varios tipos de clima, lo cual hace que posea una
diversidad de recursos naturales que están siendo rápidamente alterados debido a
factores físicos, demográficos y económicos.
El romero es una planta cultivable en todo tipo de suelo, lo cual, lo hace una opción
viable para producirlo en todas las regiones del país. El romero se puede cultivar
predominantemente en la región del altiplano y norte del país ofreciendo a la
población de esta región una opción más en materia de cultivos. Actualmente el
romero se utiliza para aliviar dolores musculares, para obtención de aceite esencial y
como aromatizante.
Los aceites esenciales son las sustancias que forman la esencia odorífera de un gran
número de especies vegetales. Tienen un gran potencial de aplicación en distintas
industrias, tal es el caso del romero, principalmente en la cosmética y farmacéutica.
1
obtención del aceite esencial de romero y se determinaran sus propiedades
organolépticas, físico-químicas y microbiológicas.
Guenther (1948), publicó sus textos sobre Aceites Esenciales, los cuales son un
tratado sobre la producción, composición química, aplicaciones y análisis de
estos productos. Realizó un estudio completo de varios aceites esenciales de todo
el mundo y su libro es uno de los más importantes en éste tema.
2
aceite esencial y de mejor calidad. Además concluye que el rendimiento del
aceite esencial es directamente proporcional al tamaño del batch.
3
sanguínea, actuando como preventivo de alergias, problemas en las vías
respiratorias y enfermedades virales. También indicó que se utiliza para limpiar
la piel, como tratamiento para la caída del cabello, caspa, fatiga mental, dolores
de cabeza y jaqueca.
4
1.2. Resumen Crítico del Marco Teórico
5
Los aceites esenciales poseen un gran número de constituyentes, por lo que
sus especificaciones se basan en propiedades físicas como: índice de
refracción, gravedad específica y rotación óptica, las cuales dependen de la
composición química del aceite y se relacionan entre sí.
Comúnmente las plantas más jóvenes producen una mayor cantidad de aceite
que las plantas de mayor edad. Las plantas de mayor edad dan como resultado
aceites más oscuros y resinosos, debido a la evaporación continúa de las
fracciones más ligeras del aceite. Al igual que las plantas en la etapa de
florecimiento producen una mayor cantidad de aceite en comparación con las
plantas después de florecer y cuando éstas brotan.
6
Composición Química de los Aceites Esenciales Naturales
7
Los aceites esenciales obtenidos por los métodos mencionados con
anterioridad, se purifican por medio de destilación al vacío. En el presente
trabajo de investigación, se describirá únicamente el primer método de
obtención de un aceite esencial.
8
componente deseado (aceite) se enfría, se separa del agua por medio de un
decantador o vaso florentino. La destilación por arrastre de vapor es
utilizada para aislar sólidos y líquidos de fuentes naturales.
9
Los principios que acompañan la destilación por arrastre de vapor son:
(Guenther, 1948)
1. Mantener una temperatura lo más baja posible, sin olvidar que la tasa
de producción será determinada por la temperatura.
10
3. La trituración del material vegetal antes de la destilación, tomando en
cuenta que la reducción excesiva del material vegetal resulta en la
formación de canales de vapor a través de la masa del material
vegetal, reduciendo la eficiencia debido al poco contacto entre el
vapor y la carga.
11
en la ecuación, debido a que los componentes son inmiscibles. Solamente
se suma la presión de vapor de los líquidos puro PAº y PBº a una temperatura
dada, para obtener la presión total sobre la mezcla. Cuando la presión total
es igual a 760 mmHg, la mezcla ebulle. (Pavia, Donald, Lampman, Gary y
Kriz, 1988)
º º º
Ptotal Paceite Pagua
º
Paceite Moles aceite
º
Pagua Moles agua
vapor
12
compartimientos separados, aunque en la práctica estén mezclados durante
la destilación. Todos los gases se mezclan, ellos forman un vapor
homogéneo y co-destilan.
Waceite M Pº
aceite
Wagua M Pº
agua
1.2.2. Romero
Descripción del Romero
13
Subreino: Embryobionta
División: Magnoliophyta
Clase: Magnoliopsida
Subclase: Asteridae
Orden: Lamiales
Familia: Labiacease (Labiatae)
Género: Rosmarinus L.
Especie: Rosmarinus officinalis L.
Tabla No. 1: Composición aproximada de las hojas secas de romero, 100g, porción
comestible
14
Figura No. 1: Planta de Romero
Hábitat
Se le encuentra desde el nivel del mar hasta los 1.500 m. de altitud en las
montañas más cálidas; prospera mejor en el piso basal que en el montano;
prefiere las zonas bajas o medias. Un menor rendimiento en la producción
del aceite esencia se da cuando se cultiva a una mayor altitud.
