Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
Tesis75 PDF
Tesis75 PDF
TRABAJO DE GRADO
BIÓLOGA.
FACULTAD DE CIENCIAS
CARRERA DE BIOLOGÍA
BOGOTÁ, D.C.
2006
NOTA DE ADVERTENCIA
“La Universidad no se hace responsable por los conceptos emitidos por sus
alumnos en sus trabajos de tesis. Sólo velará por que no se publique nada
contrario al dogma y a la moral católica y por que las tesis no contengan ataques
personales contra persona alguna, antes bien se vea en ellas el anhelo de buscar la
verdad y la justicia”.
Bogotá, 3 de octubre 2006.
Señores
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA.
Ciudad
Estimados Señores:
Los derechos morales sobre el trabajo son de los autores de conformidad con lo
establecido en el artículo 30 de la Ley 23 de 1982 y el artículo 11 de la Decisión
Andina 351 de 1993, los cuales son irrenunciables, imprescriptibles,
inembargables e inalienables. Atendiendo lo anterior, siempre que se consulte la
obra, mediante cita bibliográfica se debe dar crédito al trabajo y a su(s) autor(es)
Este documento se firma, sin perjuicios de los acuerdos que el autor(es) pacte con
la Unidad Académica referentes al uso de la obra o a los derechos de propiedad
industrial que puedan surgir de la actividad académica.
APROBADO
---------------------------------------
ALBA NOHEMÍ TÉLLEZ, Ph. D.
DIRECTORA
--------------------------------------- ----------------------------------
CLEMENCIA DE CASTRO JULIO PEDROZO, Ph.D.
JURADO JURADO
EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD CITOTÓXICA DE EXTRACTOS Y
APROBADO
--------------------------------------- --------------------------------------
ÁNGELA UMAÑA, M. Phil. ANDREA FORERO
DECANA ACADÉMICA DIRECTORA CARRERA
DE BIOLOGÍA
AUTOR O AUTORES
Apellidos Nombres
Castro Diaz Sandra Liliana
Téllez Alfonso Alba Nohemí
DIRECTOR(ES)
Apellidos Nombres
Téllez Alfonso Alba Nohemí
PROGRAMA: Carrera: x
NÚMERO DE PÁGINAS: 68
TIPO DE ILUSTRACIONES:
Mapas.
Tablas, gráficos y diagramas.
Fotografías.
A mis padres por la paciencia que han tenido durante estos años.
A la Dra. Alba Nohemí Téllez por ser una verdadera maestra y por el apoyo en la
su cooperación.
1. INTRODUCCIÓN 2
2. MARCO TEÓRICO 4
RUBIACEAE 16
MORTALIDAD 23
3.3 JUSTIFICACIÓN 26
4. OBJETIVOS 27
4.1 OBJETIVO GENERAL. 27
5. MATERIALES Y MÉTODOS 28
6. RESULTADOS Y DISCUSION 34
6.1 RESULTADOS 34
7 CONCLUSIONES 48
8 RECOMENDACIONES 50
9 BIBLIOGRAFÍA 51
10 ANEXOS 57
INDICE DE TABLAS
CH2Cl2: diclorometano
EtOH: etanol
MeOH: metanol
Entre los compuestos que han sido reportados para otras especies del género se
encuentran alcaloides indólicos, glicósidos triterpénicos, esteres y saponinas
triterpénicas. Todos estos metabolitos han sido evaluados en otras familias
botánicas y en diferentes especies de la familia rubiaceae y han presentado una
buena respuesta en ensayos de citotoxicidad sobre líneas celulares derivadas de
tumores.
Los resultados indican que la fracción MeOH del extracto Petrol presentó un
efecto citotóxico moderado con 32 y 7 % de viabilidad en las líneas celulares de
cáncer de seno, las fracciones 2, 3, 4, 7, 8 y 9 del extracto EtOH también
presentaron porcentajes de viabilidad menores al 50% para estas dos líneas. La
línea celular Colo 205 tuvo un comportamiento diferente al de las otras dos líneas,
siendo las fracciones 4 y 5 las más activas con un porcentaje de viabilidad de 41%
para el resto de fracciones tuvo un efecto proliferativo con porcentajes entre 79 y
162% de viabilidad. La línea celular que presentó mayor sensibilidad frente a los
extractos y fracciones fue la línea 1595 seguida de la línea MCF-7.
Isertia laevis pertenece a la familia Rubiaceae, esta familia es una de las más
numerosas, se encuentra representada en todos los ecosistemas, en la región
Andina se registra el mayor número de especies. El género Isertia presenta
catorce especies en América, sólo siete de ellas conocidas en Colombia, es un
grupo al que se le debe prestar atención ya que la actividad farmacológica de sus
metabolitos secundarios no ha sido estudiada.
Las especies del mismo género: Isertia pittieri, Isertia haenkeana e Isertia
hypoleuca, producen alcaloides indólicos, triterpenos y saponinas triterpénicas,
metabolitos secundarios que pueden contribuir al desarrollo y descubrimiento de
nuevos fármacos al igual que productos de interés biológico en general.
Igualmente los estudios revelan que estos metabolitos obtenidos de otras familias
botánicas han mostrado tener un potencial importante de actividad citotóxica y
anticancerígena.
El trabajo que aquí se presenta evaluó la actividad citotóxica de extractos y
fracciones de la especie Isertia laevis sobre dos líneas celulares de cáncer de seno
MCF-7 y CSC-1595 y la línea celular de cólon Colo 205, mediante el método de
“fraccionamiento bioguiado por bioensayo MTT” un ensayo colorimétrico,
rápido, versátil y cuantitativo. Es parte del programa de investigación “La
biodiversidad colombiana como fuente de nuevos fármacos en oncología” que
viene desarrollando el Grupo de Investigación Fitoquímica de la Pontificia
Universidad Javeriana.
2. MARCO TEÓRICO.
Las plantas tienen una larga historia de uso en el tratamiento del cáncer, aunque
muchas de las demandas para la eficacia de tal tratamiento deben verse con algún
escepticismo porque el cáncer es definido pobremente en la medicina tradicional.
Los primeros agentes de uso clínico fueron los llamados alcaloides de vinca
vinblastina y vincristina aislados de Catharanthus roseus la cual es usada por
varias culturas para el tratamiento de diabetes. Esta droga fue descubierta durante
una investigación de la planta como un recurso potencial como agente
hipoglicemiante; por consiguiente, su descubrimiento puede ser atribuido
indirectamente a la observación de un uso medicinal de la planta. Cragg et al
(2003).
Rubiaceae es una de las familias de plantas vasculares más grandes, con 659
géneros y un número estimado de 10 700 especies alrededor del mundo, solo
Asteraceae, Orchidaceae y Poaceae tienen más especies. Aproximadamente 80 %
de los géneros son leñosas. Se han registrado 75 géneros y 729 especies de
Rubiaceae en los Andes por encima de los 1000 m de altitud, Palicourea el
género más grande con 164 especies. Andersson (1995).
