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AUTORA
ASESOR
TRUJILLO – PERÚ
2018
JURADO EVALUADOR DE TESIS
Presidente
Miembro
Miembro
Asesor
AGRADECIMIENTO
iii
DEDICATORIA
iv
RESUMEN
Piper acutifolium Ruiz & Pav. (Matico). La cual se obtuvo del Distrito de Usquil,
v
ABSTRACT
The present thesis is of a descriptive type and qualitative approach; was carried out
characteristics of the Piper acutifolium Ruiz & Pav leaf. (Matico) Which was obtained
from the District of Usquil, Otuzco - La Libertad, its taxonomic identification was by
quality parameters of the plant species. In the phytochemical study was performed
(chloroform, ethanolic and aqueous). It was concluded that there is presence of amino
acids, amines, triterpenes, reducing sugars, flavonoids, resins, tannins and alkaloids.
vi
CONTENIDO
DEDICATORIA ......................................................................................................... iv
RESUMEN .................................................................................................................. v
ABSTRACT................................................................................................................vi
I. INTRODUCCIÓN ................................................................................................. 1
II. REVISIÓN DE LITERATURA ............................................................................. 6
2.1. Antecedentes ......................................................................................................6
2.2. Bases Teóricas ................................................................................................... 8
III. METODOLOGÍA .............................................................................................. 12
3.1. Diseño de la investigación ................................................................................ 12
3.2. Población y muestra ......................................................................................... 12
3.3. Definición y operacionalización de variables e indicadores .............................13
3.4. Técnica e instrumentos de recolección de datos ..............................................14
3.5. Plan de análisis de datos ................................................................................... 20
3.6. Matriz de consistencia… .................................................................................. 21
3.7. Principios éticos… ...........................................................................................22
IV. RESULTADOS .................................................................................................. 23
4.1. Resultados ........................................................................................................23
4.2. Análisis de resultados ...................................................................................... 28
V. CONCLUSIONES ................................................................................................32
5.1. Conclusiones ....................................................................................................32
5.2. Recomendaciones ............................................................................................ 33
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ......................................................................34
ANEXOS .................................................................................................................. 38
CONTENIDO DE TABLAS
Tabla 01. Características fisicoquímicas de la hoja de Piper acutifolium Ruiz & Pav.
(Matico) ......................................................................................................................23
Tabla 05. Metabolitos secundarios presentes de todos los extractos de la hoja de Piper
plantas medicinales fueron las primeras medicinas utilizadas para lograr curar las
días (1).
que son utilizadas como plantas medicinales por sus propiedades curativas (3,4).
1
Debido a que existen muchas plantas a las cuales se les atribuyen ciertas
fisicoquímicas, como las fitoquímicas de las especies vegetales (la droga en sí),
permitiéndonos reconocer cuales son los metabolitos que pueda llegar a contener
de la planta sino de cualquier parte (hojas, fruto, tallo, semilla, etc.) (3,4).
esta parte del estudio es de suma importancia puesto que todas las especies
vegetales se diferencian entre sí, y el Piper acutifolium Ruiz & Pav. (Matico) no
naturaleza (5,6).
permite identificar los metabolitos que existen dentro de una especie vegetal, los
Los metabolitos primarios comprenden los procesos químicos que la planta debe
2
los vegetales en su crecimiento y el desarrollo, generalmente se encuentran en
Para poder determinar los metabolitos que tiene una especie vegetal, es necesario
se puede explicar que metabolitos contiene el organismo vegetal y así explicar las
acuerdo al grupo funcional a que pertenece y estudia los métodos analíticos para
químicos presentes en una planta (metabolitos). Esta herramienta que sirve para
3
dependencia de sus características estructurales y solubilidad de cada uno de ellos,
cloroformo)(9).
El Piper acutifolium Ruiz & Pav. (Matico) común mente conocido en nuestro país
como matico, el cual sus propiedades terapéuticas que se le atribuyen lo han hecho
externo por sus propiedades cicatrizantes, esta es una especie vegetal fácilmente
reconocible por las características que presenta, ramas de color verde amarillento,
sus hojas son estrechas elípticas y aromáticas; en cuanto a sus flores y frutos son
diminutos (10,11).