Agricultura
El romero tiene una zona de vida a una temperatura de 9-28ºC, con una
precipitación anual de 0.3- 2.7m y un pH del suelo de 4.5-8.7. Es un
arbusto aromático tolerante a la sequia, puede crecer en suelos rocosos y
arenosos, bien drenados y poco profundos. Se comercializa por semilla, los
cuales tienen un poder germinativos de 40%. En los viveros se siembran al
aire libre, los cuales se riegan constantemente y logran enraizar de 2-3
15
meses. Es un cultivo poco exigente, pero requiere fertilización orgánica,
debido a que es atacado por coleópteros y nematodos. Las hojas se secan a
la sombra, para obtener aceite esencial u oleorresina, para ello se prefieren
los brotes florales, los rendimientos esperados son de 1.5- 2 ton/h de hojas
secas o 10- 15 kg/h de aceite esencial. La planta de romero se cosecha 2
veces al año. (Cáceres, 1996)
Composición Química
16
Historia del Romero
17
Se debe tomar en cuenta que antes de secar las plantas, se riegan para
limpiarlas de la tierra o polvo. Este se puede realizar con calor natural o
artificial; sea cual sea el sistema. El propósito es eliminar progresivamente la
humedad contenida en las partes útiles, mediante técnicas adecuadas a cada
especie, de forma que no se pierdan o devalúen las sustancias que se pretende
retener. Por lo que el control de la humedad es importante para la
conservación de la materia vegetal.
Secado de la Planta
Proceso que permite extraer la humedad que contiene, para evitar que se
pudra o pierda las sustancias activas, además permite que pueda ser
almacenada durante un tiempo determinado antes de su utilización. Antes
de secar la planta se riegan para limpiarlas de tierra, polvo e impurezas.
18
En el proceso de secado, la pérdida de la esencia es mayor que durante su
almacenamiento después de haber sido secada, porque durante el primer
período de secado la planta aromática retiene mucha humedad en sus
células y por medio de la difusión lleva su esencia hacia la superficie y la
ayuda a evaporarse.
19
Las partes de un horno son:
20
Para conseguir los objetivos se utilizan, los 5 tipos de análisis que se resumen
en la tabla siguiente:
Tabla No. 3: Parámetros más frecuentes utilizados en el control de calidad de las especies
vegetales aromáticas.
21
Higiénico (bacterias, mohos, levaduras)
Análisis Microbiológico
a) Mohos:
22
micras de grosor, son inmóviles y ramificados. Su reproducción puede
ser sexual o asexual.
b) Levaduras
23
o Su temperatura de crecimiento es de 20 a 30ºC, siendo la óptima
25ºC.
o Las levaduras crecen en lugares aerobios y anaerobios.
c) E. Coli
24
o La temperatura de crecimiento se encuentra de 7 a 44ºC, siendo la
óptima de 35 a 40ºC.
o El pH de crecimiento es de 4.4 a 9.
o Requieren nutrientes como el agua, carbono, compuestos
nitrogenados, fósforo, potasio, calcio, magnesio, glucosa y hierro.
25
d) Mesófilos Aerobios
26
Limoneno 2.5 5.5
1,8- cineol o eucaliptol 16.0 23.0
Alcanfor 12.5 22.0
Linalol 0.5 2.5
Acetato de bornilo 0.5 2.5
Terpinen-4-ol 0.4 1.5
Borneol 1.0 4.5
α-terpineol 1.0 4.0
Verbenona 0.7 2.5
Según Cáceres (1996), el aceite esencial (1-2%) contiene esteres como acetato
de bornilo (1-7%) y alcoholes totales como borneol (8.4-14.3%). Los
principales componentes son: α-pineno (7-25%), canfeno (2-9%), borneol
(18%), mirceno, α-felandreno, limoneno, γ-terpineno, p-cimeno, linalool (14-
17%), 1,8- cineol o eucaliptol (14-32%), alcanfor (10-15%), cariofileno y α-
terpineol.
27
aplicación como la salud capilar, favoreciendo el nacimiento del cuero
cabelludo. (Cáceres, 1996)
28
Miscibilidad en etanol
Punto congelación
Punto inflamación
Rango destilación
Índices Químicos Índice de acidez
Índice de éster
Índice de saponificación
Índice de acetilo
Índice de fenoles
Características Cromatográficas Perfil Cromatográfico CG
Cuantificación de los
principales componentes
Características Espectroscópicas Ultravioleta visible
Infrarrojo
Otras Determinaciones Pesticidas
Metales Pesado
29
Propiedades Organolépticas
30
Propiedades Físicas
a) Densidad
b) Índice de Refracción
31
Este parámetro posee un interés en detectar adulteraciones y
envejecimiento, sus principales ventajas son la rapidez y sencillez con
que se pueden obtener.
c) Cromatografía de Gases
32
Las fases estacionarias para el análisis de aceites esenciales son
polietilenglicol y polidimetisiloxano que son fases polares.