Es una familia cosmopolita, pero con mayor presencia en las regiones tropicales
y subtropicales. En el neotrópico, Rubiaceae generalmente figura entre las
primeras familias con mayor número de especies cuando se realizan inventarios
locales y en Colombia no sólo es una de las más diversas sino con mayor número
de individuos en las regiones Andina, Amazónica y del Chocó biogeográfico, la
mayor diversidad se registra en la región Andina. Presenta una amplia cobertura
de ecosistemas, que van desde las zonas costeras y de los manglares hasta las
zonas de páramo Mendoza et al (2000), (2004).
Entre los nombres comunes y usos de las especies del género, en el Amazonas se
conoce como “tefé-capacira” a Isertia coccinea var hypoleuca (Benth.) K. Schum,
que tiene propiedades medicinales. Isertia haenkeana DC. es conocida en Bolívar
como “pava”; los Karijonas la llaman “cuyarocrí”; las hojas se emplean contra el
reumatismo, el paludismo y las úlceras. En Nariño se conoce a Isertia pittieri
(Standl.) Standl. como “tabaquillo” y “flor de quinde”. García Barriga (1992),
Mendoza et al (2004). Los indígenas miraña utilizan la corteza de Isertia sp que al
secarla y pulverizarla aplican sobre la zona que presenta heridas y granos para
acelerar la cicatrización. La Rotta (1988).
Las hojas se usan como anticancerígenas, hacen una decocción de dos hojas para
una taza, lo cual se toma dos veces al día. Se dice que cura el cáncer de
estómago; otro uso es el de los indios Cholos del Chocó que toman la decocción
de las hojas para curarse las infecciones de la piel, especialmente las “úlceras
malignas”; García Barriga (1992).
Algunos de las compuestos químicos que han sido reportados para otras especies
de Isertia según Bohlmann et al (1969); García Barriga (1992); Bruix et al
(1993) y Soto et al (2001) son alcaloides de tipo indólico y fueron encontrados
por Arriaga et al (1990) y Rumbero et al (1990), triterpenos y saponinas
triterpénicas por Um et al (2001).
Dos especies de este género han sido estudiados previamente: Isertia hypoleuca
de la cual se aislaron alcaloides del tipo quinamina, esteroles y triterpenos; en
Isertia haenkeana, aislaron secoiridoides, glicósidos triterpénicos, esteres de
ácido quínico. Bruix et al (1993); Rumbero- Sánchez et al (1991).
Alcaloides 2,2´- Indolylquinuclidine son encontrados generalmente en tallos y
hojas de especies de Cinchona y Remijia. Sin embargo recientemente, bases
semejantes han sido aisladas de I. hypoleuca e I. haenkeana. Dihidroquinamina y
epidihidroquinamina de I. hypoleuca; de las hojas de I. haenkeana también se ha
aislado el segundo compuesto. En I. haenkeana fue encontrado un alcaloide
derivado del ácido nicotínico que había sido aislado previamente de la especie
Nauclea diderrichii. Bruix et al (1993).
Las saponinas son producidas principalmente por plantas pero también por
animales marinos inferiores y algunas bacterias. Constan de un azúcar,
usualmente contienen glucosa, galactosa, xilosa, rhamnosa o metil pentosa,
glicosidicamente enlazada a una aglicona hidrofóbica (sapogenina) la cual puede
ser terpenoide o esteroide. La aglicona puede contener uno o más enlaces C-C
insaturados. La cadena oligosacárida está unida normalmente a la posición C3
(monodesmósido) pero muchas saponinas tienen un azúcar adicional en la
posición C26 o C28 (bidesmósido). Francis et al (2002).
Acacia victoriae Células humanas Saponinas Actividad citotóxica Mujo et al., 2001
Benth de leucemia T. triterpénicas
(Leguminosae)
Acacia concinna Células de Saponinas Actividad citotóxica Tezuka et al., 2000
Wall. fibrosarcoma triterpénicas
(Leguminosae) humano HT-1080
Pittosporum Líneas celulares de Saponinas Actividad citotóxica Seo et al., 2002
viridiflorum Sims cáncer de ovario triterpénicas
(Pittosporaceae) A2780
Chysanthemum Células Raji Triterpeno Efecto inhibitorio Ukiya et al., 2002
morifolium pentacíclico sobre virus Epstein-
(Composite) dioles y Barr
trioles
Clinopodium Melanoma Glucósidos, Inhibe el crecimiento Dzhambazo et al.,
vulgara L. metastático triterpenos de células tumorales. 2002
(Lamiaceae) humano,carcinoma y saponinas
epidermoide triterpénicas
humano
El género Uncaria ha sido una de los más estudiados, se descubrieron dos esteres
triterpenos tetracíclicos y ácidos uncarínicos de la especie U. rhynchophylla. Estos
compuestos inhibieron la fosfolipasa Cγl (PLCγl) con CI50 de 35.66 y 44.55 µM
respectivamente. Los compuestos también inhibieron el crecimiento de las líneas
celulares de cáncer A-549, HCT-15, MCF-7 y HT-1197. Otros seis compuestos
encontrados en esta especie fueron reportados porque también inhibieron tanto la
PLCγl y el crecimiento de células de cáncer, con una CI50 de 9.5-4.6 µM y 0.5 –
6.5 µg/ml respectivamente. Estos compuestos incluían nuevos ácidos uncarínicos
y otros tres esteres triterpenos pentacíclicos. Heitzman et al (2005).
Otras especies estudiadas han sido Chiococca alba, Hamelia patens, Posoqueria
latifolia, Psychotria parvifolia, P. elata y Randia matudae, se utilizaron células
Hep G2, RatH-4-II-E, MDA-MB-231, Hs 578T, 5637. Ch. alba actuó mejor en la
línea celular Hs 578T con un porcentaje de células muertas de 100%, en las líneas
celulares Hep G2 y MDA-MB-231 no presentó actividad citotóxica y en la línea
celular 5637 tuvo un porcentaje de 6.44%;
Las líneas celulares son células de origen animal o humano que se han adaptado a
vivir en cultivo, poseen capacidad de proliferación ilimitada, debido a que han
sufrido un proceso de transformación, que puede ocurrir espontáneamente, ser
inducido por compuestos químicos, radiaciones o virus; que implica la alteración
de las características de crecimiento. Freshney (2000).
La demostración de que las células y los tumores sólidos humanos pueden dar
origen a líneas celulares continuas, fomentó su empleo en investigación sobre
cáncer e impulsó su implementación como método complementario de
“screening” o tamizaje previo a los ensayos in vivo, en el Grupo de Desarrollo de
Fármacos del Instituto Nacional de Cáncer de los Estados Unidos. Cordero
(2002).
