Pruebas cualitativas

Reacción de Molisch
(da positiva con todos los glúcidos, sean o
no reductores)

Fundamento:
Todos los glúcidos por acción del ácido
sulfúrico concentrado se deshidratan
formando compuestos furfúricos (las
pentosas dan furfural y las hexosas dan
hidroximetilfurfural). Estos furfurales
reaccionan positivamente con el reactivo de
Molish (solución alcohólica de alfa-naftol)
dando un producto coloreado.
 Reacción de Benedict
Una de las reacciones más comunes en la identificación de
carbohidratos es la reacción de Benedict. Esta reacción es
específica para azúcares con grupo reductores libres (C=O). Todos
los monosacáridos poseen un grupo reductor libre. Los disacáridos
maltosa y lactosa tienen grupos reductores libres, pero la sacarosa
no los posee, ya que se pierden los grupos reductores de sus
componentes cuando ésta es formada.
Esta prueba se basa en la capacidad del carbohidrato de
reducir el Cu2+ en un medio alcalino a Cu+. Este Cu+ se oxida y
precipita en forma de Cu2O, lo que proporciona la coloración
positiva de la reacción.
La coloración producida va desde verde, amarillo, anaranjado o
rojizo, dependiendo de la concentración de óxido de cobre y
ésta a su vez de la cantidad de cobre reducido.
 Reacción de Fehling
(da positiva con todos los glúcidos reductores)

Fundamento:
El catión cúprico (Cu++) del reactivo de Fehling reacciona con
los glúcidos reductores pasando a óxido cuproso, que es un
precipitado de color rojo ladrillo. Esta es una reacción que
resulta positiva sólo si el glúcido es reductor. Los glúcidos
reductores se manifiestan en medio alcalino, pero el Cu++ en
ese medio tiende a precipitar espontáneamente como óxido
cúprico (que en esa forma no reacciona), de manera que es
necesaria la presencia de tartrato doble de sodio y potasio en
el reactivo para "secuestrar" al catión Cu++, a fin de evitar la
formación del óxido cúprico, y permitir que reaccione con los
glúcidos reductores
 Reacción del Lugol
(da positiva con los polisacáridos)

Fundamento:
El color que dan los polisacáridos con el lugol
(solución de I2 y de IK) se debe a que el I2 ocupa
espacios vacíos en las hélices de la cadena de
unidades de glucosa, formando un compuesto de
inclusión que altera las propiedades físicas del
polisacárido, especialmente la absorción lumínica.
Esta unión del I2 a la cadena es reversible, y por
calentamiento desaparece el color, que al enfriarse
reaparece. El lugol da con el almidón color azul y
con el glucógeno color rojo caoba.
 Reacción de Seliwanof
(da positiva con cetosas y negativa con aldosas)

Fundamento:
Los glúcidos que se clasifican como cetosas tienen
en el carbono 2 una función cetona, en presencia de
un ácido fuerte producen rápidamente derivados
furfúricos que reaccionan con un difenol llamado
resorcina. La sacarosa (un disacárido formado por
glucosa y fructosa) y la inulina (un polisacárido de la
fructosa) dan positiva la reacción, ya que el HCI del
reactivo provoca en caliente la hidrólisis del
compuesto liberando fructosa (responsable de la
reacción positiva).
 Reacción de Bial
(da positiva con pentosas)

Fundamento:
Esta reacción permita reconocer
pentosas (glúcidos de 5 carbonos) y
sustancias que las contengan. Se basa
en la formación de un compuesto
furfúrico que se condensa con el
orcinol del reactivo.
 Prueba de Barfoed
Sirve para distinguir monosacáridos reductores de disacáridos
reductores, basándose en la velocidad de reacción; en los
monosacáridos la formación del oxido cuproso es mas rápido
que en los disacáridos.
La reacción consiste en utilizar acetato cúprico y ácido acético en
solución ácida con lo que los monosacáridos son capaces de
reducir al cobre de manera más rápida y en condiciones menos
drásticas.
Por supuesto que al tener la solución un pH ácido resulta necesario
controlar rigurosamente el tiempo de reacción, pues si éste se
prolongara se produciría la hidrólisis ácida del enlace glucosídico
con la consiguiente liberación del carbono anomérico y la aparición
de nuevos grupos reductores que falsearían el resultado.
 Reacción de Hübl
 Investigación de dobles ligaduras
 Los ácidos grasos pueden ser saturados o no
saturados. Los no saturados se caracterizan por
tener en su molécula uno o más dobles enlaces.
Como consecuencia de ello pueden adicionar oxígeno,
hidrógeno, cloro, bromo, yodo; utilizándose la
cantidad de sustancia fijada para determinar su
grado de insaturación. El ácido graso insaturado que
se halla con mayor frecuencia es el ácido oleico, cuya
fórmula es C18H34O2 con doble enlace en C9.