33
patrones de fragmentación que se observan en sus espectros de
masa. (Bandonni, 2002)
Según Bandoni (2002), la destilación por arrastre con vapor, no ha podido ser
sustituida por la extracción con solventes orgánicos o con calentamiento
directo por la gran cantidad de ventajas que tiene en relación a estos dos
últimos sistemas, como:
34
Figura No. 3: Principales componentes de un equipo de extracción mediante arrastre con
vapor
EXTRACTOR
35
CUELLO DEL CISNE
CONDENSADOR
36
A nivel laboratorio, también se utiliza un condensador de menor
tamaño, el cual cumple con las mismas funciones que el condensador a
nivel industrial descrito con anterioridad.
GENERADOR DE VAPOR
37
Aplicación Industrial para Aceites Esenciales
38
mejorando la circulación sanguínea del cuero cabelludo, regula la secreción
sebácea y estimula el crecimiento. (Botanical Online, 2011)
39
Marco II
Con el paso del tiempo, el medio ambiente se está deteriorando y se hace necesario
para la humanidad poseer productos que sean naturales, fáciles de obtener y sobre
todo que en su proceso no se produzca contaminación.
40
necesario obtener dichos aceites con la mayor calidad posible y de una manera
relativamente fácil, que sean derivados de plantas que no requieran de mucho
cuidado para su proliferación, siendo el caso del romero.
41
2.1. Objetivos
42
2.2. Variables
Índice de refracción.
Densidad del aceite esencial de romero.
Cromatografía de gases.
44
Def. Operacional: el tiempo de destilación del aceite esencial de romero
debe ser de 2 horas, este se mide por medio de un reloj.
ÍNDICE DE REFRACCIÓN
45
Def. Operacional: el aceite esencial de romero posee un índice de
refracción que varía de 1.464 a 1.476 a 20ºC. Se mide por medio de un
refractómetro, si la temperatura a la que se mide el índice de refracción no
es de 20ºC, se puede usar la siguiente ecuación: (Bandoni, 2002)
46
2.4. Alcances y Límites
2.4.1. Alcances
El presente estudio pretende ser una guía para la obtención de aceite esencial
de romero por medio de la destilación por arrastre de vapor para el análisis de
parámetros fisicoquímicos y microbiológicos.
2.4.2. Límites
47
San Carlos de Guatemala para la realización de las mismas. También se tuvo
el límite de que no existe mucha información referente al cultivo del romero
en Guatemala, lo cual lo hace difícil de obtener y éste solo se encuentra en el
Instituto de Ciencia y Tecnología Agrícola (ICTA) ubicado en el
departamento de Chimaltenango.
2.5. Aportes
48
Al medio ambiente, ya que se presenta un proceso para la obtención de un aceite
esencial, que no es contaminante debido a que se utiliza agua como solvente para
la extracción del mismo.
49
Marco III
III. MÉTODO
A. Sujetos
B. Unidad de Análisis
Planta de romero
Aceite esencial de romero
3.2. Instrumentos
50
temperatura +/- 10ºC. Se empleó para secar el romero, permitiendo un mayor
rendimiento del aceite.
Balanza analógica: marca Mettler Toledo, tipo AB204. Posee una carga
máxima de 210 gramos, con un valor mínimo de escala de 0.0001 gramos. Se
emplea para pesar el aceite esencial de romero obtenido, debido a que
proporciona la lectura con 4 decimales, por lo que es mucho más exacta.
(Incertidumbre de +/- 0.00005g).
51
Termómetro: marca VWR, modelo 61016048. Registra lecturas de
temperatura en un rango de 20°C a 150°C. Se utiliza para medir la
temperatura del aceite esencial de romero. (incertidumbre +/- 0.5 °C).
52
3.3. Procedimiento
53
3.3.1. Preparación Preliminar de la Materia Prima
54
Figura No. 4: Método para el recuento por dilución de una solución que contenga 100
bacterias por mililitro.
5. Lavar el balón receptor con éter etílico para recuperar la mayor cantidad
de muestra posible. Agitar e invertir el embudo de decantación y liberar la
presión acumulada, debido a la presión del componente volátil.
6. Dejar reposar hasta que las fases estén bien separadas. Y decantar.
55
7. Remover el éter utilizando destilación simple, con rotavapor o por medio
de un baño de María, para así obtener el peso del residuo y calcular el
porcentaje de aceite esencial presente en la muestra de romero.
56
3.3.5. Índice de Refracción del Aceite Esencial de Romero
Experimentos
57
Tratamientos y Repeticiones en los Experimentos
58
Marco IV
ROMERO
CARACTERÍSTICAS
RESULTADOS DE
CARACTERÍSTICA ORGANOLÉPTICAS
LABORATORIO
TEÓRICAS*
Aroma a eucalipto Olor a eucalipto fresco,
OLOR
fresco. olor alcanforado
Arbusto de color verde,
Posee hojas verdes,
contiene flores estilo
con flores color
COLOR largo color violeta,
violeta, ramas y
ramas y un tronco color
tronco de color café.
café
59
4.1.2. Porcentaje de Humedad
Tabla No. 10: Análisis microbiológico del romero seco, según el método de
recuento en placa. Crecimiento de mohos y levaduras en el medio agar papa
dextrosa, a las 72 horas de incubación a 32ºC.