Entre las ventajas de las línea celulares que citan Morgan & Darling (1995) se
encuentran que suelen ser más sencillas de manejar que las células primarias,
crecen continuamente y puede obtenerse un mayor número de células. Además
son más fáciles de obtener y existe una información relativamente abundante
sobre ellas.
El MTT es una sal de tetrazolio color amarillo que se utiliza para medir la
actividad y viabilidad celular por el rompimiento causado por la reducción
(aceptación de un H+) del anillo de la sal de tetrazolio MTT por acción de las
enzimas deshidrogenasas mitocondriales: succinato–deshidrogenasas, para
formar unos cristales azules de formazan insolubles en agua, pero solubles en
dimetil sulfóxido (DMSO). La viabilidad celular es proporcional a la absorbancia,
que presentan los cristales de formazán en solución. Angel (1999). Figura 3.
Para Pardo et al (2003) el país no tiene aún conocimiento certero acerca del
comportamiento de la enfermedad en nuestro medio, después de las enfermedades
cardiovasculares y las muertes violentas, las neoplasias malignas son la tercera
causa de mortalidad en Colombia, para el 2000, el cáncer de cuello uterino fue el
más común en las mujeres (23,4%), seguido por el de mama (19,7%) y el de piel
(11,8%).
En la parte de los Andes tropicales por encima de los 1000 m.s.n.m, el registro de
géneros de Rubiaceae que se tiene es de 75 y 729 especies, el género Isertia, tribu
Isertieae, aunque presenta una buena distribución es un género poco conocido.
¿Tendrán algún efecto citotóxico frente a las líneas celulares de cáncer de seno
CSC-1595 y MCF-7 y la línea de cólon Colo 205 los extractos y fracciones
obtenidos de Isertia laevis?
3.3 Justificación.
Las plantas son una fuente de drogas medicinales que podrían ser aprovechadas en
un uso clínico para atacar muchas de las enfermedades que no tienen opciones de
tratamiento; en los bosques colombianos un gran número de especies vegetales
no han sido estudiados, esta clase de trabajos son convenientes si se tiene en
cuenta la rápida destrucción que están sufriendo estas zonas de vida.
Material vegetal:
Obtención de extractos:
Obtención de fracciones:
A (5g) del extracto en petrol floculado, se le hizo una cromatografía en columna
tipo flash con sílica gel G-60, eluída con Petrol, CH2Cl2, AcOEt, MeOH. A cada
fracción se le realizó cromatografías en placas de sílica gel corridas en Petrol:
AcOEt (7:3), reveladas con ácido perclórico.
(2g) del extracto etanólico, se percoló en una columna cromatografía tipo flash
con RP-18 y eluída con mezclas de MeOH:H2O (10:2), MeOH, MeOH:CH2Cl2
(8:2) y CH2Cl2, se obtuvieron 10 fracciones de 50 mL cada una. Las primeras
fracciones se monitorearon en CCD de RP-18 corridas en MeOH:H2O (10:2),
para el resto de fracciones CCD sílica gel corridas en Petrol:AcOEt (7:3),
reveladas con ácido perclórico.
Cromatografía
columna flash
sílica gel
Cromatografía
en columna tipo flash
RP-18
Cromatografía
columna Sephadex
sephadex
Bioensayos:
Líneas celulares:
Cultivo celular:
Se utilizaron cajas de 96 pozos para el cultivo de las células con medio de cultivo
L-15 suplementado con 10% de suero fetal bovino y 100 µl/10ml, penicilina
estreptomicina y neomicina (5000U, 5mg estreptomicina y 10 mg neomicina/ml).
Las líneas celulares fueron resuspendidas en medio de cultivo L-15 (±40 000
células por pozo) en 100 µl por pozo. Las cajas se incubaron a 37º C y 5% de CO2
por 24 horas, tiempo para la formación de la monocapa de células. Después de la
formación de la monocapa, se colocaron 20 µl de cada una de las soluciones de
extractos y fracciones a las concentraciones definidas (300 µg/ml de extractos y
100 µg/ml de fracciones), en los pozos de la caja, cada concentración de los
extractos y fracciones tenían seis réplicas, se incubaron por 24 horas, tiempo
para que las células puedan incorporar las sustancias. Pasado este periodo las
soluciones de extractos y sus respectivas fracciones son retiradas y a cada pozo se
le adicionaron 100 µl de medio L-15, por 24 horas para establecer si las células se
recuperan.
Incubar 4h
Retirar medio Dulbecco modificado y MTT
6.1 RESULTADOS.
Para las fracciones Petrol, CH2Cl2, AcOEt, MeOH del extracto en Petrol, las
pruebas fitoquímicas determinaron la presencia de esteroides y/o triterpenos en
las fracciones CH2Cl2, AcOEt, MeOH, tabla 3.
Estas fracciones se monitorearon mediante una CCD en sílica gel G-60 corrida en
Petrol: AcOEt (7:3) y revelada en ácido perclórico como se observa en la figura
6. Los Rf para el extracto Petrol fueron 0.25; 0.38; 0.52, los Rf para la fracción
Petrol fueron: 0.48; 0.55; 0.63 y 0.76. Rf fracción CH2Cl2: 0.14; 0.36; 0.51 y
0.66 Rf fracción AcOEt: 0.14; 0.39. Rf fracción MeOH: 0.69 y 0.80.
Tabla 6. Porcentaje de viabilidad de las células para las fracciones Petrol, CH2Cl2,
AcOEt, MeOH del extracto petrol. Concentraciones aplicadas a 100 µg/ml.
F. Petrol F. CH2Cl2 F. AcOEt F. MeOH
MCF-7 66 81 97 32
CSC 1595 64 43 38 7
Colo 205 77 82 97 69
100
VIABILIDAD
80
%
60
40
20
0
Petrol 300ug/mL F. Petrol 100ug/ml F. CH2Cl2 F. AcOEt F. MeOH
EXTRACTO Y FRACCIONES
80
VIABILIDAD
60
%
40
20
0
P et r ol F. P et r ol F. CH2Cl 2 F. A c OE t F. M eOH
300ug/ mL 100ug/ ml
EXTRACTO Y FRACCIONES
Figura 10. Efecto citotóxico del extracto y fracciones petrol en línea celular 1595.
120
% VIABILIDAD
100
80
60
40
20
0
Petrol 300ug/mL F. Petrol F. CH2Cl2 F. AcOEt F. MeOH
100ug/ml
EXTRACTO Y FRACCIONES
Figura 11. Efecto citotóxico de extracto y fracciones de Petrol sobre línea celular
Colo 205.
