Tinción de Gram.

Anderson Fabián Guzman Ortiz.

Johana Hernández.

Microbiología.

SENA
Centro textil y producción industrial.
Complejo norte.

Medellín – Antioquia.

2017.
 INTRODUCCIÓN
De gran importancia en Microbiología porque permite diferenciar dos grandes
grupos de bacterias (Gram+ y Gram-), según se comporten ante esta tinción. El
fundamento radica en la diferente estructura de la pared celular de ambos grupos:
las bacterias Gram+ tienen una gruesa capa de peptidoglicano en su pared,
mientras que las bacterias Gram- tienen una capa de peptidoglicano más fina y
una capa lipopolisacarídica externa. Tras la tinción con el primer colorante (Cristal
violeta) se efectúa un lavado conetanol que arrastrará al colorante sólo en las
Gram (-), mientras que en las Gram (+) elcolorante queda retenido y las células
permanecerán azules. Las células Gram (-) se teñirán después con un colorante
de contraste (safranina o fuscina) para que puedan observarse.

Objetivos.
1. Utilización de técnicas sencillas para la observación de microorganismos
2. Conocer o manejo del microscopio óptico para la observación de bacterias
(importancia del objetivo de inmersión).
3. Identificar la morfología (coco, bacilo,etc) y tipo de tinción (Gram positiva o
Gram negativa) de las cepas proporcionadas.
4. Conocer y manejar las unidades de medida de las células.
5. Reconocer los distintos modelos de pared bacteriana.

Marco Teórico.
La tinción de Gram es una técnica diferencial comúnmente empleada en el
diagnóstico microbiológico, fue descubierta por Hans Christian Gram en 1884. La
mayor parte de las muestras sometidas a examen cuando se sospecha infección
bacteriana deben ser extendidas en frotis sobre laminillas de vidrio, teñidas y
examinadas en el microscopio. Los reactivos empleados en la tinción de Gram son
el cristal violeta (colorante básico), lugol (mordiente), alcohol cetona (decolorante)
y safranina o fuscina (colorante de contraste). [1]

El cristal violeta sirve como colorante básico uniéndose a la pared celular

bacteriana, con ayuda del mordiente (lugol) que refuerza la unión del colorante.
Las bacterias Gram positivas, debido a la estructura y composición bioquímica de
su pared celular retienen el complejo cristal violeta-lugol y aun después del
tratamiento con el decolorante conserva el colorante básico, por lo que se
observan de color púrpura o violeta al microscopio. Las bacterias Gram negativas
pierden el colorante básico cuando son tratadas con el decolorante debido a que
el alcohol disuelve el contenido lipídico de la pared celular (lo que aumenta la
permeabilidad celular), dando como resultado la pérdida del complejo cristal
violeta-lugol. Las bacterias decoloradas captan entonces el colorante de contraste,
razón por la cual estas bacterias se observan de color rojo al microscopio. [2]

Metodología.
1. Fijamos muestra en el portaobjetos (encender el mechero y esterilizar el
asa bacteriológica).
2. Adicionamos cristal violeta (esperar un 1 minuto y enjuagamos).
3. Agregamos Lugol (esperar un 1 minuto y enjuagamos).
4. Añadimos alcohol-cetona (esperar 30 segundos y enjuagamos).
5. Fucsina o safranina (esperar un 1 minuto y enjuagamos).
6. Secar (Flameando).
7. Observamos en microscopio (4x, 10x, 40x).

Observaciones:
4x
 10x

40x

Algunas bacterias debido a la naturaleza quimica de sus

paredes celular tuvieron la capacidad de retener el cristal
violeta, aun luego del tratamiento con un decolorante
orgánico como él (alcohol cetona). Tales bacterias se
denominan Gram (+). Las bacterias Gram (-) debido a su
mayor contenido lipídico en su pared celular, pierden la
coloración primaria de cristal violeta, aparecen rojas o
rosadas al microscopio, habiendo fijado safranina o
fucsina como colorante de contraste a sus paredes
celulares.
Como se puede observar en las imágenes tomadas de un
microscopio en la clase con diferentes objetivos (4x, 10x,
40x), por la coloración violeta que tomaron las bacterias,
se puede decir que son bacterias Gram (+), en esta
muestra puede haber poca concentración de bacterias
Gram (-) ya no hay presencia de coloración rosada o roja.
Conclusión.
Luego de haber finalizado este laboratorio podemos concluir lo siguiente:

En esta experiencia pudimos observar que con la de tinción de gram ( diferencial)

facilita la diferencia de una bacteria gran positiva y gram negativa realizando cada
uno de los pasos fundamentales que nos facilitan tener un buen resultad teniendo
en cuenta que para que se de este tipo de tinción la pared bacteriana de
peptidoglucano de las bacterias juega un papel importante ya que esta nos
permite diferenciar el tipo de bacteria al momento de teñir la célula utilizadas en el
laboratorio ya que en el momento de teñir su estructura gruesa o delgada de la
pared permite que la célula quede incolora o con color.

Para observar las preparaciones en el microscopio óptico siempre tenemos que

realizar de forma correcta todos los pasos para tener un buen enfoque de nuestra
muestra.

La célula eucariota es típicamente mayor y estructuralmente más compleja que la

célula procariotas ya que las procariotas son mucho más pequeñas y simples.[2]

Existen dos tipos pared celular en bacterias, que se diferencian en la tinción de

gram, la gram positiva mono estratificada gruesa, gram negativa pluriestratificada
y delgada / multicapa.[2]
 Bibliografía.
1. www.webconsultas.com/pruebas-medicas/tincion-
de-gram-13399
2. https://cienciatoday.com/tincion-de-gram/