NÚMERO
TOTAL DE
COLONIAS POR PARÁMETROS
PARÁMETROS
DILUCIÓN OBSERVACIÓN GRAMO DE TEÓRICOS‡
TEÓRICOS*
MUESTRA
CONTENIDO EN
LA DILUCIÓN
Crecieron 13
1 colonias de mohos y 130 colonias/g <100 ufc/g
<102 ufc/g
levaduras de color
60
amarillo, verde
oscuro y blancas
esponjosas.
Se observó 1 colonia
2 de moho y levadura 100 colonias/g <100 ufc/g
<102 ufc/g
de color blanca.
No se presentó <102 ufc/g
3 crecimiento de Ausente <100 ufc/g
mohos y levaduras
No se presentó <102 ufc/g
4 crecimiento de Ausente <100 ufc/g
mohos y levaduras
No se presentó <102 ufc/g
5 crecimiento de Ausente <100 ufc/g
mohos y levaduras
61
Tabla No. 11: Análisis microbiológico del romero seco, según el método de
recuento en placa. Crecimiento de Escherichia Coli en el medio agar
chromocult, a las 72 horas de incubación a 32ºC.
NÚMERO
TOTAL DE
COLONIAS PARÁMETROS PARÁMETROS
POR GRAMO TEÓRICOS* TEÓRICOS‡
DILUCIÓN OBSERVACIÓN
DE MUESTRA
CONTENIDO
EN LA
DILUCIÓN
Hubo ausencia de
1 colonia de Ausente Ausente Ausente
Escherichia Coli
No se presentó
2 crecimiento de Ausente Ausente Ausente
Escherichia Coli
No se presentó
3 crecimiento de Ausente Ausente Ausente
Escherichia Coli
No se presentó
4 crecimiento de Ausente Ausente Ausente
Escherichia Coli
No se presentó
5 crecimiento de Ausente Ausente Ausente
Escherichia Coli
62
Tabla No. 12: Análisis microbiológico del romero seco según el método de
recuento en placa. Crecimiento de aerobios mesófilos en el medio agar
recuento total, a las 72 horas de incubación a 32ºC.
NÚMERO TOTAL
DE COLONIAS PARÁMETROS PARÁMETROS
MUESTRA OBSERVACIÓN
QUE CONTIENE TEÓRICOS* TEÓRICOS‡
LA MUEASTRA
Hubo crecimiento
1 de colonias de MNPC¤ <100 ufc/g Ausente
color crema
Hubo crecimiento
2 de varias colonias MNPC <100 ufc/g Ausente
de color crema.
Se observó
crecimiento de 1
colonia de color
crema que cubre la MNPC <100 ufc/g
3 Ausente
totalidad de la caja
petri, y unas
cuantas colonias
crema alrededor.
Se observó el
crecimiento de 1
colonia que cubre
la mitad de la caja
4 MNPC <100 ufc/g Ausente
y alrededor varias
colonias unidas
entre sí de color
crema
Se observó el 1,200,000
5 <100 ufc/g Ausente
crecimiento de 12 colonias
63
colonias de color
crema.
64
4.2.2. Propiedades Físicas
Tabla No. 14: Índice de refracción promedio del aceite esencial de romero en
los 3 diferentes tamaños de batch a 20ºC y su desviación estándar respectiva.
Utilizando las hojas de romero secadas al ambiente.
Tabla No. 15: Densidad del aceite esencial de romero. Utilizando las hojas de
romero secadas por medio del horno de convección.
PORCENTAJE
* DE ERROR
TAMAÑO
RESPECTO DENSIDAD DENSIDAD
DE DENSIDAD
AL VALOR TEÓRICA* TEÓRICA‡
BATCH
TEÓRICO
MAYOR
0.9460g/ml 0.8940- 0.913 0.892 – 0.91
50 gramos 3.61%
(20.5 °C) g/ml g/ml (20°C)
65
4.2.3 Cromatografía de Gases
66
Tabla No. 17: Compuestos obtenidos en la cromatografía de gases del aceite
esencial de romero, con un tamaño de batch de 50 gramos. Utilizando las
hojas de romero secadas al ambiente.
67
Tabla No. 18: Compuestos obtenidos en la cromatografía de gases del aceite
esencial de romero, con un tamaño de batch de 60 gramos. Utilizando las
hojas de romero secadas al ambiente.
68
Tabla No. 19: Comparación de los compuestos obtenidos en la cromatografía
de gases del aceite esencial de romero, en los 3 diferentes tamaños de batch.