(Matico) ya que se conocerán cuáles son los fitoconstituyentes que esta especie
posteriormente esta planta pueda ser usada en otros estudios, pero ahora con una
base sólida sobre sus componentes, lo cual permitiría realizar nuevos avances en
su estudio (11,12).
4
acutifolium Ruiz & Pav. (Matico)?”, por lo cual se busca resolver la duda,
acutifolium Ruiz & Pav. (Matico), para que posteriormente este estudio sirva
Objetivo General:
Objetivos Específicos:
5
II. REVISIÓN DE LA LITERATURA
2.1. Antecedentes:
fitoquímico a una planta del mismo género vegetal (Piperaceae), en este caso su
especie vegetal analizada fue Piper obliquum Ruiz & Pavon del este de Ecuador
Heredia teniendo como objetivo determinar la propiedad larvicida que pueda tener
bosque relicto más para conservar en las vertientes occidentales andinas del norte
del Perú nombra a la especie vegetal Piper acutifolium Ruiz & Pav. dentro de su
lista de taxa presentes en este bosque, lo cual indica que esta especie también se
encuentra en otros lugares del Perú, por lo cual es necesario realizarle estos tipos
de estudios (15).
6
En el año 2016 Jennifer B. et al realizaron un estudio de la especie Piper
la especie vegetal Piper acutifolium Ruiz & Pav, puesto que ambas especies
que uno de los metabolitos secundarios que puede presentar este género es la
7
2.2. Bases Teóricas:
Origen:
pañil o hierba del soldado, debido a que aliviaban las hemorragias causadas por
Las drogas vegetales deben estar libres, tanto como sea posible, de moho, insectos
ser superior a la que se norma para cada producto según la monografía en una
farmacopea (19).
Tamizaje Fitoquímico:
& Cuellar Cuellar A. (ver los Anexos del 1 al 4), la muestra es sometida a
Ensayo de Liebermann-Burchard:
8
sulfúrico concentrado (98%). Si hay esteroles, se producen coloraciones verdes,
Ensayo de Borntrager:
rojo(22,23).
Ensayo de Shinoda:
Ensayo de Fehling:
oxidado a grupo ácido por el Cu2+ que se reduce a Cu+, dando un precipitado rojo
9
Ensayo de Dragendorfff:
Ensayo de Mayer:
precipitado(22,23).
Ensayo de Wagner:
Ensayo de Baljet:
Ensayo de Kedde:
cardiotónicos. Una alícuota del extracto en etanol se mezcla con 1mL del reactivo
Ensayo de Ninhidrina:
de aminas en general. Se toma una alícuota del extracto en alcohol, se mezcla con
10
minutos en baño de agua. Este ensayo se considera positivo cuando se desarrolla
Ensayo de Espuma:
Ensayo de Catequinas:
Se toma una gota de la solución etanólica y se aplica sobre un papel filtro; sobre
Se colca una gota del extracto en la placa, se le agrega una gota de clorhidrato de
potasio al 10% en etanol y se calienta a la llama hasta burbujeo; luego una gota de
HCl 0.5 mol/L y una gota de cloruro férrico al 1%. El color violeta indica
positivo(22,23).