Las fracciones F.1 ....F.10 obtenidas a partir del extracto total etanólico se
probaron a la concentración de 100 µg/mL, La fracción F.9 presentó la mayor
actividad frente a la línea celular MCF-7 con un porcentaje de viabilidad del 20%
; La fracción F.3 presentó actividad con porcentajes de viabilidad 27% y 23%
para las líneas celulares de cáncer de seno MCF-7 y CSC 1595 respectivamente y
no activa para la línea de colón Colo 205 con un 162% de viabilidad , sin
embargo sí mostraron actividad para esta línea las fracciones F. 4 y F. 5 con un
41% de viabilidad, como se muestra en la Tabla 7 y figuras 12,13 y 14.
Tabla 7. Porcentaje de viabilidad de las células para las fracciones 1 – 10 del
extracto EtOH. Concentraciones aplicadas a 100 µg/ml.
F.1 F.2 F.3 F.4 F.5 F.6 F.7 F.8 F.9 F.10
MCF-7 93 43 27 44 72 44 29 50 20 55
CSC 1595 130 39 23 48 58 57 35 38 42 104
Colo 205 108 103 162 41 41 115 127 157 152 148
100
VIABILIDAD
80
60
%
40
20
0
ETOH F.2 F.4 F.6 F.8 F-10
total
EXTRACTO Y FRACCIONES
140
VIABILIDAD
120
100
80
%
60
40
20
0
ETOH F.2 F.4 F.6 F.8 F-10
total
EXTRACTO Y FRACCIONES
200
VIABILIDAD
150
%
100
50
0
ETOH F.2 F.4 F.6 F.8 F-10
total
EXTRACTO Y FRACCIONES
Para las subfracciones de la fracción MeOH del extracto en Petrol, las pruebas
fitoquímicas determinaron la presencia de esteroides y/o triterpenos, tabla 8.
Tabla 8. Pruebas fitoquímicas de las subfracciones de la fracción MeOH del
extracto Petrol.
Las subfracciones Sf1, Sf2 y Sf3 obtenidas a partir de la fracción MeOH del
extracto Petrol se probaron a la concentración de 50 µg/ml. La subfracción Sf1
mostró un porcentaje de viabilidad del 100%; La subfracción Sf2 presentó un
porcentaje de viabilidad de 72% y Sf3 83% de viabilidad para la línea celular de
cáncer de seno CSC 1595 como se muestra en la Tabla 9 y figura 16.
100
% VIABILIDAD
80
60
40
20
0 Alcaloide subfr.1 subfr. 2 Subfr.3
ALCALOIDE, SUBFRACCIONES
% viabilidad
Sf1+ Sf2+Sf3 Sf1+ Sf2 Sf2+Sf3 Sf1+Sf3
Concentración Concentración Concentración Concentración
16.6 µg/ml 16.6 µg/ml 25 µg/ml 25 µg/ml
CSC 1595 71 68 92 84
La fracción activa F.3 se paso por una columna con Sephadex, eluída con MeOH,
obteniéndose dos subfracciones, se realizó cromatografía en placas de RP-18
corridas en MeOH:H2O (10:2), revelada con ácido perclórico. Los Rf para la
fracción F.3 y sus subfracciones 1 y 2 presentaron manchas con Rf 0.30; 0.37 y
0.45, figura 17.
F3 S3.1 S3.2
Figura 17. Cromatografía subfracciones de la fracción 3 del extracto EtOH
Las pruebas fitoquímicas determinaron la presencia de esteroides y/o triterpenos
en las subfracciones de la fracción 3 del extracto EtOH. Tabla 11.
% viabilidad
Sf1 Sf2
CSC 1595 60 61
61,5
VIABILIDAD
61
%
60,5
60
subf r .1 Subf r . 2
SUBFRACCIONES
La línea celular obtenida de tumor de paciente colombiano CSC 1595 fue la más
sensible al efecto de las fracciones CH2Cl2, AcOEt y MeOH con porcentajes de
viabilidad del 43%, 38% y 7% respectivamente, este resultado es interesante si
se tiene en cuenta que esta línea se considera joven, conservando un buen grado
de similitud entre el tejido tumoral y la línea celular, opuesto a lo que sucede con
la líneas celulares comerciales como lo menciona Téllez et al (2004). Las
fracciones no fueron activas para la línea celular de colón Colo 205. Estos
resultados demuestran cierta selectividad de acción frente a las líneas tumorales de
diversa procedencia y origen.
El comportamiento de las fracciones del extracto de EtOH también fue similar
para las líneas 1595 y MCF-7. Las fracciones 2, 3, 4, 7, 8 y 9 del extracto EtOH
presentaron porcentajes de viabilidad entre 23 y 50% para las líneas celulares
CSC 1595 y MCF-7, la fracción 6 tuvo una viabilidad 44% solo para la línea
celular MCF-7, la línea celular Colo 205 tuvo un comportamiento diferente al de
las otras dos líneas, siendo las fracciones 4 y 5 las más activas con un porcentaje
de viabilidad de 41% como se presenta en la tabla 7, opuesto a lo que mostró la
viabilidad para el resto de fracciones y extractos de petrol y EtOH que tuvieron
un efecto proliferativo con porcentajes de viabilidad entre 79 y 162% en esta línea
celular. Figuras 13.
Las pruebas fitoquímicas cualitativas muestran que las fracciones del extracto
EtOH y del extracto petrol contienen esteroides y/o triterpenos y saponinas
triterpénicas Tablas 3 y 4, concuerda con la química reportada en la literatura
para las especies de Isertia, Arriaga et al (1990), Rumbero et al (1990), Bruix et
al (1993); Um et al (2001).
Con la prueba t se comparó el control con cada uno de los extractos y fracciones
evaluadas, los valores de t calculados mostraron ser inferiores a los valores de t
de la tabla. Se rechazó la Ho, es decir sí hay diferencias significativas entre los
tratamientos y el control.
7. CONCLUSIONES
Las líneas celulares de cáncer de seno CSC 1595 y MCF-7 fueron las líneas más
sensibles al exponerlas a los diferentes extractos y fracciones de petrol y EtOH.
Las fracciones del extracto EtOH presentaron moderada actividad citotóxica para
las líneas celulares CSC 1595 y MCF-7.
Se aconseja utilizar otras partes de la planta para comparar cual presenta mayor
concentración de metabolitos secundarios.
9. REFERENCIAS
Aquino, R., De Tomáis, N., De Simona, F & Pizza, C. 1997. Triterpenes and
quinovic acid glycosides from Uncaria tomentosa. Phytochemistry 45: 1035-
1040.
Bohrmann, H., Lau-Cam, C., Tashiro, J & Youngken Jr. 1969. Constituens of
Isertia hypoleuca Benth. (Rubiaceae)-I. Isolation and characterization of
dihydroquinamine from the leaf material. Phytochemistry. 8: 649-652.
Cheng, Z-H., Yu, B-Y. & Yang, X-W. 2002. 27-nor-triterpenoid glycosides from
Mitragyna inermis. Phytochemistry 61: 379-382.