69
Gráfica No. 1: Cromatograma del aceite esencial de romero obtenido con un batch de
40 gramos
(minutos)
Tiempo
Abundance
(pA)
70
Gráfica No. 2: Cromatograma del aceite esencial de romero, obtenido con un batch de
50 gramos
(minutos)
Tiempo
Abundance
(pA)
71
Gráfica No. 3: Cromatograma del aceite esencial de romero, obtenido con un batch
de 60 gramos
(minutos)
Tiempo
Abundance
(pA)
72
Gráfica No. 4: Comparación de los 3 cromatograma de aceite esencial de romero,
obtenido con los 3 diferentes tamaños de batch
(minutos)
Tiempo
Abundance
(pA)
73
4.3. Porcentaje de Rendimiento del Aceite Esencial de Romero
DESVIACIÓN %
TAMAÑO %
ESTÁNDAR RENDIMIENTO
DE BATCH RENDIMIENTO
TEÓRICO*
40 gramos 0.4249% 0.00548% 0.5%- 1.2%
50 gramos 0.7284% 0.00792% 0.5%- 1.2%
60 gramos 0.2663% 0.1211% 0.5%- 1.2%
Fuente: Heath (1978)
74
Marco V
V. DISCUSIÓN
75
promedio de humedad de la planta de romero. Como se observa en la tabla se
utilizaron dos métodos para el secado del romero, uno de secado al ambiente y
uno de secado con horno de convección. En el método de secado con horno de
convección se secó la planta de romero a una temperatura entre 33 y 35ºC, y
en el método de secado al ambiente se dejó secando bajo la sombra evitando
el contacto de la planta con los rayos del sol, tratando de no exponer la planta
a temperaturas mayores a 35°C, debido a que la planta de romero tiene como
componente principal el aceite esencial y la sensibilidad al calor es una de las
propiedades químicas con mayor influencia sobre el componente, porque el
aceite esencial es muy volátil y en él se encuentran los principios activos, tales
como α-pineno, 1,8-cineol o eucaliptol, Terpineol, β-linalool, que son sus
componentes más volátiles, las cuales al estar expuestas a temperatura
mayores a los 35 °C, podrían afectar la calidad y el rendimiento del aceite
esencial obtenido.
El tiempo de secado por el método de secado al horno fue de 26 horas y el
tiempo de secado por el método de secado al ambiente fue de 92 horas, como
se observa en la tabla No.9 (página No.42). En los dos métodos utilizados del
secado del romero se obtuvo un porcentaje promedio de humedad que se
encuentra dentro de los parámetros establecidos (8 a 15% de humedad
residual, según Bandoni, 2002), con una mínima desviación estándar. Por lo
cual el secado con ambos métodos es aceptable para la preparación de la
planta en el proceso de destilación por arrastre de vapor para la obtención del
aceite esencial de romero.
76
colonia de mohos y levaduras en la dilución -2 (1:100), que equivale a
100 colonias/gramo de muestra. No hubo crecimiento de colonias de mohos y
levaduras en la dilución -3 (1:1000), en la dilución -4 (1:10000) y en la
dilución -5 (1: 100000).
77
que el romero se manipuló sin la utilización de guantes en el laboratorio, y
estos microorganismos crecen a temperatura corporal humana (37ºC), por lo
que fue propicio su crecimiento durante toda la manipulación en la
elaboración del análisis microbiológico. 3) el romero no recibió ningún
tratamiento de desinfección, solo de limpieza, permitiendo eliminar
únicamente el polvo, tierra que contenía la planta de romero en la superficie.
Estas razones pueden ser las responsables de contaminación de tipo
microbiológico con microorganismos mesófilos aerobios.
78
5.2.2. Propiedades Físicas
Por otro lado se evaluaron las propiedades físicas del aceite esencial de
romero, las cuales se pueden observar en la tabla No. 14 (página No.46) y
tabla No. 15 (página No.46). En la tabla No. 14 (página No.46) se muestran
los índices de refracción promedio medidos para los 3 diferentes tamaños de
batch, como se puede observar los 3 índices de refracción medidos son
mayores a los parámetros que indica Food Chemical Codex, 1996 y la norma
UNE84306:2006 (1.464 y 1.472)
79
destilación por arrastre de vapor por medio de una cromatagrafía de gases
acoplada a un espectrómetro de masas.
80
Como se puede observar el aceite esencial de romero posee una variedad de
constituyentes que le confieren propiedades para uso en la industria cosmética
y farmacéutica.
81
5.3 Porcentaje de Rendimiento del Aceite Esencial de Romero
Para las destilaciones por arrastre de vapor para los batch de 40, 50 y la segunda
repetición de 60 gramos se utilizaron hojas secas de romero sin triturar. Para la
primera repetición de 60 gramos se utilizaron hojas secas de romero sin triturar y
tallo seco triturado.