Ensayo de Resinas:
Ensayo de Mucilagos:
aumenta la densidad del agua donde se extrae. Para ello se toma una pequeña parte
11
III. METODOLOGÍA
Se recolectó las hojas de Piper acutifolium Ruiz & Pav. (Matico) del Distrito de
Sur y los 78°25'02.7" Oeste y tiene un altitud de 3018 m.s.n.m.) de una misma
12
3.3. Definición y operacionalización de variables e indicadores:
Se determinó
- Materias
Determinar las extrañas
características - Humedad
fisicoquímicas Residual
permite - Cenizas
Características Totales Cuantitativa
establecer Porcentaje (%)
fisicoquímicas - Sustancias de Razón
parámetros de solubles
calidad de una en
especie Alcohol y
vegetal. H2O
- Secado a
sombra y
estufa
Presencia de:
- Alcaloides
- Aminoácidos
La - Aminas
investigación - Lactosas
fitoquímica - Quinonas
permite Reacciones - Triterpenos
determinar de - Azúcares
Características de color, Cualitativa
reductores
fitoquímicas. manera precipitación Nominal
- Catequinas
cualitativa los u otros. - Cumarinas
principales - Flavonoides
grupos - Glicósidos
químicos Cardiotónicos
presentes en - Polisacáridos
una planta (8,9). - Resinas
- Saponinas
- Taninos
13
3.4. Técnicas e instrumentos de recolección de datos:
Material Biológico:
Hojas de Piper acutifolium Ruiz & Pav. (Matico) del Distrito de Usquil, Provincia
Método:
Material De Vidrio:
Equipos:
- Balanza Analítica
- Baño María
- Estereoscopio
- Estufa Eléctrica
- Horno mufla
- Molino
Reactivos:
- Agua destilada
14
- Alcohol 96°
- Alcohol amílico
- Cloroformo
- Magnesio metálico
- Ninhidrina
Otros:
- Navajas
- Bisturí
- Goteros
- Papel tissue.
15
Recolección:
La especie vegetal de estudio Piper acutifolium Ruiz & Pav. (Matico) fue
recolectada entre los meses Julio – Agosto del 2016, del Distrito de Usquil,
especie.
Selección:
Identificación Taxonómica:
Lavado:
La especie fue lavada con abundante agua potable, luego de haber realizado esto,
16
Secado a Sombra:
Secado a la Estufa:
Pulverización:
en frascos ámbar en un lugar sin humedad y luz directa, hasta que sea
utilizado(23,24).
Caracterización macromorfológica:
promedió el peso (2.1 g ±0.38g), largo (20.2 cm ±1.65 cm) y ancho (Ancho: 6.6
17
Caracterización Organoléptica:
Se tomó en cuenta el olor (Sui Generis), sabor (Sui Generis), color (verde),
vegetal(23,24).
fue transferida a una cápsula previamente tarada y desecada a 105º C durante tres
temperatura ambiente y luego de esto fue pesada, para luego ser colocada
se tapó y se agito durante 6h, luego se dejó en reposo hasta el día siguiente y se
agito por 30min; luego de esto se volvió a dejar reposar media hora, para luego
105° C durante 3h, se dejó enfriar y se pesó. Se procedió a hacer los cálculos
respectivos (23,24).
18
Determinación de Cenizas Totales:
desecadora y se pesó, se hizo este proceso hasta que exista una diferencia de más
La solución fue filtrada con un papel filtro libre de cenizas. El filtro con el residuo
2h. pasado las 2 horas se colocó en un desecador hasta que alcance una
temperatura ambiente, para poder ser pesada. Este procedimiento fue repetido hasta
al 10% en un crisol el cual fue tapado con una luna de reloj, este se sometió a un
baño de agua hirviendo durante 10 min. Lo que quedo en la luna de reloj fue lavada
con 5mL de agua caliente y fue vertido al contenido del crisol. La solución
resultante fue filtrada a través de papel filtro libre de cenizas, se lavó el residuo
con agua caliente hasta que el filtrado acidulado con ácido nítrico p.a.; al cual se
le añadió una o dos gotas de solución de nitrato de plata a 0,1mol/L, hasta que no
19
muestre presencia de cloruros. El filtro con el residuo fue desecado en una estufa
colocó en un desecador hasta que alcance una temperatura ambiente para poder
�
�� = �100(%)
�
Dónde:
20
3.6. Matriz de consistencia:
Plan
Tipo de
Título de la Formulación Definición Indicadores y de
Objetivos Investigación Variables
Investigación del Problema operacional Escala de medición Análi
Diseño
sis
Objetivo Se
General: determinó
Identificar las - Materias
características extrañas
fisicoquímicas y - Humedad
fitoquímicas de la Residual
Fue de tipo - Cenizas Porcentaje (%)
hoja de Piper Características
¿Qué descriptivo y Totales Cuantitativa de
acutifolium Ruiz fisicoquímicas
ESTUDIO DE LAS características de un nivel de -Sustancias Razón
& Pav. (Matico).