Díaz, S., Piñeros, M & Sánchez, O. 2005. Detección temprana del cáncer de
mama; aspectos críticos para un programa de tamizaje organizado en Colombia.
Revista Colombiana de Cancerología 9: 93- 105.
Ferrari, M., Fornasiero, M.C & Isetta, A.M. 1990. MTT colorimetric assays for
testing macrophage cytotoxic activity in vitro. Journal of Immunological
Methods. 131: 165-172.
Francis, G., Zohar, K., Harinder, P. S., Becker, M. & Becker, K. 2002. The
biological action of saponins in animal systems: a review. The British Journal of
Nutrition 88: 587-605.
Heitzman, M., Neto, C., Winiarz, A., Vaisberg, J. & Hammond, G. 2005.
Ethnobotany, phytochemistry and pharmacology of Uncaria (rubiaceae).
Phytochemistry 66: 5-29.
Monks, A., Scudiero, D., Skehan, P., Shoemaker, R., Paull, K., Vistica, D.,
Hose, C., Langley, J., Cronise, P., Vaigro-Wolff, A., Gray-Goodrich, M.,
Campbell, H., Mayo, J & Boyd, M. 1991. Feasibility of high-flux anticancer
drug screen using a diverse panel of cultured human tumor cell lines. Journal of
the National Cancer Institute. 83: 757-766.
Mosmann, T. 1983. Rapid colorimetric assays for cellular growth and survival:
application to proliferation and cytotoxicity assays. Journal of immunological
Methods. 65: 55-63.
Pardo, C., Murillo, R.., Piñeros, M & Castro, M. A.. 2003. Casos nuevos de
cáncer en el Instituto Nacional de Cancerología, Colombia, 2002. Revista
Colombiana de Cancerología 7: 1- 24.
Setzer, M., Moriarity, D., Lawton, R., Setzer, N., Gentry, G. & Haber, W.
2003. Phytomedicinal potencial of tropical cloudforest plants from Monteverde,
Costa Rica. Revista de Biología Tropical 51: 647-674.
Sparg, S.G., Light, J & Staden J.van. 2004. Biological activities and distribution
of plant saponins. Journal of Ethnopharmacology. 94: 219-243.
Studzinski, G.P. 1999. Cell grown, differentiation and senescente. The paractical
approach. Series editor: B. D. Hames.
Téllez, N., de Castro, C., Riveros, T. & Torrenegra, R. 2006. Efectos citotóxicos
in vitro de extractos y fracciones de Espeletia killipii Cuatr. Frente a líneas
celulares tumorales humanos. Brazilian Journal of Pharmacognosy. 16: 12-16.
Téllez, N., de Castro, C., Riveros, T., Alvarado, A., Mendoza, L., Pedroso, J.
& Torrenegra, R. 2004. Citotoxicidad de metabolitos secundarios de algunas
plantas colombianas. Actualidad Biológica. 26: 12–16.
Um, B. H., Polat, M., Lobstein, A., Weniger, B., Aragón, R. & Declercq, L.
2002. A new dicaffeoylquinic acid butyl ester from Isertia pittieri. Fitoterapia. 73:
550-552.
Um, B. H., Weniger, B., Lobstein, A., Pouplin, T., Polat, M & Aragon, R. 2001.
Triterpenoid saponins from Isertia pittieri. Journal of Natural Products. 12: 1588-
1589.
10. ANEXOS.
CSC-1595
Petrol F. Petrol
300ug/mL 100ug/ml F. CH2Cl2 F. AcOEt F. MeOH CONTROL
0,108 0,12 0,077 0,065 0,06 0,147
0,117 0,101 0,076 0,069 0,006 0,193
0,108 0,094 0,064 0,058 0,005 0,191
0,111 0,091 0,081 0,073 0,004 0,194
0,094 0,113 0,085 0,062 0,005 0,188
0,011 0,176 0,086 0,092 0,005 0,172
Promedio 0,0915 0,115833333 0,078166667 0,069833333 0,014166667 0,180833333
Desv Est 0,040153456 0,031492327 0,008035339 0,01205681 0,022462561 0,018432761
Comp Control 5,7623E-04 0,00141388 1,97853E-07 2,23796E-07 6,5468E-08
Viabilidad 50,59907834 64,05529954 43,22580645 38,61751152 7,834101382
Tabla 14. Efecto citotóxico de extracto y fracciones 1-3 de EtOH sobre la línea
celular CSC 1595.
Tabla 16. Efecto citotóxico de fracciones 7-10 de EtOH sobre la línea celular
CSC 1595.
Tabla 17. Efecto citotóxico de extracto y fracciones petrol sobre la línea Colo
205.
Colo 205
Petrol F. Petrol
300ug/mL 100ug/ml F. CH2Cl2 F. AcOEt F. MeOH CONTROL
0,252 0,19 0,227 0,246 0,224 0,246
0,389 0,26 0,243 0,302 0,266 0,281
0,33 0,195 0,223 0,267 0,152 0,318
0,234 0,175 0,256 0,242 0,134 0,284
0,242 0,175 0,163 0,272 0,149 0,228
0,234 0,255 0,216 0,25 0,19 0,256
Promedio 0,280166667 0,208333333 0,221333333 0,263166667 0,185833333 0,268833333
Desv Est 0,06456134 0,038944405 0,032054121 0,022435834 0,051164115 0,032089978
Comp Control 7,0826E-01 0,014868353 0,02811947 0,730327646 0,007165794
Viabilidad 104,2157471 77,49535028 82,33106014 97,89212647 69,12585245
Tabla 18. Efecto citotóxico de extracto y fracciones 1-3 de EtOH sobre la línea
celular colo 205.
ETOH total F.1 F.2 F.3 CONTROL
0,325 0,203 0,221 0,462 0,246
0,255 0,262 0,197 0,39 0,281
0,202 0,289 0,321 0,353 0,318
0,208 0,374 0,33 0,55 0,284
0,345 0,383 0,37 0,602 0,228
0,299 0,235 0,223 0,267 0,256
Promedio 0,272333333 0,291 0,277 0,437333333 0,268833333
Desv Est 0,060251694 0,07359076 0,071897149 0,125525562 0,032089978
Comp Control 9,0255E-01 0,51417516 0,804586015 0,009725912
Viabilidad 101,3019219 108,2455053 103,0378177 162,6782393
Tabla 19. Efecto citotóxico de fracciones 4-6 de EtOH sobre la línea celular Colo
205.
F.4 F.5 F.6 CONTROL
0,258 0,241 0,553 0,401
0,197 0,208 0,548 0,455
0,212 0,198 0,535 0,406
0,179 0,147 0,46 0,429
0,155 0,172 0,481 0,579
0,142 0,186 0,599 0,482
Promedio 0,1905 0,192 0,529333333 0,458666667
Desv Est 0,041965462 0,032106074 0,050867147 0,066358622
Comp Control 7,93916E-06 4,75947E-06 0,065256485
Viabilidad 41,53343023 41,86046512 115,4069767
Tabla 20. Efecto citotóxico de fracciones 7-10 de EtOH sobre la línea celular
Colo 205.