82
El rendimiento de extracción teórico es de 0.5% a 1.2%, como se puede observar
el rendimiento obtenido en el tamaño de batch de 50 gramos se encuentra cerca
del límite inferior del rango del rendimiento teórico y el rendimiento obtenido en
los tamaños de batch de 40 y 60 gramos se encuentra por debajo del límite
inferior. Esto se debe a que al realizar la destilación por arrastre de vapor para
los tres diferentes tamaños de batch, se le agregó un 30% más de agua, de la
cantidad recomendada (3 veces el peso de la muestra total), debido a que dicha
cantidad, no era suficiente para llegar al nivel medio del volumen del balón que
contenía la masa de romero, adicionalmente el vapor (producido por el balón
aforado que contenía agua y perlas de ebullición), al tener contacto con el agua
contenida en el balón, está se condensaba, aumentando la cantidad de agua en el
balón que contenía las hojas de romero, permitiendo que se hidrolizaran ciertos
componentes del aceite esencial. Principalmente los esteres compuestos por
ácidos orgánicos y alcoholes, tienden a reaccionar con el agua, el acetato de
bornilo que es un éster, presente en el aceite esencial de romero se debe encontrar
en un porcentaje teórico según norma UNE 84306:2006 en un rango entre 0.5 a
2.5%, pero como se observa en la tabla No. 14 (página No. 46), tabla No. 15
(página No. 46) y tabla No. 16 (página No.47), no se encontró dicho componente
para cada tamaño de batch analizado; con dicho resultado se comprueba que el
acetato de bornilo, se hidrolizó durante el proceso de destilación por arrastre de
vapor.
Otra causa por la que en el batch de 40 gramos el rendimiento obtenido está por
debajo del rendimiento teórico, es porque había mucho espacio intermedio entre
83
las hojas de romero y el tiempo de destilación fue el mismo que para un batch de
50 y 60 gramos, permitiendo que el vapor que contenía el aceite esencial de
romero volviera a condensar, llevándose a cabo una destilación fraccionada.
84
Marco VI
VI. CONCLUSIONES
2. El romero posee un aroma a eucalipto fresco y hojas verdes con flores de color
violeta y un tronco de color café.
85
10. El aceite esencial de romero obtenido en un tamaño de batch de 40 gramos posee
un índice de refracción de 1.4783±0.002532, para un tamaño de batch de 50
gramos posee un índice de refracción de 1.4823±1.73*10-4, para un tamaño de
batch de 60 gramos posee un índice de refracción de 1.4816±5.77*10-5.
15. El tamaño de muestra óptima para la extracción del aceite esencial de romero en
este trabajo de investigación con el equipo de destilación por arrastre con vapor
utilizado es de 50 gramos.
86
Marco VII
VII. RECOMENDACIONES
2. Desinfectar la planta de romero, para iniciar con una materia prima de menor carga
microbiana.
3. Guardar la planta de romero durante la noche cuando está se ponga a secar al aire
libre, para impedir la condensación del agua por la humedad o lluvia y así
disminuir el riesgo de pérdida de la esencia, impidiendo que el rendimiento del
aceite esencial disminuya.
6. Realizar una reacomodación de las hojas de romero para impedir que se aglomeren
en el fondo del balón, y obtener un aceite de mayor calidad y aumentar el
rendimiento del mismo.
7. Agregar la cantidad necesaria de agua al balón que contiene las hojas de romero
para promover la difusión, y no una mayor cantidad que pueda ocasionar la
hidrólisis de los constituyentes del aceite esencial de romero.
87
8. Realizar las pruebas por triplicado para una mayor confiabilidad de los resultados
obtenidos.
9. Evaluar los parámetros establecidos por la norma UNE 84306:2006 como: Perfil
cromatográfico, índice de refracción, poder rotatorio, índice de acidez,
miscibilidad con etanol al 90%, punto de inflamación, densidad relativa y
características organolépticas.
10. Utilizar otros equipos de diferentes capacidades para verificar si existe una
variación considerable con respecto al rendimiento del aceite esencial, para los 3
batch evaluados durante el trabajo de graduación.
11. Evaluar diferentes tipos de solvente como: metanol, isopropanol, acetona, hexano,
cloruro de metileno y dicloruro de metileno; para poder obtener aceite esencial de
romero mediante la extracción con solventes volátil.
88
Marco VIII
89
Carpenter, P. (1969).Microbiología. (2ª. Ed.). México D.F.: Nueva Editorial
Interamericana S.A.
Chang, R. (1997). Química. (4ª. Ed.). México D.F.: Editorial MacGraw Hill.
90
Docencia.ude. Práctica No. 3. Consultado en internet el 27 de Marzo del
2011, en:
http://docencia.udea.edu.co/cen/tecnicaslabquimico/02practicas/practica03.h
tm
Guenther, E. (1948). The Essential Oils [Los Aceites Esenciales]. Vol. I, IV.
Estados Unidos. Ed. D. Van Nostrand Company Inc.