CARACTERÍSTICAS fisicoquímicas enfoque solubles en
Objetivos
FISICOQUÍMICAS Y y fitoquímicas cualitativo. Alcohol y Office
Específicos:
FITOQUÍMICAS DE presenta las Diseño de una H2O Excel
Identificar los
LAS HOJAS DE Piper hojas de Piper casilla: - Secado a 2016.
metabolitos
acutifolium Ruiz & acutifolium Estudio de las sombra y
secundarios estufa
Pav. (MATICO). Ruiz & Pav. características
presentes en el
(Matico)? fisicoquímicas Presencia de:
extracto
y fitoquímicas. alcaloides,aminoácid
clorofórmico, Reacciones
os, aminas, azúcares
etanólico y Características de color,
reductores,flavonoid
acuoso de la hoja fitoquímicas. precipitación
es, quinonas,resinas,
de Piper u otros.
taninos y triterpenos.
acutifolium Ruiz
Cualitativa Nominal
& Pav. (Matico)
21
3.7. Principios éticos:
22
IV. RESULTADOS
4.1. Resultados:
Pav. (Matico).
23
Tabla 02. Metabolitos secundarios en el extracto clorofórmico de la hoja de Piper
Alcaloides Mayer - -
Alcaloides Wagner - -
Lactosas Baljet - -
Leyenda
Intensidad Identificación
+ Baja + Positivo
++ Moderada – Negativo
+++ Alta
24
Tabla 03. Metabolitos secundarios en el extracto etanólico de la hoja de Piper
Lactosas Baljet - -
Quinonas Borntrager + +
Lieberman –
Triterpenos + +++
Burchard
Catequinas
Catequinas - -
(Carbonato de Na)
Glicósidos
Kedde - -
Cardiotónicos
Saponinas Espuma - -
Leyenda
Intensidad Identificación
+ Baja + Positivo
++ Moderada – Negativo
+++ Alta
25
Tabla 04. Metabolitos secundarios en el extracto acuoso de la hoja de Piper
Alcaloides Mayer - -
Alcaloides Wagner - -
Polisacáridos Mucílagos - -
Saponinas Espuma - -
Leyenda
Intensidad Identificación
+ Baja + Positivo
++ Moderada – Negativo
+++ Alta
26
Tabla 05. Metabolitos secundarios del extracto clorofórmico, etanólico y acuoso
Extractos
Metabolitos
Clorofórmico Etanólico Acuoso
Alcaloides + +
Aminoácidos
+
y Aminas
Azúcares
+ +
reductores
Flavonoides + +
Quinonas +
Resinas +
Taninos + +
Triterpenos + +
Leyenda
+ Positivo
– Negativo
27
4.2. Análisis de resultados:
intermedia.
28
En cuando al secado ya sea en estufa o en sombra, se observa que existe una
a estufa 66.2% (±0.43%), estas dos formas son válidas a pesar de encontrar una
de 4 días, esto debido a que a partir del tercer día se comenzó a tener pesos
constantes.
extracto a aquellas sustancias que tengan una polaridad parecidas con él; en este
solventes (en este caso usaron petróleo) debido a la afinidad polar este género
vegetal también demostró contar con la presencia de terpenos, a pesar de ser una
29
encuentra en medio de los otros 2 solventes (cloroformo y agua); los metabolitos
taninos, como se dijo anteriormente es debido a que estas sustancias tienen más
quinonas y aminoácidos.
Ruiz & Pav, puesto que observamos que a pesar de ser del mismo género no
30
La presencia o ausencia de ciertos metabolitos secundarios en una parte anatómica
de una especie vegetal pueden ser diferentes con la misma especie vegetal
recolectada en otros lugares del mundo o dentro del mismo país, ya que las
fitoconstituyentes.
terapéuticos, puesto que ahora se conoce con cual extracto se encontrará algún
que metabolitos secundarios tiene esta especie vegetal sembrada en nuestro país.
31
V. CONCLUSIONES
5.1. Conclusiones:
hoja de Piper acutifolium Ruiz & Pav. (Matico), los cuales fueron alcaloides
y triterpenos.
taninos.
acutifolium Ruiz & Pav. (Matico) por lo cual se determinó que los
32
5.2. Recomendaciones:
- Realizar estudios no solo de las hojas de Piper acutifolium Ruiz & Pav.