 Fundamento:
 El reactivo de Hübl está formado por yodo en alcohol
(con bicloruro de mercurio como catalizador). El yodo
se fija sobre la cadena carbonada de los ácidos
grasos etilénicos a razón de dos átomos por cada
doble ligadura, por lo tanto el reactivo se decolora al
perder yodo (mientras el ácido graso lo gana).
 Reacción de Salkowsky
 (caracterización de colesterol)


 En un tubo de ensayo, medir 2 ml de

la solución clorofórmica de colesterol
de la experiencia anterior, inclinar el
tubo y deslizar por su pared interna
un volumen igual de ácido sulfúrico
concentrado, cuidando que los
líquidos no se mezclen.
 Observar la formación de un anillo
coloreado en la internase.
 Reacción de Lieberman-
Burchard
 (caracterización de colesterol)
 En un tubo de ensayo colocar 2
ml de solución clorofórmica de
colesterol, añadir 10 gotas de
anhídrido acético, y luego 3
gotas de ácido sulfúrico
concentrado
 Prueba de Fusión
 Para investigar fósforo
 Se utiliza Molibdato de amonio.
 La positividad de esta reacción indica la
presencia de fósforo inorgánico. Las
sustancias orgánicas dan la reacción
positiva, siempre que se haga una
hidrólisis previa.
 La reacción positiva se manifiesta por la
reacción de un precipitado amarillo de
fosfomolibdato de amonio.
Reacción de la Ninhidrina
 (caracteriza a todos los aminoácidos)

 Fundamento:
 Todas las aminas primarias (y por lo tanto
también los alfa-aminoácidos) reaccionan con
la ninhidrina en presencia de calor dando dióxido
de carbono, amoniaco y un aldehído que contiene
un átomo de carbono menos que el compuesto
original
 El amoniaco reacciona con otra molécula de
ninhidrina formando un compuesto azul
violáceo denominado púrpura de Ruhemmans.
Reacción de tiogrupos
 caracterización de aminoácidos azufrados)

 Fundamento:
 Esta reacción dará positiva con aquellos aminoácidos
que presenten azufre en su estructura, como son la
cistina, la cisteína y la metionina. La reacción consiste
en someter la muestra a una hidrólisis alcalina con
hidróxido de sodio, según la siguiente ecuación:
 R-SH + 2 NaOH → R-OH + Na2S + H2O

 De esta manera el sulfuro de sodio se encuentra libre
para reaccionar con el acetato de plomo del reactivo de
Courtone:

 Na2S + (CH3-COO)2Pb → 2 CH3-COONa + PbS
(precipitado)
Reacción de Hopkins-Cole
 (caracterización del aminoácido triptófano)

 Fundamento:
 El grupo indol del aminoácido triptófano se
condensa con el ácido glioxílico del
reactivo, formando compuestos
coloreados. El agregado de una pequeña
cantidad de ácido sulfúrico concentrado
puro, aumenta la sensibilidad de la
reacción
Reacción xantoproteica
 (caracterización de aminoácidos
aromáticos)

 Fundamento:
 Se produce la nitración del anillo
bencénico presente en los aminoácidos
tirosina, fenilalanina y triptofano,
obteniéndose nitrocompuestos de color
amarillo, que se vuelven anaranjados en
medio fuertemente alcalino (formación del
ácido picrámico o trinitrofenol)
Reacción de Millon
 (caracterización del aminoácido
tirosina)

 Fundamento:
 Los compuestos mercúricos en
medio fuertemente nítrico (reactivo
de Millon) se condensan con el grupo
fenólico del aminoácido tirosina,
formando complejos de color rojizo.
Reacción de Sakaguchi
 (caracterización del aminoácido
arginina)

 Fundamento:
 El grupo guanidino del aminoácido
arginina se condensa con el alfa-
naftol del reactivo, y luego forma un
complejo coloreado con el
hipoclorito de sodio.

Reacción del Biuret
 (caracterización de tripéptidos en adelante)

 Fundamento:
 Los péptidos y proteínas producen una
reacción coloreada muy usada para la
valoración de los mismos, llamada
reacción del Biuret. Las proteínas por sus
uniones peptídicas reaccionan con los
iones cúpricos del reactivo en medio
alcalino formando un complejo de color
violeta. Se necesitan 2 ó más uniones
peptídicas para que se forme el complejo
coloreado.