91
MCD Lab, S.A. de C.V. Especificaciones Agar Dextrosa Papa. Consultado
en internet el 10 de mayo del 2011, en:
http://www.mcd.com.mx/pdfs/agar_dextrosa_papa.pdf
Moreno, B.; Díez, V.; García, L.; Menes, I.; Gutiérrez; M. y Polledo,
Francisco. (2000). Microorganismos de los Alimentos I, su significado y
Métodos de Enumeración. (2ª. ed.) Zaragoza, España: Editorial Acribia S.A.
92
Quezada, A. (2008). Evaluación del rendimiento de extracción del aceite
esencial crudo de orégano proveniente de dos zonas de distinta altitud, por
medio del método de arrastre de vapor a nivel planta piloto. Tesis Inédita.
Universidad San Carlos de Guatemala.
93
Valle, K. (2006). Evaluación de la capacidad antioxidante del extracto de
romero (Rosmarinus officinalis) en el aceite de girasol, maleato de aceite de
soya, lanolina y manteca de cacao; utilizados en fase oleosa de emulsiones
cosméticas. Tesis Inédita. Universidad San Carlos de Guatemala.
94
Marco IX
IX. ANEXOS
Aceite Esencial: compuestos odoríferos naturales que ocurre en las plantas y que
son aisladas de las mimas.
Condensador: aparato que emplea dos fluidos con el propósito de que uno de ellos
cambie de fase, para su posterior uso.
95
Rendimiento: es la relación entre el aceite esencial obtenido y la masa de materia
vegetal alimentada al alambique de destilación
96
9.2. Anexo II (Datos Originales)
Secado en el
horno de 10.86% 18.99% 11.36% 26 hrs
convección
Tabla No. 22: Datos generales del proceso de destilación por arrastre de vapor,
con 40 gramos de muestra. Utilizando la planta secada al ambiente sobre papel
blanco de cocina.
CORRIDA 1 CORRIDA 2
Tiempo de destilación 3 horas 2 horas
Parte de la planta
Tallo triturado y hojas
aromática utilizada para Hojas sin triturar
sin triturar
la extracción
Cantidad obtenida de
600mL 500mL
destilado
Cantidad de éter 40mL en 30mL de 40mL en 30mL de
utilizado destilado destilado
Cantidad de agua
utilizada para generar 1200mL 900mL
vapor
97
Peso del vial 6.4267 gramos 6.4267 gramos
Peso vial + aceite 6.5951 gramos 6.5982 gramos
Peso aceite 0.1684 gramos 0.1715 gramos
Tabla No. 23: Datos generales del proceso de destilación por arrastre de vapor,
con 50 gramos de muestra (hojas de romero). Utilizando la planta secada al
ambiente sobre papel blanco de cocina.
CORRIDA 1 CORRIDA 2
Tiempo de destilación 2 horas 2 horas
Parte de la planta
aromática utilizada para Hojas sin triturar Hojas sin triturar
la extracción
Cantidad obtenida de 500mL 500mL
destilado
Cantidad de éter 40mL en 30mL de 40mL en 30mL de
utilizado destilado destilado
Cantidad de agua 900mL 900mL
utilizada para generar
vapor
Peso del vial 6.3014 gramos 6.3014 gramos
Peso vial + aceite 6.6628 gramos 6.6684 gramos
Peso aceite 0.3614 gramos 0.367 gramos
98
Tabla No. 24: Datos generales del proceso de destilación por arrastre de vapor,
con 60 gramos de muestra (hojas de romero). Utilizando la planta secada al
ambiente sobre papel blanco de cocina.
CORRIDA 1 CORRIDA 2
Tiempo de destilación 2 horas 2 horas
Parte de la planta
aromática utilizada para Hojas sin triturar Hojas sin triturar
la extracción
Cantidad obtenida de
500mL 500mL
destilado
Cantidad de éter 40mL en 30mL de 40mL en 30mL de
utilizado destilado destilado
Cantidad de agua
utilizada para generar 900mL 900mL
vapor
Peso del vial 6.3409 gramos 6.3409 gramos
Peso vial + aceite 6.4493 gramos 6.5521 gramos
Peso aceite 0.1084 gramos 0.2112 gramos
Tabla No. 25: Datos generales del proceso de destilación por arrastre de vapor,
con 50 gramos de muestra (hojas de romero). Utilizando la planta secada por
medio del horno de convección
99
Cantidad obtenida
410mL 410mL 400mL
de destilado
Cantidad de éter 30mL en 20mL de 20mL en 40mL 20mL en 40mL
utilizado destilado de destilado de destilado
Cantidad de agua
utilizada para 900mL 900mL 900mL
generar vapor
Peso del frasco
41.6395 gramos 41.6395 gramos 41.6395 gramos
ámbar
Peso frasco ámbar
42.0135 gramos 42.057 gramos 42.0087 gramos
+ aceite
Peso aceite 0.374 gramos 0.362 gramos 0.3692 gramos
Tabla No. 26: Índice de refracción del aceite esencial de romero para los 3
diferentes tamaños de batch, leídos a temperatura de 19ºC. Utilizando la planta
secada al ambiente sobre papel blanco de cocina.