33
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
en internet]. Argentina: Universidad Nacional del Nordeste; 2006; (5): [citada 24 Abril
Exactas/2006-E-053.pdf
hojas de Myrcianthes discolor. [Tesis para optar el título de: químico farmacéutico].
Medicinales en Zonas Rurales Altas del Valle del Mantaro (Perú). [Monografía en
S%20MEDICINALES%20PER%DA.pdf
ULADECH; 2013.
34
9.- Pereira S, Vega D, Almeida M, Morales G. Tamizaje fitoquímico de los extractos
alcohólico, etéreo y acuoso de las hojas de la Trichilia hirta L. Rev. Química Viva.
de Piper aduncum. “Matico” y diseño de planta piloto. [Tesis para optar el título de
Biológica. 2014.
obliquum Ruiz & Pavon (Piperaceae) essential oils from Eastern Ecuador.
principio activo larvicida de Piper acutifolium R&P. [Tesis para optar el título de
más para conservar en las vertientes occidentales andinas del norte del Perú. Rev. Perú
en: http://www.scielo.org.pe/pdf/rpb/v12n2/v12n2a12.pdf
35
16.- Jennifer B, Juan D. https:Folk medicine, phytochemistry and pharmacological
/article/pii/S0102695X16300564
irect.com/science/article/pii/S0305197817301217
36
24.- Cuéllar A, Miranda M. Farmacognosia de los Productos Naturales. 2ed.Ed Félix
37
ANEXOS
Anexo 01: Extracción sucesiva del material vegetal para la aplicación de técnicas de
Tamizaje Fitoquímico
Se obtuvo el extracto
Se filtró
Acuoso
38
Anexo 02: Esquema de las reacciones a realizar en el extracto clorofórmico
Extracto Clorofórmico
Ensayo de Baljet
(Lactosas)
Ensayo de Lieberman-
Burchard (Triterpeno)
Ensayo de Mayer
(Alcaloides)
Ensayo de Wagner
Ensayo de Dragendorff (Alcaloides)
(Alcaloides)
39
Anexo 03: Esquema de las reacciones a realizar en el extracto etanólico
Extracto Etanólico
40
Anexo 04: Esquema de las reacciones a realizar en el extracto acuoso
Extracto Acuoso
41
Anexo 05: Ubicación en el mapa de la ciudad de Usquil, lugar de recolección de la
muestra
42
Anexo 07: Número de registro en el Herbario Truxillensis
Anexo 08: Bolsa hecha a base de papel Kraff que en su interior contiene 50g de
muestra, para ser secada a sombra.
43
Anexo 09: Bolsa hecha a base de papel Kraff que en su interior contiene 50g de
muestra, colocada en estufa a 40° C
44
Anexo 11: Balón sometido a reflujo por 30 minutos dentro de un baño María.
45
Anexo 13: Extractos que serán sometidos al análisis fitoquímico junto con los reactivos
a utilizar para el tamizaje fitoquímico.
Anexo 14: Tubo del ensayo con extracto clorofórmico, prueba de Lieberman –
Burchard que identifica Triterpenos, en el cual se observa un resultado positivo.
46
Anexo 15: Tubo del ensayo con extracto etanólico, prueba de Borntrager que identifica
Quinonas, en el cual se observa un resultado positivo.
Anexo 16: Tubo del ensayo con extracto etanólico, prueba de Lieberman – Burchard
que identifica Triterpenos, en el cual se observa un resultado positivo.
