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MetBiotVegetal PDF
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• Manipular el diseño
TRANSFORMAR PLANTAS
Promotores: regulación
PROMOTOR GEN
RNA polimerasa
transcripción
PROMOTOR GEN
Promotores
•Promotores fuertes
GEN
•Promotores débiles
GEN
GEN
DesarrollosBiotecnológicos
• Mejora
Gen beneficioso añadido de misma especie
Gen añadido por cruces dentro de especies
Source: USDA
• Transformación
Gene beneficioso de otra especie
Gen añadido por ingeniería genetica
Source: USDA
Aclaremos conceptos
Triticale
Nueva especie, pero NO
un producto
biotecnológico
Biotecnología Vegetal
•Tradicional Recombinante
Mejora clásica Técnicas de DNA
http://www.insp.mx/xcongreso/ponencias/5
Los resultados de mejora clásica son
buenos per muy lentos…
corn
cob
teosinte
Tomate silvestre
(Lycopersicon pimpinellifolium )
D= 1 cm
John Doebley photo
www.quirkyworks.com/design/ Samples/plant-breeding.jpg
híbridos
(heterosis)
Mutagénesis: Nuevo caracter sin un nuevo Gen
Tratemiento de Mutagénesis
Gen Normal
susceptible
ATTCGA
Gen resistente
mutante
ATTGGA
El mercado de cosechas biotecnológica está
dominado por cinco Países
6%
63%
4 mha 3%
43 mha
3 mha
3%
3 mha
21%
14 mha
Plasmido Ti
El ingeniero de la naturaleza:
Agrobacterium tumefaciens
Ingenería genética de plantas con
Agrobacterium tumefaciens
• A. tumefaciens: usado
rutinariamente.
• Contiene T-DNA
(plásmido bacteriano)
• Los genes se integran en
el DNA bacteriano
cuando se transfiere el T-
DNA
Inducción del tumor
por A. tumefaciens
El tumor de A.tumefaciens puede ser
grandecito…
Biología de A. tumefaciens
Bién conocido que produce el tumor de agalla
A.tumefaciens es una
bacteria que vive en el
suelo (en la rizosfera)
donde usa nutrientes que
provienen de las raíces
Infecta a través de heridas
son atraídas
quimiostáticamente a ellas
www-genvagar.slu.se/teknik/ djup/plasm.htm
(Quorum sensing)
Plásmido Ti
Región
T-DNA
DNA entre bordes
L y R es
Transferido a una
planta como
Genes que
producen ssDNA
tumor
Catabolismo de Opinas
Genes codificados
Region por el T-DNA se
Vir (virulencia) pueden sustituir
ORI
por otros genes
Vectores basados en plásmidos
Ti
Ráramente
usados
DESVENTAJAS:
1) Se requiere mucha homología entre plásmido Ti y plásmido de E. coli (vectores
intermedios basados en pBR322) lo que hace que sean dificil de construir y usar
Marcador de selección
en planta
Plásmido
Disarmed Región de HELPER
Ti
Marcador de selección
plasmid Virulencia
en bacteria
Gen de interés
4. Selección de células transformadas en Kan
5. Confirmar la presencia del transgen por PCR
6. Una planta completa se puede crecer de células
transformadas !!!
Callo
Tejidos especializados de plantas
que se forman en una herida; se
forma un cambiun para sellar la
herida de manera progresiva
Auxinas Citoquininas
Relacionadas estructuralmente a
Auxina natural es el ácido indolacético (IAA) la adenina
+ citoquinina
Procedimento fácil
(según especie) para
dicotiledóneas
La transfomación se
realiza con una pistola
de genes Medio muy osmótico
prepara el callo para
transformación
DNA con el gen de interés y resistencia a antibiótico
cubre partículas de oro
Los callos se
colocan en una
cámara de vacío, la
presión de Helio
dispara el DNA
hacia las células Partículas de oro
Arma de genes
recubiertas con el
DNA
Metodología
Gas de Helio
Discos de
ruptura
macroprojectiles
Célula vegetal
Partículas recubiertas
con el DNA
Desidad de protoplasto
2 x 106mL-1 Eliminaciónd de
paredes celulares no
siempre necesario
Concentración plásmido
200µg/mL
1.5 kV
Tamaño plásmido
3-6 Kb
Concentración de iones
KCl 125 mM
La mosca de fuego de norte américa libera luz verde durante la oxidación del sustrato luciferina
Cámaras CCD pueden detectar bioluminiscencia en tiempo real