TAMAÑO DE
CORRIDA 1 CORRIDA 2 CORRIDA 3
BATCH
40 gramos 1.476 1.4814 1.4794
50 gramos 1.4826 1.4826 1.4829
60 gramos 1.482 1.4821 1.482
100
Tabla No. 27: Índice de refracción del aceite esencial de romero para los 3
diferentes tamaños de batch, a 20ºC. Utilizando la planta secada al ambiente
sobre papel blanco de cocina.
TAMAÑO DE
CORRIDA 1 CORRIDA 2 CORRIDA 3
BATCH
40 gramos 1.47555 1.4805 1.47895
50 gramos 1.48215 1.48215 1.48245
60 gramos 1.48155 1.48165 1.48155
Tabla No. 28: Densidad del aceite esencial de romero para 50 gramos de batch a
20.5ºC. Utilizando la planta de secada por medio del horno de convección.
Tabla No. 29: Porcentaje de Rendimiento del aceite esencial de romero obtenido
en la destilación por arrastre de vapor en los 3 diferentes tamaños de batch.
Utilizando la planta secada al ambiente sobre papel blanco de cocina
TAMAÑO DE
CORRIDA 1 CORRIDA 2
BATCH
40 gramos 0.421% 0.4287%
50 gramos 0.7228% 0.734%
60 gramos 0.1807% 0.352%
101
9.3. Anexo III (Cromatografía de Gases)
102
103
104
105
9.3.2. Cromatografía de gases del aceite esencial de romero Obtenido con un
tamaño de batch de 50 gramos.
106
107
108
109
9.3.3. Cromatografía de gases del aceite esencial de romero Obtenido con un
tamaño de batch de 60 gramos.
110
111
112
113
114
9.4. Anexo IV (Densidad del Aceite Esencial de Romero)
115
9.5. Anexo V (Cálculo de Muestra)
Promedio
- 13.52% +11.10% +11.23%
x= = 11.95%
3
Desviación estándar
N -
(x - x)2
j=1 j
Sx =
N -1
2 2 2
13.52% -11.95% + 11.10% -11.95% 11.23% -11.95%
S%Humedad = = 0.0136%
2
116
0.1684gramos
%ren dim iento *100
40gramos
%ren dim iento 0.421%
Promedio
- 0.42875% + 0.421%
x= = 0.424875%
2
Desviación estándar
N -
(x - x)2
j=1 j
Sx =
N -1
2 2
0.42875% - 0.424875% + 0.421% - 0.424875%
S = = 0.00548
40gr 1
η(observado) = 1.476
Tº de lectura = 19º C
η corregido = 1.47555
117
Cálculo de la desviación estándar del índice de refracción del aceite esencial de
romero obtenido en la destilación por arrastre de vapor con un tamaño de batch
de 40 gramos, a la temperatura corregida de 20ºC.
Promedio
- 1.47555 +1.4805 +1.47895
x= = 1.4783
3
Desviación estándar
N -
(x - x)2
j=1 j
Sx =
N -1
2 2 2
1.47555 -1.4783 + 1.4805 -1.4783 + 1.47895 -1.4783
S = = 0.002532
40gr 2
4.267g - 3.198g
ρaceite =
1.13mL
ρaceite = 0.9460 g
mL
118
Cálculo del porcentaje de error de la densidad del aceite esencial de romero
obtenido en la destilación por arrastre de vapor con un tamaño de batch de 50
gramos, respecto al valor teórico mayor.
0.9460 g - 0.913 g
% ERROR = ml ml 100
0.913 g
ml
% ERROR = 3.61%
119
9.6. Anexo VI (Especificaciones Reglamento Técnico Centroamericano RTCA
71.03.45:07)
120
9.7. Anexo VII (Fotos)
121
Figura No. 8: Determinación del porcentaje de humedad de la planta de romero por
medio de la balanza de humedad
Figura No. 10: Realización del método de recuento por dilución para su posterior
sembrado en un medio de cultivo
122
Figura No. 11: Siembra del extracto de romero en el medio agar papa dextrosa,
chromocult y agar recuento total.
Figura No. 12: Lectura del número de colonias que crecieron en el medio agar papa
dextrosa.
Figura No. 13: Lectura del número de colonias que crecieron en el medio
chromocult.
123
Figura No. 14: Lectura del número de colonias que crecieron en el medio recuento
total.
Figura No. 15: Equipo de laboratorio utilizado para la destilación por arrastre de
vapor para la obtención del aceite esencial de romero.
124
Figura No. 17: Filtración de la mezcla de aceite y agua con sulfato de sodio
anhidro.
125
Figura No. 20: Refractómetro, utilizado para la determinación del índice de
refracción del aceite esencial de romero.
126