F.7 F.8 F.9 F.10 CONTROL
0,575 0,665 0,667 0,74 0,401
0,655 0,718 0,784 0,685 0,455
0,564 0,799 0,886 0,395 0,406
0,55 0,704 0,491 0,698 0,429
0,466 0,621 0,776 0,711 0,579
0,701 0,835 0,606 0,863 0,482
Promedio 0,585166667 0,723666667 0,701666667 0,682 0,458666667
Desv Est 0,082804388 0,080587013 0,142138899 0,154660919 0,066358622
Comp Control 1,5298E-02 9,90923E-05 0,003517424 0,008712474
Viabilidad 127,5799419 157,7761628 152,9796512 148,6918605
Tabla 21. Efecto citotóxico de extracto y fracciones Petrol sobre la línea celular
MCF-7.
MCF-7
Petrol F. Petrol
300ug/mL 100ug/ml F. CH2Cl2 F. AcOEt F. MeOH CONTROL
0,388 0,255 0,421 0,42 0,152 0,458
0,348 0,379 0,421 0,492 0,155 0,403
0,49 0,352 0,372 0,535 0,182 0,502
0,654
0,548
0,411
Promedio 0,408666667 0,328666667 0,404666667 0,482333333 0,163 0,496
Desv Est 0,073221126 0,065209917 0,028290163 0,058106225 0,016522712 0,094891517
Comp Control 2,0887E-01 0,030365027 0,157508506 0,828605817 0,000639086
Viabilidad 82,39247312 66,26344086 81,58602151 97,24462366 32,86290323
Tabla 22. Efecto citotóxico de extracto y fracciones 1-3 de EtOH sobre la línea
celular MCF-7.
ETOH total F.1 F.2 F.3 CONTROL
0,04 0,537 0,197 0,14 0,458
0,407 0,408 0,221 0,12 0,403
0,692 0,442 0,222 0,142 0,502
0,654
0,548
0,411
Promedio 0,379666667 0,462333333 0,213333333 0,134 0,496
Desv Est 0,326858277 0,066860551 0,014153916 0,012165525 0,094891517
Comp Control 4,2043E-01 0,604456533 0,001632932 0,000380601
Viabilidad 76,54569892 93,21236559 43,01075269 27,01612903
Tabla 23. Efecto citotóxico de fracciones 4-6 de EtOH sobre la línea celular
MCF-7.
F.4 F.5 F.6 CONTROL
0,224 0,462 0,182 0,458
0,192 0,326 0,211 0,403
0,251 0,292 0,265 0,502
0,654
0,548
0,411
Promedio 0,222333333 0,36 0,219333333 0,496
Desv Est 0,02953529 0,089955545 0,042122836 0,094891517
Comp Control 0,002120235 0,078728504 0,002215909
Viabilidad 44,82526882 72,58064516 44,22043011
Tabla 24. Efecto citotóxico de fracciones 7-10 de EtOH sobre la línea MCF-7.
F.7 F.8 F.9 F.10 CONTROL
0,14 0,214 0,108 0,281 0,458
0,143 0,297 0,1 0,356 0,403
0,162 0,237 0,102 0,182 0,502
0,654
0,548
0,411
Promedio 0,148333333 0,249333333 0,103333333 0,273 0,496
Desv Est 0,011930353 0,04285246 0,004163332 0,087275426 0,094891517
Comp Control 4,8556E-04 0,004124494 0,000226881 0,011455932
Viabilidad 29,90591398 50,2688172 20,83333333 55,04032258
Tabla 25. Efecto citotóxico del sólido alcaloide sobre la línea celular CSC 1595.
Alcaloide CONTROL
0,3390 0,4150
0,3930 0,4460
0,3280 0,4840
0,4650 0,3910
0,3710 0,4110
0,3010 0,4950
Viabilidad 83,1567
Tabla 31. Análisis estadístico del efecto citotóxico del extracto y fracciones 1-3
EtOH sobre la línea celular CSC 1595. (300 µg/ml), (100 µg/ml).
VARIABLE 1 VARIABLE1 VARIABLE1 VARIABLE1 VARIABLE 2
Ext. EtOH F.1 F.2 F.3
Media 0,080947109 0,21922655 0,05788927 0,039973183 0,179064859
Varianza 0,000850167 0,00617057 0,00218257 0,000126967 0,000339767
Observaciones 6 6 6 6 6
Diferencia hipotética de
las medias 0 0 0 0
Grados de libertad 10 10 10 10
P(T< =t) una cola 4,3416E-05 0,06503468 0,0001621 1,11168E-08
P(T< =t) dos colas 8,68319E-05 0,13006935 0,0003242 2,22335E-08
Tabla 32. Análisis estadístico del efecto citotóxico de fracciones EtOH sobre la
línea celular CSC 1595. (100 µg/ml).
VARIABLE1 VARIABLE1 VARIABLE1 VARIABLE 2
F.4 F.5 F.6
Media 0,079466437 0,095332209 0,095077002 0,162363964
Varianza 3,61667E-05 5,85667E-05 4,67E-05 0,000534967
Observaciones 6 6 6 6
Diferencia hipotética
de las medias 0 0 0 0
Grados de libertad 10 10 10 10
P(T< =t) una cola 2,67353E-06 1,92402E-05 1,69646E-05 0
P(T <=t) dos colas 5,34706E-06 3,84804E-05 3,39292E-05 0
Tabla 33. Análisis estadístico del efecto citotóxico de fracciones EtOH sobre la
línea celular CSC 1595. (100 µg/ml).
VARIABLE1 VARIABLE1 VARIABLE1 VARIABLE1 VARIABLE 2
F.7 F.8 F.9 F.10
Media 0,058071563 0,061824903 0,069952263 0,17096484 0,162363964
Varianza 2,99E-05 0,000128167 4,67E-05 0,000170167 0,000534967
Observaciones 6 6 6 6 6
Diferencia hipotética de las
medias 0 0 0 0 0
Grados de libertad 10 10 10 10 10
P(T< =t) una cola 3,31465E-07 1,11222E-06 1,13797E-06 0,276157613 0
P(T< =t) dos colas 6,6293E-07 2,22443E-06 2,27595E-06 0,552315225 0
Tabla 34. Análisis estadístico del efecto citotóxico del extracto y fracciones
Petrol sobre la línea celular colo 205. (300 µg/ml), (100 µg/ml).