47
Anexo 17: Cálculos para encontrar promedio del largo ancho y peso de las hojas de
Piper acutifolium Ruiz & Pav. (Matico)
Largo:
σ = √2,7528
σ =1,6591
Ancho:
σ = √ 0,4002
σ = 0,6326
Peso:
σ = √ 0,1471
σ = 0,3835
48
b. Determinación de coeficiente de variación
Largo:
σ
CV= x100
�
1.6591
CV= x100
20.225
CV= 8.2036%
Ancho:
σ
CV= x100
�
0.6326
CV= x100
6.586
CV= 9.6054%
Peso:
σ
CV= x100
�
0,3835
CV= x100
2.084
CV= 18.4065%
49
Anexo 18: Cálculos para la determinación de materias extrañas
�
�� = �100(%)
�
Dónde:
8.3
�� = �100(%)
100
�� = �. �%
50
Anexo 19: Cálculos para la determinación de humedad residual
(�2 − �1)
Hg = �100(%)
�2 − �
Dónde:
Muestra A:
M= 31.1390 g
M1=33.0142 g
M2=33.1419 g
(33.1419 − 33.0142)
Hg = �100(%)
33.1419 − 31.1390
0.1277
Hg = �100(%)
2.0029
Hg = 6.3757%
51
Muestra B:
M=22.3341
M1=24.2025
M2=24.3349
(24.3349 − 24.2025)
Hg = �100(%)
24.3349 − 22.3341
0.1324
Hg = �100(%)
2.0008
Hg = 6.6173%
Promedio
(6.3757 + 6.6173)
X Hg =
2
X Hg = 6.4965%
52
Anexo 20: Cálculos para determinación de sustancias solubles
��500�100
Ss =
�(100 − �)
Dónde:
��500�100
Ss =
�(100 − �)
H= 6.4965%
R= 0.1051 g.
M= 2 g.
0.1051�500�100
Ss =
2(100 − 6.4965)
Ss = 28.1005%
53
b. Determinación de sustancias hidrosolubles
H= 6.4965%
R= 0.0876 g.
M= 2 g.
0.0876�500�100
Ss =
2(100 − 6.4965)
Ss = 23.4215%
54
Anexo 21: Cálculos para la determinación de cenizas totales:
M2 − M
C= �100(%)
M1 − M
Donde:
Muestra A:
M= 21.6501
M1= 23.6541
M2= 21.9131
21.9131 − 21.6501
C= �100(%)
23.6541 − 21.6501
C = 13.1237%
Muestra B:
M= 22.6593
M1= 24.6662
M2= 22.9205
22.9205 − 22.6593
C= �100(%)
24.6662 − 22.6593
C = 13.0150%
Muestra C:
M= 17.8474
M1= 19.8495
M2= 18.1017
18.1017-17.8474
C= x100(%)
19.8495-17.8474
55
C = 12.7016 %
Muestra D:
M= 22.1581
M1= 24.1666
M2= 22.4038
22.4038 − 22.1581
C= �100(%)
24.1666 − 22.1581
C = 12.2330%
Promedio
X C = 12.7683%
56
Anexo 22: Cálculos para determinación de cenizas insolubles en ácido clorhídrico
M2 − M
B= �100(%)
M1 − M
Donde:
Muestra B:
M= 22.6593
M1= 24.6662
M2= 22.6671
22.6671 − 22.6593
B= �100(%)
24.6662 − 22.6593
B = 0.3886%
Muestra D:
M= 22.1581
M1= 24.1666
M2= 22.1665
22.1665 − 22.1581
B= �100(%)
24.1666 − 22.1581
C = 0.4182%
0.3886 + 0.4182
XB=
2
X B = 0.4034%
57
Anexo 23: Cálculos para determinación de cenizas solubles en agua.
M2 − Ma
C1 = �100(%)
M1 − M
Donde:
Muestra A:
M= 21.6501
M1= 23.6541
M2= 21.7874
Ma= 21.7092
21.7874 − 21.7092
C1 = �100(%)
23.6541 − 21.6501
C = 3.9021%
Muestra D:
M= 22.1581
M1= 24.1666
M2= 22.2708
Ma= 22.1898
22.2708 − 22.1898
C1 = �100(%)
24.1666 − 22.1581
C = 4.0776%
3.9021 + 4.0776
X C1=
2
X B = 3.9898%
58
Anexo 24: Cálculos para el análisis del secado
Estufa:
1 16.9
2 16.85
3 16.9
4 16.9
Promedio = 66.22 %
Desviación Estándar:
σ = 0,0433
59
Sombra
1 22.1
2 22.2
3 22.0
4 22.1
Promedio = 55.8 %
Desviación Estándar:
σ = 0,1414
60