VAR. 1 VAR. 1 VAR. 1 VAR. 1 VAR. 1 VAR. 2
Ext. Petrol F. Petrol F. CH2Cl2 F. AcOEt F. MeOH
Media 0,26968121 0,20278726 0,216796946 0,2616623 0,175234231 0,26570122
Varianza 0,00416817 0,00151667 0,001027467 0,00050337 0,002617767 0,00102977
Observaciones 6 6 6 6 6 6
Diferencia hipotética
de las medias 0 0 0 0 0 0
Grados de libertad 10 10 10 10 10 10
P(T< =t) una cola 0,35413138 0,00743418 0,014059735 0,36516382 0,003582897
P(T <=t) dos colas 0,70826276 0,01486835 0,02811947 0,73032765 0,007165794
Tabla 35. Análisis estadístico del efecto citotóxico del extracto y fracciones 1-3
EtOH sobre la línea celular colo 205. (300 µg/ml), (100 µg/ml).
VAR.2
VAR. 1 VAR. 1 VAR. 1 VAR. 1
Ext. EtOH F.1 F.2 F.3
Media 0,26087284 0,26570122 0,27594845 0,261624814 0,40578663
Varianza 0,00363027 0,00102977 0,0054156 0,0051692 0,01575667
Observaciones 6 6 6 6 6
Diferencia hipotética de las
medias 0 0 0 0 0
Grados de libertad 10 10 10 10 10
P(T< =t) una cola 0,45127341 0,25708758 0,402293007 0,00486296
P(T <=t) dos colas 0,90254683 0,51417516 0,804586015 0,00972591
Tabla 36. Análisis estadístico del efecto citotóxico de fracciones 4-6 EtOH sobre
la línea celular colo 205. (100 µg/ml).
VAR.1 VAR.1 VAR.1 VAR. 2
F.4 F.5 F.6
Media 0,183208619 0,187496522 0,52517979 0,45155463
Varianza 0,0017611 0,0010308 0,00258747 0,00440347
Observaciones 6 6 6 6
Diferencia hipotética
de las medias 0 0 0 0
Grados de libertad 10 10 10 10
P(T< =t) una cola 3,96958E-06 2,37973E-06 0,03262824
P(T< =t) dos colas 7,93916E-06 4,75947E-06 0,06525649
Tabla 37. Análisis estadístico del efecto citotóxico de fracciones EtOH 7-10
sobre la línea celular colo 205. (100 µg/ml).
VARIABLE1 VARIABLE1 VARIABLE1 VARIABLE1 VARIABLE 2
F.7 F.8 F.9 F.10
Media 0,575289271 0,716294168 0,67575836 0,64234781 0,45155463
Varianza 0,006856567 0,006494267 0,02020347 0,02392 0,00440347
Observaciones 6 6 6 6 6
Diferencia hipotética de las
medias 0 0 0 0 0
Grados de libertad 10 10 10 10 10
P(T< =t) una cola 0,007649051 4,95462E-05 0,00175871 0,00435624
P(T< =t) dos colas 0,015298102 9,90923E-05 0,00351742 0,00871247
Tabla 38. Análisis estadístico del efecto citotóxico del extracto y fracciones Petrol
sobre la línea celular MCF-7. (300 µg/ml), (100 µg/ml).
VAR.1 VAR. 1 VAR. 1 VAR. 1 VAR.1 VARIABLE2
Ext. Petrol F. Petrol F. CH2Cl2 F. AcOEt F. MeOH
Media 0,4004432 0,31911498 0,4032927 0,477506911 0,16194274 0,482168327
Varianza 0,00536133 0,00425233 0,00080033 0,003376333 0,000273 0,0090044
Observaciones 6 6 6 6 6 6
Diferencia hipotética
de las medias 0 0 0 0 0 0
Grados de libertad 10 10 10 10 10 10
P(T<=t) una cola 0,10443536 0,01518251 0,07875425 0,414302908 0,00031954
P(T< =t) dos colas 0,20887071 0,03036503 0,15750851 0,828605817 0,00063909
Tabla 39. Análisis estadístico del efecto citotóxico del extracto y fracciones 1-3
EtOH sobre la línea celular MCF-7. . (300 µg/ml), (100 µg/ml).
VARIABLE 1 VARIABLE1 VARIABLE1 VARIABLE1 VARIABLE 2
Ext. EtOH F.1 F.2 F.3
Media 0,10379872 0,45623066 0,21268249 0,133224125 0,48216833
Varianza 0,10683633 0,00447033 0,00020033 0,000148 0,0090044
Observaciones 6 6 6 6 6
Diferencia hipotética de las
medias 0 0 0 0 0
Grados de libertad 10 10 10 10 10
P(T< =t) una cola 0,21021593 0,30222827 0,00081647 0,000190301
P(T <=t) dos colas 0,42043187 0,60445653 0,00163293 0,000380601
Tabla 40. Análisis estadístico del efecto citotóxico de fracciones EtOH 4-6 sobre
la línea celular MCF-7. (100 µg/ml).
VAR.1 VAR.1 VAR.1 VAR. 2
F.4 F.5 F.6
Media 0,219672672 0,346554609 0,214172098 0,4821683
Varianza 0,000872333 0,008092 0,001774333 0,0090044
Observaciones 3 3 3 3
Diferencia
hipotética de las
medias 0 0 0 0
Grados de
libertad 7 7 7 7
P(T <=t) una cola 0,001060117 0,039364252 0,001107954
P(T <=t) dos
colas 0,002120235 0,078728504 0,002215909
Tabla 41. Análisis estadístico del efecto citotóxico de fracciones EtOH 7-10
sobre la línea celular MCF-7. (100 µg/ml).
VARIABLE1 VARIABLE1 VARIABLE1 VARIABLE1 VARIABLE 2
F.7 F.8 F.9 F.10
Media 0,14771992 0,244711981 0,103223388 0,252903903 0,48216833
Varianza 0,00014233 0,001836333 1,73333E-05 0,007617 0,0090044
Observaciones 3 3 3 3 3
Diferencia
hipotética de las
medias 0 0 0 0 0
Grados de libertad 7 7 7 7 7
P(T< =t) una cola 0,00024278 0,002062247 0,000113441 0,005727966
P(T <=t) dos colas 0,00048556 0,004124494 0,000226881 0,011455932
Tabla 42. Análisis estadístico del efecto citotóxico de sólido alcaloide sobre la
línea celular CSC 1595. (25 µg/ml).
VAR.1 VAR 2
Alcaloide
Media 0,35903684 0,437039267
Varianza 0,00339057 0,001772667
Observaciones 6 6
Diferencia hipotética
de las medias 0 0
Grados de libertad 10 10
P(T< =t) una cola 0,0149798
P(T< =t) dos colas 0,0299596
Tabla 43. Análisis estadístico del efecto citotóxico de la fracción MeOH sobre la
línea celular CSC 1595. (50 µg/ml).
Media 0,163413505 0,24983909
Varianza 0,000190917 0,00022967
Observaciones 4 4
Diferencia hipotética de las medias 0 0
Grados de libertad 6 6
P(T< =t) una cola 7,69487E-05
P(T <=t) dos colas 0,000153897
slcastro@javeriana.edu.co, ntellez@javeriana.edu.co
RESUMEN
cáncer de seno (MCF-7 y CSC 1595) y de cólon (colo 205). Las fracciones
1595 y fue la fracción más activa, del extracto EtOH la fracción 3 con 27%
mostró mejor resultado. Para la línea celular colo 205 las fracciones más activas
The fractions of Isertia laevis showed citotoxic activity in front of human tumor
cell lines of breast cancer (MCF-7 and CSC 1595) and of colon (colo 205). The
fractions were proven to a concentration of 100 µg/ml, the fraction MeOH of the
extract Petrol presented a percentage of viability of 7% on the cell line 1595 and it
was the most active fraction, of the extract EtOH the fraction 3 with 27% for the
line MCF-7 and 23% of viability in the line 1595 the fraction that showed better
result were. For the cell line colo 205 the most active fractions it was the 4 and 5
of the extract EtOH with a percentage of viability of 41%. The tests qualitative
de la especie I. laevis sobre las líneas celulares de cáncer de seno MCF-7, CSC-
MATERIALES Y MÉTODOS.
sílica gel eluída con Petrol, CH2Cl2, AcOEt, MeOH de la cual se obtuvieron 4
columna flash con RP-18 eluída con mezclas de MeOH:H2O (10:2), MeOH,
sinérgico o antagónico entre las sustancias que están presentes en la fracción que
Bioensayos: La viabilidad celular fue determinada por la técnica del MTT, ensayo
(adenocarcinoma), hipertriploide.
Cultivo celular: Se utilizaron cajas de 96 pozos para el cultivo de las células con
medio L-15 suplementado con 10% de suero fetal bovino y 100 µl/10ml,
15 (±40 000 células por pozo) en 100 µl por pozo. Las cajas se incubaron a 37º C
horas, tiempo para que las células puedan incorporar las sustancias. Pasado este
cada pozo se le adicionaron 100 µl de medio L-15, por 24 horas para establecer si
37º C. Pasadas las 4 horas se retiraron los 150 µl de medio Dulbecco y MTT y se
adicionaron en los pozos 100 µl de isopropanol para disolver los cristales de
RESULTADOS.
Para las fracciones Petrol, CH2Cl2, AcOEt, MeOH del extracto en Petrol, las
Férrico Burchard
Petrol - - - - - -
CH2Cl2 - - + + - +
AcOEt - - + + - +
MeOH - - + + + -
Férrico Burchard
1 + + + + + +
2 + - + + + +
3 - - + + + +
4-10 - - + - - -
A los extractos de Petrol y EtOH se hojas de I.laevis se les evaluó el efecto
concentración de 100 µg/ml, frente a las líneas celulares. Las fracciones que se
celular 1595.
Tabla 3. Porcentaje de viabilidad de las células para las fracciones Petrol, CH2Cl2,
MCF-7 66 81 97 32
Colo 206 77 82 97 69
CSC 1595 64 43 38 7
En el estudio se encontró que las fracciones actuaron mejor sobre las líneas
F.1 F.2 F.3 F.4 F.5 F.6 F.7 F.8 F.9 F.10
MCF-7 93 43 27 44 72 44 29 50 20 55
Colo 205 108 103 162 41 41 115 127 157 152 148
que tuvieron un porcentaje de viabilidad menor al 50%. Las dos líneas celulares
viabilidad de 41%.
50
VIABILIDAD
40
30
%
20
10
0 F. MeOH F.2 F.3 F.4 F,7 F.8 F.9
FRACCIONES
60
VIABILIDA
40
%
20
0 F. MeOH F.2 F.3 F.4 F.6 F,7 F.9
FRACCIONES
Para las subfracciones de la fracción MeOH del extracto en Petrol, las pruebas
subfracciones Sf1, Sf2 y Sf3 obtenidas a partir de la fracción MeOH del extracto
% viabilidad
100
VIABILIDAD
50
%
0
Alcaloide subfr.1 subfr. 2 Subfr.3
SUBFRACCIONES
CSC 1595
Sf1 Sf2
CSC 1595 60 61
62
VIAB
ILID
AD
%
60
s ubf r . 1 Subf r . 2
SUBFRACCIONES
DISCUSIÓN
Los extractos se probaron a una concentración de 300 µg/ml mostrando los
siguientes efectos citotóxicos, la línea tumoral CSC 1595 fue la más sensible a los
viabilidad 50%).
100 µg/mL, se demostró que la más activa fue la fracción MeOH con porcentajes
respectivamente.
La línea celular obtenida de tumor de paciente colombiano CSC 1595 fue la más
se tiene en cuenta que esta línea se considera joven, conservando un buen grado
de similitud entre el tejido tumoral y la línea celular, opuesto a lo que sucede con
fracciones no fueron activas para la línea celular de colón Colo 205. Estos
para las líneas 1595 y MCF-7. Las fracciones 2, 3, 4, 7, 8 y 9 del extracto EtOH
CSC 1595 y MCF-7, la fracción 6 tuvo una viabilidad 44% solo para la línea
celular MCF-7, la línea celular Colo 205 tuvo un comportamiento diferente al de
las otras dos líneas, siendo las fracciones 4 y 5 las más activas con un porcentaje
Las pruebas fitoquímicas cualitativas muestran que las fracciones del extracto
al (1993); Um et al (2001).
respectivamente lo que indica que la CC50 se debe encontrar entre los 50 y 100
antagónico entre las sustancias que presentaba esta fracción, se obtuvieron tres
MeOH, por eso se hicieron mezclas de las subfracciones para observar cual
secundarios esteroides y/o triterpenos posiblemente sean los que están actuando
rubiaceae.
Adina rubella. El extracto MeOH fue el que mostró ser citotóxico contra un
LITERATURA CITADA.
-Aquino, R., De Tomáis, N., De Simona, F & Pizza, C. 1997. Triterpenes and
1040.
-Bohrmann, H., Lau-Cam, C., Tashiro, J & Youngken Jr. 1969. Constituens of
-Cheng, Z-H., Yu, B-Y. & Yang, X-W. 2002. 27-nor-triterpenoid glycosides from
-Mosmann, T. 1983. Rapid colorimetric assays for cellular growth and survival:
623-626.
-Setzer, M., Moriarity, D., Lawton, R., Setzer, N., Gentry, G. & Haber, W.
-Sparg, S.G., Light, J & Staden J.van. 2004. Biological activities and distribution
-Um, B. H., Weniger, B., Lobstein, A., Pouplin, T., Polat, M & Aragon, R. 2001.
Triterpenoid saponins from Isertia pittieri. Journal of Natural Products. 12: 1588-
1589.